專利名稱：以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及臨床免疫檢測(cè)技術(shù)，尤其是涉及一種以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲 狀腺素的試劑盒，本發(fā)明還涉及該試劑盒的制備方法。
背景技術(shù)：
甲狀腺素(T4)是由甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞合成和分泌的甲狀腺激素，其結(jié)構(gòu)由一 個(gè)酪氨酸殘基和一個(gè)酚環(huán)組成，與T3的區(qū)別僅在于多一個(gè)碘原子。正常人平均每日的T4 分泌量為90士9yg，約為甲狀腺內(nèi)貯存量的1%。T4進(jìn)入血液循環(huán)后約99. 96%與結(jié)合蛋 白結(jié)合，其中約60%與甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)結(jié)合，30%與甲狀腺結(jié)合前白蛋白(TBPA) 結(jié)合，其余與白蛋白結(jié)合。結(jié)合T4與游離T4之間呈可逆的平衡狀態(tài)。結(jié)合狀態(tài)的甲狀腺 素不能發(fā)揮其生理功能，而只有游離T4方能進(jìn)入靶細(xì)胞與T4受體結(jié)合并發(fā)揮其生理功能。 甲狀腺外T4的循環(huán)總量為900 μ g，半衰期為7天。T4是具有生物活性的甲狀腺激素，能促 進(jìn)糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝，產(chǎn)生能量和熱，并促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。近年來(lái)有人認(rèn)為T(mén)4是T3的前激 素，是其儲(chǔ)備形式。血清中總的T4稱為總Τ4(ΤΤ4)，游離部分的T4稱為游離T4(FT4)。甲狀腺疾病會(huì)引起血清TT4的變化。甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)時(shí)，包括原發(fā)性，二發(fā)性，三 發(fā)性甲亢，以及高功能腺瘤、自主功能結(jié)節(jié)、T4型甲亢等，均有甲狀腺合成和分泌T4增多， 導(dǎo)致血清TT4增高。而亞急性甲狀腺炎和慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎的早期，因甲狀腺濾泡 受破壞，T4溢出，使血中TT4 一過(guò)性升高產(chǎn)生暫時(shí)性的輕度甲亢。大量服用甲狀腺素，或誤 食動(dòng)物甲狀腺，致使血中TT4增高，可產(chǎn)生醫(yī)源性或中毒性甲亢，甚至甲亢危象。當(dāng)靶組織 對(duì)甲狀腺激素不敏感時(shí)，雖然機(jī)體無(wú)甲亢癥狀，但外周血T4增高；若是下丘腦，垂體對(duì)甲狀 腺激素不敏感，則外周血T4增高，并有甲亢癥狀，且促甲狀腺激素(TSH)亦增高。甲狀腺機(jī)能減退時(shí)，無(wú)論是原發(fā)，繼發(fā)或其它原因，TT4均減低。且T4的降低先于 T3的降低，因此，測(cè)定T4(配合TSH的測(cè)定)能較好地及早發(fā)現(xiàn)甲低病人。正確檢測(cè)總甲狀腺素水平，對(duì)甲狀腺疾病的診斷、療效判斷及幫助醫(yī)生排除非甲 狀腺疾病均有重要意義。目前，臨床檢測(cè)總甲狀腺素的試劑多采用放射免疫分析法和酶聯(lián) 免疫分析法，這兩種方法中，前者操作繁瑣、耗時(shí)，試劑存在放射性污染，且因放射性元素天 然存在的半衰期，試劑有效期一般較短，僅能維持1-3個(gè)月；后者線性范圍較窄，靈敏度較 低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，該 試劑盒反應(yīng)快速，檢測(cè)靈敏度高且準(zhǔn)確；本發(fā)明還涉及該試劑盒的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案本發(fā)明所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，它包括偶聯(lián)有抗 甲狀腺素抗體的磁微?；鞈乙?、甲狀腺素系列校準(zhǔn)品、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液、發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液以及濃縮洗液。所述抗甲狀腺素抗體為鼠抗甲狀腺素單克隆抗體。所述的甲狀腺素系列校準(zhǔn)品以去甲狀腺素血清或分析緩沖液為校準(zhǔn)品基質(zhì)，加入 甲狀腺素純品配制而成。所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液是將甲狀腺素與辣根過(guò)氧化物酶共價(jià) 偶聯(lián)在一起，制備成辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素，使用時(shí)用緩沖液稀釋至工作濃度即可。所述發(fā)光底物A液由Iuminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59mM、沒(méi)食子酸0. 