專利名稱：高純度大豆皂苷單體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域的制備方法，尤其是一種可作為大豆皂苷以及各單 體皂苷的定量分析和建立檢測標準依據(jù)的高純度大豆皂苷單體的制備方法。
背景技術(shù)：
大豆中有2%的皂苷和異黃酮等糖苷，其中皂苷約占0.5%。大豆皂苷具有抗癌、 調(diào)節(jié)免疫功能、降低血清中膽固醇含量、防治心血管疾病、抗菌、抗病毒、護肝、減肥等多重 生理功效和良好藥理作用，可開發(fā)成保健食品或藥品，同時它還是一種重要的發(fā)泡劑、乳化 劑、穩(wěn)定劑和風(fēng)味改良劑，市場潛力巨大。日本學(xué)者北川勛和大久保一良按照苷元的不同，把大豆皂苷分為A、B、E和DDMP 組。大豆皂苷分為A組的結(jié)構(gòu)式如下 大豆皂苷分為B、E和DDMP組的結(jié)構(gòu)式如下 同時，表1列出了 A組、B組、E組大豆皂苷以及DDMP基團結(jié)構(gòu)圖及其相對應(yīng)的分 子量，以供后續(xù)實驗的分析。表1 A組、B組、E組大豆皂苷以及DDMP基團結(jié)構(gòu)圖及其相對應(yīng)的分子量 經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)文獻的檢索發(fā)現(xiàn)，中國專利申請?zhí)?00810200834. 1，名稱一種高 純度大豆皂苷A和B的制備方法，該技術(shù)稱制備檢測方法。該技術(shù)涉及一種高速逆流色譜 制備高純度大豆皂苷A和B的方法，得到大豆皂苷單體A和大豆皂苷B的單體。該發(fā)明制 得的大豆皂苷A和大豆皂苷B能夠達到相當高的純度，并且該制備方法操作簡便、分離效率 高、分離量較大、回收率高以及重現(xiàn)性好。但是，該發(fā)明分離的到的是高純度的大豆A組皂 苷和大豆B組皂苷，即實現(xiàn)的是大豆皂苷的組分離，尚不能有效得到高純度的各單體皂苷 的分離。其它專利，如中國專利申請:CN101278729A、CN1923845A、CN1245811A、CN1315323、 CN1327983A、CN1590385A、CN1683362A、日本專利 JP2003-171393A 等。這些專利都是工業(yè)化 生產(chǎn)富含大豆皂苷混合物的方法。由于大豆皂苷同與之共存的大豆異黃酮極性部分重疊， 這給大豆皂苷單體的分離純化造成一定的困難。學(xué)術(shù)上，國內(nèi)科學(xué)家都在致力于研究探討 合理有效的高純度的大豆皂苷單體的分離方法。另外，文獻報道的分析檢測大豆皂苷的方法很多，如薄層色譜光密度(定量)法、 二極管陣列分光光度法、薄層色譜比色法、氣相色譜法、高效液相色譜法、HPLC-MS聯(lián)用技 術(shù)、毛細管電泳技術(shù)、比色法等。由于HPLC的應(yīng)用普及，近年來，比較常用的大豆皂苷分析 檢測是使用HPLC。但是由于皂苷類組分紫外吸收信號較弱，通常用205nm作為檢測波長，而 這又由于溶劑的“末端”吸收效應(yīng)，造成了 HPLC分析檢測大豆皂苷的困難。盡管目前有運 用光電二極管陣列檢測器(PDA)，但還是難以解決精確定量分析的困難。同時，由于適當標 準參照物的缺乏，也加大了有效定量分析檢測大豆皂苷的難度。當前，盡管有大豆皂苷的檢 測分析國家標準頒布，但國內(nèi)相應(yīng)的大豆皂苷檢測分析方法在各方面或多或少存在一定的 不足。其根本原因在于大豆皂苷單體標準物質(zhì)的缺乏，導(dǎo)致無法對大豆皂苷進行準確的定 量分析。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種高純度大豆皂苷單體的 制備方法。本發(fā)明在大孔吸附樹脂固相萃取制備大豆皂苷和異黃酮粗提物后，通過凝膠色 譜分子層析分部分離大豆皂苷和異黃酮，液相制備色譜法分離得到大豆皂苷純單體，液相 色譜_質(zhì)譜聯(lián)用對大豆皂苷單體種類作出有效的檢測和判斷。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明以大豆皂苷含量較為豐富的大豆胚芽為原料，經(jīng)脫脂后，先用70%體積百 分比乙醇水溶液提取，再經(jīng)大孔吸附樹脂固相萃取得到大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物；然 后，用凝膠色譜法分子層析分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮；最后，采用液相色譜、蒸發(fā)光 散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體，并采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法鑒 別大豆皂苷單體種類，采用制備液相色譜分離得到> 95. 0%的高純度的單體大豆皂苷。本發(fā)明的制備方法包括步驟如下①利用大豆胚芽粉制備大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物；②凝膠色譜法分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮；③采用制備液相色譜純化分離單體大豆皂苷；④采用液相色譜、蒸發(fā)光散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體；⑤采用液相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用的方法獲得高純度的單體大豆皂苷。
