一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法。該方法，以白芍配方顆粒為檢測(cè)對(duì)象，建立了針對(duì)該藥物制劑的指紋圖譜的方法，獲得了較為全面的圖譜信息，確認(rèn)了共有特征峰1號(hào)峰羥基芍藥苷、2號(hào)峰芍藥內(nèi)酯苷、3號(hào)峰芍藥苷，選擇3號(hào)峰芍藥苷作為指紋圖譜中的內(nèi)參考峰，確定了白芍配方顆粒的共有特征峰1號(hào)峰、2號(hào)峰、4號(hào)峰等的相對(duì)保留時(shí)間，且能夠結(jié)合該指紋圖譜中多個(gè)色譜峰的信息，能夠全面地、快速地檢測(cè)白芍配方顆粒的質(zhì)量，有利于其全面質(zhì)量檢測(cè)和整體質(zhì)量控制，從而有助于提高該藥物使用的安全性和穩(wěn)定性。同時(shí)，本發(fā)明所述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法具有穩(wěn)定性高、精密度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 白芍配方顆粒是通過(guò)對(duì)中藥白芍飲片進(jìn)行提取、濃縮、制粒所得。白芍為毛茛科植 物芍藥(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根，主要含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷 等單萜苷類和苯甲酸、沒(méi)食子酸等酸類成分;夏、秋二季采挖，洗凈，除去頭尾和細(xì)跟，置沸 水中煮后除去外皮或去皮后再煮，曬干，主產(chǎn)浙江、安徽、四川等地，此外，山東、貴州、湖南、 湖北、甘肅、陜西、河南、云南等地亦產(chǎn)。白芍性味苦酸，歸肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、平肝止 痛、斂陰止汗等功效，臨床常用于治療頭痛眩暈、脅痛、腹痛、四肢攣痛、血虛萎黃、月經(jīng)不 調(diào)、自汗盜汗等癥。
[0003 ]《中國(guó)藥典》2015年版對(duì)白芍的質(zhì)量控制包括原植物品種、藥材性狀、理化鑒別、含 量測(cè)定等項(xiàng)目，文獻(xiàn)報(bào)道的白芍主要化學(xué)成分為單萜及其苷類，如芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥 基芍藥苷等。目前普遍認(rèn)為芍藥苷為白芍的有效成分，且以芍藥苷含量的高低來(lái)衡量白芍 藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)白芍的質(zhì)量控制，僅以芍藥苷的含量作為白芍及其復(fù)方制劑 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，通常是薄層色譜法或高效液相色譜法。然而，一方面，通過(guò)上述單一成分的含 量測(cè)定或鑒別白芍配方顆粒，不能從整體上檢測(cè)和控制其質(zhì)量;另一方面，通過(guò)單一成分的 含量測(cè)定聯(lián)合其他成分的鑒別白芍配方顆粒，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，難以廣泛地應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。
[0004] 因此，建立一種能夠全面地、快速地檢測(cè)白芍配方顆粒的方法，對(duì)于其全面質(zhì)量檢 測(cè)和整體質(zhì)量控制具有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 為此，本發(fā)明所要解決的是現(xiàn)有的白芍配方顆粒的檢測(cè)方法單一檢測(cè)指標(biāo)不能從 整體上檢測(cè)和控制其質(zhì)量、多個(gè)檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，難以廣泛地應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐 的技術(shù)問(wèn)題，從而提出一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法。
[0006] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 本發(fā)明提供一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：
[0008] (1)取待測(cè)白芍的藥物制劑0.05-0.15重量份，精密稱定，精密加入稀乙醇10-30體 積份，稱定重量，加熱回流提取或超聲提取20-40分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減 失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0009] (2)精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00002-0.00010重量份的 溶液，搖勻，作為對(duì)照品A溶液；
[0010] 精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含〇. 0005-0.0015重量份的溶 液，搖勻，作為對(duì)照品B溶液；
[0011]精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含〇. 00012-0.00014重量份的 溶液，搖勻，作為對(duì)照品C溶液；
[0012] (3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的 磷酸溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫:0min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% : 95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% :90% ;5-25min，A:B為 10% :90% - 16% :84% ;25_ 40min，A:B為 16% :84% ;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，流速為lmL/min;
[0013] ⑷分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液0.005_ 〇. 〇 15體積份，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液 和對(duì)照品C溶液的液相色譜；
[0014] (5)利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照 品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹 配，即得指紋圖譜；
[0015] 所述重量份與所述體積份的關(guān)系為g/mL。
