本發(fā)明屬于生物試劑盒材料領(lǐng)域，具體涉及一種用于糖類抗原242的定量檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，可快速、簡(jiǎn)便、高效、靈敏地對(duì)人血清樣本中糖類抗原242的定性定量檢測(cè)。
背景技術(shù)：
：糖類抗原242（carbohydrateantigen242,ca242）是一種唾液酸化的粘蛋白型糖類抗原，在健康人群和良性疾病患者的血清中含量很低，消化道等發(fā)生惡性腫瘤（如胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、卵巢癌、子宮癌、肺癌等）時(shí)其含量明顯上升，胰腺癌和結(jié)直腸癌時(shí)尤為明顯。作為一種腫瘤標(biāo)志物，糖類抗原242的優(yōu)點(diǎn)主要在于惡性腫瘤時(shí)升高明顯，而良性疾病時(shí)一般不升高。糖類抗原242與癌胚抗原（cea）聯(lián)合檢測(cè)，可增加對(duì)結(jié)、直腸癌的早期診斷敏感性，對(duì)監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)亦是一個(gè)很好的診斷指標(biāo)。糖類抗原242是胰腺癌病人中首先出現(xiàn)的一種與腫瘤相關(guān)的抗原。在診斷胰腺癌時(shí)，比糖類抗原19-9、糖類抗原50更為特異。ca242是一種唾液酸化的糖類抗原，能被結(jié)腸癌細(xì)胞株經(jīng)雜交瘤技術(shù)得到的一系列單克隆抗體之一ca242所識(shí)別，它是一種存在于多器官惡性腫瘤中呈粘蛋白類型的糖蛋白叫canag，即不能與lewisa型抗原反應(yīng)，也不能與唾液酸化的半乳糖苷反應(yīng)。免疫化學(xué)研究已表明它不同于其他已知的腫瘤相關(guān)粘蛋白如：ca199、ca50、ca125、ca153等，健康人和良性疾病血清中含量較低。ca242是近年來(lái)應(yīng)用于臨床較新的一種腫瘤標(biāo)志物，胰腺癌和結(jié)腸癌較好的腫瘤標(biāo)志物。ca242是一種唾液酸化的鞘糖脂類抗原，幾乎總是和ca50一起表達(dá)，但兩者受不同的單克隆抗體識(shí)別。在臨床上均被用于消化道惡性腫瘤尤其是胰腺癌、結(jié)直腸癌的診斷，與ca19-9、ca50相比，新一代的ca242在胰腺癌、膽囊癌和消化道癌中的靈敏度、特異性更高(ca50、ca19-9易受肝功能以及膽汁郁積的影響，在良性阻塞性黃疸以及肝實(shí)質(zhì)性損害記疾病時(shí)常出現(xiàn)假陽(yáng)性)。為了提高腫瘤診斷水平和改善治療效果，從檢測(cè)角度上來(lái)說(shuō)，目前臨床上用于測(cè)定ca242抗原的方法主要有放射性免疫技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)、時(shí)間分辨熒光免疫分析方法和化學(xué)發(fā)光技術(shù)等。過(guò)去以放射性免疫技術(shù)為代表的人ca242抗原測(cè)定試劑盒由于方法學(xué)的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴(yán)重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場(chǎng)；目前應(yīng)用較多的為酶聯(lián)免疫技術(shù)、時(shí)間分辨熒光免疫分析和化學(xué)發(fā)光技術(shù)，其中化學(xué)發(fā)光技術(shù)興起于上個(gè)世紀(jì)80年代，是繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放射性免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的新興技術(shù)，由于其高靈敏度、高特異性，同時(shí)方法簡(jiǎn)便、快速，標(biāo)記結(jié)合物穩(wěn)定，相對(duì)時(shí)間分辨熒光免疫法分析成本低廉、操作簡(jiǎn)便，無(wú)放射性同位素?fù)p傷和污染等特點(diǎn)，得到了飛速發(fā)展。本試劑盒主要用于對(duì)相關(guān)惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果，不能作為相關(guān)惡性腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，不宜用于普通人群的腫瘤篩查。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)提供一種板式化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)人血清ca242抗原的試劑盒及其制備方法，研發(fā)和優(yōu)化了與血清學(xué)免疫反應(yīng)原理相關(guān)的各種關(guān)鍵技術(shù)，從而提高了針對(duì)臨床患者體內(nèi)的ca242抗原檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性，開(kāi)發(fā)出靈敏度高、穩(wěn)定性好、生產(chǎn)便捷、操作方便的板式化學(xué)發(fā)光診斷試劑。