生何首烏的hplc指紋圖譜檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了生何首烏的HPLC指紋圖譜檢測方法，它包括以下步驟：(1)對照品溶液的制備；(2)參照物溶液的制備：(3)對照指紋圖譜的建立：(4)供試品溶液的制備；(5)供試品溶液的檢測。本發(fā)明的指紋圖譜出峰多，分離度良好，重復性好，精密度高，為全面監(jiān)控生何首烏質量提供了有效保障。利用本發(fā)明指紋圖譜檢測方法的提取方法和色譜條件，還可以測得生何首烏中16種成分的含量，從而可以從更多的角度來控制生何首烏的質量。
【專利說明】
生何首烏的HPLC指紋圖譜檢測方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及藥物質量控制方法技術領域，尤其涉及生何首烏的HPLC指紋圖譜檢測 方法。
【背景技術】
[0002] 何首烏為寥科植物何首烏(Polygonum Multif lorum Thunb.)的干燥塊根，其性 平，味甘、苦，歸心、、肝、大腸經，具有解毒、消癰、截皰、潤腸通便的功效;為常用中藥。其在全 國各地分布廣泛，主產于河南、湖北、廣西、廣東、貴州、四川等地。
[0003] 何首烏中的二苯乙烯苷類和蒽醌類成分為其代表性活性成分。其中，二苯乙烯苷 具有顯著的神經保護作用；蒽醌類成分具有抗炎、抗病原微生物、抗腫瘤、利尿、保肝等作 用，其中大黃素具有抗炎、抗病原微生物、抗腫瘤、利尿、保肝等作用，大黃素-8-β-ο-吡喃葡 萄糖苷則具有益智活性。
[0004] 目前《中國藥典》2015年版何首烏項下采用紫外-可見光分光光度法對何首烏的2， 3,5,4_四羥基二苯乙烯-2-〇-i3-D葡萄糖苷和大黃素含量進行了測定，以測定結果建立了質 量標準。
[0005] 然而，考慮到中藥材的成分繁多，且各個成分間容易相互影響，僅以一兩個有效成 分的含量難以全面評價中藥的真實質量。因此，目前需要一種可以監(jiān)控生何首烏中多個成 分的檢測方法，以更加全面地監(jiān)控生何首烏的質量狀況。
【發(fā)明內容】
[0006] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種生何首烏的HPLC指紋圖譜檢測方法，它包括 以下步驟：
[0007] 生何首烏的HPLC指紋圖譜檢測方法，其特征在于:它包括以下步驟：
[0008] (1)對照品溶液的制備：取生何首烏藥材，粉碎得藥材粉末，40~60%乙醇水溶液 提取，過濾，得生何首烏對照品溶液;優(yōu)選的乙醇濃度為50 % ;
[0009] (2)參照物溶液的制備：取沒食子酸、原花青素 B1、兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃 素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大 黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚對照品適量，混合，加入甲醇，得到參照物溶液；
[0010] (3)對照指紋圖譜的建立：
[0011] 分別取參照物溶液和由不同批次生何首烏藥材制備得到的對照品溶液，注入高效 液相色譜儀檢測，得到各批次藥材和參照物的色譜數據;色譜條件如下：
[0012] 檢測波長：254 ~275nm;
[0013] 色譜柱:C18色譜柱和C18預柱；
[0014] 流動相:流動相A為0.1 %甲酸水，流動相B為乙腈；
[0015] 梯度洗脫程序如下：
[0017] 對所得色譜數據進行處理，建立生何首烏的對照指紋圖譜；
[0018] (4)供試品溶液的制備:取待測藥材，按照步驟（1)相同的方法制備得到供試品溶 液；
[0019] (5)按照步驟(3)相同的色譜條件，將供試品溶液注入高效液相色譜儀檢測，將所 得色譜圖與對照指紋圖譜進行比對，可鑒別出生何首烏及其質量狀況。
[0020] 進一步地，步驟(1)中，所述提取超聲提取。
[0021 ] 進一步地，所述超聲提取的時間為60min。
[0022] 進一步地，步驟(1)中，所述提取的溫度是40°C。
[0023] 進一步地，步驟(1)中，所述藥材乙醇水溶液的重量體積比為lg: 20mL。
[0024] 進一步地，所述C18色譜柱為ZORBAX C18色譜柱，長度為250mm，內徑為4.6mm，填料 的粒徑為5μπι;所述C18預柱為ZORBAX C18色譜柱，長度為12.5mm，內徑為4.6mm，填料的粒徑 為 5μηι· 〇
[0025] 進一步地，所述色譜條件的柱溫為30°C。
[0026] 進一步地，所述色譜條件的流速為I .OmL/min。
[0027] 進一步地，所述對照指紋圖譜如圖5所示。
