專利名稱：紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的質(zhì)量檢查方法，具體是紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法。
背景技術(shù)：
在已有技術(shù)中，大株紅景天注射液是通化玉圣藥業(yè)股份有限公司獨(dú)家生產(chǎn)的專利產(chǎn)品，國藥準(zhǔn)字Z20060361。性狀本品為淡黃色至棕黃色的澄明液體。成份大株紅景天，適應(yīng)癥狀活血化瘀。冠心病穩(wěn)定型勞累性心絞痛。癥見胸部刺痛，絞痛，固定不移，痛引肩背及臂內(nèi)側(cè)，胸悶，心悸不寧，唇舌紫暗，脈細(xì)澀。用法用量靜脈滴注。一次IOml加入250ml氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液中，一日一次，10天為ー療程。現(xiàn)代中藥技術(shù)中，對中藥注射劑增加了指紋圖譜的定性檢測要求，以控制產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性，目前市場銷售的中藥注射劑采用指紋圖譜進(jìn)行定性檢測的品種很少，執(zhí)行指紋圖譜檢測的幾個(gè)中藥注射劑中，多采用已知批次的藥品做10 20批次后，生成平均指紋圖譜，對以后再生成產(chǎn)的同一品種藥品與此平均圖譜進(jìn)行相似度評價(jià)，來確定是否合格，這種方法存在一定的不足之處，用來做相似度評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)平均指紋圖譜一旦制定就不能改變，一直沿用下去，隨著生產(chǎn)的逐漸擴(kuò)大，藥材產(chǎn)地的變化，藥材采摘時(shí)間的變化等不確定因素，可能導(dǎo)致不同批次的產(chǎn)品的相似度平均不合格。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對上述不足而提供一種以指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為對照品，在同等實(shí)驗(yàn)條件下，即時(shí)進(jìn)行相似度評價(jià)，提高檢查準(zhǔn)確率的檢查紅景天注射液指紋圖譜檢查方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是本發(fā)明采用藥材按實(shí)際生產(chǎn)エ藝做成紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，作為對照品，此標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)滿足國家藥監(jiān)局批復(fù)的紅景天注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中指紋圖譜檢查標(biāo)準(zhǔn)，檢驗(yàn)生產(chǎn)的藥品時(shí)，用此紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與藥品同時(shí)進(jìn)行高效液相檢測，并即時(shí)進(jìn)行相似度評價(jià)，這樣更能真實(shí)反映藥品是否合格。紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可采用同一品種的不同產(chǎn)地、不同年份的藥材分別按エ藝制成，并且可以每年制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，這樣實(shí)際生產(chǎn)過程中的產(chǎn)品就會有針對性的進(jìn)行相似度評價(jià)，可以及時(shí)的對藥品內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行檢測，加強(qiáng)了質(zhì)量控制，避免了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)陳舊而不能實(shí)時(shí)滿足生產(chǎn)需求。紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法，包括如下步驟
(O建立紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；
a、紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備提取大株紅景天得粉劑；
取大株紅景天1670g，加水煎煮三次，每次加水6倍，煎煮2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為I. 15 I. 20 (50°C)的清膏，加こ醇使含醇量達(dá)70%，攪勻，冷藏24小時(shí)(5 10°C)，濾過，沉淀以5 10°C的少量70%こ醇洗滌一次，濾過，合并濾液，回收こ醇并濃縮至相對密度為I. 15 I. 20 (50 0C )的清膏，再加こ醇使含醇量達(dá)85%，攪勻，冷藏24小時(shí)(5 10°C)，濾過，沉淀以5 10°C的少量85%こ醇洗滌一次，濾過，合并濾液，調(diào)pH值至8. 0，冷藏12小時(shí)(5 10°C )，濾過，濾液回收こ醇并濃縮至相對密度為I. 20 I. 30(50°C)的清膏，加入注射用水IOOOml，冷藏12小時(shí)(5 10°C )，濾過，濾液調(diào)pH值至7. O，加熱煮沸30分鐘，冷藏72小時(shí)(5 10°C )，濾過，濾液以截留分子量為10000的超濾柱超濾，超濾液加注射液用水定容至1000ml，超濾液加入IOOg甘露醇，邊攪拌邊加熱，煮沸30min，降至室溫，用O. 22 μ m微孔濾膜過濾，灌封至2ml西林瓶中，每瓶裝2ml，裝好膠塞，放入凍干機(jī)中，按規(guī)定凍干曲線操做，冷凍結(jié)束后，取出壓蓋，即得。b、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的制備
取上述紅景天指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)I支(相當(dāng)于紅景天注射液2ml)加水稀釋至IOml,搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，毎次5ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)幼⑸溆盟芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得；
c、供試品溶液的制備
取紅景天注射液2ml,加水至IOml,搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次,姆次5ml,合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)幼⑸溆盟芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，
O.45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得；
d、色譜條件
