一種人參皂苷Rd的提取工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種人參皂苷Rd的提取工藝，屬于人參皂苷提取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 人參阜苷（Ginsenoside)是一種固醇類化合物，三貓阜苷，主要存在于人參屬藥 材中。人參皂苷被視為是人參中的活性成分，因而成為研宄的目標，目前已分離鑒定出40 余種人參皂苷單體。因為人參皂苷影響了多重的代謝通路，所以其效能也是復雜的，并且各 種人參皂苷的效能是難以分離出來的。而對單體進行生物活性研宄易于闡明其確切的藥理 作用，故對于人參皂苷單體化合物的研宄越來越多。人參皂苷單體化合物中RgnRbpRc等 量較高，而RcURg3、肋2等屬于稀有皂苷，但藥理活性卻優(yōu)于主要人參皂苷。其中，人參皂苷 Rd是主要皂苷代謝后在腸道中吸收利用的主要形式之一，對神經(jīng)系統(tǒng)、心腦血管以及腎功 能都具有良好的藥理作用。
[0003] 現(xiàn)有分離提取人參皂苷Rd的工藝主要采用如圖2和圖3所示方法，洗脫劑采用氯 仿-甲醇-水系統(tǒng)，提取過程引入有毒試劑氯仿，并且采用梯度洗脫，使得分離純度不高，操 作煩瑣，生產(chǎn)過程不易控制，不適宜工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于，提供一種人參皂苷Rd的提取工藝，能提高人參皂苷Rd的分離 純化效果，避免毒性有機試劑的使用，操作簡便，生產(chǎn)過程易于控制，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：一種人參皂苷Rd的提取工 藝，包括以下步驟：
[0006] Sl，將含有人參皂苷Rd成分的藥材粉碎成藥粉，采用70 %?95 %乙醇回流提取， 過濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1. 15?1. 26的浸膏，得總提取物；
[0007] S2,取總提取物，加2倍量純化水，攪勻，上DlOl大孔吸附樹脂柱，先用純化水 洗脫，繼用40 %?80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度為 1. 10?1. 20的清膏，得總皂苷；
[0008] S3,取總皂苷，吸附于2倍量硅膠上，揮發(fā)至干，過篩，將其加入硅膠層析柱中，用 正丁醇-乙酸乙酯-水=2 : 3 : 5等度洗脫，分段收集，經(jīng)薄層色譜檢查合并人參皂苷Rd 流份，減壓回收溶劑至干，得人參皂苷Rd粗品；
[0009] S4,取人參皂苷Rd粗品，用甲醇溶解并加入純化水，攪勻，上Rp-C18反相層析硅膠 柱，用甲醇-水=75 : 25等度洗脫，分段收集，經(jīng)薄層色譜檢查后合并所需組分，減壓回收 溶劑，靜置，析出沉淀，上層液返回反相層析硅膠柱分離，沉淀干燥得人參皂苷Rd。
[0010] 前述的人參皂苷Rd的提取工藝中，所述步驟SI具體為：將含有人參皂苷Rd成分 的藥材粉碎成40?60目的藥粉，加2倍量85 %乙醇，冷浸15?18h，濾過，藥渣加1. 8倍 量85%乙醇，回流提取3次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為 1. 24?1. 26的浸膏，得總提取物。
[0011] 前述的人參皂苷Rd的提取工藝中，所述步驟S2包括：
[0012] S21，裝柱：用乙醇充分濕潤預先處理過的DlOl大孔吸附樹脂，攪拌排除氣泡，裝 柱，浸泡12h，用95%乙醇沖洗至流出液加水混合后不呈渾濁為止，繼用純化水置換其中的 乙醇至無醇味，備用；
[0013] S22,上樣：取總提取物，加2倍量純化水，攪勻，緩緩加入預先處理過的DlOl大孔 吸附樹脂柱中，使全部進入柱床，靜置吸附12h;
[0014] S23,洗脫：先用5L/kgajR純化水洗脫，水洗脫液棄去；繼用不少于純化水用量的 60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度為1. 10?1. 20的清 膏，得總皂苷。
[0015] 前述的人參皂苷Rd的提取工藝中，所述步驟S3包括：
[0016] S31，上柱樣品制備：取總皂苷，吸附于2倍量的硅膠上，揮發(fā)至干，過60目篩，備 用；
[0017] S32,裝柱：取總皂苷10倍量的柱層析硅膠，用正丁醇-乙酸乙酯-水=2 : 3 : 5的上層溶液濕法裝柱，反復用洗脫劑洗脫，使硅膠充分下沉緊密；
[0018] S33,上樣及洗脫：硅膠層析柱中預留一定洗脫液使其淹沒硅膠，將上柱樣品慢慢 加入層析柱中，用正丁醇-乙酸乙酯-水=2 : 3 : 5的上層溶液等度洗脫，分段收集，每 流份收集量為I. 5L/kgajR，經(jīng)薄層色譜檢查后合并人參皂苷Rd流份，65?70°C減壓回收溶 劑至干，得人參皂苷Rd粗品。
[0019] 前述的人參皂苷Rd的提取工藝中，所述步驟S4包括：
[0020] S41，上柱樣品制備：取人參皂苷Rd粗品，按2. 5mL甲醇/g人參皂苷Rd粗品的比 例用甲醇溶解后，加入甲醇體積1/3的純化水，攪勻，備用；
[0021] S42,裝柱：按Ikg硅膠/30g人參皂苷Rd粗品的比例稱取反相層析硅膠Rp-C18， 用甲醇濕法裝柱；
[0022] S43,上樣及洗脫：將上柱樣品濕法上柱，用甲醇-水=75 : 25等度洗脫，分段收 集，每流份收集量為〇. 5L/kgajR，經(jīng)薄層色譜檢查后合并所需組分，75?80°C減壓回收溶劑 至上柱樣品體積的1. 5?2倍，靜置15?18h，析出沉淀，上層液返回反相層析硅膠柱分離， 沉淀于40°C真空干燥，得人參皂苷RcL
[0023] 前述的人參皂苷Rd的提取工藝中，所述薄層色譜檢查具體為：每流份分別取 10mL，蒸干，殘渣加ImL甲醇溶解，作為供試品溶液；另取適量人參皂苷Rd對照品，加甲醇制 成每ImL含2mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB的薄層色 譜法試驗，吸取所述供試品溶液5?10yL和對照品溶液5yL，分別點于同一硅膠GF254板 上，以正丁醇-乙酸乙酯-水=4 : 3 : 5的上層溶液作為展開劑，展開，取出，晾干，噴 以10%濃硫酸-乙醇溶液，于105°C加熱至斑點顯色清晰。
[0024] 前述的人參皂苷Rd的提取工藝中，所述含有人參皂苷Rd成分的藥材為三七、人參 或西洋參。
[0025] 為解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題，申請人對人參皂苷Rd提取工藝進行了完善研宄， 具體如