[0016] 優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，該檢測(cè)方法包括如 下步驟：
[0017] (1)取待測(cè)白芍的藥物制劑0.10重量份，精密稱定，精密加入稀乙醇20體積份，稱 定重量，加熱回流提取或超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0018] (2)精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00006重量份的溶液，搖 勻，作為對(duì)照品A溶液；
[0019] 精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.0010重量份的溶液，搖 勻，作為對(duì)照品B溶液；
[0020] 精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00013重量份的溶液，搖 勻，作為對(duì)照品C溶液；
[0021 ] (3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的 磷酸溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫:0min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% : 95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% :90% ;5-25min，A:B為 10% :90% - 16% :84% ;25_ 40min，A:B為 16% :84% ;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，流速為lmL/min;
[0022] (4)分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液0.010體 積份，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品 C溶液的液相色譜；
[0023] (5)利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照 品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹 配，即得指紋圖譜。
[0024] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，以4.6mmX 250mm、5μηι的Waters XbridgeCis、4·6mmX250mm、5yn^Thromo Acclaiml20Cis或4·6mmX 250mm、5ym的Ecosil Cis為色譜柱。
[0025] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述稀乙醇 的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為48~52%。
[0026] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述稀乙醇 的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為49.5~50.5%。
[0027] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述步驟(1) 中，以0.45μπι微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。
[0028] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述藥物制 劑為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑 或注射制劑。
[0029] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述白芍的 藥物制劑通過(guò)以下方法制備而成：
[0030] 取白芍，加熱回流提取至少1次，每次加入至少2重量倍量的水提取至少0.5h，過(guò) 濾，合并濾液，濾液濃縮至60 °C相對(duì)密度為1.00-1.10的流浸膏，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工 藝，制成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋 制劑、口服液體制劑或注射制劑。
[0031] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述白芍的 藥物制劑通過(guò)以下方法制備而成：
[0032] 取白芍，加熱回流提取1~5次，每次加入2~10重量倍量的水提取0.5~2h，過(guò)濾， 合并濾液，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1.05-1.10的流浸膏，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝， 制成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制 劑、口服液體制劑或注射制劑。
[0033]進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述白芍的 藥物制劑通過(guò)以下方法制備而成：
[0034]取白芍，加熱回流提取2次，第1次加入8重量倍量的水提取1.5h，第2次加入6重量 倍量的水提取lh，過(guò)濾，合并濾液，濾液濃縮至60 °C相對(duì)密度為1.05-1.10的流浸膏，加入常 規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制 劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。
[0035] 所述藥學(xué)上可接受的輔料為:填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯 味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、 蔗糖等;崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、 低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素納等;潤(rùn)滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石 粉、二氧化硅等;助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素 等;粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等;甜味劑包括:糖精鈉、阿斯 帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矯味劑包括:甜味劑及各種香精;防腐劑包括:尼泊金類、 苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等;基質(zhì)包括:PEG6000、 PEG4000、蟲蠟等。