采用菲羅門Phenomenex色譜分析柱,流動相為O. 07 %磷酸溶液、こ腈一甲醇(體積比1:1);檢測波長278nm ;柱溫:30°C，進(jìn)行梯度洗脫；
e、測定
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，測定，紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜與供試品指紋圖譜采用相似度軟件進(jìn)行評價(jià)，相似度不應(yīng)低于O. 95 ；
(2)以步驟(I)相同的方法建立待測紅景天注射液樣品的指紋圖譜；
(3)將步驟(2)得到的紅景天注射液樣品指紋圖譜與紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行相似度評價(jià)，篩選符合紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜要求的樣品?？梢砸远嗯未笾昙t景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜生成的綜合對照指紋圖譜為參照，計(jì)算多批次注射液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜的相似度。優(yōu)選以三批大株紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜生成的綜合對照指紋圖譜為參照，計(jì)算十批注射液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜的相似度；十批注射液與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜的相似度均大于O. 98。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、以紅景天注射液生產(chǎn)エ藝制定的紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與時(shí)間生產(chǎn)相符合，并且包含著紅景天大部分活性成分，定性的確定紅景天注射液的主要成分，與已批復(fù)的紅景天注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相一致，為完整、準(zhǔn)確評價(jià)紅景天注射液質(zhì)量提供了新的檢查方法。2、可以及時(shí)檢查出該紅景天注射液中是否雜質(zhì)過多，給患者帶來ー定安全隱患；3、本方法具有簡便、穩(wěn)定、即時(shí)的特點(diǎn)，有利于提高檢查準(zhǔn)確率。4、對照品可采用同一品種的不同產(chǎn)地、不同年份的藥材分別按エ藝制成，并且可以每年生產(chǎn)對照品，這樣實(shí)際生產(chǎn)過程中的產(chǎn)品就會有針對性的進(jìn)行相似度評價(jià)，可以及時(shí)的對藥品內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行檢測，加強(qiáng)了質(zhì)量控制，避免了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)陳舊而不能實(shí)時(shí)滿足生產(chǎn)需求。下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)描述。


圖I大株紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖2大株紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜。圖3是十批大株紅景天注射液指紋圖譜與紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜 疊加圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備 紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備包括如下步驟 a、紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備
取大株紅景天1670g，加水煎煮三次，每次加水6倍，煎煮2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為I. 15 I. 20 (50°C)的清膏，加こ醇使含醇量達(dá)70%，攪勻，冷藏24小時(shí)(5 10°C)，濾過，沉淀以5 10°C的少量70%こ醇洗滌一次，濾過，合并濾液，回收こ醇并濃縮至相對密度為I. 15 I. 20 (50 0C )的清膏，再加こ醇使含醇量達(dá)85%，攪勻，冷藏24小時(shí)(5 10°C)，濾過，沉淀以5 10°C的少量85%こ醇洗滌一次，濾過，合并濾液，調(diào)pH值至8. 0，冷藏12小時(shí)(5 10°C )，濾過，濾液回收こ醇并濃縮至相對密度為I. 20 I. 30(50°C)的清膏，加入注射用水IOOOml，冷藏12小時(shí)(5 10°C )，濾過，濾液調(diào)pH值至7. O，加熱煮沸30分鐘，冷藏72小時(shí)(5 10°C )，濾過，濾液以截留分子量為10000的超濾柱超濾，超濾液加注射液用水定容至1000ml，超濾液加入IOOg甘露醇，邊攪拌邊加熱，煮沸30min，降至室溫，用O. 22 μ m微孔濾膜過濾，灌封至2ml西林瓶中，每瓶裝2ml，裝好膠塞，放入凍干機(jī)中，按規(guī)定凍干曲線操做，冷凍結(jié)束后，取出壓蓋，即得。b、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的制備
取上述紅景天指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)I支(I支就是相當(dāng)于注射液2ml，因?yàn)榇怂幨怯?ml注射液制成的，使用時(shí)整支藥用水溶解全部使用)，加水稀釋至IOml，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，毎次5ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)幼⑸溆盟芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。C、色譜條件
色譜柱菲羅門Phenomenex碳十八C18 (2) (4. 60 X 150mm 5μ)色譜分析柱；流動相為Α 0. 07%磷酸溶液，B :こ腈一甲醇(50 50);檢測波長278nm ;柱溫30°C ;檢測儀器島津SPD — IQkvp, LC 一 IOA叩。按下表梯度洗脫，見表I。表I
權(quán)利要求
