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一種qPCR鑒定牛肉的方法與流程

文檔序號:12346697閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種qPCR鑒定牛肉的方法,其特征在于,包括以下步驟:

步驟1:設計特異性識別牛細胞色素b基因片段的1對引物;

步驟2:將牛肉總DNA的濃度調(diào)至2 ng/μL作為樣品PCR檢測的模板;

步驟3:使用步驟1的引物和步驟2的模板,借助qPCR擴增牛細胞色素b基因特定片段;

步驟4:根據(jù)qPCR的Ct值判斷樣品是否為牛肉或是否含有牛肉或牛的其他組織成份。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種qPCR鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述牛細胞色素b基因片段的1對引物,上游引物堿基序列:5′-aatacactacacatccgacac-3′,下游引物堿基序列:5′-gacccgtaatataagcctcg -3′,濃度均為2 pmol/μL。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種qPCR鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述qPCR反應體系為10μL,其中2×qPCR Master mix:5μL;上、下游引物各0.5μL;模板DNA:0.5μL;滅菌純水3.5μL。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種qPCR鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述qPCR的程序為:95℃變性/3 s,63℃退火/30 s,72℃延伸反應/25 s,40次循環(huán)。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種qPCR鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述qPCR的Ct值判斷樣品是否是或含有牛肉或牛的其他組織成份,若Ct值在16~29時出現(xiàn)特異性SYBR熒光信號,則表明檢測樣品是牛肉或含有牛肉的成分或牛的其他組織成份;反之不是或不含有牛肉成份或牛的其他組織成份。

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