專利名稱：：一種快速檢測蔬菜綜合毒性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，屬于食品安全檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
："民以食為天，食以安為先"。當(dāng)前，蔬菜時常受農(nóng)藥、重金屬和未知毒物的污染，因此，蔬菜食用安全性問題尤為引人關(guān)注。通過互聯(lián)網(wǎng)搜索，與"食用蔬菜農(nóng)藥中毒"有關(guān)的信息有近97萬多項。由于中國農(nóng)業(yè)的特殊性，蔬菜生產(chǎn)與流通的安全性控制問題呈現(xiàn)基礎(chǔ)薄弱，面大點多的特點。目前，安全控制監(jiān)測方法的關(guān)鍵技術(shù)，以氣相、液相色譜以及分光光度計儀器分析為主，可檢出樣品中的痕量污染物，但是存在著操作復(fù)雜、時間長、成本較高等問題，不適于蔬菜生產(chǎn)和流通過程中的現(xiàn)場監(jiān)測，也無法對污染物質(zhì)進行生物危害性評估。一些具有遺傳毒性的污染物質(zhì)逐漸被人們認識；同時，對由多個污染因子引起的食物綜合生物毒性也引起了人們的關(guān)注。還有類似"蘇丹紅一號"食品安全危機的出現(xiàn)，對現(xiàn)有蔬菜食用安全監(jiān)測手段提出挑戰(zhàn)，當(dāng)前只檢測蔬菜中已知有毒有害物質(zhì)，而對未知有毒有害物質(zhì)就無能為力，尤其對于由多種有毒有害物質(zhì)共存時產(chǎn)生的綜合生物毒性缺乏有效的快速檢測方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測蔬菜綜合毒性的發(fā)光細菌檢測法，本方法用于蔬菜生產(chǎn)和流通過程中進行安全性快速檢測，從樣品取樣處理直到檢測結(jié)果出來，不超過1小時。為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用發(fā)光細菌檢測法，來判定所測樣品是否含有毒性物質(zhì)及其綜合毒性的程度，給出可否安全食用的結(jié)論。所述的發(fā)光細菌檢測法，包括如下步驟l)發(fā)光細菌的準(zhǔn)備，2制備測試用菌液，3)選取蔬菜樣品，4)進行發(fā)光檢測，5)發(fā)光強度的計算，6)蔬菜食用安全性結(jié)果評價。經(jīng)過發(fā)光細菌的準(zhǔn)備和樣品的預(yù)處理，隨后進行發(fā)光檢測，由此判斷樣品是否存在生物毒性。采用發(fā)光細菌檢測法，適用于蔬菜上市之前的安全性檢測，對所檢樣品做出生物毒性的綜合判斷(有毒、無毒或者可疑等)。以下對如下歩驟進行說明1)發(fā)光細菌的準(zhǔn)備，發(fā)光細菌菌種采用青?；【鶴67菌株(W^r"^'/^si'e7^^sQ67)，其培養(yǎng)基成分，包括MgS042.47g，MgC030.79g，MgBr20.09g,MgCl20.109g，CaC030.103g，KC10.122g，NaCl8.29g，Mg(HC03)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，瓊脂20g，溶于1000mL蒸餾水中，于121"滅菌20min，制成斜面，貯于4"C冰箱備用。2)用上述青海弧菌Q67菌株的斜面菌種，移接到新鮮斜面上，20-22。C培養(yǎng)12-14h，此時細菌發(fā)光明亮，用10ml生理鹽水(0.85%Nacl溶液)將菌苔從斜面上輕柔沖刷下來，搖勻，用少量生理鹽水調(diào)整菌液濃度，使菌液濃度0D660"0.3左右，取O.lml菌液，加入置有2ml生理鹽水的樣品測試管中，用測光儀檢測發(fā)光。3)蔬菜樣品的準(zhǔn)備取有代表性蔬菜樣品50g，葉菜類蔬菜取葉片部位，瓜果類蔬菜用削皮刀取表皮部位，操作者需戴無菌手套，用50ml無菌生理鹽水浸泡15min，用旋渦震蕩器震蕩lmin，，取上清液備用，對照選用同類無污染蔬菜50g，用上述樣品處理方法同樣處理備用。4)發(fā)光檢測。準(zhǔn)備好三個測試杯，每個小杯各平行樣，對照也取三個測量杯，各加入2ml上清夜同樣設(shè)置三個平行樣。依次加入0.2ml測試用菌液每個測量杯加菌液的時間間隔為15s，放置30min后，發(fā)光檢測儀依次相隔15s測定各測量杯的發(fā)光強度，計算相對發(fā)光強度。5)發(fā)光強度的計算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>6)蔬菜食用安全性結(jié)果評價<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本發(fā)明的有益效果本方法的優(yōu)點1)運用發(fā)光細菌法檢測技術(shù)，對蔬菜食用安全性進行快速檢測與評價，與現(xiàn)有方法比較，極大地縮短了檢測時間，并降低了成本；2)可以應(yīng)用于蔬菜食用安全性評價的現(xiàn)場實時檢測，進行污染蔬菜的初篩，填補當(dāng)前在農(nóng)產(chǎn)品安全綜合生物毒性快速評價方法的空白；3)可對因多種污染物(多種農(nóng)藥和重金屬殘留)引起的蔬菜進行食用安全性綜合評估；4)可對農(nóng)產(chǎn)品中潛在的危險因素進行生物毒性的分析(可以防止類似"蘇丹紅一號"食品安全危機)。