本發(fā)明的主要設(shè)計(jì)思路是在化學(xué)發(fā)光免疫分析基礎(chǔ)上，通過(guò)引入具有抗生物素抗體-生物素體系，從而，穩(wěn)定性試劑盒檢測(cè)特異性的同時(shí)，大幅增加了檢測(cè)靈敏度。本發(fā)明解決上述問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：一種糖類抗原242的板式化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括的試劑有生物素標(biāo)記的ca242抗體溶液、抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ca242抗體溶液、ca242校準(zhǔn)品a-f、濃縮洗液、底物液a、底物液b。上述生物素標(biāo)記的ca242抗體溶液的濃度為0.02～8.0μg/ml，所述抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板的抗生物素抗體的包被濃度為0.2～8.0μg/ml，所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ca242抗體溶液的濃度為0.03～5.0μg/ml，陽(yáng)性對(duì)照稀釋比為1：500～1：10000。上述ca242校準(zhǔn)品a-f點(diǎn)是ca242抗原（北京玖峰潤(rùn)達(dá)）以ph值為7.4的tris-hcl緩沖液配制得到的，濃度分別為0,4,16,48,144,288u/ml。上述生物素標(biāo)記的ca242抗體溶液的制備過(guò)程：生物素標(biāo)記的ca242抗體加入到ph值為7.4的緩沖液中，調(diào)節(jié)到適宜倍數(shù)，混勻得到。上述述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ca242抗體溶液的制備過(guò)程：辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ca242抗體溶液加入到ph值為7.4的緩沖液中，調(diào)節(jié)到適宜倍數(shù)，混勻得到。上述抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板所用包被液為0.01m的碳酸緩沖液，ph9.6±0.1，所用封閉液的含0.3wt%bsa、0.1%proclin300(v/v)、1wt%羊血清、1wt%魚皮明膠、2wt%海藻糖和10wt%蔗糖的0.1mph7.4tbs緩沖液。針對(duì)本發(fā)明的抗生物素抗體包被體系，采用0.01m的碳酸緩沖液，并在封閉液中以少量bsa屏蔽了酶標(biāo)板大部分未結(jié)合位點(diǎn)，在緩沖體系的協(xié)同作用下，以動(dòng)物血清消除非特異性結(jié)合位點(diǎn)，保證了包被板的精密度和低本底，以蔗糖、海藻糖和魚皮明膠作為穩(wěn)定體系，強(qiáng)化了包被板對(duì)高溫、干燥的抗性，保證了抗生物素抗體包被板的性能。抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板的制備過(guò)程為：酶標(biāo)板采用高溫振蕩式包被，包被溫度為37±1℃，包被時(shí)間為1～3小時(shí)，采用低速振蕩包被形式，選用的振蕩儀為艾本森科學(xué)儀器有限公司微孔板振蕩器，振蕩幅度：3mm，采用水平回轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為200~500rpm，封閉和干燥溫度為37±1℃，封閉時(shí)間為1.5～3小時(shí)，干燥時(shí)間為2～4小時(shí)；采用高溫振蕩式包被工藝，包被板制備時(shí)間可控制在5～7小時(shí)，跟室溫包被普遍的3～4天制備時(shí)間相比，具備明顯的效率優(yōu)勢(shì)，同時(shí)提高了反應(yīng)的靈敏度，降低抗體/抗原使用量的同時(shí)，簡(jiǎn)化了試劑生產(chǎn)流程，縮短了生產(chǎn)時(shí)間。國(guó)內(nèi)包被板技術(shù)采用鏈霉親和素包被較多，采用抗生物素抗體尚未見(jiàn)專利文獻(xiàn)報(bào)告。另外，低速振蕩包被法相比常規(guī)的室溫包被法明顯縮短了包被板的生產(chǎn)時(shí)間，提高了試劑生產(chǎn)效率。本發(fā)明糖類抗原242的板式化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括如下步驟一、濃縮洗液的配制，步驟如下：1、稱取kcl60g、nacl300g于1l容器中；2、稱取20.0gtween-20于100ml容器中加50ml水使其完全溶解后，倒入上述1l容器中；3、用移液器將proclin-300量取2ml，倒入上述1l容器中；4、用量筒量取適量純化水于上述1l容器中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙猓?、調(diào)ph，控制其范圍在7.35～7.45之間；6、最后定容至1000ml，完全溶解后用0.2μm濾器過(guò)濾即得；二、底物液的配制（一）底物液a的配制1、稱取硼砂11.44g、硼酸4.948g、魯米諾2.0g和對(duì)碘苯酚0.2mg于1l燒杯中；2、用量筒量取純化水于1l燒杯中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙?，調(diào)ph，控制其范圍在7.95-8.05之間；3、用0.2μm濾器過(guò)濾收集濾液，用純化水定容至1000ml，混勻后即得；（二）底物溶液b的配制1、稱取硼砂11.44g、硼酸4.948g、過(guò)氧化脲0.2g和pc300500μl于1l燒杯中；2、用量筒量取純化水于1l燒杯中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙?，調(diào)ph控制其范圍在7.95-8.05之間；3、用0.2μm濾器過(guò)濾收集濾液，用純化水定容至1000ml，混勻后即得；三、校準(zhǔn)品稀釋液的配制方法，步驟如下：1、稱取tris12.11g和hcl7ml于1l的容器中，調(diào)節(jié)溶液ph,控制其范圍在7.35-7.45之間,定容至1000ml；2、用量筒量取小牛血清300ml，加入上述溶液中，作為校準(zhǔn)品稀釋液備用；四、校準(zhǔn)品的配制方法，步驟如下：1、校準(zhǔn)品a點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，分裝到適宜規(guī)格；2、校準(zhǔn)品b點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為4u/ml，分裝到適宜規(guī)格；3、校準(zhǔn)品c點(diǎn)的配制：??；校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為16u/ml，分裝到適宜規(guī)格；4、校準(zhǔn)品d點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為48u/ml，分裝到適宜規(guī)格；5、校準(zhǔn)品e點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為144u/ml，分裝到適宜規(guī)格；6、校準(zhǔn)品f點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為288u/ml，分裝到適宜規(guī)格；五、抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板1、配制0.01m的碳酸緩沖液，調(diào)節(jié)ph至ph9.6±0.1，備用；2、在上述0.01m的碳酸緩沖液中加入抗生物素抗體溶液至終濃度為0.1～5μg/ml攪拌30分鐘至混合均勻；3、將上述混勻后的溶液按包被量為100μl每孔加入酶標(biāo)板中，采用高溫振蕩式包被，包被溫度為37±1℃，包被時(shí)間為1～3小時(shí)，采用低速振蕩包被方式，選用的振蕩儀為艾本森科學(xué)儀器有限公司微孔板振蕩器，振蕩幅度：3mm，采用水平回轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為200~500rpm；4、配制0.1mph7.4tbs緩沖液，含0.3%bsa，1%羊血清，0.1%proclin300(v/v)，1%魚皮明膠，2%海藻糖和10%蔗糖，作為封閉液加入到清洗后的包被板中，封閉量為150μl每孔，封閉為37±1℃，封閉時(shí)間為2～5小時(shí)；5、吸掉封閉液，放置在干燥箱中，干燥溫度控制在37±1℃，干燥時(shí)間為2～4小時(shí)，再以鋁箔袋真空包裝，貼簽備用；六、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記ca242抗體溶液的制備（一）酶反應(yīng)物稀釋液的配制1、取tris4.846g、hcl2900μl于燒杯中，然后在燒瓶中加入純化水，充分?jǐn)嚢枋乖噭┩耆芙猓?、調(diào)ph，控制ph在7.35-7.45；3、稱取bsa4g倒入上述燒杯中；4、最后燒杯定容至400ml，用0.2um濾器過(guò)濾即得；（二）辣根過(guò)氧化物酶（hrp）與ca242抗體的偶聯(lián)1、取抗ca242抗體1mg放置于1ml玻璃管中；2、取200μldmso溶解抗體使抗體的終濃度到達(dá)5mg/ml，然后充分混勻；3、按照1mol抗體加入10mol的辛二酸二琥珀酰亞胺酯的摩爾比例加辛二酸二琥珀酰亞胺酯到上述2溶液中，37℃恒溫箱中反應(yīng)1.5小時(shí)；4、按照3mol抗體加入1molhrp的摩爾比往上述3的溶液中添加hrp，然后加入1ml的ph為7.4濃度為0.1m的pb緩沖液，置于37℃恒溫箱中反應(yīng)3小時(shí)；5、將上述4配制的溶液用pd-10柱純化，收集純化液，按照1:3000的體積添加自制的酶反應(yīng)物稀釋液，控制最終使用濃度在0.03-5.0μg/ml，混合均勻即得酶反應(yīng)物；七：生物素標(biāo)記的ca242抗體溶液的制備（一）生物素反應(yīng)物稀釋液的配制1、取tris4.846g、hcl2847μl于燒瓶中，然后在燒瓶中加入純化水，充分?jǐn)嚢枋乖噭┩耆芙猓?