本發(fā)明涉及中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，特別是涉及一種用高效液相色譜法對重感靈膠囊制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

重感靈膠囊由毛冬青、羌活、葛根、石膏、馬鞭草、板藍根、青蒿七味中藥與馬來酸氯苯那敏、安乃近兩味化藥制成的中西藥復(fù)方制劑。具有解表清熱，疏風(fēng)止痛的作用。用于表邪未解、郁里化熱引起的重癥感冒，癥見惡寒高、高熱、頭痛、四肢酸痛、咽痛、鼻塞、咳嗽等。現(xiàn)行重感靈膠囊的質(zhì)量控制方法主要為理化鑒別、薄層鑒別、含量測定與馬來酸氯苯那敏的含量均勻度檢測。對處方中中藥僅僅是選取其中一兩種成分狀況來評價產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，這些控制方法不足以代表其整體質(zhì)量，存在一定的局限性。現(xiàn)行重感靈膠囊的質(zhì)量控制標準已不能真實全面的反映其內(nèi)在品質(zhì)及批次之間產(chǎn)品質(zhì)的一致性。近年來科技發(fā)展迅速，指紋圖譜技術(shù)、遠紅外在線控制技術(shù)等多種新技術(shù)用于中藥的生產(chǎn)和質(zhì)量控制等方面，取得了很好的效果，極大的提高了中藥生產(chǎn)和質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)的科技含量?，F(xiàn)行參照西藥的質(zhì)量控制模式的質(zhì)量標準不能恰當(dāng)?shù)姆磻?yīng)中藥內(nèi)在的質(zhì)量。宏觀的鑒別和主要有效成分含量測定結(jié)合才是質(zhì)量控制模式的發(fā)展趨勢。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種重感靈膠囊指紋圖譜的建立方法，該方法用于評價和控制重感靈膠囊的質(zhì)量，以確保證重感靈膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而提高重感靈膠囊的安全性和有效性。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。

一種重感靈膠囊指紋圖譜的建立方法：取重感靈膠囊內(nèi)容物用60%甲醇超聲波提?。灰愿鸶貫閷φ掌?，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。

進一步的，上述重感靈膠囊指紋圖譜的建立方法：取重感靈膠囊內(nèi)容物，研細后用50-80%甲醇超聲波提取，放冷、濾過，取續(xù)濾液；以葛根素為對照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。

前述重感靈膠囊指紋圖譜的建立方法如下：

（a）供試品溶液的制備：稱取重感靈膠囊內(nèi)容物1.0g，充分研細后加入50-80%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理15-45分鐘，取出放冷，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液，所述濾過為最終采用微孔濾頭（孔徑0.45um）濾過；

（b）對照品溶液的配制：精密稱取葛根素對照品適量，加50%-80%甲醇制成每1ml含葛根素0.05mg的對照品溶液，即得；

（c）色譜條件為： C18色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為0.5%醋酸溶液，梯度洗脫，流速0.5-1.5ml/min，柱溫15～35℃，檢測用蒸發(fā)光散射檢測器；

（d）測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到重感靈膠囊的指紋圖譜。

進一步地，前述重感靈膠囊指紋圖譜的方法優(yōu)選方案如下：

（a）供試品溶液的制備：精密取重感稱靈膠囊內(nèi)容物1g，充分研細后加入60%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液；

（b）對照品溶液的配制：精密稱取葛根素對照品7mg，加60%甲醇至溶解至25ml，搖勻，從中取2ml用60%甲醇稀釋至10 ml，得到葛根素對照品溶液；

（c）色譜條件為：C18色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為0.5%冰醋酸溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30℃，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，漂移管溫度：108℃ ，氮氣流速：3.2L/min；

