一種腎康寧膠囊指紋圖譜的建立方法
【專利摘要】一種腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，涉及中藥制劑質(zhì)量控制方法。腎康寧膠囊用甲醇超聲波提取，以丹參素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮為對(duì)照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫方法為梯度洗脫。本發(fā)明建立的腎康寧膠囊指紋圖譜與相應(yīng)的對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，其相似度大于0.9，能有效的檢測(cè)到腎康寧膠囊處方中除山藥、淡附片、茯苓外各藥材的特征峰，有利于監(jiān)控本產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，從而保障其在治療上的有效性。
【專利說明】
-種腎康寧膠囊指紋圖譜的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥制劑的質(zhì)量控制方法，特別是設(shè)及一種用高效液相色譜法對(duì)腎康 寧膠囊制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥質(zhì)量控制是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容，指紋圖譜技術(shù)被認(rèn)為是中藥質(zhì)量控制的 有效手段?，F(xiàn)行參照西藥的質(zhì)量控制模式的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能恰當(dāng)?shù)姆磻?yīng)中藥內(nèi)在的質(zhì)量。宏 觀的鑒別和主要有效成分含量測(cè)定結(jié)合才是質(zhì)量控制模式的發(fā)展趨勢(shì)。中藥指紋圖譜能科 學(xué)地反映中藥制劑中相關(guān)處方藥的化學(xué)物質(zhì)的種類，是實(shí)現(xiàn)中藥真實(shí)性、質(zhì)量可控性和產(chǎn) 品穩(wěn)定性的可行模式，能更好地反映中藥的內(nèi)在品質(zhì)。
[0003] 腎康寧膠囊由黃巧、丹參、巧等、澤瀉、益母草、淡附片、鎖陽、山藥八味藥制成的純 中藥制劑。具有溫腎，益氣，和血，滲濕的作用。用于慢性腎炎，腎氣虧損，腎功能不全所引起 的的腰酸、疲乏、畏寒及夜尿增多?，F(xiàn)行《中國藥典》中腎康寧膠囊的質(zhì)量控制方法主要包括 鑒別和含量測(cè)定兩方面。僅僅是選取其中一兩種成分狀況來說明產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，運(yùn)些控 制方法不足W代表其質(zhì)量整體，具有一定的局限性。現(xiàn)行的腎康寧膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)已 不能真實(shí)反映其內(nèi)在品質(zhì)及批次之間產(chǎn)品質(zhì)的一致性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種腎康寧膠囊指紋圖 譜的建立方法，該方法W高效液相色譜法對(duì)腎康寧膠囊中的某些指標(biāo)成分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲得 指紋圖譜，用于評(píng)價(jià)和控制腎康寧膠囊的質(zhì)量，W確保證腎康寧膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性、一致性 和可控性，從而提高腎康寧膠囊的安全性和有效性。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。
[0006] -種腎康寧膠囊指紋圖譜的建立方法:取腎康寧膠囊內(nèi)容物用甲醇超聲波提取； W丹參素、毛蕊異黃酬葡萄糖巧、毛蕊異黃酬為對(duì)照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜， 洗脫過程為梯度洗脫。
[0007] 進(jìn)一步的，上述腎康寧膠囊指紋圖譜的建立方法:取腎康寧膠囊內(nèi)容物，研細(xì)后用 甲醇超聲波提取，濾過，濃縮，取濾液；W丹參素、毛蕊異黃酬葡萄糖巧、毛蕊異黃酬為對(duì)照 品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。
[000引前述腎康寧膠囊指紋圖譜的建立方法如下： (a) 供試品溶液的制備：取腎康寧膠囊內(nèi)容物0.5~2.Og,充分研細(xì)后加入甲醇25~ 100mL，超聲處理20~40分鐘，取出放冷，濾過，濃縮至5~20ml，取續(xù)濾液為供試品溶液，所 述濾過為采用微孔濾頭濾過； (b) 對(duì)照品溶液的配制：精密稱取丹參素對(duì)照品適量、毛蕊異黃酬葡萄糖巧對(duì)照品適 量、毛蕊異黃酬對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml各含0.2mg的對(duì)照品溶液； (C)色譜條件為:0DS C18色譜柱，流動(dòng)相A為乙臘，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水溶液，梯度洗 脫，流速0.5~1.5ml/min，柱溫25~35 °C，檢測(cè)波長:260~300醒； (d)測(cè)定:精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法 測(cè)定，得到腎康寧膠囊的指紋圖譜。
[0009] 進(jìn)一步地，前述腎康寧膠囊指紋圖譜的方法優(yōu)選方案如下： (a) 供試品溶液的制備:取腎康寧膠囊內(nèi)容物Ig,充分研細(xì)后加入甲醇50ml，稱定重量， 超聲處理30分鐘，取出放冷，濾過，濃縮至5ml，取續(xù)濾液為供試品溶液； (b) 對(duì)照品溶液的配制:精密稱取丹參素對(duì)照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作為丹參素 對(duì)照品溶液;精密稱取毛蕊異黃酬葡萄糖巧對(duì)照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作為毛蕊異 黃酬葡萄糖巧對(duì)照品溶液;精密稱取毛蕊異黃酬對(duì)照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作為毛 蕊異黃酬對(duì)照品溶液； (C)色譜條件為：ODS C18色譜柱，流動(dòng)相A為乙臘，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水溶液，梯度洗 脫，流速1.0ml/min，柱溫30°C，檢測(cè)波長:280nm; (d)測(cè)定:精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液lOiil，分別注入液相色譜儀，照高效液相色 譜法測(cè)定，得到腎康寧膠囊的指紋圖譜。
[0010] 前述方法中所述梯度洗脫的程序W如下體積比濃度配置進(jìn)行。
[0011] 用前述方法建立的指紋圖譜中有12特征峰，其中峰3為丹參素，峰8為毛蕊異黃酬 葡萄糖巧，峰12為毛蕊異黃酬，圖譜總長度為71min。
[0012] 上述指紋圖譜中所述12個(gè)特征共有峰的平均保留時(shí)間(min)如下。
[0013] 峰I黃巧藥材、澤瀉藥材、鎖陽藥材的共有峰，峰2為黃巧藥材、澤瀉藥材共有峰，峰 3、6、9、10、11為丹參專屬峰，峰5為益母草專屬峰，峰7為益母草、澤瀉藥材共有峰，峰8、12為 黃巧藥材專屬峰。方中山藥、巧等和淡附片在該色譜條件下基本檢不出特征峰。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下： (1)用本發(fā)明所提供的方法建立的腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜采用《中藥色 譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2004年A版相似度軟件對(duì)比評(píng)價(jià)，相似度均大于0.9，能有效的 表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0015] (2)指紋圖譜注重各特征峰的關(guān)聯(lián)性和指紋圖譜的整體面貌特征，標(biāo)定了 12個(gè)共 有峰，反應(yīng)信息比較完全，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的長期穩(wěn)定性，療效的安全性和可靠性。
[0016] (3)本發(fā)明具有方便、快捷、穩(wěn)定、精密度高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可準(zhǔn)確可靠的控制 腎康寧膠囊的質(zhì)量。
【附圖說明】
[0017] 圖1為腎康寧膠囊指紋圖譜。
[001引圖2為6批次腎康寧膠囊的指紋圖譜。
[0019] 圖3為丹參藥材色譜圖。
[0020] 圖4為黃巧藥材色譜圖。
[0021] 圖5為益母草藥材色譜圖。
[0022] 圖6為澤瀉藥材色譜圖。
[0023] 圖7為鎖陽藥材色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]除非另有定義，本發(fā)明使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的含義與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域 普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。通常，本發(fā)明使用的命名及下述實(shí)驗(yàn)方法都是本領(lǐng)域 公知的或常用的。為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，W 下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[00巧]儀器:Waters高效液相色譜儀(Waters2695分離單元，Waters2996二極管陣列檢測(cè) 器，Empower色譜工作站）；ABl04-N萬分之一天平(梅特勒-托利多）;AUW2200十萬分之一天 平（SHIMADZU島津）;KQ3200超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）;Mi 1 i-Q超純水儀： (美國Mi Iipore公司）。
[0026] 試藥和試劑：腎康寧膠囊（批號(hào)：121101、121102、121103、121104、121201、 121202、130702、130703);甲醇(分析純）、乙臘(色譜純）、醋酸(分析純）。
[0027] 實(shí)施例1:腎康寧膠囊基于指紋圖譜的質(zhì)量控制方法。
[0028] 供試品溶液的制備:供試品溶液的制備:取腎康寧膠囊內(nèi)容物Ig,充分研細(xì)后加入 甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷，濾過，濃縮至5ml為供試品溶液。
[0029] 對(duì)照品溶液的配制:精密稱取丹參素對(duì)照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作為丹參 素對(duì)照品溶液;精密稱取毛蕊異黃酬葡萄糖巧對(duì)照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作為毛蕊 異黃酬葡萄糖巧對(duì)照品溶液;精密稱取毛蕊異黃酬對(duì)照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作為 毛蕊異黃酬對(duì)照品溶液。
[0030] 色譜條件為：ODS C18色譜柱，流動(dòng)相A為乙臘，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水溶液，梯度 洗脫，流速l.Oml/min，柱溫25~35°C，檢測(cè)波長:280nm。
[0nr^i I 陡駐化化的巧壇1;1 f；n 了化扣沁、彼駐耐晉化片
[0032] 測(cè)定:精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液IOiil，分別注入液相色譜儀，照高效液相 色譜法測(cè)定，得到腎康寧膠囊的指紋圖譜。
