本發(fā)明屬于分子鑒定
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及羊肚菌的羊肚菌交配型決定基因、交配型鑒定專用引物及出菇能力預(yù)測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：羊肚菌是子囊菌中的一種美味食用菌，其子實(shí)體含有7種人體必需的氨基酸，甘寒無(wú)毒，有益腸胃、化痰理氣藥效。羊肚菌的營(yíng)養(yǎng)相當(dāng)豐富，據(jù)測(cè)定，羊肚菌含粗蛋白20％、粗脂肪26％、碳水化合物38.1％，還含有多種氨基酸，特別是谷氨酸含量高達(dá)1.76％。因此，有人認(rèn)為是“十分好的蛋白質(zhì)來(lái)源”，并有“素中之葷”的美稱。由于羊肚菌廣受消費(fèi)者歡迎，供不應(yīng)求，靠采集野生羊肚菌已無(wú)法滿足羊肚菌消費(fèi)市場(chǎng)的需求。因此，近年來(lái)出現(xiàn)了一批人工栽培羊肚菌的技術(shù)，例如授權(quán)公告號(hào)CN103583232B、CN103202177B、CN101628834B的專利和申請(qǐng)公布號(hào)CN103782802A、CN103583240A、CN101053302所述的栽培方法。但是，在生產(chǎn)實(shí)踐中，人工栽培的羊肚菌存在出菇不穩(wěn)定的現(xiàn)象。目前用于人工栽培方式生產(chǎn)的羊肚菌菌株眾多，并且為替換退化的老菌株，每年還有大量新選育的菌株投入羊肚菌生產(chǎn)。有相當(dāng)多的的情況下，被栽種的羊肚菌菌株最終無(wú)法出菇，導(dǎo)致種植戶幾乎顆粒無(wú)收。導(dǎo)致羊肚菌無(wú)法出菇的原因，除去田間管理不善導(dǎo)致光照、溫度、水分、通氣等因素不適宜之外，羊肚菌菌種的交配型缺失也占有重要的原因。大多數(shù)真菌，包括羊肚菌在內(nèi)，存在有兩種交配型的菌絲，在有性生殖過(guò)程中分別扮演相當(dāng)于雌性和雄性的角色。而在羊肚菌中，兩種交配型分別為MAT1-1-1和MAT1-2-1型。只有當(dāng)MAT1-1-1和MAT1-2-1型菌絲同時(shí)存在，羊肚菌才能完成類似雌雄交配的有性生殖過(guò)程，并成功長(zhǎng)出子實(shí)體(出菇)。因此，能成功出菇的羊肚菌菌種必須同時(shí)具有MAT1-1-1和MAT1-2-1型兩種菌絲。當(dāng)羊肚菌菌種被長(zhǎng)期保存、反復(fù)傳代后，容易發(fā)生退化，將導(dǎo)致兩種可能的結(jié)果：(1)MAT1-1-1和MAT1-2-1型的兩種菌絲中的其中任意一種退化消失，(2)基因突變導(dǎo)致MAT1-1-1型轉(zhuǎn)變?yōu)镸AT1-2-1型或MAT1-2-1型轉(zhuǎn)變成MAT1-1-1型。這兩種變化都將導(dǎo)致原先同時(shí)擁有MAT1-1-1和MAT1-2-1兩種交配型的菌絲的羊肚菌菌種只剩下一種交配型，無(wú)法完成有性生殖過(guò)程，從而導(dǎo)致出菇失敗。本發(fā)明急需開發(fā)出在種植之前就能判別羊肚菌菌種是否具有出菇能力的技術(shù)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是羊肚菌菌種在種植之前難以判斷其是否具有出菇能力。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是在首次發(fā)現(xiàn)并分離得到了羊肚菌的兩種交配型的基因的基礎(chǔ)上，提供了擴(kuò)增羊肚菌交配型基因的引物對(duì)。進(jìn)一步的，上述的引物對(duì)的核苷酸序列為SEQIDNo.7和SEQIDNo.8，以及SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。本發(fā)明還在上述方案的基礎(chǔ)上提供了上述的引物對(duì)在鑒定羊肚菌菌株交配型中的用途。同時(shí)，本發(fā)明提供了一種鑒定羊肚菌菌株交配型的方法。