一種人參皂苷提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離提取領(lǐng)域，具體設(shè)及一種人參皂巧提取物及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人參（PanaxginsengC.AMeyer)為五加科人參屬多年生宿根草本植物，主產(chǎn)于 吉林、迂寧、黑龍江、河北、山西等地，是我國名貴的中藥材，具有主補(bǔ)五臟、安精神、定魂魄、 止驚惇、除邪氣、生津止渴、安神益智、益壽延年之功效，是滋補(bǔ)的佳品，有"百草之王"的美 譽(yù)。人參皂巧是人參的主要成分之一，約占人參總質(zhì)量的4%。人參皂巧是一種固醇類化合 物，屬=祗類皂巧，由巧元和糖連接而成，具有相似的基本結(jié)構(gòu)，根據(jù)糖巧基結(jié)構(gòu)的不同分 為3類：齊墳果酸型（如Ro)、人參二醇型（如化1、化2、Rg3、化I、化2、PPD)、人參S醇型 巧e、Rgl、化1、PPT)，其中F2、Rg3、化2等存在于野山參和紅參中并且含量極低，稱為稀有人 參皂巧。目前從人參中分離得到150余種人參皂巧單體，其具有改善微循環(huán)、保護(hù)屯、功能、 提高組織抗缺氧能力、抗癌、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗福射、抗疲勞等多種生物活性。
[0003] 目前，提取人參皂巧的方法有W下幾種，煎煮法、溫浸法、乙醇回流提取法、微波提 取法、超聲波提取法、索氏提取法、柱層析法、超臨界萃取法、酶提取法等。其中，乙醇回流提 取法提取效率高，但是醇對(duì)于葉綠素的溶解性較大，不易去除，從而影響提取物質(zhì)量；超聲 波提取法應(yīng)用于許多植物的有效成分的提取，操作簡單，提取時(shí)間短，得率高，但是提取效 果受人參含水量的影響，同時(shí)存在噪音大，影響人體健康，難W實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)的不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種人參皂巧提取物，W及通過凍融法提取人參皂巧的制備 方法，該方法操作簡單、提取率高、成本低，最重要的是在凍融過程中實(shí)現(xiàn)人參皂巧的轉(zhuǎn)化， 使得人參皂巧提取物中含有抗腫瘤活性物質(zhì)原人參二醇（PPD)。
[0005] 本發(fā)明的目的通過采用W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 一種人參皂巧提取物，由W下凍融法提取制備： 曰、取鮮人參，去除異物后切成小片； b、放入超低溫冰箱中冷凍，然后解凍，反復(fù)凍融； C、粉碎后加入80%甲醇水溶液超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮；t加入去離子水溶解后，用乙酸、飽和正下醇溶液萃取，減壓濃縮，得到人參皂巧提取 物，所得到的人參皂巧提取物中含有化1、化2、Rc、Rd人參主皂巧和轉(zhuǎn)化得到的抗腫瘤活性 物質(zhì)原人參二醇（PPD)。
[0006] -種人參皂巧提取物的制備方法，包括W下步驟： 曰、取鮮人參，去除異物后切成片； b、放入超低溫冰箱中冷凍，然后解凍； C、粉碎后加入80%甲醇水溶液超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮； t加入去離子水溶解后，用乙酸、飽和正下醇溶液萃取，減壓濃縮，得到人參皂巧提取 物。
[0007]進(jìn)一步地，所述的b步驟中冷凍溫度為-30°C至-80°C，冷凍時(shí)間為5-25h;在18°C 至25°C下自然解凍5-25h;重復(fù)凍融b步驟1-6次。
[0008] 進(jìn)一步地，所述的C步驟加入80%甲醇水溶液50-200血，在50°C超聲提取 10-50min。
[0009] 進(jìn)一步地，所述的d步驟中，將C步驟得到的粗提物用40-60血去離子水溶解，用 等體積的乙酸萃取S次，保留下層，用40-60mL飽和正下醇溶液提取，減壓濃縮，得到人參 皂巧提取物。
[0010] 進(jìn)一步地，所述的d步驟所得到的人參皂巧提取物中含有化1，化2,Re,Rd人參主 皂巧和轉(zhuǎn)化得到的抗腫瘤活性物質(zhì)原人參二醇（PPD)。
