東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法和檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥材檢測領(lǐng)域，特別是涉及東風(fēng)桔指紋藥材圖譜的構(gòu)建方法和檢測方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 東風(fēng)桔為蕓香科酒餅簕屬植物的根，氣香，味微辛、苦，性溫。具有祛風(fēng)散寒、行氣 止痛功效，用于治療支氣管炎、風(fēng)寒咳嗽、感冒發(fā)燒、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性胃炎、胃潰瘍及跌 打腫痛等。
[0003] 東風(fēng)桔為樹根，目前中藥材有多種外觀與其相似的易混淆品，而現(xiàn)有的檢測是否 為東風(fēng)桔的方法較為復(fù)雜，如通過對東風(fēng)桔的根和莖分別作性狀、顯微觀察等研宄進(jìn)行鑒 另Ij，其結(jié)果也不夠直觀全面，誤差較大。
[0004] 因此，有必要建立一種準(zhǔn)確、簡便、全面、直觀的東風(fēng)桔藥材檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于此，有必要提供一種東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法和檢測方法。
[0006] -種東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：
[0007] 精密稱取東風(fēng)桔藥材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超聲提取45_60min，過濾， 即得供試品溶液；
[0008] 精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，得到由18個共有特征峰 構(gòu)成的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜。
[0009] 在其中一個實(shí)施例中，所述高效液相色譜儀的條件為：
[0010] 色譜柱為C18色譜柱；流速為0. 8-1. 2mL · mirT1;檢測波長252-256nm ;柱溫 25-35°C ;流動相：以乙腈為流動相A，0. 5%冰乙酸水溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式。
[0011] 在其中一個實(shí)施例中，所述流速為1.0 mL · mirT1，檢測波長為254nm，柱溫為35°C。
[0012] 在其中一個實(shí)施例中，所述梯度洗脫方式為：0-30min，流動相A的體積百分?jǐn)?shù)由 20%變化至50% ;30-70min，流動相A的體積百分?jǐn)?shù)由50%變化至100%。
[0013] 在其中一個實(shí)施例中，所述甲醇的用量為每克東風(fēng)桔藥材粉末精密加入19-21毫 升。
[0014] 本發(fā)明還提供一種東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的檢測方法，包括如下步驟：
[0015] 精密稱取東風(fēng)桔藥材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超聲提取45-60min，過濾， 即得供試品溶液；
[0016] 精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定。
[0017] 在其中一個實(shí)施例中，所述高效液相色譜儀的條件為：
[0018] 色譜柱為C18色譜柱；流速為0. 8-1. 2mL · mirT1;檢測波長252-256nm ;柱溫 25-35°C ;流動相：以乙腈為流動相A，0. 5%冰乙酸水溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式。
[0019] 在其中一個實(shí)施例中，所述流速為1.0 mL · mirT1，檢測波長為254nm，柱溫為35°C。
[0020] 在其中一個實(shí)施例中，所述梯度洗脫方式為：0_30min，流動相A的體積百分?jǐn)?shù)由 20%變化至50% ;30-70min，流動相A的體積百分?jǐn)?shù)由50%變化至100%。
[0021] 在其中一個實(shí)施例中，所述甲醇的用量為每克東風(fēng)桔藥材粉末精密加入19-21毫 升。
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0023] 本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人的大量實(shí)驗(yàn)和研宄，確定了制備供試品溶液的方法、高效液相色 譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)，由此構(gòu)建出東風(fēng)桔藥材的指紋圖譜，該指紋圖譜中有18個特 征共有峰，可較為全面的表征東風(fēng)桔藥材的物理化學(xué)特征。
[0024] 采用本發(fā)明方法構(gòu)建的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜以及檢測方法，可以準(zhǔn)確直觀地鑒定 東風(fēng)桔藥材，同時具有操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說明】
[0025] 圖1為溶劑峰考察HPLC圖；
[0026] 圖2為不同流動相條件下HPLC圖；
[0027] 圖3為流動相不同起始梯度條件下HPLC圖；
[0028] 圖4為最佳流動相起始梯度條件下HPLC圖；
[0029] 圖5為不同流速條件下HPLC圖；
[0030] 圖6為不同柱溫條件下HPLC圖；
[0031] 圖7為四個檢測波長條件下HPLC圖；
[0032] 圖8為四種色譜柱考察HPLC圖；
[0033] 圖9為六種提取溶劑考察HPLC圖；
[0034] 圖10為不同提取體積考察HPLC圖；
[0035] 圖11為不同提取方法考察HPLC圖；
[0036] 圖12為不同提取時間考察HPLC圖；
[0037] 圖13為東風(fēng)桔藥材樣品1-12的指紋圖譜；
[0038] 圖14為東風(fēng)桔藥材樣品1-12生成的對照指紋圖譜；
[0039] 圖15為待測藥材的指紋圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法和檢測方法作 進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0041] 實(shí)施例1
[0042] 本實(shí)施例為東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法。