步驟①中所述的大豆皂苷粗提物，其制備方法為A、脫脂用石油醚(30-60°C )在索氏抽提裝置中進行脫脂抽提大約3h左右，取出 后在通風(fēng)處自然揮干石油醚。B、溶劑提取將脫脂的大豆胚芽粉按采用10 1的液料比(mL/g)溶于約的70% 的乙醇水溶液，置于搖床上，在25°C水浴中搖晃浸提大約4h左右，或輔以頻率為20KHz的超 聲波預(yù)處理45min，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇。C、陽離子樹脂去雜將大豆皂苷提取液加入裝有弱酸性陽離子樹脂的吸附柱中， 流速0. 5-2. OBV/h,流出液反復(fù)上柱3次，IOOml 15%甲醇水溶液洗脫；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收甲醇 得洗脫液。D、固相萃取將上述大豆皂苷提洗脫液加入裝有大孔吸附樹脂的吸附柱中，室溫 下，流速控制在0. 5-2. OBV/h ； 1-5BV的去離子水，室溫下，流速控制在0. 5-2. OBV/h洗脫雜 質(zhì)；1-5BV的彡95%的低級醇于室溫下2. 0-5. OBV/h沖洗吸附柱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收低級醇得洗 脫液；洗脫液凍干得到大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物粉末。步驟②中所述的凝膠色譜法，分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮的技術(shù)條件是 皂苷和大豆異黃酮粗提物粉末Ig用2. 0-3. OmL甲醇溶解，流動相為甲醇、進樣體積為 200-500 μ L、流動相流速為0. 5-0. 8mL/min、二極管陣列吸收檢測波長為215nm和295nm(監(jiān) 控DDMP大豆皂苷)。此步驟分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮的原理是，由于大豆皂苷和大豆異黃酮的 分子結(jié)構(gòu)的不同，隨流動相流經(jīng)凝膠樹脂時進行分子排阻或分子層析從而得到組分離。步驟③所述的制備液相色譜法分析條件是C18反相色譜制備分離柱，溫度為 30 0C ；樣品濃度為Ig皂苷樣品溶于2ml 50% (V/V)甲醇水溶液，進樣體積為IOOyL;流動 相為A 0. 001% (V/V)乙酸水溶液，B 0. 001% (V/V)乙酸乙腈溶液；流動相流速為5mL/ min ；檢測器為PDA 二極管陣列檢測器(200nm-800nm，215nm為監(jiān)控波長)；HPLC梯度洗脫， 梯度程序見下表。分部收集保留時間> 40min的洗脫液；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙腈，凍干濃縮液得 到。HPLC梯度洗脫程序 注表中10 — 30min,30 — 80min,80 — 90min三個時間段內(nèi)的濃度變化都隨著 時間線性變化。步驟④中所述的采用的液相色譜法是指C18反相色譜分析性分離柱；樣 品濃度80mg皂苷樣品溶于IOml 1 9 (V/V)乙腈水溶液；進樣體積20 μ 1 ；流動相A 0. 001% (V/V)乙酸水溶液，B 0. 001% (V/V)乙酸乙腈溶液；流動相流速:lml/min ；檢測 器蒸發(fā)光散射(溫度40°C，氣壓2. 3bar)PDA 二極管陣列檢測器(205nm，295nm) ；HPLC梯 度洗脫，梯度程序見上表。步驟⑤中所述的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用，即用來通過電噴霧電離質(zhì)譜(Electronic Spray I on/Mas s Spectrometry, ESI/MS)得到大豆皂苷單體分子量從而獲得高純度的單體
大豆皂苷。
本發(fā)明利用現(xiàn)有技術(shù)中的蒸發(fā)光散射檢測器(Evaportive light Scattering Detector, ELSD)，改進了其常用的檢測方法，本發(fā)明消除了常見于傳統(tǒng)HPLC檢測方法中的 難點，不同于二極管陣列和熒光檢測器，本發(fā)明的ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性， 任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測，不受其官能團的影響。ELSD的響應(yīng)值與樣品的 質(zhì)量成正比，因而能用于測定樣品的純度或者檢測未知物，為HPLC的檢測發(fā)揮了更加進一 步的優(yōu)勢，帶來了更大的便利。本發(fā)明檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品，而不需要樣品含 有發(fā)色基團，其靈敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗 脫液相色譜聯(lián)用。