[0028] 本發(fā)明還提供了一種同時測定生何首烏中16種成分的方法，所述16種成分為沒食 子酸、原花青素B1、兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、大黃苷、白藜 蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、和大黃素甲醚；
[0029] 它包括以下步驟：
[0030] a、16種成分標準曲線的建立：
[0031] 取16種成分混合對照品溶液，按照前述檢測方法中步驟(3)相同的色譜條件檢測， 得到16種成分各自的標準曲線；
[0032] b、取生何首烏藥材，按照前述檢測方法中步驟(1)相同的方法，制備得到供試品溶 液，注入高效液相色譜，以步驟a相同的色譜條件檢測，根據步驟a的標準曲線得到生何首烏 中16種成分的含量。
[0033] 本發(fā)明的指紋圖譜出峰多、分離度良好、重復性好、精密度高，為全面監(jiān)控生何首 烏的材質量提供了有效的保障。
[0034] 同時，利用本發(fā)明指紋圖譜檢測方法的提取方法和色譜條件，還可以同時測得生 何首烏中16種成分一沒食子酸、原花青素B1、兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖苷、 二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、 大黃素、大黃素甲醚的含量，從而可以從更多的角度監(jiān)控生何首烏的藥材質量。
[0035] 顯然，根據本發(fā)明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0036] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內容 所實現的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0037] 圖1為生何首烏不同梯度洗脫程序的指紋圖譜(A-F)。
[0038]圖2為生首烏不同溫度條件下超聲60min的指紋圖譜(A-D)。
[0039] 圖3為生首烏不同超聲提取時間下的指紋圖譜(A-E)。
[0040] 圖4為何首烏16個成分的標準品圖譜：1:沒食子酸，2:原花青素Bl，3:兒茶素，4:沒 食子酸酯，5:蘆薈大黃苷，6:虎杖苷，7:二苯乙烯苷，8:土大黃苷，9:白藜蘆醇，10:大黃素 苷，11:大黃素甲醚苷，12:蘆薈大黃素，13:大黃酸，14:大黃素，15:大黃酚，16:大黃素甲醚。
[0041] 圖5為何首烏的對照指紋圖譜 [0042]圖6為25批市售生首烏的指紋圖譜。
【具體實施方式】
[0043] 試藥
[0044] 沒食子酸(批號：150226);原花青素出(批號：140628);兒茶素(批號：141224);沒 食子酸酯（批號：14〇73〇);蘆薈大黃素-8-〇-0-〇-葡萄糖苷（簡稱：蘆薈大黃素苷，批號： 141225);虎杖苷(批號：141228) ;2,3,5,4_四羥基二苯乙烯-2-(H3-D-葡萄糖苷(簡稱:二苯 乙烯苷，批號：141121);土大黃苷(批號：141209);白藜蘆醇(批號：150122);大黃素-8-β-0-吡喃葡萄糖苷(簡稱:大黃素苷，批號：141209);大黃素甲醚-8-(H3-D-葡萄糖苷(簡稱:大黃 素甲醚苷，批號：150120);大黃酚(批號：140325)均購置于成都克洛瑪生物有限公司。蘆薈 大黃素（批號=MUST-IOl 12301);大黃酸（批號=MUST-11032801);大黃素（批號：MUST-12022715);大黃素甲醚(批號:MUST-12022005)均購置于曼斯特生物科技有限公司。
[0045] 藥材
[0046] 25批生何首烏藥材經成都中醫(yī)藥大學生藥鑒定室鑒定為寥科植物Polygonum multiflorum Thunb.的干燥塊根。何首烏藥材樣品來源見表1。
[0047]表1何首烏藥材樣品
[0049] 實驗儀器
[0050] Agilent 1260 高效液相色譜儀器（栗 G1312B，DEACB07224;進樣器 G1329B， DEAAC25245;柱溫箱Gl316A，DEACN27098;紫外檢測器G4212BDEAA307363);KQ-500DB超聲波 清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；IlD型電子分析天平（Sartorius公司）；BP-2Vortex-Genie 2禍旋振蕩器(Scientific Industries，美國）；TG16-WS型臺式高速離心機(湘儀離 心機有限公司）；隔膜真空栗(天津市津騰實驗設備有限公司）。