35mM、 PH 9. 4的Tris-Hcl緩沖液0. 2M組成；所述發(fā)光底物B液由氨基酸氧化酶0. 85mM、吐 溫-200. 8% ν/ν、二乙烯三胺五乙酸0. 5mM、維生素C 0. 12mM、pH 6. 5的乙酸-乙酸鹽緩沖 液0. 2M組成。所述的濃縮洗液由0. IM磷酸鹽緩沖液和1 % Tween-20組成。本發(fā)明所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒的制備方法，包括 下述步驟第一步，偶聯(lián)有抗甲狀腺素抗體的磁微粒混懸液的制備取磁性微粒，用0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液清洗備用；用0. 05M醋酸-醋酸鈉緩 沖液分別配制成5mg/ml濃度的碳二亞胺溶液和琥珀酰亞胺溶液，然后按照每3mg磁微粒加 入50ul碳二亞胺溶液和50ul琥珀酰亞胺溶液的比例加入上述配制的碳二亞胺溶液和琥珀 酰亞胺溶液，室溫振蕩反應(yīng)；用0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液清洗，去除多余的碳二亞胺和 琥珀酰亞胺；按照100ul/3mg磁微粒的比例加入0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液，再按比例 45ug/3mg磁微粒的比例加入鼠抗甲狀腺素單克隆抗體，室溫振蕩反應(yīng)；用pH為7. 4-7.6， 含1 %牛血清白蛋白，0. 01 % -0. 02 %的疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液洗滌，室溫振蕩；用pH為 7. 4-7. 6，含1 %牛血清白蛋白，0. 01 % -0. 02 %的疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液將偶聯(lián)有抗甲狀 腺素抗體的磁微粒混懸液稀釋至0. 5-lmg/ml的工作液；第二步，甲狀腺素系列校準(zhǔn)品的制備用去甲狀腺素人血清將甲狀腺素高值抗原溶液稀釋成校準(zhǔn)品，配制后的系列濃度 為 0ug/dl、lug/dl、2. 5ug/dl、5ug/dl、15ug/dl、30ug/dl ；第三步，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液的制備采用化學(xué)連接劑碳二亞胺將甲狀腺素與辣根過(guò)氧化物酶共價(jià)偶聯(lián)在一起，制備成 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素，使用時(shí)用緩沖液稀釋至工作濃度即可；第四步，發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液的配制發(fā)光底物A液由Iuminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59mM、沒(méi)食子酸0. 35mM、pH 9. 4 的Tris-Hcl緩沖液0. 2M配制而成；發(fā)光底物B液由氨基酸氧化酶0. 85mM、吐溫-200. 8 % ν/ν、二乙烯三胺五乙酸 0. 5mM、維生素C 0. 12mM、pH 6. 5的乙酸-乙酸鹽緩沖液0. 2M配制而成；第五步，濃縮洗液的配制濃縮洗液由0. IM磷酸鹽緩沖液，1 % Tween-20配制而成。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法結(jié)合了磁微粒固相偶聯(lián)技術(shù)，在酶聯(lián)免 疫分析的基礎(chǔ)上結(jié)合化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大技術(shù)，利用辣根過(guò)氧化物酶催化發(fā)光底物，則發(fā)光底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到 穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)，可同時(shí)發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器即可測(cè)量出光量子產(chǎn)額，該光量 子產(chǎn)額與樣品中的待測(cè)物質(zhì)的量成比例關(guān)系，由此可以建立校準(zhǔn)曲線并計(jì)算出樣品中待測(cè) 物質(zhì)的含量。本發(fā)明采用的磁微粒固相偶聯(lián)技術(shù)，由于磁性微粒是由超順磁性納米粒子(包括 磁性金屬如Fe、Co、Ni或其金屬氧化物等)與高分子或無(wú)機(jī)材料等形成的一種膠態(tài)液體復(fù) 合物，可通過(guò)表面的功能基團(tuán)進(jìn)行各種表面的功能化修飾；在外加磁場(chǎng)的作用下通過(guò)吸附、 清洗、解吸等操作快速移動(dòng)和分離，具有磁性分離簡(jiǎn)便、親和吸附高特異性以及巨大表面積 等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明檢測(cè)試劑盒反應(yīng)時(shí)間僅需15分鐘，分析總耗時(shí)不超過(guò)30分鐘，方便快速， 既適用于半自動(dòng)大通量檢測(cè)，也適用于全自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)使用。