[0036] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明上述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，所述白芍的 藥物制劑的指紋圖譜的共有特征峰為：1號(hào)峰羥基芍藥苷、2號(hào)峰芍藥苷內(nèi)酯、3號(hào)峰芍藥苷 和4號(hào)峰，各峰號(hào)的相對(duì)保留時(shí)間分別為：1號(hào)峰0.47、2號(hào)峰0.86、3號(hào)峰1.00和4號(hào)峰1.69。
[0037] 本發(fā)明還提供上述方法在白芍的藥物制劑的質(zhì)量檢測(cè)和質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
[0038] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的上述技術(shù)方案具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0039] 本發(fā)明所述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，以白芍配方顆粒為檢測(cè)對(duì) 象，建立了針對(duì)該藥物制劑的指紋圖譜的方法，獲得了較為全面的圖譜信息，確認(rèn)了共有特 征峰1號(hào)峰羥基芍藥苷、2號(hào)峰芍藥內(nèi)酯苷、3號(hào)峰芍藥苷，選擇3號(hào)峰芍藥苷作為指紋圖譜中 的內(nèi)參考峰，確定了白芍配方顆粒的共有特征峰1號(hào)峰、2號(hào)峰、4號(hào)峰等的相對(duì)保留時(shí)間，且 能夠結(jié)合該指紋圖譜中多個(gè)色譜峰的信息，能夠全面地、快速地檢測(cè)白芍配方顆粒的質(zhì)量， 有利于其全面質(zhì)量檢測(cè)和整體質(zhì)量控制，從而有助于提高該藥物使用的安全性和穩(wěn)定性。 同時(shí)，本發(fā)明所述建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法具有穩(wěn)定性高、精密度高、重復(fù)性 好等優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0040] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例并結(jié)合 附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，其中：
[0041] 圖1是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中不同提取溶劑的色譜圖；
[0042] 圖2是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中不同提取方法的色譜圖；
[0043] 圖3是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中不同提取時(shí)間的色譜圖；
[0044] 圖4是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中不同溶劑量的色譜圖；
[0045] 圖5(A)、5(B)、5(C)分別是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中不同流動(dòng)相的色譜圖；
[0046] 圖6、7、8、9分別是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例2中梯度1、2、3、4的色譜圖；
[0047] 圖10是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例2中不同色譜柱的色譜圖；
[0048] 圖11是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例2中不同流速的色譜圖；
[0049] 圖12是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例2中不同柱溫的色譜圖；
[0050] 圖13為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例3中15批白芍配方顆粒的特征圖譜；
[0051] 圖14為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例3中白芍對(duì)照藥材特征圖譜；
[0052] 圖15為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例3中15批白芍配方顆粒及白芍對(duì)照藥材特征圖譜的共有模 式；
[0053]圖16為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例3中專屬性考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0054] 實(shí)施例1
[0055] 以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例中，白芍配方顆粒的制備方法為：
[0056]取白芍，加熱回流提取2次，第1次加入8重量倍量的水提取1.5h，第2次加入6重量 倍量的水，提取lh，過(guò)濾，合并濾液，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1.05-1.10的流浸膏，加入 常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成顆粒劑。，
[0057] 實(shí)施例2
[0058]本實(shí)施例建立白芍配方顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：
[0059] (1)取待測(cè)白芍配方顆粒0.10g，精密稱定，精密加入稀乙醇20mL，稱定重量，加熱 回流提取或超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取 續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0060] (2)精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lmL含0.00006g的溶液，搖勻，作為對(duì)照 品A溶液；
[0061 ]精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每lmL含0.0 OlOg的溶液，搖勻，作為對(duì)照 品B溶液；
[0062]精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00013g的溶液，搖勻，作 為對(duì)照品C溶液；