[0051 ]實驗試劑
[0052] 無水乙醇(批號：20120306)購置于成都臨江化工。甲酸、乙腈、水均為色譜級，購于 Fisher公司，其他試劑均為分析純。
[0053]實施例1實驗條件的篩選 [0054] 1.流動相條件篩選
[0055] 生何首烏同一樣本進樣條件下，分別將0.1%甲酸水和乙腈作為洗脫流動相的A栗 和B栗，以A和B不同時間段的不同體積比例(v/v)進行梯度洗脫條件篩選，梯度洗脫程序見 表2,得到對應的生何首烏指紋圖譜見圖I(A-F)，由圖1可知，圖IA基本未能分開；圖1B、C、D 中部分時間點圖譜未能分開；圖IE中部分時間段基線漂移嚴重，圖IF中呈現出各成分良好 的分離，基線基本平穩(wěn)，因此將該梯度洗脫條件設為生何首烏的指紋譜圖分析條件。
[0056] 表2梯度洗脫時間(T)變化以及水相(A栗)比例變化
[0058] 2.生首烏提取時溫度篩選
[0059] 取相同質量的生何首烏樣本4份，加入20倍質量的50%乙醇水，浸泡30min后，分別 在20°(：、40°(：、60°(：、80°(：條件下超聲601^11，過濾后進樣，在篩選好的梯度洗脫程序下建立 不同提取溫度的生首烏的指紋圖譜，見圖2(A-D)。記錄各溫度下的二苯乙烯苷、大黃素苷、 大黃素甲醚苷以大黃素峰面積，以這4種成分封面積的變化為篩選條件，得到表3。結合圖2 和表3可知40°C條件下，4種成分的峰面積均最大，提示該條件下得到的成分含量最高，因此 設置提取溫度為40°C。
[0060] 衷3不同淵庠備件下軺聲60mi η得剞4種成分的峰而和
[0062] 3.生首烏提取時間篩選
[0063]取相同質量的生何首烏樣本5份，加入20倍質量的50%乙醇水，浸泡30min后，在篩 選得到的40°C條件下超聲1〇111；[11、20111；[11、40111；[11、60111；[11以及80111；[11，過濾后進樣，在篩選好的 梯度洗脫程序下建立不同提取溫度的生首烏的指紋圖譜，見圖4(A-E)。記錄各溫度下的二 苯乙烯苷、大黃素苷、大黃素甲醚苷以大黃素峰面積，以這4種成分封面積的變化為篩選條 件，得到表4。結合圖4和表4可知隨著時間延長，各成分的峰面積增加，60min時的峰面積達 到最大，不再隨時間的增加而增加，提示超聲60min即可得到的成分含量最高，因此設置提 取溫度為40°C，超聲時間為60min。
[0064] 表4 40°C條件下超聲不同時間得到4種成分的峰面積
[0066]實施例2本發(fā)明的方法及其方法學驗證 [0067] 1樣品溶液的制備
[0068]將25批市售生首烏分別打成粗粉備用。精密稱取各粗粉0.25g，置具塞三角瓶中， 加20倍量50%乙醇水溶液，浸泡30min后，40°C下超聲提取60min，定容到5π?45μπι微孔濾 膜濾過，取續(xù)濾液進樣。
[0069] 2.2對照品溶液的制備
[0070]精密稱取對照品沒食子酸、原花青素 B1、兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖 苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃 酚、大黃素、大黃素甲醚對照品于IOmL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配置成濃度分別為131、 98、185、142、78、125、5400、142、94、750、86、71、81、500、25、88以8/11^的儲備液，4°(：貯存?zhèn)?用。
[0071] 2.3色譜條件
[0072] 色譜柱ZORBAX C18(4.6mm*250mm，5ym)，預柱ZORBAX C18(4.6mm*12.5mm，5ym);流 速1.0 mL/min，柱溫30°C，進樣量5yL，梯度洗脫A為0.1 %甲酸水，B為乙腈，流動相系統(tǒng)配比 見表5。
[0073]表5梯度洗脫條件
[0075] 2.4指紋圖譜的建立
[0076] 采用國家藥典委員會推薦的中藥指紋圖譜計算機輔助相似度評價軟件A版進行各 個炮制時間樣品的相似度分析。
[0077] 3實驗結果
[0078] 圖4為生何首烏中16種成分的標準品的液相色譜圖。
[0079] 3.1方法學考察
[0080] 3.1.1精密度
[0081] 制備濃度依次為低、中、高3個濃度的沒食子酸、原花青素B1，兒茶素、沒食子酸酯、 蘆薈大黃素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大 黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚質控樣品，每個濃度平行3份，按照"2.3"項下色 譜條件進行分析?？疾烊諆染芏?、連續(xù)3天的日間精密度，測定峰面積并計算各成分的 RSD%值，見表6。
