復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法及檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別是涉及復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的構(gòu) 建方法及檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方救必應(yīng)制劑由中藥材救必應(yīng)、東風(fēng)桔、香附為原料，經(jīng)水提取后，按常規(guī)的制 藥工藝制成，具有清熱解毒、利濕止痛的功能，用于腹瀉、止痛等。復(fù)方救必應(yīng)制劑在中華人 民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十冊(cè)收載有復(fù)方救必應(yīng)膠囊，是深受歡迎的中藥 制劑。
[0003] 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)復(fù)方救必應(yīng)膠囊的質(zhì)量控制主要采用薄層色譜法，分別以救必應(yīng)對(duì)照 藥材、東風(fēng)桔對(duì)照藥材和香附對(duì)照藥材進(jìn)行鑒別，以判斷成品中是否有救必應(yīng)、東風(fēng)桔、香 附；現(xiàn)有技術(shù)還公開了采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方救必應(yīng)膠囊中紫丁香苷的含量的方 法，以表征復(fù)方救必應(yīng)制劑的質(zhì)量。
[0004] 以上針對(duì)投料藥材進(jìn)行鑒別或針對(duì)個(gè)別成分含量測(cè)定的方法，難以全面表征復(fù)方 救必應(yīng)制劑的物理化學(xué)特征，因此，對(duì)復(fù)方救必應(yīng)制劑的質(zhì)量控制方法有待進(jìn)一步完善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于此，有必要提供一種復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法及檢測(cè)方法。
[0006] -種復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：
[0007] (1)對(duì)照品溶液的制備：
[0008] 分別精密稱取紫丁香苷對(duì)照品和α -香附酮對(duì)照品，加甲醇稀釋，得紫丁香苷對(duì) 照品溶液和α-香附酮對(duì)照品溶液；
[0009] ⑵供試品溶液的制備：
[0010] 精密稱取復(fù)方救必應(yīng)制劑，加入體積百分含量為50-70%的甲醇，回流提取或超聲 提取30-45分鐘，過(guò)濾，即得供試品溶液；
[0011] (3)分別精密吸取紫丁香苷對(duì)照品溶液、α -香附酮對(duì)照品溶液和供試品溶液，注 入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，得到由19個(gè)共有特征峰構(gòu)成的復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜。
[0012] 本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人大量的實(shí)驗(yàn)和研宄，得到上述復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的構(gòu)建方 法：該方法以紫丁香苷、α -香附酮為參照指標(biāo)，配合適當(dāng)?shù)墓┰嚻诽崛》椒ê透咝б合嗌?譜儀的色譜條件，得出可全面表征復(fù)方救必應(yīng)制劑物理化學(xué)特征的指紋圖譜，該指紋圖譜 中有19個(gè)特征共有峰，注重各個(gè)構(gòu)成特征峰的前后順序和相互關(guān)系，注重整體面貌特征， 既避免了因測(cè)定一、二個(gè)化學(xué)成分而判定制劑整體質(zhì)量的片面性，又減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而 人為處理的可能性，能有效地表征復(fù)方救必應(yīng)制劑的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量，及鑒 別廣品的真?zhèn)巍?br>[0013] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟（3)中，高效液相色譜儀的條件如下：
[0014] 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；柱溫：25-30 °C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為 200-40011111;流速：0.8-1.21111^1^11_1;流動(dòng)相 ：甲醇為流動(dòng)相4,0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng) 相B，采用梯度洗脫方式。
[0015] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述梯度洗脫方式為：0-60min，流動(dòng)相A的體積百分?jǐn)?shù)由 10 %變化至95%。
[0016] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述柱溫為25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速為1.0 mL · mirT1。
[0017] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟（2)中，所述體積百分含量為50-70%的甲醇的用量為 每克復(fù)方救必應(yīng)制劑精密加入19-21毫升。
[0018] 本發(fā)明還提供一種復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0019] (1)對(duì)照品溶液的制備：
[0020] 分別精密稱取紫丁香苷對(duì)照品和α -香附酮對(duì)照品，加甲醇稀釋，得紫丁香苷對(duì) 照品溶液和α-香附酮對(duì)照品溶液；
[0021] (2)供試品溶液的制備：
