一種乙?；藚⒃碥誖d及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乙?；藚⒃碥誖d及其制備方法，方法包括以下步驟：1)提?。喝∪藚⒒ɡ伲鬯?，用甲醇溶液進(jìn)行提取，減壓濃縮；2)萃?。喝饪s浸膏加蒸餾水溶解，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取，將余下的浸膏減壓回收溶劑，3)富集：將上述得到的萃取液加入到大孔吸附樹脂柱上吸附，先水洗，再以60％甲醇洗脫得到含乙酰基人參皂苷Rd的富集液；4)中壓MCI GEL柱層析：將上述所得富集液經(jīng)MCI GEL柱層析除去部分色素和雜質(zhì)，5)制備：將上述洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后上高效制備液相，以甲醇水進(jìn)行洗脫。該方法具有分離工藝簡單、快速、經(jīng)濟(jì)、高效的特點(diǎn)。
【專利說明】
一種乙酰基人參皂苷Rd及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[00011本發(fā)明公開一種從人參花蕾中提取和分離乙?；藚⒃碥誖d(Ac-Rd)的制備方 法，屬于中藥單體提取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 人參皂苷是人參的主要活性成分，在人參的根、莖、葉、花和果實(shí)中均含有人參皂 苷，但各個(gè)部位中人參皂苷的種類和含量不同。人參地上部分是不可忽視的寶貴資源，其中 人參花蕾是人參含苞待放的花，人參花中的總皂苷含量最高（約5~7%)，部分單體皂苷的 含量超過人參根中的十倍(如人參阜苷Re)。研究發(fā)現(xiàn)，人參地上部分阜苷成分的藥理活性 與人參根總皂苷相似，因此人參地上部分尤其是人參花具有很好的藥物開發(fā)利用前景。迄 今為止已從人參各部位分離鑒定的單體人參皂苷已有200余種，其中乙?；藚⒃碥帐窃?葡萄糖基的6位鏈接一個(gè)乙酰基，使得該人參皂苷的極性變小，親水性變?nèi)酢５肿又械囊??；环€(wěn)定，易發(fā)生水解反應(yīng)。
[0003] 現(xiàn)已分離得到的乙?；藚⒃碥罩饕蠥c-RgidOO-Ac-RgsJCKlO-Ac-Rg〗，已 有通過乙?；磻?yīng)的手段得到乙?；藚⒃碥誖d，但尚未有從天然植物中分離得到其單 體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了 一種乙?；藚⒃碥誖d及其制備方法，能夠簡單、高效、快速提純乙 ?；藚⒃碥誖d。
[0005] 本發(fā)明所述的一種乙?；藚⒃碥誖d，具有以下結(jié)構(gòu)式：
[0007] 白色粉末;分子式:C5〇H84〇i9;分子量:988;mp 125-127°C。
[0008] 名稱:30，120，2〇3-三羥基-達(dá)瑪-24-烯3-〇-0-〇-吡喃葡萄糖基-(1-2)-0-〇-吡喃 葡萄糖基-6" -乙?；?2〇-(H3-D-吡喃葡萄糖苷，即乙酰基人參皂苷Rd。
[0009] 本發(fā)明所述的一種乙?；藚⒃碥誖d的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
[0010] 1)提取:取新鮮干燥后的人參花蕾，粉碎，用98%-100%甲醇溶液進(jìn)行提取，減壓 濃縮制成相對密度為1.1的浸膏；
[0011] 2)萃取:取濃縮浸膏加蒸餾水溶解，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取，待被兩種溶劑 萃取完全后，將余下的浸膏減壓回收溶劑，即得到含人參皂苷類化合物的水層萃取液；
[0012] 3)富集:將上述得到的萃取液加入到大孔吸附樹脂柱上吸附，先以水洗脫掉提取 液中的糖和無機(jī)鹽類，再以60%甲醇洗脫得到含乙?；藚⒃碥誖d的富集液；
[0013] 4)中壓MCI GEL柱層析：將上述所得富集液經(jīng)MCI GEL柱層析除去部分色素和雜 質(zhì)，用甲醇水進(jìn)行洗脫，根據(jù)TLC檢查合并乙?；藚⒃碥誖d洗脫液；
[0014] 5)制備:將上述洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后上高效制備液相，以甲醇水進(jìn)行 洗脫，根據(jù)紫外檢測器譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，冷凍干燥后即得乙酰 基人參皂苷Rd。
[0015] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟5)中，色譜柱為C18反相硅膠色譜柱，其填料粒 徑3-5μπι，色譜柱內(nèi)徑25-30mm，柱子長度250-300mm。
[0016] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟1中的甲醇用量為人參花蕾重量的3-5倍，所述 提取方法為加熱回流提取，提取時(shí)間為每次2h，提取次數(shù)為3-5次，濃縮溫度控制在40-50 Γ。
[0017] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟2中溶解浸膏所用的水的量是浸膏重量的0.2-0.5倍。
[0018] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟3中所用的大孔吸附樹脂為Diaion HP-20、D101 或HPD100等非極性樹脂，所用的洗脫溶劑為60%甲醇。