該方法于包括以下步驟：a、提取羊肚菌菌絲的總DNA；b、使用上述的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；c、根據(jù)擴(kuò)增所得產(chǎn)物判斷是羊肚菌菌絲是MAT1-1-1型菌絲，MAT1-2-1型菌絲，還是兼具M(jìn)AT1-1-1和MAT1-2-1型的菌絲。其中，上述方法步驟c中所述的斷方式為：若用核苷酸序列為SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的引物對(duì)擴(kuò)增出一條大約1.2-1.5kb大小的片段，說(shuō)明樣品具有MAT1-1-1交配型，反之則否；若用核苷酸序列如SEQIDNo.9與SEQIDNo.10所示的引物對(duì)擴(kuò)增出一條大約0.4-0.6kb大小的片段，說(shuō)明樣品具有MAT1-2-1交配型，反之則否。進(jìn)一的，本發(fā)明還提供了一種預(yù)測(cè)羊肚菌能否出菇的方法，其特征在于包括以下步驟：a、提取羊肚菌菌絲的總DNA；b、使用上述的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；c、根據(jù)擴(kuò)增所得產(chǎn)物判斷是羊肚菌菌絲是MAT1-1-1型菌絲，MAT1-2-1型菌絲，還是兼具M(jìn)AT1-1-1和MAT1-2-1型的菌絲；d、若羊肚菌菌絲兼是具M(jìn)AT1-1-1和MAT1-2-1型的菌絲，判別為能出菇，反之則判別為不能。其中，上述方法步驟c中所述的判斷方式為：若用核苷酸序列為SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的引物對(duì)擴(kuò)增出一條大約1.2-1.5kb大小的片段，說(shuō)明樣品具有MAT1-1-1交配型，反之則否；若用核苷酸序列如SEQIDNo.9與SEQIDNo.10所示的引物對(duì)擴(kuò)增出一條大約0.4-0.6kb大小的片段，說(shuō)明樣品具有MAT1-2-1交配型，反之則否。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明首次提供了檢測(cè)羊肚菌交配型的方法，以及在栽培前能預(yù)測(cè)羊肚菌菌株能否出菇的方法，實(shí)驗(yàn)證明能非常準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)羊肚菌菌株能否出菇用，有助于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中盡早淘汰交配型具有缺陷的菌株，避免盲目投產(chǎn)造成損失，在生產(chǎn)中有很好的應(yīng)用前景。名詞解釋：本發(fā)明所述“羊肚菌”：指真菌中屬于羊肚菌屬(Morchellagenus)的所有食用菌，包括但不限于梯棱羊肚菌(Morchellaimportuna)、六妹羊肚菌(Morchellasextelata)、七妹羊肚菌(Morchellaseptimelata)、尖頂羊肚菌(Morchellaconica)、黃羊肚菌(Morchellaesculenta)、高羊肚菌(Morchellaelata)、粗腿羊肚菌(Morchellacrassipes)等。其中最常見的栽培種類是梯棱羊肚菌、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌。本發(fā)明中所述的“出菇”，指羊肚菌產(chǎn)生出子實(shí)體。具體實(shí)施方式由于羊肚菌中，兩種交配型分別為MAT1-1-1和MAT1-2-1型。只有當(dāng)MAT1-1-1和MAT1-2-1型菌絲同時(shí)存在，羊肚菌才能完成類似雌雄交配的有性生殖過(guò)程，并成功長(zhǎng)出子實(shí)體(出菇)。因此，能成功出菇的羊肚菌菌種必須同時(shí)具有MAT1-1-1和MAT1-2-1型兩種菌絲。