[0063] (3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以4.6mmX 250mm、5μπι的Waters XbridgeC18S色譜柱，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的磷酸溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行 梯度洗脫：〇min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% :95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% : 90%;5-2511^114:8為10%:90%416%:84% ;25-4〇11^11，4:8為16%:84%;檢測(cè)波長(zhǎng)為 230nm，流速為 lmL/min;
[0064] ( 4 )分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液 O.OlOmL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C 溶液的液相色譜；
[0065] (5)利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照 品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹 配，即得指紋圖譜。
[0066] 實(shí)施例3
[0067] 本實(shí)施例建立白芍配方顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：
[0068] (1)取待測(cè)白芍配方顆粒0.05g，精密稱定，精密加入稀乙醇30mL，稱定重量，加熱 回流提取或超聲提取20分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取 續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0069] (2)精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lmL含0.00010g的溶液，搖勻，作為對(duì)照 品A溶液；
[0070]精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每lmL含0.0015g的溶液，搖勻，作為對(duì)照 品B溶液；
[0071 ]精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00014g的溶液，搖勻，作 為對(duì)照品C溶液；
[0072] (3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以4 · 6mmX 250mm、5μπι的Waters XbridgeC18S色譜柱，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的磷酸溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行 梯度洗脫：〇min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% :95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% : 90%;5-2511^114:8為10%:90%416%:84% ;25-4〇11^11，4:8為16%:84%;檢測(cè)波長(zhǎng)為 230nm，流速為 lmL/min;
[0073] ( 4 )分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液 0.005mL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品溶液、對(duì)照品A溶液和對(duì)照品B溶液的液 相色譜；
[0074] (5)利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照 品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹 配，即得指紋圖譜。
[0075] 實(shí)施例4
[0076] 本實(shí)施例建立白芍配方顆粒的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：
[0077] (1)取待測(cè)白芍配方顆粒0.15g，精密稱定，精密加入稀乙醇lOmL，稱定重量，加熱 回流提取或超聲提取40分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取 續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0078] (2)精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每lmL含0.00002g的溶液，搖勻，作為對(duì)照 品A溶液；
[0079]精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每lmL含0.0005g的溶液，搖勻，作為對(duì)照 品B溶液；
[0080]精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00012g的溶液，搖勻，作 為對(duì)照品C溶液；
[0081 ] (3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以4 · 6mmX 250mm、5μπι的Waters XbridgeC18S色譜柱，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的磷酸溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行 梯度洗脫：〇min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% :95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% : 90%;5-2511^114:8為10%:90%416%:84% ;25-4〇11^11，4:8為16%:84%;檢測(cè)波長(zhǎng)為 230nm，流速為 lmL/min;
[0082] ( 4 )分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液 0.015mL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì) 照品C溶液的液相色譜；
[0083] (5)利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照 品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹 配，即得指紋圖譜。
[0084] 實(shí)驗(yàn)例
[0085] 1、儀器與試藥
[0086] 儀器包括:高效液相色譜儀:Waters e2695高效液相色譜儀(美國(guó)waters公司）：四 元栗，二極管陣列檢測(cè)器(PDA)，自動(dòng)進(jìn)樣器，Empower色譜工作站;色譜柱:Waters Xbridge (：18(4.6111111\25〇111111，5卩111)色譜柱；天平：千分之一天平（上海恒平從2003)，萬(wàn)分之一天平 (Sartorius BS224S)，十萬(wàn)分之一天平(Precisa XR205SM DR);超聲波發(fā)生器：（昆山超聲 KQ-700DE 40KHz 280W);超純水系統(tǒng)：美國(guó)Mi 11 ipore(密理博）公司；DGX-9073鼓風(fēng)干燥箱 (上海?，敼荆桓邷叵涫诫娮锠t(上海凱朗SRJX-4-13D);