（d）測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到重感靈膠囊的指紋圖譜。

前述方法中所述梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：

用前述方法建立的指紋圖譜中有10特征峰，其中峰3為葛根素，峰9與峰10來自毛冬青特征峰，圖譜總長度為67min。

上述指紋圖譜中所述10個特征共有峰的平均保留時間（min）如下：

峰2、峰3、峰4、峰5為葛根藥材峰，峰9、峰10為毛冬青藥材專屬峰。其他小峰為板藍根等藥材的一些共有峰，方中馬鞭草、青蒿、安乃近在該色譜條件下基本檢不出特征峰。

使用前述方法測定共7個批次的重感靈膠囊，得到7批次的重感靈膠囊指紋圖譜。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》2012年版相似度軟件，對7批次重感靈膠囊HPLC圖譜進行相似度評價，不同批次重感靈膠囊指紋圖譜的相似度大于0.9，說明各批次的樣品色譜模式相似，其化學(xué)成分一致性較好。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：

（1）用本發(fā)明所提供的方法建立的重感靈膠囊HPLC 指紋圖譜與對照圖譜采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》2012年版相似度軟件對比評價，相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）指紋圖譜注重各特征峰的關(guān)聯(lián)性和指紋圖譜的整體面貌特征，標定了10個共有峰，反應(yīng)信息比較完全，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的長期穩(wěn)定性，療效的安全性和可靠性。

（3）本發(fā)明具有方便、快捷、穩(wěn)定、精密度高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點，可準確可靠的控制重感靈膠囊的質(zhì)量。

附圖說明

圖1 重感靈膠囊指紋圖譜。

圖2 七批次重感靈膠囊的指紋圖譜。

圖3 葛根藥材色譜圖。

圖4 葛根素對照品色譜圖。

圖5板藍根藥材色譜圖。

圖6馬鞭草藥材色譜圖。

圖7 青蒿藥材色譜圖。

圖8 毛冬青藥材色譜圖。

具體實施方式

除非另有定義，本發(fā)明使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的含義與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。通常，本發(fā)明使用的命名及下述實驗方法都是本領(lǐng)域公知的或常用的。為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步的說明。

儀器：Waters 2695-2996 高效液相色譜儀；色譜柱：賽博斯C18 4.6×250mm，5μm；檢測器：奧泰2000ELSD； AB104-N萬分之一天平（梅特勒-托利多）； AUW2200十萬分之一天平（SHIMADZU 島津）；KQ3200超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；Mili-Q超純水儀：（美國Milipore公司）。

試藥和試劑： 重感靈膠囊（批號：121001、121002、121101、130303、130305、130307、130702）；甲醇（分析純）、乙腈（色譜純）、醋酸（分析純）。

實施例1：重感靈膠囊基于指紋圖譜的質(zhì)量控制方法。

供試品溶液的制備：供試品溶液的制備：取重感靈膠囊內(nèi)容物1g，充分研細后加入60%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷，濾過，取續(xù)濾液過0.45um的濾膜，即為供試品溶液。

對照品溶液的配制：精密稱取葛根素對照品7mg，加60%甲醇至溶解至25ml，搖勻，從中取2ml用60%甲醇稀釋至10 ml，作為葛根素對照品溶液。

色譜條件為： C18色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為0.5%冰醋酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫15～35℃，蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度：108℃ ，氮氣流速：3.2L/min。

梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：

測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到重感靈膠囊的指紋圖譜。

實施例2：重感靈膠囊指紋圖譜的建立。

采用實施例1 所述方法測定共7個批次的重感靈膠囊（批號：121001、121002、121101、130303、130305、130307、130702），得到7批次的重感靈膠囊指紋圖譜。

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》2012年版相似度軟件，對7批次重感靈膠囊HPLC圖譜的進行相似度評價，重感靈膠囊指紋圖譜相似度研究如下：

7個批次重感靈膠囊指紋圖譜相似度計算結(jié)果

上表顯示，不同批次重感靈膠囊指紋圖譜的相似度大于0.9，說明各批次的樣品色譜模式相似，其化學(xué)成分一致性較好。

應(yīng)當(dāng)說明的是，雖然本發(fā)明以較佳實施例揭示如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟習(xí)此項技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。