當(dāng)羊肚菌菌種被長(zhǎng)期保存、反復(fù)傳代后，容易發(fā)生退化，將導(dǎo)致兩種可能的結(jié)果：(1)MAT1-1-1和MAT1-2-1型的兩種菌絲中的其中任意一種退化消失，(2)基因突變導(dǎo)致MAT1-1-1型轉(zhuǎn)變?yōu)镸AT1-2-1型或MAT1-2-1型轉(zhuǎn)變成MAT1-1-1型。這兩種變化都將導(dǎo)致原先同時(shí)擁有MAT1-1-1和MAT1-2-1兩種交配型的菌絲的羊肚菌菌種只剩下一種交配型，無(wú)法完成有性生殖過(guò)程，從而導(dǎo)致出菇失敗。在羊肚菌中，菌絲的交配型MAT1-1-1和MAT1-2-1分別由基因mrlMAT1-1-1、mrlMAT1-2-1控制。具有mrlMAT1-1-1基因的菌絲即為MAT1-1-1交配型，具有mrlMAT1-2-1基因的菌絲即為mrlMAT1-2-1交配型。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了羊肚菌屬的mrlMAT1-1-1、mrlMAT1-2-1基因的序列。mrlMAT1-1-1、mrlMAT1-2-1基因的完整DNA序列包含上下游非表達(dá)序列和內(nèi)含子，參見SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。在下面列出的序列中，上下游非表達(dá)序列用下劃線標(biāo)記，內(nèi)含子用方框標(biāo)記(如無(wú)特殊說(shuō)明本發(fā)明中所有核酸序列的順序均為從5’端向3’端)。mrlMAT1-1-1基因的完整DNA序列(SEQIDNo.1)：ATCACCGACGAGAGCACGCTGCTCACTGGGTTTTCCCTTACTTTACATGCATTTCCTGACACATACAACCTTTTATCAACGGTACACTTCAATAAAGTAGAGTCTACTAAGGCTCTCTTGTGCCCCTTTTGACTATTATTTCTATCCTTCTATTTTATCTTCATGTCACTCCGTCCGGTTTACCTTACTGGACTGGTTCGTGAGAACCCGCCTTCTGAGTCCGTTATGCTCATGGACGCTATAAAGCGGACTCTTTGTCTTCGTAACGCCACTTTGGGTTGCGCTCTCTATCTCTCGAAAACCCATCAATACCTTTTAATGCAAGACCGAGGCGGTGGAATCTGGGTTCAACACAAAGACTGTCGATATATTGTGCCCCCACCAGGAGGGTCGGTATTTCAGGTGCAGGGCAGGCCCCTCCCGTTCCAGAGATGGCTCACTCTTATGCATCGACTTGTACGTCAGGATGGAAGGGTTGGGCTAGACCCTAAGATCCCATACAAGTGCGCAGTCCAAAGGCTTTATGGTGAACACTACAAGAGTAATAGGCCGATTGTTGATGAACCGTTGACTAAACGGTCTGTTTTGAAAGCCCTAAACCCTTATATAGCACATAGAACTTGGATATCAAAATTCCTAGGAGGGCTAGGATTTACCCAGATGCTGATTTCAGCACTCACCAAAGGTGTATGGCAACGTGAGAAGAGGAAAGCTATGTGGTCCAATATAGCAAGGTTGTACACCTACCACCGGGATCAAGGGACGCTCACATCTACTCTCGAAGATTTTATCAAAGCGCAACTTATCGAGAATAAACAAGATCCTTCCCCTAGCTCATTCCTACACAACTGCGGTATAAATCTCGACGATGTGAGAAAACGAATGACACCCACTTGCATTCCACCTGATGCTCAAATCTTTGCTATTGGGACTGTGGCACCCATCGAGGAGACTTATTCTGGGATTCAAGATATTCCAAATGTTCACTTTCAAGCGCCTACAGTTCCTGACTCTACCGCCATGGAATCTGCCAAAACGGAGCCCATTATAATGTCGCCCATATCAACTATATGTACGGTATCGAAGGATTATATTTCGTCTCGAGCTCGGCAGAGAAGCAGGAAAACAATTGCACGCTCGGAATTAACAGGAATTACCCCTCAAGACGCATGTCAAAACGCTCTATCGCCACCAGCTCTCCCAACTTCTCAACAATCCATCTCCAATCAAATGCTTGTAGATCCTCCTCAGGACTGGAATTCTATGACCCCAGTCGCTTACAATACGAATCAGCTCGATCCAAGATTGAACTTTTTACCCATTAAACCGCTTCCTGGGAGGCTGCCCGCTTTTGATAAGACCCTCCGAGAGCCAGGGACATACCCAGAGCCAGAGATATACCCAGAACCAGATACATATTCAGAATCACGACATTTCCAGGAGTCACAGTTTTATCCACAACAAATTTTTTCTAGCGGGTTAAAATTCTGTATAAGCCCAAAGTCTGATGTAGAACCACGGACATATACAGCTCCCAACATTTATCCAGAACCTTATACTCTTAGACCTGAAAACGCAACTTCGCAGGTATTTCATGGGATATATAATCCCCAAAATATGGAAATTGAAGAGCCTTTCGATTTTACAAAAGAAAATACATATTTCGTTTCGGAAACCTACACCTCCAAAGACTTTCCACAGCCTCAATCACAGACATTCCAGGAGTTCGTAAACTAGGACCACACTACAGTACAAGGACATTAAATTGAAGTAAACGTATCTCATGTTTTATAATTACTTTGTTTTGCTTGTTTCACATGGCTGGTAGATATATCGTCATTTTAAAACGTTTGAGCGGCCATTACGCTCAATCTGATTTGTCAAACCAGCTACTTATATATATGTGCTATATAACTAmrlMAT1-2-1基因的完整DNA序列(SEQIDNo.2)：ATTTTCTGCCATTTATAACATATATATATAAATCAAACCTATTTCGACGTATATCAACCACGCCCGTAATTTCTTCGATCTTTACTATTCCGGTCACCTCTTTGAAACATCTTATTCTGTTAGCCGCCCATCTCTGAGCTTTTTCTACTCTTACCACCCTATCAGTTCATCGATAAAGAGGTTCCATGTTTCCAGGCCTCCAAAAGCCTGGGTTGCGTCCGAAGAATAGCTCTACTCTTCGGCCAGAACAGATGCTCGAAGAAGCTATGGGTCATATCAATCAGAGCTTTGCCAATTCAAATGAAAAGACCGCTTTAGATAGATTGGCAGGACTTAAACCTCGCCGTGACCCTCCTTCTTTCGATTTCACTGGATCAGACGGCCATATCCTGAGAGTTAAGGTTTTATCTCTGGACCAACGAGGGCCAGGGAAAGAAAGTGATGACCATGGGCCCCAAACATTTACTGTTTTAGAAAAAACCAACCATATAAACGGTTATCCTTGTGTTAAGACCAATGAGGGTGATCTGGTCTTCGTTTATGACTCTACTGTCACTTCTGCAGAAACAATTTACCAAGGCCATGGAAATTTTGTGGATCCACAGCTGTCAGCGCAAGGCGTGAGTCGAGTTACCAAGAAGAATTTATTAGAGCATGTTCCTCGTCCTATGAATGCTTTTATAATCTATCGCAACACAGAGATGAAGGCTGTTCGCCAGAAATACCCGGGGATTGGGAACAACGATGTTTGTAGGTTTTTTGTTGCTCATTTATCCTTCAGAATCTGATAATATGTGTTCGTTTTGGGCCTTTTGATTATTTTATTGACAATTTACGTTGTAGCGCGGATTGTCGGGCAACGGTGGCGAGAGCTTGACCCTAAGATTAGAGAGCATTACAAGGTGAATTAAAACAATCACTTCTTCAAGTAAATATGCTCATATTGCTAATCTAGAAAAGGATTTGGCCGCAAAATCTGCACGAGAGCACCACGTAA同時(shí)還研究發(fā)現(xiàn)了羊肚菌的該mrlMAT1-1-1基因和mrlMAT1-2-1基因中存在CDS序列。