[0087] 試藥包括：乙腈為色譜純(德國(guó)Merk公司），水為超純水（電阻率18.2m Ω . cm)，其他 試劑均為分析純；白芍配方顆粒(序號(hào)1-15)由華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司提供，按照實(shí)施 例1的制備方法制備而成。
[0088]實(shí)驗(yàn)例1供試品溶液的制備 [0089] (1)提取溶劑的選擇
[0090]分別采用甲醇、30%乙醇、稀乙醇作為提取溶劑按照以下方法對(duì)白芍配方顆粒進(jìn) 行提取:取白芍配方顆粒粉末〇. lg，精密稱定，置50mL量瓶中，分別加入上述提取溶劑35mL， 超聲處理(功率280W，頻率40kHz) 30分鐘，放冷，加相應(yīng)的提取溶劑至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù) 濾液，即得。
[0091]不同提取溶劑的色譜圖如圖1所示，對(duì)除溶劑峰外的三個(gè)最大峰進(jìn)行比較，結(jié)果如 表1和表2所不。
[0092] 表1不同提取溶劑時(shí)除溶劑峰外的三個(gè)最大峰的總峰面積
[0093]
[0094] 表2除溶劑峰外的三個(gè)最大峰的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)
[0095]
[0096] 由圖1、表1和表2可知，提取溶劑為甲醇、30 %乙醇、稀乙醇的峰形峰數(shù)無(wú)明顯差 異，提取溶劑為稀乙醇的峰面積稍大于提取溶劑為甲醇的峰面積。此外，由于提取溶劑為甲 醇和稀乙醇時(shí)樣品幾乎全部溶解，提取溶劑為30%乙醇時(shí)樣品部分溶解，且稀乙醇對(duì)人體 的毒性較甲醇對(duì)人體的毒性低，故選擇提取溶劑為稀乙醇。
[0097] (2)提取方法的選擇
[0098]根據(jù)選擇的提取溶劑，考察提取方法為未超聲提取30min、加熱回流提取30min， 即：取白芍配方顆粒粉末0. lg，精密稱定，置50mL量瓶中，加入稀乙醇35mL，分別加熱回流提 取或超聲處理（功率280W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾 液，即得。
[0099] 不同提取方法的色譜圖如圖2所示，對(duì)除溶劑峰外的三個(gè)最大峰進(jìn)行比較，結(jié)果如 表3所示。
[0100] 表3不同提取方法的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)
[0101]
[0102] 由圖2和表3可知，加熱回流和超聲提取的色譜圖的峰形、峰高、峰數(shù)相似；由于回 流提取和超聲提取時(shí)樣品幾乎全部溶解，考慮到實(shí)驗(yàn)操作的簡(jiǎn)便性，最終選擇提取方法為 超聲提取。
[0103] (3)提取時(shí)間的選擇
[0104] 根據(jù)選擇的提取溶劑和提取方法，考察提取時(shí)間為15min、30min和45min的區(qū)別， 即：取白芍配方顆粒粉末0 . lg，精密稱定，置50mL量瓶中，加入稀乙醇35mL，分別超聲處理 (功率280W，頻率40kHz) 15min、30min和45min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾 液，即得。
[0105] 不同提取時(shí)間的色譜圖如圖3所示，對(duì)除溶劑峰外的三個(gè)最大峰進(jìn)行比較，結(jié)果如 表4和5所不。
[0106] 表4不同提取時(shí)間的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)
[0107]
[0108] 表5不同提取溶劑時(shí)除溶劑峰外的三個(gè)最大峰的總峰面積
[0109]
[0110] 由圖3和表4、5可知，提取時(shí)間為30min時(shí)，除溶劑峰外的三個(gè)最大峰總峰面積最 大;經(jīng)計(jì)算，比較對(duì)，超聲處理30min和45min時(shí)茍藥苷的提取率相近，且高于超聲處理15min 芍藥苷的提取率;為了節(jié)約時(shí)間，確定提取時(shí)間為30min。
[0111] (4)溶劑量考察
[0112] 根據(jù)以上確定的實(shí)驗(yàn)條件，考察不同的溶劑量，即：分別取白芍配方顆粒粉末 〇.18，精密稱定，分別置1〇1111、251^、5〇1^量瓶中，分別加入稀乙醇81111、2〇1^、351^，超聲處理 (功率280W，頻率40kHz) 30分鐘。放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0113] 不同溶劑量的色譜圖如圖4所示，對(duì)除溶劑峰外的三個(gè)最大峰進(jìn)行比較，結(jié)果如表 6和7所示。
[0114] 表6不同溶劑量的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)
[0115]
[0116] 表7不同溶劑量的芍藥苷峰面積
[0117]
[0118] 由圖4和表6、7可知，提取溶劑量為25mL和50mL時(shí)提取效果相當(dāng)，為了節(jié)省溶劑、簡(jiǎn) 便操作，選擇25mL為提取溶劑量。
[0119] (5)最終提取方案
[0120] 取白芍配方顆粒約O.lg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加稀乙醇20mL，超聲處理(功 率280W，頻率40kHz) 30分鐘，溶解，加稀乙醇至刻度，搖勻，0.45μπι微孔濾膜過(guò)濾，即得。
[0121 ]實(shí)驗(yàn)例2色譜分析條件的確定
[0122] (1)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
[0123] 實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)到的峰數(shù)、峰高為選擇原則，采用3D全波長(zhǎng)掃描，230nm得到的峰信息 量較為全面，且共有峰的響應(yīng)最高，因此確定最佳波長(zhǎng)為230nm。
[0124] (2)流動(dòng)相的選擇
[0125] 配方顆粒是飲片經(jīng)大規(guī)模水提取后經(jīng)一系列制劑生產(chǎn)的產(chǎn)物，其所含成分復(fù)雜， 等度洗脫很難分離，故本實(shí)施采用例梯度洗脫方式。比較乙腈-水、甲醇-水，先確定所用有 機(jī)相，結(jié)果如圖5 (A)所示;在此基礎(chǔ)上再比較水、0.1 %磷酸水，如圖5 (B)所示，從而確定水 相;最后比較不同比例(0.1%、〇. 2%)的差別，記錄色譜圖，如圖5(C)所示。