[0019] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟4中所用中壓MCI GEL柱層析所用的填料為MCI GEL F型，粒度50-70u，洗脫劑甲醇水的比例依次是60%、80%，流速為5-8mL/min。
[0020] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，所述步驟5中采用以70%甲醇水溶液進(jìn)行恒梯度洗脫。 [0021]目前尚未見到有關(guān)乙?；藚⒃碥誖d的提取方法的報(bào)道，該化合物屬于新天然產(chǎn) 物，屬于在天然植物中首次分離制備得到。
[0022]發(fā)明有益效果
[0023]提供了一種乙?；藚⒃碥誖d分離方法，將鮮人參花蕾提取液經(jīng)大孔吸附樹脂層 析、中壓MCI GEL柱層析和高效液相制備分離純化得到了高純度的乙?；藚⒃碥誖d，提取 純化中的濃縮溫度控制在50°C以下，最后制備得到的洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，溫度在40 °C，保證乙?；藚⒃碥誖d不發(fā)生降解;提供了一種一步富集、兩步純化得到單體乙?；?參皂苷Rd純度在97 %以上的工藝方法，提取工藝簡化，操作步驟縮短，保證乙?；藚⒃碥?Rd不因純化時(shí)間太長而大量損失，適合放大進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。具有分離工藝簡單、快速、經(jīng) 濟(jì)、高效的特點(diǎn)，為進(jìn)一步探索乙酰基人參皂苷Rd的藥理活性奠定了基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0024]圖1本發(fā)明所得到的乙?；藚⒃碥誖d(Ac-Rd)質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不 局限于下列實(shí)施方式。實(shí)施方式中所用的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為中藥化學(xué)領(lǐng)域技術(shù) 人員熟知的常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法。
[0026] 下述實(shí)施例中，高效制備液相為北京創(chuàng)新通恒科技有限公司LC-3000型高效液相 色制備譜儀，包括P3050二元栗、UV-3000紫外檢測器、7125i手動(dòng)進(jìn)樣器、5mL定量環(huán);色譜柱 Daisogel C-18(5ym,25mm i.d.X250mm)〇
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 稱取4Kg新鮮干燥后的人參花蕾，粉碎，加入12L的純甲醇溶液，加熱回流提取5次， 每次2h，離心過濾，去除殘?jiān)脼V液，濾液在50°C下回收甲醇，減壓濃縮制成相對密度為 1.1的浸膏，往浸膏中加入0.2倍量的水分散溶解，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取后，回收水 層萃取液，將得到的萃取液加入到大孔吸附樹脂Diaion HP-20上進(jìn)行吸附，先以水洗脫掉 提取液中糖類和無機(jī)鹽類，再以60%甲醇洗脫富集乙?；藚⒃碥誖d，所得富集液經(jīng)中壓 MCI GEL柱層析除去部分色素和雜質(zhì)，用甲醇水(60 %，80 % )進(jìn)行洗脫，流速為5mL/min，根 據(jù)TLC檢查合并含乙酰基人參皂苷Rd的洗脫液，洗脫液在40 °C下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干后上高 效制備液相，以70%甲醇水進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)液相色譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液在40°C 下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，冷凍干燥后即得乙酰基人參皂苷Rd，純度為98%，其質(zhì)譜圖見圖1。 [0029] 實(shí)施例2
[0030]稱取4Kg新鮮干燥后的人參花蕾，粉碎，加入16L的純甲醇溶液，加熱回流提取4次， 每次2h，離心過濾，去除殘?jiān)脼V液，濾液在50°C下回收甲醇，減壓濃縮制成相對密度為 1.1的浸膏，往浸膏中加入0.3倍量的水分散溶解，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取后，回收水 層萃取液，將得到的萃取液加入到大孔吸附樹脂D101上進(jìn)行吸附，先以水洗脫掉提取液中 糖類和無機(jī)鹽類，再以60%甲醇洗脫富集乙?；藚⒃碥誖d，所得富集液經(jīng)中壓MCI GEL柱 層析除去部分色素和雜質(zhì)，用甲醇水(60%，80%)進(jìn)行洗脫，流速為6mL/min，根據(jù)TLC檢查 合并含乙?；藚⒃碥誖d的洗脫液，洗脫液在40°C下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干后上高效制備液 相，以70%甲醇水進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)液相色譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液在40°C下用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀旋干，冷凍干燥后即得乙?；藚⒃碥誖d，純度為98%，其質(zhì)譜圖見圖1。