本發(fā)明的優(yōu)點為本發(fā)明改進了現(xiàn)有技術(shù)中的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，利用凝 膠色譜成功地對大豆異黃酮和大豆皂苷進行了分部分離；利用制備型高效液相色譜制備純 化大豆皂苷單體；采用蒸發(fā)光散射檢測器，檢測基線相對比較穩(wěn)定，對于大豆皂苷的檢測效 果很好，通過二極管陣列檢測與蒸發(fā)光散射檢測器并用，能夠使定量檢測結(jié)果更加準確；成 功分離制備了 A類中的大豆皂苷Aa、Ab，B類中的大豆皂苷Ba、Bb, E類中的大豆皂苷Be， 純度較高，各樣品峰面積達到95%以上。它將液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對復(fù)雜樣品的高分離能 力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息結(jié)合起來，在藥物 分析、食品分析和環(huán)境分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。本發(fā)明為大豆總體皂苷以及各單體皂苷的定量分析提供了基礎(chǔ)，對于大豆皂苷的 分析檢測標準的建立也具有重要的意義。


圖1大豆皂苷樣品成分反相HPLC蒸發(fā)光散射和光電二極管陣列檢測色譜對照 圖；圖2大豆皂苷與大豆異黃酮的凝膠色譜分離圖；圖3ELSD檢測器過凝膠色譜后各樣品HPLC分析對照色譜圖；圖4大豆皂苷單體的HPLC制備分離圖譜(檢測波長215nm)；圖5ELSD檢測器HPLC分析檢測5個制備色譜收集樣品色譜圖；圖6大豆皂苷單體Aa、Ab、Ba、Bb、Be的ESI/MS圖譜。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施例作詳細說明本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前 提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下 述的實施例。實施例一(1)利用大豆胚芽粉制備大豆皂苷粗提物A、脫脂稱取大豆胚芽粉20g，用石油醚(30-60°C )脫脂3hr，取出置于通風(fēng)廚中 自然揮干。B、溶劑提取20g脫脂胚芽粉，按10 1的液料比(mL/g)用70%的乙醇水溶液 200ml的浸提4hr，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇得濾液。C、固相萃取將上述大豆皂苷浸提濾液加入裝有大孔吸附樹脂(AB-8，天津南開大學(xué)化工廠)的吸附柱(Φ30πιπιΧ800mm，樹脂床層高550mm)中，室溫下，流速控制在 1.5BV/h經(jīng)過大孔吸附樹脂床層；5BV的去離子水，室溫下，流速控制在1.5BV/h洗去除糖等 雜質(zhì)(苯酚硫酸法驗證糖是否洗去)；4BV的彡90%的甲醇于室溫下5. OBV/h沖洗吸附柱， 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收甲醇得洗脫液；洗脫液凍干得到大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物粉末。D、陽離子樹脂去雜上述干燥后得粉末溶于50mL50%甲醇水溶液中，加入裝有弱 酸性陽離子樹脂(Amberlite FPC 22)的吸附柱(15mmX300mm，樹脂床層高200mm)中，流速 2. OBV/h，流出液反復(fù)上柱3次，IOOml 50%甲醇水溶液洗脫；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收甲醇得洗脫液， 回收溶劑后冷凍干燥得大豆皂苷粗提物。(2)凝膠色譜法分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮樣品準備稱取上述得到的大豆皂苷粗提物，按照1. OOg粗提物溶于2ml純甲醇的 比例進行溶解，溶解后的溶液作為樣品待用，即配即用；凝膠樹脂為S^hadex LH-20 ；色譜 柱=AmerishamBiosciences (300mmX 25mm)；溫度室溫；流動相純甲醇(色譜純)；進樣體 積300 μ 1 ；流動相流速0. 5ml/min ；紫外吸收檢測波長:215nm (監(jiān)控皂苷)和254nm(監(jiān) 控異黃酮)，295nm(監(jiān)控DDMP大豆皂苷)。如圖2所示，分別以215nm和295nm為監(jiān)控波 長，收集1-6分部峰的洗脫液。其分部組分HPLC分析圖譜如圖3所示。(3)制備液相色譜純化分離單體大豆皂苷上述分部分離組分并經(jīng)HPLC定性分析為大豆皂苷的組分，Ig樣品濃度樣品溶于 2ml50% (V/V)甲醇水溶液；進樣體積為100 μ L ；分離柱為Alltima C18 (250mmX 10. 0mm， 10 μ m)；溫度為30°C ；流動相流速為5mL/min ；流動相為A 0. 001 % (V/V)乙酸水溶液，B 0. 001% (V/V)乙酸乙腈溶液；檢測器為PDA 二極管陣列檢測器(200nm-800nm，215nm為監(jiān) 控波長)；HPLC梯度洗脫。