[0126] 由圖5(A)、5(B)和5(C)可知，由于乙腈-水為流動(dòng)相時(shí)分離的色譜峰多，分離度較 好，且基線平穩(wěn)，故確定了流動(dòng)相使用的有機(jī)相為乙腈;通過(guò)比較水與0.1%磷酸水的洗脫 效果，結(jié)果顯示以0.1%磷酸作為水相時(shí)，色譜圖峰數(shù)較多;再對(duì)不同比例酸性溶液進(jìn)行比 較，其中0.1 %磷酸與0.2%磷酸分離效果無(wú)明顯差別，且考慮到色譜柱耐受pH為2-8,故確 定水相的磷酸濃度為0.1%。
[0127] (3)梯度的選擇
[0128] 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用了多個(gè)不同的洗脫梯度對(duì)同一份白芍配方顆粒提取樣品進(jìn)行 測(cè)定，通過(guò)比較不同洗脫程序所測(cè)定的樣品色譜圖，從中優(yōu)選色譜信息較豐富，主要色譜峰 分離度高，基線較平穩(wěn)且分析時(shí)間較為合理的梯度4洗脫程序作為最終的色譜分析條件，梯 度1為等度洗脫：乙腈-〇. 1 %磷酸溶液(14:86)。
[0129] 表8為梯度2(A:乙腈和B:0.1 %磷酸溶液)的梯度洗脫程序，表9為梯度3(A:乙腈和 B: 0.1 %磷酸溶液)的梯度洗脫程序，表10為梯度4(A:乙腈和B: 0.1 %磷酸溶液)的梯度洗脫 程序，不同梯度洗脫程序的色譜圖如圖6、7、8、9所示。
[0130] 表8梯度2(A:乙腈;B: 0.1 %磷酸溶液)的梯度洗脫程序
[0131]
[0132] 表9梯度3 (A:乙腈;B: 0.1 %磷酸溶液)的梯度洗脫程序
[0133]
[0134] 表10梯度4(A:乙腈;B: 0.1 %磷酸溶液)的梯度洗脫程序
[0135]
[0136] 由圖6、7、8、9可知，梯度3比梯度2的分離效果好，但梯度2、3的5〇11^11后的峰分離效 果差;梯度4的色譜圖的峰形良好，分離度高，分析時(shí)間較為合適，故確定梯度4為最終的流 動(dòng)相梯度。
[0137] (4)不同色譜柱的考察
[0138] 取同一份白茍配方顆粒樣品的供試品溶液，分別以Waters XbridgeCis(4·6mmX 250mm，5ym)作為色譜柱1、以Thromo Acclaiml20Ci8(4 · 6mmX 250mm，5ym)作為色譜柱2、以 Ecosil (]18(4.61111]1\25〇1111]1，5以1]1)作為色譜柱3進(jìn)行測(cè)定，所得結(jié)果如圖10所示。
[0139]不同色譜柱的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)如表11所示，不同色譜柱時(shí)6個(gè)共有峰的相對(duì)保留 時(shí)間的結(jié)果如表12所示。
[0140] 表11不同色譜柱的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)
[0141]
[0142] 表12不同色譜柱時(shí)6個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的結(jié)果
[0143]
[0144] 由圖 10和表11 可知，Waters XbridgeCi8(4 · 6mm X 250mm，5ym)的分離效果較好，選 擇Waters XbridgeCi8為本實(shí)驗(yàn)的色譜柱。由表12可知，1號(hào)峰~6號(hào)峰與參照物S峰的相對(duì)保 留時(shí)間的RSD分別為11.79%、1.98%、1.42%、0.00%、4.20%，峰1的1?0%值超過(guò)要求，說(shuō) 明峰1在不同色譜柱的重現(xiàn)性較差，建議剔除該共有峰。
[0145] (5)不同流速的考察
[0?46] 取同一份白茍配方顆粒樣品的供試品溶液，分別以0.8mL/min、1. OmL/min，1.2mL/ min的流速測(cè)定，所得色譜圖如圖11所示，系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)如表13所示。
[0147] 表13不同流速的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)
[0148]
[0149] 由圖11和表13可知，流速為0.8mL/min時(shí)，5、6號(hào)峰分離效果不佳;又因?yàn)閮?nèi)徑為 4.6mm的柱子流速一般為1 .OmL/min，壓力可以控制在系統(tǒng)耐受范圍內(nèi)，故本實(shí)驗(yàn)采用 1 .OmL/min進(jìn)行測(cè)定。
[0150] (6)不同柱溫的選擇
[0151] 取同一份白芍配方顆粒樣品的供試品溶液，分別以柱溫25°C、30°C、35°C的柱溫測(cè) 定，所得色譜圖如圖12所示，系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)如表14所示。
[0152] 表14不同柱溫的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)比較
[0153]
[0154] 由圖12和表14可知，比較不同柱溫（15 °C、25 °C、35 °C )的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)，綜合比 較，柱溫為25°C時(shí)的分離效果最佳；又因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)的環(huán)境保持在25°C，故采用25°C進(jìn)行測(cè) 定。
[0155] (7)最終色譜條件
[0156] 色譜柱:Waters XbridgeC18色譜柱（4.6mmX250mm，5ym);
[0157] 柱溫：25 °C;
[0158] 檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm;
[0159] 流動(dòng)相：乙腈-0.1 %磷酸水，梯度洗脫；
[0160] 流速：lmL/min;
[0161] 梯度洗脫程序如表15所示：
[0162] 表15梯度洗脫程序
[0163]
[0164] 實(shí)驗(yàn)例3白芍配方顆粒特征圖譜的建立
[0165] 參照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)指南(試行)》，利用中國(guó)藥典委員會(huì)推薦的 "中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版"軟件，通過(guò)對(duì)所得指紋圖譜的進(jìn)行相似度比較（以 中位數(shù)建立參照指紋圖譜），并進(jìn)行方法學(xué)考察。
[0166] 根據(jù)實(shí)驗(yàn)例1和2，確定白芍配方顆粒HPLC特征圖譜按如下方法建立：
[0167] (1)取白芍配方顆粒約0. lg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加稀乙醇20mL，超聲處理 (功率280W，頻率40kHz) 30分鐘，溶解，加稀乙醇至刻度，搖勻，0.45μπι微孔濾膜過(guò)濾，即得。
[0168] (2)高效液相HPLC色譜分析條件：
[0169] 色譜柱:Waters XbridgeC18色譜柱（4.6mmX250mm，5ym);
[0170] 柱溫：25°C;
[0171] 檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm;
[0172] 流動(dòng)相:乙腈-0.1 %磷酸水，梯度洗脫；
[0173] 流速：lmL/min;