[0033] 實(shí)施例2:腎康寧膠囊指紋圖譜的建立。
[0034] 采用實(shí)施例1所述方法測(cè)定共6個(gè)批次的腎康寧膠囊（批號(hào)：130101、130102、 130301、130302、130401、130501)，得到6批次的腎康寧膠囊指紋圖譜。
[0035] 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2004年A版相似度軟件，對(duì)6批次腎康寧 膠囊HPLC圖譜的進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，腎康寧膠囊指紋圖譜相似度研究如下。
[0036] 6個(gè)批次腎康寧膠囊指紋圖譜相似度計(jì)算結(jié)果。
[0037] 上表顯示，不同批次腎康寧膠囊指紋圖譜的相似度大于0.9,說明各批次的樣品色 譜模式相似，其化學(xué)成分一致性較好。
[0038] 應(yīng)當(dāng)說明的是，雖然本發(fā)明W較佳實(shí)施例掲示如上，然其并非用W限定本發(fā)明，任 何熟習(xí)此項(xiàng)技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，所作的任何修改、等同替換和改進(jìn) 等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于腎康寧膠囊內(nèi)容物用甲醇超 聲提取，以丹參素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮為對(duì)照品，照高效液相色譜法建立指 紋圖譜;高效液相色譜法的色譜條件為:C18色譜柱;流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水 溶液;檢測(cè)波長260~300nm;柱溫為15~35 °C ;流速0.5~1.5ml/min;洗脫方法為梯度洗 脫。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于腎 康寧膠囊內(nèi)容物以甲醇為溶劑超聲波提取，濾過，取濾液測(cè)試；以丹參素、毛蕊異黃酮葡萄 糖苷、毛蕊異黃酮為對(duì)照品，用甲醇溶解，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，其中梯度洗脫 的時(shí)間程序及其流動(dòng)相的體積變化按下表設(shè)置進(jìn)行：3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于： (a) 供試品溶液的制備：取腎康寧膠囊內(nèi)容物0.5~2g，充分研細(xì)后加入甲醇25~ 100ml，超聲處理20~40分鐘，取出放冷，濾過，濾液濃縮至5~20ml，用孔徑為0.45μηι的濾頭 濾過為供試品溶液； (b) 對(duì)照品溶液的配制：精密稱取丹參素對(duì)照品適量、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品適 量、毛蕊異黃酮對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每lml各含0.2mg的對(duì)照品溶液； (c) 色譜條件:C18色譜柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫，流速 0.5~1.51111/1^11，柱溫25~35°(：，檢測(cè)波長：28〇11111; (d) 測(cè)定:精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液5~15μ1，分別注入液相色譜儀，照高效液 相色譜法測(cè)定，得到腎康寧膠囊的指紋圖譜。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于： (a) 供試品溶液的制備:精密稱取充分研細(xì)后的腎康寧膠囊內(nèi)容物lg，加入甲醇50ml， 超聲處理30分鐘，取出放冷，濾過，濃縮至5ml，取續(xù)濾液為供試品溶液； (b) 對(duì)照品溶液的配制:精密稱取丹參素對(duì)照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作為丹參素 對(duì)照品溶液;精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作為毛蕊異 黃酮葡萄糖苷對(duì)照品溶液;精密稱取毛蕊異黃酮對(duì)照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作為毛 蕊異黃酮對(duì)照品溶液； (c) 色譜條件:C18色譜柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫，流速 1 · Oml/min，柱溫30°C，檢測(cè)波長：280nm; (d) 測(cè)定:精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液1 ΟμL，分別注入液相色譜儀，照高效液相色 譜法測(cè)定，得到腎康寧膠囊的指紋圖譜。5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的一種腎康寧膠囊HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于 指紋圖譜中所述的12個(gè)特征共有峰的與峰3(丹參素)相對(duì)保留時(shí)間如下： 峰1 :0.52;峰2 :0.76 ;峰3 :1.00;峰4 1.23;峰5 :1.55;峰6 :1.57;峰7 :2.23;峰8 :2.81;峰9 :3.30 ;峰10 :3.64;峰11 :3.75;峰12 :3.81 。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105954435SQ201610573178
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年7月21日
【發(fā)明人】周朝忠, 肖軍平, 吳永忠, 杜劍松, 習(xí)錦山, 劉厚權(quán), 夏淑英
【申請(qǐng)人】江西普正制藥有限公司