實(shí)驗(yàn)表明，使用本試劑盒檢測(cè)總甲狀腺素具有如下優(yōu)點(diǎn)1.檢測(cè)速度快，穩(wěn)定、無(wú)放射性污染等，在沒(méi)有磁場(chǎng)存在的情況下，磁性微粒懸浮 在液體中，使得抗原抗體反應(yīng)類似于均相反應(yīng)；磁性微粒在外加磁場(chǎng)的作用下可方便地分 離，洗滌快速。2.磁性微粒做為免疫學(xué)載體，可明顯提高檢測(cè)的精密性、穩(wěn)定性。磁性微粒的粒徑 達(dá)到納米級(jí)，使得包被固相接近于液相狀態(tài)，相對(duì)微孔板式，減少了包被，封閉等多個(gè)影響 精密性的操作步驟，分析精密性和穩(wěn)定性得到極大的提升。3.本試劑盒組成簡(jiǎn)單，操作方便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，相對(duì)市面上的酶聯(lián)免疫試劑盒和 板式化學(xué)發(fā)光試劑盒，反應(yīng)時(shí)間僅為其1/8 1/4的時(shí)間，但試劑性能和操作簡(jiǎn)便性卻不輸 于這些試劑盒，而且在試劑組份簡(jiǎn)化，操作易用性上有所超越。


圖1是本發(fā)明試劑盒中的校準(zhǔn)品曲線圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，它包括偶聯(lián)有鼠 抗甲狀腺素單克隆抗體的磁微?；鞈乙海灰匀ゼ谞钕偎匮寤蚍治鼍彌_液為校準(zhǔn)品基質(zhì)， 加入甲狀腺素純品配制而成的甲狀腺素系列校準(zhǔn)品；將甲狀腺素與辣根過(guò)氧化物酶共價(jià)偶 聯(lián)在一起，制備成辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液，使用時(shí)用緩沖液稀釋至工作濃度 即可；由Iuminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59mM、沒(méi)食子酸0. 35mM、pH 9. 4的Tris-Hcl緩沖 液0. 2M組成的發(fā)光底物A液和由氨基酸氧化酶0. 85mM、吐溫-200. 8% ν/ν、二乙烯三胺五 乙酸0. 5mM、維生素C 0. 12mM、pH 6. 5的乙酸-乙酸鹽緩沖液0. 2M組成的發(fā)光底物B液以 及由0. IM磷酸鹽緩沖液和Tween-20組成的濃縮洗液。本發(fā)明所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒的制備方法，包括 下述步驟第一步，偶聯(lián)有抗甲狀腺素抗體的磁微?；鞈乙旱闹苽淙〈判晕⒘＃?. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液清洗3 5次備用；用0. 05M醋 酸-醋酸鈉緩沖液分別配制成5mg/ml濃度的碳二亞胺(EDC)溶液和琥珀酰亞胺(NHS)溶 液，然后按照每3mg磁微粒加入50ul EDC溶液和50ul NHS溶液的比例加入上述配制的EDC溶液和NHS溶液，室溫振蕩反應(yīng)15-60分鐘；用0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液清洗兩次，去 除多余的EDC和NHS ；按照100ul/3mg磁微粒的比例加入0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液，再 按比例45ug/3mg磁微粒的比例加入鼠抗甲狀腺素單克隆抗體，室溫振蕩反應(yīng)1-3小時(shí)；用 pH為7. 4-7. 6，含牛血清白蛋白(ff/V),0.01% _0. 02%的疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液洗滌， 室溫振蕩；用PH為7. 4-7. 6，含1 %牛血清白蛋白(W/V) ,0.01%-0. 02%的疊氮鈉的磷酸鹽 緩沖液將偶聯(lián)有抗甲狀腺素抗體的磁微?；鞈乙合♂屩?. 5-lmg/ml的工作液；第二步，甲狀腺素系列校準(zhǔn)品的制備用去甲狀腺素人血清將甲狀腺素高值抗原溶液稀釋成校準(zhǔn)品，配制后的系列濃度 為 0ug/dl、lug/dl、2. 5ug/dl、5ug/dl、15ug/dl、30ug/dl ；第三步，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液的制備采用化學(xué)連接劑EDC將甲狀腺素與辣根過(guò)氧化物酶共價(jià)偶聯(lián)在一起，制備成辣根 過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素，使用時(shí)用緩沖液稀釋至工作濃度即可，具體制備方法如下將5mg甲狀腺素溶于Iml N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，加入0. 5ml 20mg/ml辣 根過(guò)氧化物酶水溶液，然后加入1. 5mg碳二亞胺，隨后將0. 5ml 50mg/ml碳二亞胺溶液(溶 于0. 05M醋酸-醋酸鈉溶液)分3次加入，間隔1小時(shí)，反應(yīng)于室溫振蕩條件下，最后一 次加入碳二亞胺溶液后繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)；在0. 05M PH7. 4磷酸鹽緩沖液中充分透析，透析 完畢等比例加入甘油，儲(chǔ)存于-20°C備用；辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的甲狀腺素工作溶液是用含