、調(diào)ph，控制ph在7.35-7.45；3、稱取bsa4g倒入上述燒杯中；4、最后燒杯定容至400ml，用0.2μm濾器過(guò)濾即得；（二）取生物素化抗體，以生物素反應(yīng)物稀釋液稀釋，控制最終使用濃度在0.5μg/ml左右（0.01～5.0μg/ml），混勻，即可得到生物素結(jié)合物。本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)方法是，將樣品和生物素標(biāo)記的ca242抗體加入到抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板中，樣品中的ca242抗原和該抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，同時(shí)，該免疫復(fù)合物通過(guò)抗生物素抗體和生物素之間的結(jié)合作用被固定到酶標(biāo)板上。使用洗液清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的游離成分。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ca242抗體溶液，該酶標(biāo)抗體通過(guò)免疫反應(yīng)與被固定的免疫復(fù)合物結(jié)合。再次清洗酶標(biāo)板后，加入底物液激發(fā)化學(xué)發(fā)光，測(cè)定相對(duì)光強(qiáng)度rlu，在一定濃度范圍內(nèi)，rlu值與樣品中ca242抗原含量呈線性正比關(guān)系。通過(guò)校準(zhǔn)品測(cè)值，擬合校準(zhǔn)曲線，根據(jù)曲線計(jì)算樣品中ca242抗原濃度，從而評(píng)估人血清中是否含有ca242抗原以及ca242抗原的含量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的板式化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清ca242抗原的試劑盒及其制備方法，在化學(xué)發(fā)光免疫分析基礎(chǔ)上，通過(guò)引入具有抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板，并改進(jìn)了高溫振蕩式抗生物素抗體包被工藝，通過(guò)抗生物素抗體-生物素方法體系，提高反應(yīng)的靈敏度，節(jié)省生產(chǎn)成本，從而降低抗體/抗原使用量的同時(shí)，簡(jiǎn)化了試劑生產(chǎn)流程，縮短了生產(chǎn)時(shí)間，簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟，可為市場(chǎng)提供質(zhì)優(yōu)價(jià)廉、穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好、批間差小、準(zhǔn)確度高的新一代檢測(cè)試劑盒。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，所舉的實(shí)施例僅是對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品或方法作概括性例示，有助于更好地理解本發(fā)明，但并不會(huì)限制本發(fā)明范圍。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。本實(shí)施例的糖類抗原242的板式化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒主要試劑包括：包括的試劑有生物素標(biāo)記的ca242抗體溶液、抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的ca242抗體溶液、ca242校準(zhǔn)品a-f、濃縮洗液、底物液a、底物液b。試劑盒的制備方法一、濃縮洗液的配制，步驟如下：1、稱取kcl60g、nacl300g于1l容器中；2、稱取20.0gtween-20于100ml容器中加50ml水使其完全溶解后，倒入上述1l容器中；3、用移液器將proclin-300量取2ml，倒入上述1l容器中；4、用量筒量取適量純化水于上述1l容器中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙猓?、調(diào)ph，控制其范圍在7.35～7.45之間；6、最后定容至1000ml，完全溶解后用0.2μm濾器過(guò)濾即得。二、底物液的配制（一）底物液a的配制步驟1、稱取硼砂11.44g、硼酸4.948g、魯米諾2.0g和對(duì)碘苯酚0.2mg于1l燒杯中；2、用量筒量取純化水于1l燒杯中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙猓{(diào)ph，控制其范圍在8±0.05之間；3、用0.2μm濾器過(guò)濾收集濾液，用純化水定容至1000ml，混勻后即得。（二）底物溶液b的配制1、稱取硼砂11.44g、硼酸4.948g、過(guò)氧化脲0.2g和pc300500μl于1l燒杯中；2、用量筒量取純化水于1l燒杯中，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙?，調(diào)ph控制其范圍在8±0.05之間；3、用0.2μm濾器過(guò)濾收集濾液，用純化水定容至1000ml，混勻后即得。三、校準(zhǔn)品稀釋液的配制方法，步驟如下：1、稱取tris12.11g和hcl7ml于1l的容器中，調(diào)節(jié)溶液ph,控制其范圍在7.35-7.45之間,定容至1000ml；2、用量筒量取小牛血清300ml，加入上述溶液中，作為校準(zhǔn)品稀釋液備用；四、校準(zhǔn)品的配制方法，步驟如下：1、校準(zhǔn)品a點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，分裝到適宜規(guī)格；2、校準(zhǔn)品b點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原（北京玖峰潤(rùn)達(dá)）溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為4u/ml，分裝到適宜規(guī)格；3、校準(zhǔn)品c點(diǎn)的配制：取；校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為16u/ml，分裝到適宜規(guī)格；4、校準(zhǔn)品d點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為48u/ml，分裝到適宜規(guī)格；5、校準(zhǔn)品e點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為144u/ml，分裝到適宜規(guī)格；6、校準(zhǔn)品f點(diǎn)的配制：取校準(zhǔn)品稀釋液，將ca242抗原溶液稀釋適宜倍數(shù)，控制濃度為288u/ml，分裝到適宜規(guī)格。五、抗生物素抗體包被的酶標(biāo)板6、配制0.01m的碳酸緩沖液，調(diào)節(jié)ph至ph9.6±0.1，備用；7、在上述0.01m的碳酸緩沖液中加入抗生物素抗體溶液至終濃度為0.3μg/ml攪拌30分鐘至混合均勻；8、將上述混勻后的溶液按包被量為100μl每孔加入酶標(biāo)板中，采用高溫振蕩式包被，包被溫度為37±1℃，包被時(shí)間為1～3小時(shí)；9、配制0.1mph7.4tbs緩沖液，含0.3%bsa，1%羊血清，0.1%proclin300(v/v)，1%魚皮明膠，2%海藻糖和10%蔗糖，作為封閉液加入到清洗后的包被板中，封閉量為150μl每孔，封閉溫度為37±1℃，封閉時(shí)間為2～5小時(shí)；10、吸掉封閉液，放置在干燥箱中，干燥溫度控制在37±1℃，干燥時(shí)間為2～4小時(shí)，再以鋁箔袋真空包裝，貼簽備用；六、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記ca242抗體溶液的制備（一）酶反應(yīng)物稀釋液的配制1、取tris4.846g、hcl2900μl于燒杯中，然后在燒瓶中加入純化水，充分?jǐn)嚢枋乖噭┩耆芙猓?、調(diào)ph，控制ph在7.4±0.05；3、稱取bsa4g倒入上述燒杯中；4、最后燒杯定容至400ml，用0.2um濾器過(guò)濾即得；（二）辣根過(guò)氧化物酶（hrp）與ca242抗體的偶聯(lián)1、取抗ca242抗體1mg放置于1ml玻璃管中；2、取200μldmso溶解抗體使抗體的終濃度到達(dá)5mg/ml，然后充分混勻；3、按照1mol抗體加入10mol的辛二酸二琥珀酰亞胺酯的摩爾比例加辛二酸二琥珀酰亞胺酯到上述2溶液中，37℃恒溫箱中反應(yīng)1.5小時(shí)；4、按照3mol抗體加入1molhrp的摩爾比往上述3的溶液中添加hrp，然后加入1ml的ph為7.4濃度為0.1m的pb緩沖液，置于37℃恒溫箱中反應(yīng)3小時(shí)；5、將上述4配制的溶液用pd-10柱純化，收集純化液，按照1:3000的體積添加自制的酶反應(yīng)物稀釋液，控制最終使用濃度在0.5μg/ml，混合均勻即得酶反應(yīng)物；七：生物素標(biāo)記的ca242抗體溶液的制備（一）生物素反應(yīng)物稀釋液的配制1、取tris4.846g、hcl2847μl于燒瓶中，然后在燒瓶中加入純化水，充分?jǐn)嚢枋乖噭┩耆芙猓?