一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種胃癌檢測方法，通過胃蛋白酶原抗原和抗體之間的反應，采用膠乳增強免疫比濁法原理，能夠快速準確的定量檢測出胃癌，并涉及一種能夠將胃蛋白酶抗原和抗體相結合的用于檢測胃癌的試劑盒以及相關試劑。
【背景技術】
[0002]胃是腹腔中容納食物的器官，主要用于將大塊食物研磨成小塊，并將食物中的大分子降解為較小的分子，以便于吸收，對于人類而言，胃是非常重要的一個消化器官。
[0003]在現代社會，由于人類不健康的生活方式，對胃的損害極大，又加之保護不夠，使得胃癌的發(fā)生率極高，嚴重影響了人們的生活質量，在我國，胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其病死率居各種惡性腫瘤之首。造成胃癌的原因很多，例如，遺傳和基因的先天性因素，地域環(huán)境因素，吸煙、長期食用腌制和熏烤食品等不健康的飲食生活因素，幽門螺桿菌(Helicobacter Pylori, HP)感染，胃息肉、慢性萎縮性胃炎以及切除部分胃等胃疾病轉變?yōu)槲赴?。其中HP感染與多種胃良、惡性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關，國際癌癥研究中心已將其列為I類致癌因子，在我國胃癌高發(fā)區(qū)成人HP感染導致的胃癌占60%以上。因此，還胃癌患者一個健康的身體是人們的追求。
[0004]隨著醫(yī)學的進步，胃癌的治療方法很多，包括手術治療、化療、放療、熱療、免疫治療等，這些治療方法從一定程度上提高了患者的生存率，延長了患者的生命，但這些治療方法的前提是必須經過相應的檢測確診為胃癌后進行治療。目前檢測胃癌的常用方法主要包括X線鋇餐檢查、纖維胃鏡檢查、上消化道造影檢查，其中X線鋇餐檢查中使用的X射線對人體有侵害，費用較高，對早期胃癌的判斷無能為力；胃鏡被稱為是確診胃癌的“金標準”，但患者較痛苦，胃鏡檢查和上消化道造影檢查均要求具備先進的設備和專門的操作人員，技術水平要求較高，費用較貴，因此不能作為普查手段。
[0005]由于胃癌的發(fā)生是一個多步驟、多因素進行性發(fā)展的過程，早期胃癌缺乏一定的特異性癥狀與體征，早期很難發(fā)現，當出現明顯的臨床癥狀再去醫(yī)院就診時，病情往往已屬中、晚期，使患者失去最佳的治療時機，并影響預后。因此，早期發(fā)現胃癌非常重要，可以在早期就進行針對性地治療，提高患者的治愈率，并且預后較好。
[0006]胃蛋白酶原(PG)是胃黏膜特異性功能酶——胃蛋白酶的前體，分為PG I和PG II兩種亞群，均由胃部相關細胞分泌，通常情況下，約有I %的PG透過胃黏膜毛細血管進入血液循環(huán)，進入血液循環(huán)的PG在血液中非常穩(wěn)定。由于胃部的發(fā)展歷程一般可表述為:淺表性胃炎一胃黏膜糜爛潰瘍一萎縮性胃炎一胃癌，而在這個過程中，均伴隨著PG含量的變化，血清PG水平可反映不同部位胃黏膜的形態(tài)和功能，因此，臨床上聯合測定PG I值、PG II和PG I /PG II值可以起到胃黏膜“血清學活檢”的作用，對監(jiān)測早期胃癌具有重要的臨床意義。
[0007]上世紀80年代日本最早報道建立PG I檢測方法，使用最早的方法學主要以放免法和酶免法，后來又有時間分辨熒光免疫分析法。目前囯內外常用的血清PG I檢測的方法為放射免疫分析法(RIA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)三種檢測方法。RIA雖然敏感性較高，但試劑具有放射性，造成環(huán)境污染，且有效期短、不易保存，應用受到一定限制；TRFIA的敏感度最高，但試劑成本亦較高，并且需要昂貴的儀器；ELISA敏感度相對低些，且只能定性或作半定量檢測，不能動態(tài)觀察PG I的變化，這三種方法的操作步驟均為繁瑣的手工操作，檢測速度較慢。PG作為一種新的腫瘤標志物，對于胃癌的早期診斷和篩選、胃癌術后復發(fā)與轉移的檢測、良惡性潰瘍的鑒別、胃酸分泌的評判都有重要的意義，以PG作為腫瘤標志物的方法目前在我國還未普及。因此，急需開發(fā)出一種簡便、快速、高效、穩(wěn)定、可靠、對人體和環(huán)境友好的檢測PG含量的方法，這對大范圍內篩查出胃癌陽性患者具有重要意義。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明的主要優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，通過PG抗體與PG抗原結合形成不溶性復合體，引起吸光度的變化，通過吸光度的變化定量的測出PG含量，通過檢測出的PG 1、PG II和PG I /PG II的值與正常值比較，可反應出胃的病變程度，并基于PG含量來判斷胃癌。
[0009]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，通過配制試劑Rl和試劑R2、R3，其中試劑R2中包括包被有PG抗體的膠乳顆粒，與包含PG抗原的樣本發(fā)生凝集反應，使用生化分析儀進行檢測，測出PG的含量，操作簡單，檢測快速，結果可靠。