制備HPLC色譜圖如圖4所示，制備色譜收集到的5個高純度大 豆皂苷單體樣品色HPLC分析檢測(ELSD檢測器)圖譜如圖5所示。(4)液相色譜、蒸發(fā)光散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體分析柱Aquasil RP C18 (15(kimX 4. 6謹，3 μ m)；樣品濃度80mg皂苷樣品溶于 IOmll 9 (V/V)乙腈水溶液；進樣體積:20μ 1 ；流動相=A 0. 001% (V/V)乙酸水溶液， Β:0. 001% (V/V)乙酸乙腈溶液；流動相流速lml/min;檢測器蒸發(fā)光散射(溫度45°C， 氣壓2. 3bar)PDA 二極管陣列檢測器(205nm，295nm) ；HPLC梯度洗脫，洗脫程序同上表所示。 HPLC分析型色譜圖如圖1所示。(5)液相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用的方法獲得高純度的單體大豆皂苷液相色譜條件同(4)操作，質(zhì)譜分析條件API+/MS ；離子源(Turbo Spray)；氦氣 10. OOL/min ；噴霧電壓:5500V ；溫度500°C ；離子峰掃描范圍150-1500。液相色譜-質(zhì)譜 分析圖譜，如圖6所示。制備的大豆皂苷高純度單體經(jīng)質(zhì)譜解析結(jié)果如下表。表3實例一制備所得大豆皂苷單體樣品純度 實施例二(1)利用大豆胚芽粉制備大豆皂苷粗提物A、脫脂同實例一。B、溶劑提取20g脫脂胚芽粉，按10 1的液料比(mL/g)用70%的乙醇水溶液 200ml的輔以頻率為20KHz的超聲波預(yù)處理45min，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇得濾液。C、固相萃取將上述大豆皂苷浸提濾液加入裝有大孔吸附樹脂(Amberlite XAD-2)的吸附柱(①30mmX 800mm，樹脂床層高550mm)中，室溫下，流速控制在1. 5BV/h經(jīng) 過大孔吸附樹脂床層；5BV的去離子水，室溫下，流速控制在2. OBV/h洗去除糖等雜質(zhì)(苯 酚硫酸法驗證糖是否洗去)；4BV的彡90%的乙醇于室溫下2. 0-5. OBV/h沖洗吸附柱，旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)回收乙醇得洗脫液；洗脫液凍干得到大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物粉末。D、陽離子樹脂去雜同實例一。(2)凝膠色譜法分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮樣品準備同實例一。(3)制備液相色譜純化分離單體大豆皂苷上述分部分離組分并經(jīng)HPLC定性分析為大豆皂苷的組分，lg樣品濃度 樣品溶于2ml 1 9(V/V)乙腈水溶液；進樣體積為lOOyL;分離柱為Alltima C18(250mmX10. 0mm, 10 u m)；溫度為 30°C ；流動相流速為 5mL/min ；流動相為 A :0. 001 % (V/V)乙酸水溶液，B:0. 001% (V/V)乙酸乙腈溶液；檢測器為PDA 二極管陣列檢測器 (200nm-800nm, 215nm為監(jiān)控波長)；HPLC梯度洗脫。(4)液相色譜、蒸發(fā)光散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體同實例一。(5)液相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用的方法獲得高純度的單體大豆皂苷同實例一。制備的大豆皂苷高純度單體經(jīng)質(zhì)譜解析結(jié)果如下表。表4實例二制備所得大豆皂苷單體樣品純度
1權(quán)利要求
一種高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征在于，以大豆皂苷含量較為豐富的大豆胚芽為原料，經(jīng)脫脂后，先用70％體積百分比乙醇水溶液提取，再經(jīng)大孔吸附樹脂固相萃取得到大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物；然后，用凝膠色譜法分子層析分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮；最后，采用液相色譜、蒸發(fā)光散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體，并采用液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用的方法鑒別大豆皂苷單體種類，采用制備液相色譜分離得到≥95.0％的高純度的單體大豆皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征是，包括步驟如下①利用大豆胚芽粉制備大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物；②凝膠色譜法分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮；③采用制備液相色譜純化分離單體大豆皂苷；④采用液相色譜、蒸發(fā)光散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體；⑤采用液相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用的方法獲得高純度的單體大豆皂苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征是，步驟①中 