、調(diào)ph，控制ph在7.35-7.45；3、稱取bsa4g倒入上述燒杯中；4、最后燒杯定容至400ml，用0.2μm濾器過(guò)濾即得。（二）取生物素化抗體，以生物素反應(yīng)物稀釋液稀釋，控制最終使用濃度在0.5μg/ml，混勻，即可得到生物素結(jié)合物。八、優(yōu)化與驗(yàn)證主要性能指標(biāo)均符合發(fā)光檢測(cè)試劑技術(shù)評(píng)審規(guī)范。1、陰性符合率檢測(cè)130例貝克曼化學(xué)發(fā)光試劑檢測(cè)的臨床血樣，陰性符合率（-/-）為130/130，符合率100%。2、陽(yáng)性符合率檢測(cè)204份貝克曼化學(xué)發(fā)光試劑檢測(cè)的臨床血樣，陽(yáng)性符合率（+/+）為201/204，符合率為98.53%,見(jiàn)下表。3、重復(fù)性用經(jīng)國(guó)家參考品標(biāo)化的企業(yè)精密度參考品重復(fù)檢測(cè)10次，其變異系數(shù)cv在3.23-3.66%之間，符合不大于10.0%的行業(yè)規(guī)范（全自動(dòng)儀器操作）。精密性質(zhì)控品平均值標(biāo)準(zhǔn)差cv%l4.850.23.58%m68.952.53.66%h226.887.33.23%4、批間差用經(jīng)國(guó)家參考品標(biāo)化的企業(yè)精密度質(zhì)控品檢測(cè)三個(gè)批號(hào)試劑盒，其批間變異系數(shù)（cv）在2.50～4.24%之間，符合行標(biāo)小于15%的要求（全自動(dòng)儀器操作）。分析結(jié)果如下：精密性質(zhì)控品平均值標(biāo)準(zhǔn)差cv%l4.790.12.39%m68.612.94.17%h220.9610.14.59%5、穩(wěn)定性熱穩(wěn)定性：試劑盒在37℃放置7天后進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)信號(hào)與對(duì)照相比，變化幅度不超過(guò)15%。實(shí)施例中試劑盒的一種半自動(dòng)儀器檢測(cè)方法，采用北京濱松光子技術(shù)股份有限公司微孔板發(fā)光分析儀bhp9504進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)步驟包括（1）取出試劑盒置于室溫，使試劑盒的溫度平衡至室溫（18～25℃）。（2）樣本應(yīng)混合均勻，若樣本為凍融樣本，平衡至室溫（18～25℃）后再進(jìn)行檢測(cè)。（3）按照濃縮洗液:蒸餾水=1:39的比例配制洗液，混合均勻后，轉(zhuǎn)入洗液瓶中。（4）取出檢測(cè)酶標(biāo)板板條，設(shè)好校準(zhǔn)品孔、待檢樣品孔。將其余板條放回鋁箔袋中，封存。（5）按表1順序，進(jìn)行半自動(dòng)加樣與反應(yīng)操作。表1加樣和操作對(duì)照表底物液a和b也可在用前等體積混勻后每孔加100μl，如果底物液a和b混勻使用，則混合液應(yīng)在30分鐘內(nèi)被使用。實(shí)施例中試劑盒的一種半全自動(dòng)儀器檢測(cè)方法，采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀adcclia200/300/400/500/600以及smart3000/smart300/smart3000s進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)步驟包括（1）在使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（以下簡(jiǎn)稱“儀器”）時(shí)，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀儀器的操作手冊(cè)，務(wù)必按照相應(yīng)的操作說(shuō)明對(duì)儀器進(jìn)行設(shè)置、檢查和維護(hù)，以實(shí)現(xiàn)最佳檢測(cè)性能。（2）按照儀器的操作手冊(cè)說(shuō)明配置試劑信息，并在“微板布局設(shè)置”中設(shè)置對(duì)照品孔和樣本孔的位置。特別地，請(qǐng)?jiān)趦x器的“方法編輯”界面按照表2所示參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)方法配置。（3）按照表2全自動(dòng)儀器參數(shù)設(shè)置表，進(jìn)行參數(shù)設(shè)置與數(shù)據(jù)表2全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀參數(shù)表除上述實(shí)施例外，本發(fā)明還包括有其他實(shí)施方式，凡采用等同變換或者等效替換方式形成的技術(shù)方案，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12