[0010]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，通過全自動生化分析儀，短時間內可完成大批量的檢測，適合大范圍人群篩查出陽性患者，再經胃鏡活檢確診，可大大提高胃部疾病的早期診斷，具有較高的臨床意義。
[0011]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，只需要少量血液就可進行檢測，對人體無創(chuàng)傷，對環(huán)境友好，對于胃部疾病具有良好的診斷和篩選作用。
[0012]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，檢測費用低，可判斷胃部疾病的進展情況，對于胃癌的檢測、診斷、治愈以及良好的預后都具有重要臨床意義。
[0013]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑及其試劑盒，對于胃癌普查的初篩、萎縮性胃炎等胃部疾病的檢測、HP感染的篩查和HP治療效果的評價、消化性潰瘍復發(fā)和治愈的指標判定、胃癌切除后復發(fā)的指標判定、個人胃黏膜功能的動態(tài)檢測具有重要臨床意義。
[0014]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，其中所述檢測胃癌的試劑盒為全液體試劑，穩(wěn)定性好，抗干擾性強。
[0015]本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，其中所述檢測胃癌的試劑盒可適用于各類生化分析儀器，可滿足不同用戶的不同需求。
[0016]為滿足本發(fā)明的以上優(yōu)勢以及本發(fā)明的其他優(yōu)勢和目的，本發(fā)明提供一種胃癌檢測方法、試劑以及其試劑盒，包括一種胃癌檢測方法和檢測胃癌的試劑以及其試劑盒。
[0017]一種胃癌檢測方法，根據PG抗體與PG抗原能夠特異性結合的原理，結合胃癌患者中的血清PG含量水平與健康者中的血清PG含量水平有差異的現象，可通過檢測出的PG 1、PG I1、PG I /PG II的值，初步判斷受測者的胃部健康狀況。
[0018]在體外，將含有PG抗原的受測體血清作為樣本，通過試劑Rl培養(yǎng)數分鐘后，加入試劑R2或R3，試劑R2或R3中的PG抗體能夠與樣本中的PG抗原結合形成不溶性復合體，通過生化分析儀測定的所述不溶性復合體的吸光度與校準品進行比較，計算出PG的含量水平，與健康者的血清PG含量水平進行比較，基于PG含量來判斷胃癌。
[0019]所述試劑R2或R3中包括有能夠與樣本中的PG抗原結合的PG抗體，其中所述PG抗體包括PG I抗體和PG II抗體。進一步地，所述試劑R2或R3的成分包括膠乳顆粒，其中所述乳膠顆粒包被有所述PG抗體，當所述PG抗原與所述PG抗體結合形成PG抗原一PG抗體不溶性復合體后，根據膠乳增強免疫比濁法原理進行檢測。
[0020]一種檢測胃癌的試劑盒，包括:一試劑Rl和一試劑R2或R3，所述試劑Rl和所述試劑R2均為稀釋劑，并為PG抗原和PG抗體提供適當的反應環(huán)境，以促進反應，其中所述試劑Rl包括:(I)質量百分比為0.01% -1.00%的防腐劑:疊氮鈉、疊氮鋰、對羥基苯甲酸酯類(也稱尼泊金酯類，例如，尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯等)、苯甲酸及其鹽類(例如苯甲酸鈉、苯甲酸鉀等)、山梨酸鹽類(例如山梨酸鉀、山梨酸鈣等)、亞硝酸鈉、PC300中的一種或幾種；(2)質量百分比為0.01-4.00%的穩(wěn)定劑:蛋白質(牛血清蛋白或明膠)、無機鹽(氯化鈉、氯化鉀或氯化鎂中的一種或幾種)、金屬絡合劑(HEDTA、CM0M、CM0S、DHEG，含有氨基二乙酸基團的絡合劑，選自EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一種或幾種)、助懸劑(乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘油、糖漿劑、纖維素類的甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、阿拉伯膠、西黃蓍膠、桃膠中的一種或幾種)中的一種或幾種；
(3)質量百分比為0.01%-2.00%的表面活性劑:非離子型表面活性劑和/或陰離子型表面活性劑，優(yōu)選地，所述表面活性劑為所述非離子型表面活性劑和所述陰離子型表面活性齊Li，其中所述非離子型表面活性劑選自Tween20、Tween80、Emulgen B-66>Triton X-100中的一種或幾種，所述陰離子型表面活性劑選自SDS、脫氧膽酸鈉、聚茴腦磺酸鈉、烷基苯磺酸鈉、脂肪酸鹽、硫酸酯鹽、磷酸酯鹽中的一種或幾種；(4)質量百分比為0.01-5.00%的反應促進劑:聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