牛血清白蛋白和0. 05-0. 25%阻斷劑的0. 05M磷酸鹽緩沖液稀釋配制而成，稀釋比例為 1 5000-1 20000 ；第四步，發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液的配制發(fā)光底物A液由Iuminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59mM、沒(méi)食子酸0. 35mM、pH 9. 4 的Tris-Hcl緩沖液0. 2M配制而成；發(fā)光底物B液由氨基酸氧化酶0. 85mM、吐溫-200. 8 % ν/ν、二乙烯三胺五乙酸 0. 5mM、維生素C 0. 12mM、pH 6. 5的乙酸-乙酸鹽緩沖液0. 2M配制而成；第五步，濃縮洗液的配制濃縮洗液由0. IM磷酸鹽緩沖液，1 % Tween-20配制而成。本發(fā)明試劑盒的使用操作程序如下實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1.取1瓶濃縮洗液按標(biāo)簽上標(biāo)識(shí)的稀釋要求稀釋備用。2.將恒溫箱或恒溫水浴鍋溫度調(diào)至37°C，待溫度穩(wěn)定后使用。3.將磁微?；鞈乙撼浞只靹蛑翢o(wú)肉眼可見(jiàn)沉淀。實(shí)驗(yàn)操作1.取出一定量的反應(yīng)容器，編號(hào)。前6孔依次加入50μ 1校準(zhǔn)品，其余孔依次加入 50 μ 1樣本。2.每孔分別加入酶結(jié)合物100 μ 1。3.搖勻磁微?；鞈乙海靠追謩e加入20 μ 1。4.將反應(yīng)容器內(nèi)溶液混合均勻，37°C溫育15分鐘。5.使用磁分離及洗滌設(shè)備，將反應(yīng)容器中磁微粒用洗液洗滌5次。6.將洗滌后的反應(yīng)容器充分振蕩使磁微粒散開(kāi)。
7.每孔加入發(fā)光底物A和發(fā)光底物B各50 μ 1，混勻后避光室溫反應(yīng)5分鐘。8.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度。經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明試劑盒在用于總甲狀腺素測(cè)定時(shí)的性能指標(biāo)可達(dá)到如下 狀態(tài)分析靈敏度——最低檢出量低于0. 5ug/dl ；校準(zhǔn)曲線范圍——0-30ug/dl,如圖1所示(四參數(shù)Logistic曲線擬合R = 0.99996)。精密性一分析內(nèi)精密度平均3. 27% (η = 10)，分析間精密度5. 57% (η = 3), 遠(yuǎn)高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，表明本試劑盒在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中具有良好的重復(fù)性；準(zhǔn)確性——將已知Τ4濃度血清用去甲狀腺素血清倍比稀釋后的回收率介于 90% -110%之間。穩(wěn)定性一將試劑盒放置于37°C環(huán)境下考查加速穩(wěn)定性14天，試劑盒性能無(wú)明 顯改變。
權(quán)利要求
一種以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，其特征在于它包括偶聯(lián)有抗甲狀腺素抗體的磁微?；鞈乙?、甲狀腺素系列校準(zhǔn)品、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液、發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液以及濃縮洗液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，其特征在 于所述抗甲狀腺素抗體為鼠抗甲狀腺素單克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，其特征在 于所述的甲狀腺素系列校準(zhǔn)品以去甲狀腺素血清或分析緩沖液為校準(zhǔn)品基質(zhì)，加入甲狀 腺素純品配制而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，其特征在 于所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液是將甲狀腺素與辣根過(guò)氧化物酶共價(jià)偶聯(lián)在 一起，制備成辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素，使用時(shí)用緩沖液稀釋至工作濃度即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，其特征在 于所述發(fā)光底物A液由luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59mM、沒(méi)食子酸0. 