mrlMAT1-1-1基因的CDS序列如SEQIDNo.3所示。mrlMAT1-2-1基因的CDS序列如SEQIDNo.4所示。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)了羊肚菌的該mrlMAT1-1-1基因和mrlMAT1-2-1基因編碼的交配型決定因子的多肽序列。mrlMAT1-1-1基因編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的氨基酸序列如SEQIDNo.5所示。mrlMAT1-2-1基因編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的氨基酸序列如SEQIDNo.6所示。在上述創(chuàng)造性工作的基礎(chǔ)上，申請(qǐng)人更進(jìn)一步地獲取和考察了羊肚菌屬的多個(gè)可食用種的mrlMAT1-1-1、mrlMAT1-2-1基因，發(fā)現(xiàn)其共有保守序列。其中，SEQIDNo.1所示的mrlMAT1-1-1和SEQIDNo.2所示的mrlMAT1-2-1基因序列都是屬于梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌，這兩個(gè)種的這兩個(gè)基因序列相同。還發(fā)現(xiàn)羊肚菌屬各種的mrlMAT1-1-1、mrlMAT1-2-1基因序列高度保守，不同種之間的相似度mrlMAT1-1-1在98.1％-100％之間，mrlMAT1-2-1為99.4-100％。本發(fā)明在此基礎(chǔ)上研究得到一套引物對(duì)，該套引物對(duì)在多段保守序列可選作引物設(shè)計(jì)位點(diǎn)的前提下，為盡可能擴(kuò)增出基因全長(zhǎng)的引物對(duì)。本發(fā)明得到的該引物對(duì)不僅能檢測(cè)出目標(biāo)基因是否存在，還能檢測(cè)其長(zhǎng)度是否正常，以方便檢出可能由于突變導(dǎo)致基因部分片段缺失，使mrlMAT1-1-1或mrlMAT1-2-1基因產(chǎn)物失去正常功能的情況。該套引物對(duì)包括用于特異性擴(kuò)增mrlMAT1-1-1基因的引物對(duì)MrlMAT1-1-1F、MrlMAT1-1-1-R，和用于特異性擴(kuò)增mrlMAT1-2-1基因的引物對(duì)MrlMAT1-2-1-F、MrlMAT1-2-1-R。MrlMAT1-1-1F(SEQIDNo.7)：ATGGCTCACTCTTATGCATCGACTTGTACMrlMAT1-1-1-R(SEQIDNo.8)：GGCTGTGGAAAGTCTTTGGAGGTGTAGMrlMAT1-2-1-F(SEQIDNo.9)：AAGACCGCTTTAGATAGATTGGCAGGACMrlMAT1-2-1-R(SEQIDNo.10)：AACAGCCTTCATCTCTGTGTTGCGATAG利用上述引物可以通過(guò)PCR方法鑒定羊肚菌菌絲的交配型：是MAT1-1-1型菌絲，MAT1-2-1型菌絲，還是兼具M(jìn)AT1-1-1和MAT1-2-1型的菌絲。而運(yùn)用PCR法鑒定羊肚菌交配型時(shí)，其中PCR具體步驟和細(xì)節(jié)，例如DNA模板的提取、PCR程序的設(shè)置、引物退火溫度的選擇等，根據(jù)所使用不同廠家的試劑產(chǎn)品而有所差異，但都是本領(lǐng)域技術(shù)人員在現(xiàn)有技術(shù)的指導(dǎo)下容易完成的基本工作，如參考各種教科書、試劑盒的說(shuō)明書、分子生物學(xué)手冊(cè)等等，本發(fā)明中不再對(duì)這些細(xì)節(jié)進(jìn)行贅述。