[0011] 凍融法是一種廣泛用于動(dòng)植物、微生物和病理醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法，是指反復(fù)冷凍與 融化時(shí)由于細(xì)胞中形成了冰晶，使剩余液體中鹽濃度增高，導(dǎo)致膜組織結(jié)構(gòu)不同的程度改 變的一種方法。表現(xiàn)為細(xì)胞器膜脂質(zhì)雙分子層變化，橫向的脂質(zhì)分離成單個(gè)結(jié)構(gòu)域，W及 膜通透性的變化，從而有利于胞內(nèi)物質(zhì)流出。有報(bào)道凍融法被用于農(nóng)桿菌、根瘤菌的轉(zhuǎn)化研 究，W及被用于植物血清素、葉綠素糖、動(dòng)物血纖維蛋白原的提取和基因工程受體細(xì)胞破碎 等諸多領(lǐng)域。
[0012] 本發(fā)明的有益效果在于： (1)采用凍融技術(shù)提取人參有效成分人參皂巧，該方法中人參經(jīng)過反復(fù)凍融導(dǎo)致細(xì)胞 膜和組織結(jié)構(gòu)的機(jī)械損傷，增強(qiáng)膜的通透性，促進(jìn)植物細(xì)胞代謝產(chǎn)物的釋放，從而提高有效 成分的提取率。
[0013] (2)凍融法提取人參皂巧過程中，實(shí)現(xiàn)人參皂巧的轉(zhuǎn)化，即多糖鏈人參皂巧巧曰 化1等）轉(zhuǎn)化為生物活性更強(qiáng)的低糖鏈人參皂巧（F2等）或無糖鏈的原人參二醇（PPD);提取 物中生成有抗腫瘤活性物質(zhì)原人參二醇（PPD)，運(yùn)是在凍融法應(yīng)用于人參皂巧提取中從未 有報(bào)道的。
【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)人參皂巧提取物中稀有人參皂巧PPD標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 為了更清楚地理解本發(fā)明，下面通過具體的實(shí)施例進(jìn)一步做詳細(xì)描述。運(yùn)些實(shí)施 例僅用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明，而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[001引實(shí)施例1 準(zhǔn)確稱取一定量人參(鮮參)，去除異物后切成小片；-30°c冷凍12h，室溫20°C下解凍 5h，反復(fù)凍融3次；粉碎后加入80%甲醇水溶液，50°C超聲提取20min，過濾，濾液減壓濃縮； 加入去離子水溶解后，用飽和正下醇溶液萃取，減壓濃縮，得到人參皂巧提取物。經(jīng)HPLC測(cè) 試，得到人參皂巧化1含量為8. 06mg/g、Re含量為4. 79mg/g、化2含量為5. 30mg/g、Rd含 量為 1. 95mg/g。
[0017]實(shí)施例2 準(zhǔn)確稱取一定量人參(鮮參)，去除異物后切成小片；-70°C冷凍12h，室溫18°C至25°C下解凍lOh，反復(fù)凍融4次；粉碎后加入80%甲醇水溶液50-200血，50°C超聲IO-SOmi，過濾， 濾液減壓濃縮，得粗提物；為粗提物中加入40-60mL去離子水溶解后，用等體積的乙酸萃取 =次，保留下層，用40-60血飽和正下醇溶液提取，減壓濃縮，得到人參皂巧提取物。經(jīng)HPLC 測(cè)試，得到人參皂巧化1含量為7. 53mg/g，Rc含量為4. 84mg/g，化2含量為5. 40mg/g，Rd含 量為 1. 64mg/g。
[001引實(shí)施例3 準(zhǔn)確稱取一定量人參(鮮參)，去除異物后切成小片；-80°C冷凍lOh，室溫18°C至25°C下解凍5-25h，反復(fù)凍融5次；粉碎后加入80%甲醇水溶液，50°C超聲提取30min,過濾，濾 液減壓濃縮，得粗提物；在粗提物中加入去離子水溶解后，，用等體積的乙酸萃取=次，保留 下層，用40-60mL飽和正下醇溶液提取，減壓濃縮，得到人參皂巧提取物。經(jīng)HPLC測(cè)試，得 到人參皂巧化1含量為6. 35mg/g，Rc含量為3. 22mg/g，化2含量為4. 07mg/g，Rd含量為 1. 09mg/g0
[0019] 在實(shí)施例1、2、3的實(shí)施過程中，調(diào)節(jié)凍融條件可得到不同比例的人參皂巧提取 物，并且在凍融過程中實(shí)現(xiàn)人參皂巧的轉(zhuǎn)化，得到抗腫瘤活性物質(zhì)原人參二醇（PPD)，其含 量達(dá)到0.llmg/g。人參皂巧提取物中稀有人參皂巧PPD標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。
[0020] 測(cè)試實(shí)施例 準(zhǔn)確稱取一定量人參，分別按照實(shí)施例1-3提供的方法提取人參皂巧，同時(shí)將未經(jīng)凍 融的人參作為對(duì)照組提取人參皂巧，利用高效液相色譜（HPLC)測(cè)定人參皂巧含量。