[0082] 表6何首烏各成分的日內以及日間精密度
[0084] 由表6可知，沒食子酸、原花青素B1，兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖苷、 二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、 大黃素、大黃素甲醚各成分的日內以及日間精密度RSD%均小于6.00%，方法精密度良好。
[0085] 3.1.2重現性
[0086] 取同一批生首烏藥材6份，按照"2. Γ項下供試品溶液制備方法制備，以"2.3"項下 色譜條件進行測定，測定6份樣品中各成分沒食子酸、原花青素B1，兒茶素、沒食子酸酯、蘆 薈大黃素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃 素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚的峰面積，標準曲線計算各成分的濃度，計算其 RSD %，見表7。
[0087] 3.1.3 穩(wěn)定性
[0088]取同一批生首烏藥材，按照"2. Γ項下供試品溶液制備方法制備，以"2.3"項下色 譜條件進行測定，分別在〇、3、6、9、12以及2處進樣，測定樣品中沒食子酸、原花青素也、兒茶 素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素糖苷、大 黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚的峰面積，標準曲線計算各 成分的濃度，計算RSD%，見表7。
[0089]表7何首烏各成分的重現性、穩(wěn)定性考察
[0091]由表7可知，何首烏各成分，RSD%值均小于2.00 %，符合2015版藥典規(guī)定，表明在 該提取方法條件下各成分的重現性好，樣品在12h分析時間內穩(wěn)定性好。
[0092] 3.1.4回收率
[0093]取已知含量的同一批生首烏藥材，分成2份，一份加入等體積的50%乙醇稀釋成原 有濃度的50%，未稀釋的另一份加入已知且相近濃度的沒食子酸、原花青素B1，兒茶素、沒 食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚 苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚的等體積，HPLC測定稀釋后的樣品中 各成分的濃度以及等體積加入對照品后各成分的的峰面積，代入標準曲線進行計算，采用 C% =C樣+標-C樣/C標*100%，計算公式計算各成分的回收率％，何首烏各成分的回收率均在 90 %~110 %之間，回收率較高，結果見表8。
[0094]表8何首烏各成分的回收率考察
[0096]由表8可知，何首烏各成分回收率值均在90.00 %~120.00 %之間，表明在該分析 方法條件具有較好的回收率。
[0097] 3.1.5何首烏各成分標準曲線制備
[0098] 沒食子酸、原花青素B1，兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素-苷、虎杖苷、二苯乙烯 苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大 黃素甲醚儲備液進行梯度稀釋，得到一系列濃度的標準溶液，按"2.3"項下的液相條件對各 成分的峰面積進行測定，得到各成分的標準曲線見表9。
[0099] 表9何首烏各成分的標準曲線及線性范圍
[0101] 3.2 25批市售生首烏成分的含量測定
[0102] 25批市售生首烏按"2. Γ項下進行樣品的制備，以"2.3"項下色譜條件進樣測定。 每個各樣品重復測定3次，以均值得到樣品中沒食子酸、原花青素B 1，兒茶素、沒食子酸酯、 蘆薈大黃素苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大 黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚的含量，結果見表1 〇。
AIA格式數據文件導入中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)研究版(2004A版），進行相似度計算， 以各成分含量均較高的大巴山（編號:S5)產地為指紋圖譜為參照圖譜，采用中位數法，時間 窗寬度為O.lmin，采用多點校正匹配，獲得生何首烏對照指紋圖譜，見圖5,計算機輔助相似 度評價報告結果見表1。25批何首烏藥材樣品的指紋圖譜見圖6.