1.一種紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法，其特征在于包括如下步驟 (1)建立紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜； a、紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備提取大株紅景天得粉劑； b、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的制備 取上述紅景天指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)I支，相當(dāng)于注射液2ml，加水稀釋至10ml，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，毎次5ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)幼⑸溆盟芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得； C、供試品溶液的制備 取紅景天注射液2ml,加水至IOml,搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次,姆次5ml,合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)幼⑸溆盟芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，O.45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得； d、色譜條件 采用菲羅門Phenomenex色譜分析柱,流動相為O. 07 %磷酸溶液、こ腈一甲醇,體積比I 1 ;檢測波長278nm ;柱溫:30°C，進(jìn)行梯度洗脫； e、測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜與供試品指紋圖譜采用相似度軟件進(jìn)行評價(jià)，相似度不應(yīng)低于O. 95 ； (2)以步驟(I)相同的方法建立待測紅景天注射液樣品的指紋圖譜； (3)將步驟(2)得到的紅景天注射液樣品指紋圖譜與紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行相似度評價(jià)，篩選符合紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜要求的樣品。
2.按照權(quán)利要求I所述的紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法，其特征在于 紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備如下取大株紅景天1670g,加水煎煮三次,姆次加水6倍，煎煮2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為I. 15 I. 20的清膏，溫度50°C;加こ醇使含醇量達(dá)70%，攪勻，冷藏24小時(shí)，溫度5 10°C，濾過，沉淀以5 10°C的少量70%こ醇洗滌一次，濾過，合并濾液，回收こ醇并濃縮至相對密度為I. 15 I. 20的清膏，溫度50°C ;再加こ醇使含醇量達(dá)85%，攪勻，冷藏24小時(shí)，溫度5 10°C，濾過，沉淀以5 10°C的少量85%こ醇洗滌一次，濾過，合并濾液，調(diào)pH值至8. O,冷藏12小時(shí)，溫度5 10°C，濾過，濾液回收こ醇并濃縮至相對密度為I. 20 I. 30的清膏，溫度50°C，加入注射用水1000ml，冷藏12小時(shí)，溫度5 10°C，濾過，濾液調(diào)pH值至7. 0，加熱煮沸30分鐘，冷藏72小時(shí)，溫度5 10°C，濾過，濾液以截留分子量為10000的超濾柱超濾，超濾液加注射液用水定容至1000ml,超濾液加入IOOg甘露醇,邊攪拌邊加熱,煮沸30min,降至室溫,用0.22 um微孔濾膜過濾，灌封至2ml西林瓶中，每瓶裝2ml，裝好膠塞，放入凍干機(jī)中，按規(guī)定凍干曲線操做，冷凍結(jié)束后，取出壓蓋，即得。
3.按照權(quán)利要求I所述的紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法，其特征在于紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜應(yīng)符合下列要求 供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜應(yīng)有18個(gè)共有峰；相對保留時(shí)間0. 15±10%(I)，O. 20±10%(2)，O. 97±10%(3)，I. 18±10%(4)，I. 31 ±10%(5)，·1.42±10%(6)，I. 51 + 10% (7)， I. 61 ± 10% (8)， I. 85+ 10% (9)，2. 01±10%(10)，·2.12±10%(11)，2· 33±10%(12)，2· 44±10%(13) ,2. 62 ± 10% (14)，2. 82±10% (15)，·2.91±10% (16)，2. 99±10% (17)，3. 07± 10% (18);非共有峰面積之和不得過總峰面積的 15%。
4.按照權(quán)利要求I所述的紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法，其特征在于以多批次大株紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜生成的綜合對照指紋圖譜為參照，計(jì)算多批次注射液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜的相似度。
5.按照權(quán)利要求I所述的紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法，其特征在于以三批大株紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜生成的綜合對照指紋圖譜為參照，計(jì)算十批注射液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜的相似度；十批注射液與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜的相似度均大于O. 98。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的質(zhì)量檢查方法，即紅景天注射液的指紋圖譜檢查方法。具體步驟a、紅景天注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備b、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的制備c、供試品溶液的制備；d、色譜條件采用菲羅門Phenomenex色譜分析柱，流動相為0.07％磷酸溶液、乙腈－甲醇；檢測波長278nm；柱溫30℃，進(jìn)行梯度洗脫；e、測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，紅景天注射液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指紋圖譜與供試品指紋圖譜采用相似度軟件進(jìn)行評價(jià)，相似度不應(yīng)低于0.95。本方法具有簡便、穩(wěn)定、即時(shí)的特點(diǎn)，有利于提高檢查準(zhǔn)確率。
文檔編號G01N30/02GK102692464SQ201210196940
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月15日
發(fā)明者劉淑麗, 張愛平, 曹明光 申請人:通化玉圣藥業(yè)股份有限公司