[0022] 精密稱取復(fù)方救必應(yīng)制劑，加入體積百分含量為50-70%的甲醇，回流提取或超聲 提取30-45分鐘，過(guò)濾，即得供試品溶液；
[0023] (3)分別精密吸取紫丁香苷對(duì)照品溶液、α -香附酮對(duì)照品溶液和供試品溶液，注 入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。
[0024] 經(jīng)由上述復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的檢測(cè)方法對(duì)待測(cè)復(fù)方救必應(yīng)制劑樣品進(jìn)行 檢測(cè)，可獲得樣品具有代表性的指紋圖譜，通過(guò)與前述構(gòu)建方法獲得的具有19個(gè)特征共有 峰的指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照分析，能有效地判斷復(fù)方救必應(yīng)制劑的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品 質(zhì)量，及鑒別產(chǎn)品的真，同時(shí)避免了因測(cè)定一、二個(gè)化學(xué)成分而判定制劑整體質(zhì)量的片面 性，又減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能性。
[0025] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟（3)中，高效液相色譜儀的條件如下：
[0026] 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；柱溫：25-30 °C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為 200-40011111;流速：0.8-1.21111^1^11_ 1;流動(dòng)相：甲醇為流動(dòng)相4,0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng) 相B，采用梯度洗脫方式。
[0027] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述梯度洗脫方式為：0_60min，流動(dòng)相A的體積百分?jǐn)?shù)由 10 %變化至95%。
[0028] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述柱溫為25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速為1.0 mL .mirT1。
[0029] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述體積百分含量為50-70%的甲醇的用量為每克復(fù)方救 必應(yīng)制劑精密加入19-21毫升。
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0031] (1)本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人大量的實(shí)驗(yàn)和研宄，以紫丁香苷、α-香附酮為參照指標(biāo)，得 出可全面表征復(fù)方救必應(yīng)制劑物理化學(xué)特征的指紋圖譜的構(gòu)建方法，同時(shí)確定了制備供試 品溶液和對(duì)照品溶液，及高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)；該方法具有操作簡(jiǎn)便、結(jié) 果穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0032] (2)采用本發(fā)明的構(gòu)建方法所獲得的指紋圖譜中有19個(gè)特征共有峰，其能有效 地表征復(fù)方救必應(yīng)制劑的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量，及鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)?；指紋圖譜注 重各個(gè)構(gòu)成特征峰的前后順序和相互關(guān)系，注重整體面貌特征，既避免了因測(cè)定一、二個(gè)化 學(xué)成分而判定復(fù)方救必應(yīng)制劑整體質(zhì)量的片面性，又減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能 性。
[0033] (3)本發(fā)明所述復(fù)方救必應(yīng)制劑指紋圖譜的檢測(cè)方法，能更完整有效地判斷復(fù)方 救必應(yīng)制劑的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量，及鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)巍?br>【附圖說(shuō)明】
[0034] 圖1為主要色譜峰選擇HPLC圖；
[0035] 圖2為不同流動(dòng)相條件下HPLC圖；
[0036] 圖3為流動(dòng)相不同起始梯度條件下HPLC圖；
[0037] 圖4為不同柱溫條件下HPLC圖；
[0038] 圖5為不同流速條件下HPLC圖；
[0039] 圖6為四種提取溶劑考察HPLC圖；
[0040] 圖7為三種提取體積考察HPLC圖；
[0041] 圖8為不同提取方法考察HPLC圖；
[0042] 圖9為三種提取時(shí)間考察HPLC圖；
[0043] 圖10為四個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)條件下HPLC圖；
[0044] 圖11為四種色譜柱考察HPLC圖；
[0045] 圖12為復(fù)方救必應(yīng)膠囊、紫丁香苷對(duì)照品和α -香附酮對(duì)照品的HPLC圖；
[0046] 圖13為紫丁香苷對(duì)照品的HPLC圖；
[0047] 圖14為α -香附酮對(duì)照品的HPLC圖；
[0048] 圖15為復(fù)方救必應(yīng)膠囊樣品1-14的指紋圖譜；
[0049] 圖16為復(fù)方救必應(yīng)膠囊樣品1-14生成的對(duì)照指紋圖譜；
[0050] 圖17為救必應(yīng)藥材與復(fù)方救必應(yīng)膠囊疊加圖；
[0051] 圖18為香附藥材與復(fù)方救必應(yīng)膠囊疊加圖；