[0108]表11 25批市售生首烏相似度計算結果
LU'I 'I u」 通]Q：甲約指漢圖堵的評價糸統(tǒng)建H起米的對照指漢圖堵與秤ift指漢圖堵塋懷性 (保留時間和峰面積)進行相似性比較，從而對中藥質量進行評價和控制，從而得出一致性 和差異性。相似度一般在0.85~1.0之間認為符合要求。從圖6可以大致看出各成分在一定 的保留時間誤差范圍內（0.1 min)的都能與生成的對照指紋圖譜有較好的重疊，相似度介于 0.95~0.99之間，而1和13號藥材相似度介于0.45~0.70之間，以相似度大于0.85作為判定 何首烏藥材合格與否的限度，則1和13號藥材判定為不合格生首烏樣本。
[0111] 綜上試驗結果可以看出，本發(fā)明的指紋圖譜出峰多、分離度良好、重復性好、精密 度高，為全面監(jiān)控生何首烏的材質量提供了有效的保障。
[0112] 同時，利用本發(fā)明指紋圖譜檢測方法的提取方法和色譜條件，還可以同時測得生 何首烏中16種成分一一沒食子酸、原花青素B1、兒茶素、沒食子酸酯、蘆薈大黃素苷、虎杖 苷、二苯乙烯苷、土大黃苷、白藜蘆醇、大黃素苷、大黃素甲醚苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃 酚、大黃素、大黃素甲醚的含量，從而可以從更多的角度監(jiān)控生何首烏的藥材質量。
【主權項】
1. 生何首烏的HPIX指紋圖譜檢測方法，其特征在于:它包括w下步驟： (1) 對照品溶液的制備:取生何首烏藥材，粉碎得藥材粉末，40~60 %乙醇水溶液提取， 過濾，得生何首烏對照品溶液;優(yōu)選的乙醇濃度為50 % ; (2) 參照物溶液的制備:取沒食子酸、原花青素 Bi、兒茶素、沒食子酸醋、蘆苔大黃素巧、 虎杖巧、二苯乙締巧、±大黃巧、白襲蘆醇、大黃素巧、大黃素甲酸巧、蘆苔大黃素、大黃酸、 大黃酪、大黃素、大黃素甲酸對照品適量，混合，加入甲醇，得到參照物溶液； (3) 對照指紋圖譜的建立： 分別取參照物溶液和由不同批次生何首烏藥材制備得到的對照品溶液，注入高效液相 色譜儀檢測，得到各批次藥材和參照物的色譜數據;色譜條件如下： 檢測波長:254~275nm; 色譜柱:C18色譜柱和C18預柱； 流動相:流動相A為0.1 %甲酸水，流動相B為乙臘； 梯度洗脫程序如下：對所得色譜數據進行處理，建立生何首烏的對照指紋圖譜； (4) 供試品溶液的制備:取待測藥材，按照步驟(1)相同的方法制備得到供試品溶液； (5) 按照步驟(3)相同的色譜條件，將供試品溶液注入高效液相色譜儀檢測，將所得色 譜圖與對照指紋圖譜進行比對，可鑒別出生何首烏及其質量狀況。2. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于:步驟(1)中，所述提取超聲提取。3. 根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于:所述超聲提取的時間為60min。4. 根據權利要求1-3任一項所述的檢測方法，其特征在于:步驟（1)中，所述提取的溫度 是40 C。5. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于:步驟(1)中，所述藥材乙醇水溶液的重 量體積比為lg:20mL。6. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于:所述C18色譜柱為ZORBAX C18色譜柱， 長度為250mm，內徑為4.6111111，填料的粒徑為54111;所述(：18預柱為201?84乂(：18色譜柱，長度為 12.5mm，內徑為4.6mm，填料的粒徑為如m.。7. 根據權利要求1-5任一項所述的檢測方法，其特征在于:所述色譜條件的柱溫為30 Γ。8. 根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于:所述色譜條件的流速為1. OmL/min。9. 根據權利要求1-8任一項所述的檢測方法，其特征在于:所述對照指紋圖譜如圖5所 /J、- 〇10. -種同時測定生何首烏中16種成分的方法，其特征在于：所述16種成分為沒食子 酸、原花青素 Bi、兒茶素、沒食子酸醋、蘆苔大黃素巧、虎杖巧、二苯乙締巧、大黃巧、白襲蘆 醇、大黃素巧、大黃素甲酸巧、蘆苔大黃素、大黃酸、大黃酪、大黃素、和大黃素甲酸； 它包括W下步驟： a、 16種成分標準曲線的建立： 取16種成分混合對照品溶液，按照權利要求1-9任一項檢測方法中步驟(3)相同的色譜 條件檢測，得到16種成分各自的標準曲線； b、 取生何首烏藥材，按照權利要求1-9任一項檢測方法中步驟（1)相同的方法，制備得 到供試品溶液，注入高效液相色譜，W步驟a相同的色譜條件檢測，根據步驟a的標準曲線得 到生何首烏中16種成分的含量。
【文檔編號】G01N30/02GK105938125SQ201610490084
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年6月27日
【發(fā)明人】李蕓霞, 龔小紅, 彭成, 黨玨, 趙夢杰, 趙夢君, 羅林, 袁岸, 李燕
【申請人】成都中醫(yī)藥大學