[0043] -、儀器和材料
[0044] 1、儀器
[0045] KQ-100B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；T-214型電子分析天平 (Denver公司）；Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng)，Empower工作站，含四元梯度泵、自動進(jìn) 樣器、紫外檢測器（Waters公司）。
[0046] 2、試劑
[0047] 冰乙酸（色譜純，天津市化學(xué)試劑研宄所）；甲醇、乙腈（色譜純，Honeywell公 司）；水為超純水。
[0048] 3、材料
[0049] 東風(fēng)桔藥材（廣州白云山星群（藥業(yè)）股份有限公司提供，共12批，批號或產(chǎn)地分 別為 20110501、20111201、XG130701、XG111102、XG110501、XG140401、XG111002、20110401、 XG110401、20140501、廣東、廣西）。
[0050] 二、方法學(xué)考察
[0051] 1、溶劑峰的考察
[0052] 取東風(fēng)桔藥材粉末（過60目篩）約0.5g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密 加入甲醇l〇ml，密塞，稱重，回流加熱處理45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，0. 22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，HPLC分析東風(fēng)桔藥材樣品和甲醇溶劑空白，得 圖1。
[0053] 由圖1可知，通過比較甲醇和東風(fēng)桔藥材圖譜，可以發(fā)現(xiàn)，溶劑對主要的色譜峰無 太大影響，前5min的峰為溶劑峰，不選作主要色譜峰。
[0054] 2、流動相組成的選擇
[0055] 取約〇· 5g東風(fēng)桔藥材粉末（過60目篩）樣品1份，精密稱定，置100mL具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇l〇ml，密塞，稱重，回流加熱處理45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ) 足減失的重量，搖勻，0. 22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液HPLC分析，流動相組成及梯度見表 1，得圖2。
[0056] 表1四種流動相組成信息
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟： 精密稱取東風(fēng)桔藥材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超聲提取45-60min，過濾，即得 供試品溶液； 精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，得到由18個共有特征峰構(gòu)成 的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述高效液 相色譜儀的條件為： 色譜柱為C18色譜柱；流速為0. 8-1. 2mL?miiT1;檢測波長252-256nm;柱溫25-35°C; 流動相：以乙腈為流動相A，0. 5%冰乙酸水溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述流速為 I.OmL?mirf1，檢測波長為254nm，柱溫為35°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述梯度洗 脫方式為：0-30min，流動相A的體積百分?jǐn)?shù)由20%變化至50% ;30-70min，流動相A的體積 百分?jǐn)?shù)由50 %變化至100%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述甲醇的 用量為每克東風(fēng)桔藥材粉末精密加入19-21毫升。
6. -種東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟： 精密稱取東風(fēng)桔藥材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超聲提取45-60min，過濾，即得 供試品溶液； 精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，所述高效液 相色譜儀的條件為： 色譜柱為C18色譜柱；流速為0. 8-1. 2mL?miiT1;檢測波長252-256nm;柱溫25-35°C; 流動相：以乙腈為流動相A，0. 5%冰乙酸水溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，所述流速為 I.OmL?mirf1，檢測波長為254nm，柱溫為35°C。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，所述梯度洗 脫方式為：0-30min，流動相A的體積百分?jǐn)?shù)由20%變化至50% ;30-70min，流動相A的體積 百分?jǐn)?shù)由50 %變化至100%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，所述甲醇的 用量為每克東風(fēng)桔藥材粉末精密加入19-21毫升。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種東風(fēng)桔藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法及檢測方法。所述構(gòu)建方法包括如下步驟：精密稱取東風(fēng)桔藥材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超聲提取45-60min，過濾，即得供試品溶液；精密吸取供試品溶液，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，得到由18個共有特征峰構(gòu)成的東風(fēng)桔藥材指紋圖譜。該指紋圖譜中有18個特征共有峰，可較為全面的表征東風(fēng)桔藥材的物理化學(xué)特征，以此可以準(zhǔn)確直觀地鑒定東風(fēng)桔藥材，同時具有操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104777254
【申請?zhí)枴緾N201510188251
【發(fā)明人】方鐵錚, 姚江雄, 許招懂, 蔣莉娟
【申請人】廣州白云山星群(藥業(yè))股份有限公司
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年4月20日