[0021] 高效液相色譜法測(cè)定人參皂巧的具體步驟為： a、 精密準(zhǔn)確稱取人參皂巧標(biāo)準(zhǔn)品，色譜級(jí)甲醇溶解，利用峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1 所示，X:峰面積；y:濃度（mg/mL); b、 色譜條件為：流動(dòng)相：水（A)-乙臘度)，洗脫梯度如表1所示；流速：lmL/min;檢測(cè) 波長：203nm;柱溫：30°C;進(jìn)樣體積：10yL。
[0022] 表1為高效液相色譜流動(dòng)相梯度表
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人參皂苷提取物，由以下凍融法提取制備： a、 取鮮人參，去除異物后切成小片； b、 放入超低溫冰箱中冷凍，然后解凍，反復(fù)凍融； c、 粉碎后加入80%甲醇水溶液超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮； d、 加入去離子水溶解后，用乙醚、飽和正丁醇溶液萃取，減壓濃縮，得到人參皂苷提取 物，所得到的人參皂苷提取物中含有Rbl、Rb2、Rc、Rd人參主皂苷和轉(zhuǎn)化得到的抗腫瘤活性 物質(zhì)原人參二醇（pro)。2. -種人參皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟： a、 取鮮人參，去除異物后切成片； b、 放入超低溫冰箱中冷凍，然后解凍，反復(fù)凍融； c、 粉碎后加入80%甲醇水溶液超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮； d、 加入去離子水溶解后，用乙醚、飽和正丁醇溶液萃取，減壓濃縮，得到人參皂苷提取 物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種人參皂苷提取物的制備方法，其特征在于所述的b步驟 中冷凍溫度為_30°C至_80°C，冷凍時(shí)間為5-25h;在18°C至25°C下自然解凍5-25h;重復(fù)凍 融b步驟1-6次。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種人參皂苷提取物的制備方法，其特征在于所述的c步驟 加入80%甲醇水溶液50-200mL，在50°C超聲提取10_50min。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種人參皂苷提取物的制備方法，其特征在于所述的d步驟 中，將c步驟得到的粗提物用40-60mL去離子水溶解，用等體積的乙醚萃取三次，保留下層， 用40-60mL飽和正丁醇溶液提取，減壓濃縮，得到人參皂苷提取物。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種人參皂苷提取物的制備方法，其特征在于所述的d步驟 所得到的人參皂苷提取物中含有Rbl，Rb2,Rc，Rd人參主皂苷和轉(zhuǎn)化得到的抗腫瘤活性物 質(zhì)原人參二醇（pro)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種人參皂苷提取物及其制備方法。提取物中含有Rb1、Rb2、Rc、Rd人參主皂苷和轉(zhuǎn)化得到的抗腫瘤活性物質(zhì)原人參二醇（PPD）。其制備方法采用凍融法提取人參皂苷，該方法包括以下步驟：a、取鮮人參，去除異物后切成片；b、放入超低溫冰箱中冷凍，然后解凍，反復(fù)凍融；c、粉碎后加入80%甲醇水溶液超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮；d、加入去離子水溶解后，用乙醚、飽和正丁醇溶液萃取，減壓濃縮，得到人參皂苷提取物。本發(fā)明方法操作簡單，與傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑法相比提取收率高、成本低，并且能夠得到抗腫瘤活性物質(zhì)原人參二醇（PPD）。
【IPC分類】A61P39/00, A61P35/00, A61P9/00, A61K36/258, C07J9/00, A61P39/06
【公開號(hào)】CN105343143
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510749152
【發(fā)明人】尹成日, 陳賀, 吳昊, 金英今
【申請(qǐng)人】延邊大學(xué)
【公開日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年11月6日