專利名稱：一種菲牛蛭藥材指紋圖譜的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種菲牛蛭藥材指紋圖譜的測定方法，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
菲牛蛭(Poecilobdella manillensis),俗稱金邊螞幢,隸屬于無吻蛭目、醫(yī)蛭科、牛蛭屬，主要分布于廣西、廣東、海南和福建等省區(qū)，并且可以進(jìn)行人工養(yǎng)殖，其具有顯著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集活性，主要化學(xué)成分為脂肪酸、氨基酸和蛋白質(zhì)，其中以報道的活性成分為水蛭素P6、水蛭素P18、菲牛蛭素A和菲牛蛭素B，急性毒性試驗(yàn)表明菲牛蛭沒有明顯的毒副作用，因此其具有顯著的藥用價值，迄今為止藥典和地方標(biāo)準(zhǔn)均無收載，也無任何關(guān)于指紋圖譜的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種菲牛蛭指紋圖譜的測定方法。本發(fā)明所述指紋圖譜的測定方法是采用高效液相色譜法測定菲牛蛭的指紋圖譜。本發(fā)明所述指紋圖譜的測定方法供試液配制方法及色譜條件優(yōu)選為
供試液配制方法菲牛蛭藥材干品粉碎，過40目篩，取O. 40g,加5ml去離子水超聲15min, 4500r*min^離心15min，用O. 45 μ m濾膜濾過，濾液作為高效液相色譜供試品溶液備用；
色譜條件色譜柱為C18柱，規(guī)格為250mmX4. 6mm, 5 μ m ;流動相A相為乙腈，B相為水，梯度洗脫；洗脫程序?yàn)镺 — 5min, A為0%，5 — 23min, A為0% — 4%，23 — 24min, A為4% — 5%，24-66min，A 為 5% — 21. 4% ;流速 dml.rnirT1 ;柱溫20°C ;檢測波長為 254nm。為證實(shí)該方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，能夠用于控制菲牛蛭藥材的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行如下方法學(xué)驗(yàn)證
I儀器與試藥
Waters高效液相色譜儀(2695-2996，美國Waters公司)；電子天平(AG135，MettlerToledo) ;KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀有限公司)；高速萬能粉碎機(jī)(天津市太斯特儀器有限公司)；相似度計算軟件中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版。乙腈為色譜純(Fisherscientific);實(shí)驗(yàn)用水為超純水。菲牛蛭由廣西科康生物科技有限公司提供，批號為200901、200902、200903、201001、201002、201003、201104、201101、201102，201103。2方法與結(jié)果
2. I供試品溶液制備
供試液配制方法菲牛蛭藥材干品粉碎，過40目篩，取O. 40g,加5ml去離子水超聲15min, 4500r*min^離心15min，用O. 45 μ m濾膜濾過，濾液作為高效液相色譜供試品溶液備用；
2.2液相色譜條件色譜柱為C18柱，規(guī)格為250·ιΧ4·6πιπι，5μπι;流動相A相為乙腈，B相為水，梯度洗脫；洗脫程序?yàn)?O — 5min, A 為 0%，5 — 23min, A 為 0% — 4%, 23 — 24min, A 為 4% — 5%,24-66min，A 為 5% — 21. 4% ;流速:1ml .mirT1 ;柱溫20°C ;檢測波長為 254nm。2. 3方法學(xué)考察
2.3. I精密度試驗(yàn)
取同一批號供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得各共有峰相對保留時間和峰面積RSD均小于3%，表明進(jìn)樣的精密度良好。2. 3. 2穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一批號供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，測得各共有峰相對保留時間和峰面積RSD均小于3%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2. 3. 3重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號供試品，按2. 2項(xiàng)方法，分別制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣，測得各共有峰相對保留時間和峰面積RSD均小于3%，表明方法重復(fù)性較好。2. 3. 4菲牛蛭藥材特征指紋圖譜及溶劑的測定圖譜，見圖I和圖2，由圖可見，溶劑對樣品測定無干擾。按上述方法檢測10批樣品指紋圖譜，同時生成對照分峰，標(biāo)示了指紋圖譜中23個共有峰，其中6、7、8、13、14、16，17和21號的峰為強(qiáng)吸收峰。指紋圖譜的建立及相似度分析
2.4. I指紋圖譜的建立
取10批菲牛蛭藥材樣品，菲牛蛭藥材指紋圖譜共有模式確立利用中國藥典“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版”，將1-10批次菲牛蛭藥材圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入，經(jīng)數(shù)據(jù)自動匹配，以中位數(shù)法生成對照指紋圖譜，指紋圖譜見圖3。指紋圖譜相似度分析
按照建立起來的指紋圖譜對不同批次的菲牛蛭藥材進(jìn)行相似度分析，相似度數(shù)據(jù)見表1，結(jié)果表明其共有峰RSD > O. 9，具有很好的相似度。表I十批菲牛蛭藥材指紋圖譜與對照指紋圖譜相似度
權(quán)利要求
1.一種菲牛蛭藥材的指紋圖譜測定方法，該方法采用高效液相色譜法測定其指紋圖-i'TfeP曰。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述測定方法，其特征在于所述高效液相色譜法的供試液配制方法及色譜條件為 供試液配制方法菲牛蛭藥材干品粉碎，過40目篩，取0.40g，加5ml去離子水超聲15min，4500r · mirT1離心15min，用O. 45 μ m濾膜濾過，濾液作為高效液相色譜供試品溶液備用; 色譜條件色譜柱為C18柱，規(guī)格為250mmX4. 6mm, 5 μ m ;流動相A相為乙腈，B相為水，梯度洗脫；洗脫程序?yàn)镺 — 5min, A為0%，5 — 23min, A為0% — 4%，23 — 24min, A為4% — 5%, 24-66min, A 為 5% — 21. 4% ;流速:1ml · mirT1 ;柱溫20°C ;檢測波長為 254nm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種菲牛蛭藥材指紋圖譜的測定方法。菲牛蛭(Poecilobdellamanillensis)，俗稱金邊螞蝗，隸屬于無吻蛭目、醫(yī)蛭科、牛蛭屬，具有顯著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集活性，具有顯著的藥用價值，迄今為止藥典和地方標(biāo)準(zhǔn)均無收載，也無任何關(guān)于指紋圖譜的報道，本發(fā)明采用高效液相色譜法對菲牛蛭藥材進(jìn)行測定，建立了菲牛蛭藥材的指紋圖譜，為該藥材的整體質(zhì)量評價提供了方法，用于菲牛蛭藥材原料質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/88GK102914612SQ20111022410
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月6日
發(fā)明者孟作環(huán), 馬振嗣, 喬莉, 李文烈, 賈繼明, 宋劍 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司