發(fā)明人通過(guò)對(duì)羊肚菌菌種的交配型進(jìn)行鑒定，檢查其是否同時(shí)擁有兩種交配型，預(yù)測(cè)羊肚菌菌種能否成功出菇，從而用來(lái)鑒定自制或市售的羊肚菌菌種的質(zhì)量。具體在現(xiàn)場(chǎng)使用時(shí)，當(dāng)用引物對(duì)MrlMAT1-1-1F、MrlMAT1-1-1-R擴(kuò)增羊肚菌樣品，擴(kuò)增出一條大約1.2-1.5kb大小的片段，即可說(shuō)明樣品具有MAT1-1-1交配型。若無(wú)條帶，說(shuō)明樣品不具有MAT1-1-1交配型。當(dāng)用引物對(duì)MrlMAT1-2-1-F、MrlMAT1-2-1-R擴(kuò)增羊肚菌樣品，擴(kuò)增出一條大約0.4-0.6kb大小的片段，即可說(shuō)明樣品具有MAT1-2-1交配型。若無(wú)條帶，說(shuō)明樣品不具有MAT1-2-1交配型。而當(dāng)該羊肚菌菌種同時(shí)具有MAT1-1-1和MAT1-2-1兩種交配型，則判斷該菌種能成功出菇，即菌種合格。當(dāng)該菌種僅具有MAT1-1-1或MAT1-2-1中的一種交配型時(shí)，則判斷該菌種不能成功出菇，即菌種不合格。以下通過(guò)適用本發(fā)明方法在羊肚菌栽培實(shí)踐中進(jìn)行出菇能力預(yù)測(cè)及結(jié)果驗(yàn)證的實(shí)施例，以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例一、使用本發(fā)明方法預(yù)測(cè)羊肚菌菌種能否出菇目的：對(duì)5株羊肚菌進(jìn)行交配型的鑒定，并對(duì)這5個(gè)菌株分別制成的羊肚菌菌種產(chǎn)品能否出菇進(jìn)行預(yù)測(cè)。時(shí)間：根據(jù)PCR結(jié)果進(jìn)行預(yù)測(cè)的時(shí)間為2014年9月，實(shí)際出菇時(shí)間2015年3月。地點(diǎn)：四川省成都市新都區(qū)其中A、B、C為發(fā)明人單位自己擁有的羊肚菌菌株，D、E是來(lái)自兩種市售羊肚菌菌種的菌株。A、B為梯棱羊肚菌(Morchellaimportuna)，C、D為六妹羊肚菌(Morchellasextelata),E為七妹羊肚菌(Morchellaseptimelata)。在結(jié)果表格中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有則填入“√”，無(wú)則填入“×”。結(jié)果參見表1。取樣過(guò)程：無(wú)菌操作挑取適量待測(cè)羊肚菌菌株的菌絲，接入盛有25ml土豆汁葡萄糖培養(yǎng)液(每1000毫升培養(yǎng)液的制備方法：稱取200g馬鈴薯洗凈去皮切成小塊，加水煮爛(煮沸20～30分鐘，能被玻璃棒戳破即可)，用八層紗布過(guò)濾，加熱，加入20g葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補(bǔ)足水分至1000毫升)的250毫升三角瓶中，20攝氏度下靜置培養(yǎng)7天，即得菌絲樣品。提取過(guò)程：使用上海生工的真菌基因組DNA快速抽提試劑盒(產(chǎn)品號(hào)SK8229)提取總DNA，作為PCR模板。鑒定MAT1-1-1的PCR過(guò)程：使用NEB公司的Q5TMHotStartHigh-Fidelity2XMasterMix進(jìn)行擴(kuò)增。每20微升反應(yīng)體系含有1微升羊肚菌總DNA，1微升SeqNO.7所示的引物，1微升SeqNO.8所示的引物，7微升蒸餾水，10微升Q5TMHotStartHigh-Fidelity2XMasterMix。PCR程序：98度2分鐘，98度30秒，60度20秒，72度45秒(循環(huán)30次)，72度2分鐘，鑒定MAT1-2-1的PCR過(guò)程：使用NEB公司的Q5TMHotStartHigh-Fidelity2XMasterMix進(jìn)行擴(kuò)增。