所述的大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物，其制備方法為A、脫脂用石油醚(30-60°C)在索氏抽提裝置中進行脫脂抽提大約3h左右，取出后在 通風(fēng)處自然揮干石油醚；B、溶劑提取將脫脂的大豆胚芽粉按采用10 1的液料比為mL/g，溶于約的70%的乙 醇水溶液，置于搖床上，在25°C水浴中搖晃浸提大約4h左右，或輔以頻率為20KHz的超聲波 預(yù)處理45min，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇；C、陽離子樹脂去雜將大豆皂苷提取液加入裝有弱酸性陽離子樹脂的吸附柱中，流速 0. 5-2. OBV/h，流出液反復(fù)上柱3次，100ml 15%甲醇水溶液洗脫；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收甲醇得洗 脫液；D、固相萃取將上述大豆皂苷提洗脫液加入裝有大孔吸附樹脂的吸附柱中，室溫下， 流速控制在0. 5-2. OBV/h ； 1-5BV的去離子水，室溫下，流速控制在0. 5-2. OBV/h洗脫雜質(zhì)； 1-5BV的彡95%的低級醇于室溫下2. 0-5. OBV/h沖洗吸附柱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收低級醇得洗脫 液；洗脫液凍干得到大豆皂苷和大豆異黃酮粗提物粉末。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征是，步驟②中所 述的凝膠色譜法，分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮的技術(shù)條件是皂苷和大豆異黃酮粗提 物粉末lg用2. 0-3. OmL甲醇溶解，流動相為甲醇、進樣體積為200-500 u L、流動相流速為 0. 5-0. 8mL/min、二極管陣列吸收檢測波長為215nm和295nm，監(jiān)控DDMP大豆皂苷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征是，步驟③所述的 制備液相色譜法分析條件是C18反相色譜制備分離柱，溫度為30°C;樣品濃度為lg皂苷樣 品溶于2ml 50%體積百分比甲醇水溶液，進樣體積為100 u L ；流動相為A 0. 001 %體積百 分比乙酸水溶液，B 0. 001%體積百分比乙酸乙腈溶液；流動相流速為5mL/min ；檢測器為 PDA 二極管陣列檢測器；HPLC梯度洗脫，分部收集保留時間> 40min的洗脫液；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回 收乙腈，凍干濃縮液得到。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征是，步驟④中所 述的采用的液相色譜法是指C18反相色譜分析性分離柱；樣品濃度80mg皂苷樣品溶于IOml 1 9體積百分比乙腈水溶液；進樣體積20 μ 1 ；流動相A:0. 001%體積百分比乙酸 水溶液，B 0. 001%體積百分比乙酸乙腈溶液；流動相流速lml/min ；檢測器蒸發(fā)光散射 PDA 二極管陣列檢測器，HPLC梯度洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度大豆皂苷單體的制備方法，其特征是，步驟⑤中所述 的液相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用，通過電噴霧電離質(zhì)譜得到大豆皂苷單體分子量從而獲得高純度的 單體大豆皂苷。
全文摘要
一種生物技術(shù)領(lǐng)域的高純度大豆皂苷單體的制備和檢測方法。包括以下步驟①利用大豆胚芽粉制備大豆皂苷粗提物；②凝膠色譜法分部分離大豆皂苷和大豆異黃酮；③采用制備型液相色譜純化分離單體大豆皂苷；④采用液相色譜、蒸發(fā)光散射檢測器與二極管陣列檢測器檢測大豆皂苷單體；⑤采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法區(qū)別大豆皂苷單體種類。本發(fā)明成功地對大豆異黃酮和大豆皂苷進行了分部分離并制備純化大豆皂苷單體，檢測基線相對比較穩(wěn)定，對于大豆皂苷的檢測效果很好；通過二極管陣列檢測與蒸發(fā)光散射檢測器并用，使定量檢測結(jié)果更加準確；成功分離制備了A類中的大豆皂苷Aa、Ab，B類中的大豆皂苷Ba、Bb，E類中的大豆皂苷Be，純度較高，各樣品峰面積達到95％以上。
文檔編號G01N30/06GK101891796SQ20101024311
公開日2010年11月24日 申請日期2010年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月4日
發(fā)明者嚴明霞, 趙大云, 黃玉艾 申請人:上海交通大學(xué)