[0174] 梯度洗脫程序如表15所示：
[0175] 表15梯度洗脫程序
[0176]
[0177] 按上述方法進(jìn)行白芍配方顆粒特征圖譜的建立。
[0178] 取白芍對(duì)照藥材和15個(gè)批次的白芍配方顆粒樣品作為供試品溶液，通過(guò)高效液相 色譜得到白芍配方顆粒特征圖譜，圖13為15批白芍配方顆粒的特征圖譜(S1~S15依次為批 號(hào)1209001S、1309003H、1201002S、1112001H、1209003H、1401001S、1312002W、1305001H、 1303002H、1306002H、1203002H、1210003H、1204001S、1212002H、1311002W的白芍配方顆粒 的圖譜S16為白芍對(duì)照藥材圖譜），圖14為白芍對(duì)照藥材特征圖譜，圖15為15批配方顆粒及 對(duì)照藥材特征圖譜的共有模式。
[0179] 采用藥典委員會(huì)編制的指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件"中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 系統(tǒng)2012版"，生成對(duì)照特征圖譜，對(duì)配方顆粒特征圖的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析、比較，選取其中 的芍藥苷作為參照峰(S峰），計(jì)算各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間規(guī)定值，所得結(jié)果如表16、 17所示。
[0180] 表16白芍配方顆粒的共有模式的相對(duì)保留時(shí)間
[0181]
[0182] 表17白芍配方顆粒的相對(duì)保留時(shí)間
[0183]
[0184]
[0185] (3)方法學(xué)驗(yàn)證
[0186] 3.1重復(fù)性考察
[0187] 取同一批號(hào)的供試品(批號(hào)：1204001S)6份，按（1)中供試品制備及(2)中色譜條件 分別測(cè)定4個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間，重復(fù)性考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表18所示。
[0188] 如表18所示，1號(hào)峰~4號(hào)峰與參照物S峰的相對(duì)保留時(shí)間的R S D分別為0.5 2 %、 0.18%、0.00%、0.72%;這表明，該方法重復(fù)性較好。
[0189] 表18重復(fù)性考察結(jié)果
[0190]
[0192] 3.2精密度考察
[0193] 取同一瓶重復(fù)性項(xiàng)下的供試品溶液(批號(hào)：1204001S)，連續(xù)進(jìn)樣6次。
[0194] 分別測(cè)定4個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間，精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表19所示。
[0195] 表19精密度考察結(jié)果
[0196]
[0197] 由表19可知，1號(hào)峰~4號(hào)峰與參照物S峰的相對(duì)保留時(shí)間的R S D分別為0.18 %、 0.13%、0.00%、0.39 %;這表明，該方法精密度較好。
[0198] 3.3專屬性考察
[0199] 取同一瓶重復(fù)性項(xiàng)下的供試品溶液與空白溶劑稀乙醇做對(duì)比，專屬性考察實(shí)驗(yàn)結(jié) 果如圖16所示。
[0200] 由圖16可知，空白溶劑在相應(yīng)保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，無(wú)干擾，符合要求。
[0201] 3.4穩(wěn)定性考察
[0202] 取同一瓶重復(fù)性項(xiàng)下的供試品溶液，分別在Oh、lh、4h、8h、12h、24h測(cè)定4個(gè)共有峰 的相對(duì)保留時(shí)間。穩(wěn)定性考察結(jié)果如表20所示。
[0203]表20穩(wěn)定性考察結(jié)果 [0204]
[0206]由表20可知，1號(hào)峰~4號(hào)峰與參照物S峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD分別為0.63 %、 0.04 %、0.00 %、0.80 % ;這表明，該方法穩(wěn)定性較好。
[0207]顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說(shuō)明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì) 于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或 變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見(jiàn)的變化或 變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在于， 該方法包括如下步驟： (1) 取待測(cè)白芍的藥物制劑0.05-0.15重量份，精密稱定，精密加入稀乙醇10-30體積 份，稱定重量，加熱回流提取或超聲提取20-40分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減失 的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液； (2) 精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00002-0.00010重量份的溶液， 搖勻，作為對(duì)照品A溶液； 精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.0005-0.0015重量份的溶液， 搖勻，作為對(duì)照品B溶液； 精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00012-0.00014重量份的溶 液，搖勻，作為對(duì)照品C溶液； (3) 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的磷酸 溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫:0min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% :95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% :90% ;5-25min，A:B為 10% :90% - 16% :84% ;25-40min，A: 8為16%:84%;檢測(cè)波長(zhǎng)為23〇11111，流速為1111171^11; (4) 分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液0.005-0.015 體積份，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照 品C溶液的液相色譜； (5) 利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照品A 溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹配，即 得指紋圖譜； 所述重量份與所述體積份的關(guān)系為g/mL。