[0031] 實(shí)施例3
[0032]稱取4Kg新鮮干燥后的人參花蕾，粉碎，加入20L的純甲醇溶液，加熱回流提取3次， 每次2h，離心過濾，去除殘?jiān)脼V液，濾液在50°C下回收甲醇，減壓濃縮制成相對密度為 1.1的浸膏，往浸膏中加入0.5倍量的水分散溶解，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取后，回收水 層萃取液，將得到的萃取液加入到大孔吸附樹脂HPD100上進(jìn)行吸附，先以水洗脫掉提取液 中糖類和無機(jī)鹽類，再以60%甲醇洗脫富集乙酰基人參皂苷Rd，所得富集液經(jīng)中壓MCI GEL 柱層析除去部分色素和雜質(zhì)，用甲醇水(60%，80%)進(jìn)行洗脫，流速為8mL/min，根據(jù)TLC檢 查合并含乙?；藚⒃碥誖d的洗脫液，洗脫液在40°C下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干后上高效制備液 相，以70%甲醇水進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)液相色譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液在40°C下用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀旋干，冷凍干燥后即得乙?；藚⒃碥誖d，純度為96%，其質(zhì)譜圖見圖1。
[0033] 表征
[0034]將上述實(shí)施實(shí)例中得到的乙?；藚⒃碥誖d單體，測定其質(zhì)譜，見圖1，數(shù)據(jù)表征 為HR-ESI-MS:分子量 1027.5266[M+K]+為準(zhǔn)分子離子峰（計(jì)算值 1027.5244，C5〇H84〇i9K)， 847.4830[M-G1c-H20+K]+。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種乙?；藚⒃碥誖d，其特征在于具有以下結(jié)構(gòu)式：分子式:C5〇H84〇19 ;分子量:988。2. 如權(quán)利要求1所述的乙?；藚⒃碥誖d的制備方法，其特征在于包括如下步驟： 1) 提取:稱取新鮮干燥后的人參花蕾，粉碎，加入3-5倍重量的98%-100%甲醇溶液，加 熱回流提取3-5次，每次2h，離心過濾，去除殘?jiān)?，得濾液，濾液在50°C以下回收甲醇，減壓濃 縮制成相對密度為1.1的浸膏； 2) 萃取:往步驟1)得到的浸膏中加入蒸餾水分散溶解，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取， 待被兩種溶劑萃取完全后，將余下的浸膏減壓回收溶劑，即得到含人參皂苷類化合物的水 層萃取液； 3) 富集:將步驟2)得到的水層萃取液加入到非極性大孔吸附樹脂柱上吸附，先以水洗 脫掉提取液中的糖和無機(jī)鹽類，再以60%甲醇洗脫富集乙酰基人參皂苷Rd; 4) 中壓MCI GEL柱層析:將步驟3)所得富集液經(jīng)MCI GEL柱層析除去部分色素和雜質(zhì)， 依次用60 %甲醇、80 %甲醇進(jìn)行梯度洗脫，流速為5-8mL/min，根據(jù)TLC檢查合并含乙?；?參皂苷Rd洗脫液； 5) 制備：將步驟4)得到的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后上高效液相制備色譜，以 70%甲醇水進(jìn)行恒梯度洗脫，根據(jù)液相色譜圖接收目標(biāo)組分，洗脫液在40°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 旋干，冷凍干燥后即得乙?；藚⒃碥誖d。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取制備乙?；藚⒃碥誖d的方法，其特征在于所述步驟3) 中，所用的非極性大孔吸附樹脂選自Diaion HP-20、D101或HPD100樹脂。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取制備乙?；藚⒃碥誖d的方法，其特征在于所述步驟4) 中，所用的MCI GEL柱層析所用的填料為MCI GEL F型，粒度50-70U。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取制備乙酰基人參皂苷Rd的方法，其特征在于所述步驟2) 中，浸霄中加入水量為浸霄重量的0.2-0.5倍。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取制備乙酰基人參皂苷Rd的方法，其特征在于所述步驟1) 中，濃縮溫度控制在40-50 °C。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取制備乙?；藚⒃碥誖d的方法，其特征在于所述步驟5) 中，高效液相制備色譜的色譜柱為C18反相硅膠色譜柱，其填料粒徑3-5wii，色譜柱內(nèi)徑25-30mm，柱子長度 250-300mm。
【文檔編號(hào)】C07J17/00GK106046098SQ201610423051
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月15日
【發(fā)明人】李珂珂, 弓曉杰, 陳麗榮, 李沙沙
【申請人】大連大學(xué)