35mM、pH 9. 4的 Tris-Hcl緩沖液0. 2M組成；所述發(fā)光底物B液由氨基酸氧化酶0. 85mM、吐溫-200. 8% v/ v、二乙烯三胺五乙酸0. 5mM、維生素C 0. 12mM、pH 6. 5的乙酸-乙酸鹽緩沖液0. 2M組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，其特征在 于所述的濃縮洗液由0. 1M磷酸鹽緩沖液和Tween-20組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒的制備方 法，其特征在于它包括下述步驟第一步，偶聯(lián)有抗甲狀腺素抗體的磁微粒混懸液的制備取磁性微粒，用0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液清洗備用；用0. 05M醋酸-醋酸鈉緩沖 液分別配制成5mg/ml濃度的碳二亞胺溶液和琥珀酰亞胺溶液，然后按照每3mg磁微粒加 入50ul碳二亞胺溶液和50ul琥珀酰亞胺溶液的比例加入上述配制的碳二亞胺溶液和琥珀 酰亞胺溶液，室溫振蕩反應(yīng)；用0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液清洗，去除多余的碳二亞胺和 琥珀酰亞胺；按照100ul/3mg磁微粒的比例加入0. 02M PH7. 6磷酸鹽緩沖溶液，再按比例 45ug/3mg磁微粒的比例加入鼠抗甲狀腺素單克隆抗體，室溫振蕩反應(yīng)；用pH為7. 4-7.6， 含牛血清白蛋白W/V，0. 01% -0. 02%的疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液洗滌，室溫振蕩；用pH 為7. 4-7. 6，含牛血清白蛋白，0.01% -0. 02%的疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液將偶聯(lián)有抗甲 狀腺素抗體的磁微?；鞈乙合♂屩?. 5-lmg/ml的工作液；第二步，甲狀腺素系列校準(zhǔn)品的制備用去甲狀腺素人血清將甲狀腺素高值抗原溶液稀釋成校準(zhǔn)品，配制后的系列濃度為 0ug/dl、lug/dl、2. 5ug/dl、5ug/dl、15ug/dl、30ug/dl ；第三步，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液的制備采用化學(xué)連接劑碳二亞胺將甲狀腺素與辣根過(guò)氧化物酶共價(jià)偶聯(lián)在一起，制備成辣根 過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素，使用時(shí)用緩沖液稀釋至工作濃度即可；第四步，發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液的配制發(fā)光底物A液由luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59mM、沒(méi)食子酸0. 35mM、pH 9. 4的 Tris-Hcl緩沖液0. 2M配制而成；發(fā)光底物B液由氨基酸氧化酶0. 85mM、吐溫-200. 8% v/v、二乙烯三胺五乙酸0. 5mM、維生素C 0. 12mM、pH 6. 5的乙酸-乙酸鹽緩沖液0. 2M配制而成； 第五步，濃縮洗液的配制濃縮洗液由0. IM磷酸鹽緩沖 液，Tween-20配制而成。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種以磁性微粒為固相載體檢測(cè)總甲狀腺素的試劑盒，包括偶聯(lián)有抗甲狀腺素抗體的磁微?；鞈乙?、甲狀腺素系列校準(zhǔn)品、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素溶液、發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液以及濃縮洗液。本發(fā)明還公開(kāi)了該試劑盒的制備方法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法結(jié)合了磁微粒固相偶聯(lián)技術(shù)，使其檢測(cè)速度快、穩(wěn)定；在沒(méi)有磁場(chǎng)存在時(shí)，磁性微粒懸浮在液體中，抗原抗體反應(yīng)類似于均相反應(yīng)；磁性微粒在外加磁場(chǎng)的作用下可方便地分離，洗滌快速，明顯提高檢測(cè)的精密性、穩(wěn)定性。本試劑盒組成簡(jiǎn)單，操作方便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，相對(duì)市面上同類試劑盒，反應(yīng)時(shí)間僅為其1/8～1/4的時(shí)間，且在試劑組份簡(jiǎn)化，操作易用性上有所超越。
文檔編號(hào)G01N33/543GK101949941SQ201010242998
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月3日
發(fā)明者付光宇, 吳學(xué)煒, 渠海, 苗擁軍, 陳曉玲, 靳增明, 項(xiàng)立紅, 馬建軍 申請(qǐng)人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司