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在于， 該方法包括如下步驟： (1) 取待測(cè)白芍的藥物制劑〇. 10重量份，精密稱定，精密加入稀乙醇20體積份，稱定重 量，加熱回流提取或超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，取稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻， 過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液； (2) 精密稱取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00006重量份的溶液，搖勻，作 為對(duì)照品A溶液； 精密稱取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.0010重量份的溶液，搖勻，作 為對(duì)照品B溶液； 精密稱取羥基芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1體積份含0.00013重量份的溶液，搖勻，作 為對(duì)照品C溶液； (3) 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A、以0.1 %的磷酸 溶液為流動(dòng)相B按照如下程序進(jìn)行梯度洗脫:0min，A:B為5% :95% ;0-5min，A:B為5% :95% - 10% :90% ;5min，A:B為 10% :90% ;5-25min，A:B為 10% :90% - 16% :84% ;25-40min，A: 8為16%:84%;檢測(cè)波長(zhǎng)為23〇11111，流速為1111171^11; (4) 分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液0.010體積 份，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，分別得供試品溶液、對(duì)照品A溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C 溶液的液相色譜； (5)利用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)供試品溶液、對(duì)照品A 溶液、對(duì)照品B溶液和對(duì)照品C溶液的液相色譜分別經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入，多點(diǎn)校正和數(shù)據(jù)匹配，即 得指紋圖譜。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在于，以 4.6mm X 250mm、5μηι的Waters XbridgeCis、4 · 6mm X 250mm、5ym的Thromo Acclaiml20Cis或 4.6mmX250mm、5ym的Ecosil Cis為色譜柱。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在 于，所述步驟(1)中，以〇. 45μπι微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在 于，所述藥物制劑為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、 口服液體制劑或注射制劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在 于，所述白芍的藥物制劑通過(guò)以下方法制備而成： 取白芍，加熱回流提取至少1次，每次加入至少2重量倍量的水提取至少0.5h，過(guò)濾，合 并濾液，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1.00-1.10的流浸膏，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制 成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、 口服液體制劑或注射制劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在于，所述白 芍的藥物制劑通過(guò)以下方法制備而成： 取白芍，加熱回流提取1~5次，每次加入2~10重量倍量的水提取0.5~2h，過(guò)濾，合并 濾液，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1.05-1.10的流浸膏，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成 臨床上可接受的片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口 服液體制劑或注射制劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在于，所述白 芍的藥物制劑通過(guò)以下方法制備而成： 取白芍，加熱回流提取2次，第1次加入8重量倍量的水提取1.5h，第2次加入6重量倍量 的水提取lh，過(guò)濾，合并濾液，濾液濃縮至60 °C相對(duì)密度為1.05-1.10的流浸膏，加入常規(guī)輔 料，按照常規(guī)工藝，制成臨床上可接受的片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、 速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的建立白芍的藥物制劑的指紋圖譜的方法，其特征在 于，所述白芍的藥物制劑的指紋圖譜的共有特征峰為：1號(hào)峰羥基芍藥苷、2號(hào)峰芍藥苷內(nèi) 酯、3號(hào)峰芍藥苷和4號(hào)峰，各峰號(hào)的相對(duì)保留時(shí)間分別為：1號(hào)峰0.47、2號(hào)峰0.86、3號(hào)峰 1.00 和 4 號(hào)峰 1.69。10. 權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法在白芍的藥物制劑的質(zhì)量檢測(cè)和質(zhì)量控制中的應(yīng) 用。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105866296SQ201610427296
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年6月15日
【發(fā)明人】譚沛, 張輝, 鄭曉英, 馬鵬崗, 嚴(yán)萍, 張潔, 詹若挺, 陳蔚文, 林文華
【申請(qǐng)人】華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司