每20微升反應(yīng)體系含有1微升羊肚菌總DNA，1微升SeqNO.9所示的引物，1微升SeqNO.10所示的引物，7微升蒸餾水，10微升Q5TMHotStartHigh-Fidelity2XMasterMix。PCR程序：98度2分鐘，98度30秒，64度20秒，72度20秒(循環(huán)30次)72度2分鐘。PCR產(chǎn)物在含1％瓊脂糖的凝膠上電泳檢測(cè)。以相應(yīng)條帶出現(xiàn)為陽(yáng)性。表一.5株羊肚菌的交配型鑒定結(jié)果將上述菌種則按照已公開發(fā)表的《四川羊肚菌高效栽培模式與技術(shù)》(《食藥用菌》2016年第24卷第3期，151～154頁(yè))中描述的流程進(jìn)行栽培，收獲到子實(shí)體則為出菇，0子實(shí)體產(chǎn)生則為未出菇。實(shí)驗(yàn)結(jié)果參見表2。表二.對(duì)5個(gè)羊肚菌菌種產(chǎn)品能否出菇的預(yù)測(cè)，以及實(shí)際出菇情況。菌株號(hào)鑒定為交配型預(yù)測(cè)能否出菇實(shí)際是否出菇A僅MAT1-1-1預(yù)計(jì)不能出菇未出菇BMAT1-1-1和MAT1-2-1預(yù)計(jì)能出菇出菇CMAT1-1-1和MAT1-2-1預(yù)計(jì)能出菇出菇D僅MAT1-2-1預(yù)計(jì)不能出菇未出菇EMAT1-1-1和MAT1-2-1預(yù)計(jì)能出菇出菇由此可見，通過(guò)鑒定交配型預(yù)測(cè)羊肚菌菌種能否出菇的準(zhǔn)確率達(dá)100％。若按照傳統(tǒng)模式不經(jīng)過(guò)鑒定交配型而盲目投產(chǎn)，則5個(gè)菌種里將遇到2個(gè)無(wú)法出菇，風(fēng)險(xiǎn)概率40％，可能給種植戶帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)損失。實(shí)施例二、使用本發(fā)明方法預(yù)測(cè)羊肚菌菌種能否出菇目的：對(duì)12株羊肚菌進(jìn)行交配型的鑒定，并對(duì)這12個(gè)菌株制成的羊肚菌菌種產(chǎn)品能否出菇進(jìn)行預(yù)測(cè)。時(shí)間：根據(jù)PCR結(jié)果進(jìn)行預(yù)測(cè)的時(shí)間為2015年10月，實(shí)際出菇時(shí)間2016年4月。地點(diǎn)：四川省阿壩州其中M1-M8為本單位自己擁有的菌株，S1-S4是來(lái)自四種市售羊肚菌菌種的菌株。M1～M4為六妹羊肚菌，M5～M8為梯棱羊肚菌，S1為七妹羊肚菌，S2為梯棱羊肚菌，S3為粗腿羊肚菌(Morchellacrassipes)，S4為六妹羊肚菌具體試驗(yàn)方法參見實(shí)施例一。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有則填入“√”，無(wú)則填入“×”。在結(jié)果表格中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有則填入“√”，無(wú)則填入“×”。結(jié)果參見表2。表三.12株羊肚菌的交配型鑒定結(jié)果將上述菌種則按照已公開發(fā)表的《四川羊肚菌高效栽培模式與技術(shù)》(《食藥用菌》2016年第24卷第3期，151～154頁(yè))中描述的流程進(jìn)行栽培，收獲到子實(shí)體則為出菇，0子實(shí)體產(chǎn)生則為未出菇。實(shí)驗(yàn)結(jié)果參見表4。表四.對(duì)12個(gè)羊肚菌菌種產(chǎn)品能否出菇的預(yù)測(cè)，以及實(shí)際出菇情況由此可見，通過(guò)鑒定交配型預(yù)測(cè)羊肚菌菌種能否出菇的準(zhǔn)確率達(dá)100％。若按照傳統(tǒng)模式不經(jīng)過(guò)鑒定交配型而盲目投產(chǎn)，則12個(gè)菌種里將遇到5個(gè)無(wú)法出菇，風(fēng)險(xiǎn)概率42％，可能給種植戶帶來(lái)很大的損失。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3