圖1為本發(fā)明快速檢測蔬菜綜合毒性方法的步驟流程圖。以下結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明快速檢測方法作比較詳細說明。具體實施例方式參照圖1，這是本發(fā)明快速檢測蔬菜綜合毒性方法的步驟流程圖。所述的發(fā)光細菌檢測法，包括如下步驟發(fā)光細菌的準(zhǔn)備，測試用菌液的制備，蔬菜樣品的準(zhǔn)備，發(fā)光檢測，相對發(fā)光強度的計算，蔬菜食用安全性結(jié)果評價。經(jīng)過發(fā)光細菌的準(zhǔn)備和樣品的預(yù)處理，隨后進行發(fā)光檢測，由此判斷樣品是否存在生物毒性。快速檢測蔬菜綜合毒性方法在實際樣品中的應(yīng)用。實施例l:青菜的檢測1)發(fā)光細菌Q67的準(zhǔn)備發(fā)光細菌菌種采用青?；【鶴67菌株("Z^j'o^'/7^sie/lsj'sQ67)，其培養(yǎng)基成分，包括MgS042.47g，MgC030.79g，MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaC030.103g，KC10.122g，NaCl8.29g，Mg(HC03)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，瓊脂20g，溶于lOOOmL蒸餾水中，于12rC滅菌20min，制成斜面，貯于4。C冰箱備用。2)測試用菌液的制備用上述青?；【鶴67菌株的斜面菌種，移接到新鮮斜面上，20-22°C培養(yǎng)12h-14h，此時細菌發(fā)光明亮，用10ml生理鹽水(0.85%Nacl溶液)將菌苔從斜面上輕柔沖刷下來，搖勻，用少量生理鹽水調(diào)整菌液濃度，使菌液濃度0D660"0.3左右，取0.lml菌液，加入置有2ml生理鹽水的樣品測試管中，用測光儀檢測發(fā)光。3)青菜樣品的準(zhǔn)備取有代表性青菜樣品50g，操作者需戴無菌手套，用50ml無菌生理鹽水浸泡15min，用旋渦震蕩器震蕩lmin，，取上清液備用，對照選用無污染青菜50g，用上述樣品處理方法同樣處理備用。4)發(fā)光檢測準(zhǔn)備好三個測試小管，每個小管各加入待測青菜樣品上清液(5.1.3)2ml，制成三個平行樣。對照也取三個測量管，分別加入2ml對照樣品上清液，同樣也設(shè)置三個平行樣。依次加入O.2ml測試用(5.1.2)菌液，每個測量管加菌液的時間間隔為15s，放置30rnin后用發(fā)光檢測儀依次(相隔15s)檢測各測試小管的發(fā)光強度，計算相對發(fā)光強度。5)相對發(fā)光強度的計算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>6)青菜食用安全性結(jié)果評價<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例2:空心菜的檢測1)發(fā)光細菌Q67的準(zhǔn)備發(fā)光細菌菌種采用青?；【鶴67菌株(VibrioqinghaiensisQ67)，其培養(yǎng)基成分，包括MgS042.47g，MgC030.79g,MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaC030.103g，KC10.122g,NaCl8.29g，Mg(HC03)20,50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，瓊脂20g，溶于1000mL蒸餾水中。制成斜面，于12rC滅菌20min。貯于4。C冰箱備用。2)測試用菌液的制備用上述青?；【鶴67菌株的斜面菌種，移接到新鮮斜面上，20-22°C培養(yǎng)12-14h，此時細菌發(fā)光明亮，用10ml生理鹽水(0.85。/。Nacl溶液)將菌苔從斜面上輕柔沖刷下來，搖勻，用少量生理鹽水調(diào)整菌液濃度，使菌液濃度OD660"0.3左右，取O.lml菌液，加入置有2ml生理鹽水的樣品測試管中，用測光儀檢測發(fā)光。3)空心菜樣品的準(zhǔn)備取有代表性空心菜樣品50g，操作者需戴無菌手套，用50ml無菌生理鹽水浸泡15min，用旋渦震蕩器震蕩lmin，，取上清液備用，對照選用無污染空心菜50g，用上述樣品處理方法同樣處理備用。4)發(fā)光檢測準(zhǔn)備好三個測試小管，每個小管各加入待測空心菜樣品上清液(5.1.3)2ml，制成三個平行樣。對照也取三個測量管，分別加入2ml對照樣品上清液，同樣也設(shè)置三個平行樣。依次加入0.2ml測試用(5.1.2)菌液，每個測量管加菌液的時間間隔為15s，放置30min后用發(fā)光檢測儀依次(相隔15s)檢測各測試小管的發(fā)光強度，計算相對發(fā)光強度。5)相對發(fā)光強度的計算祥品三個平行樣的平均發(fā)光值相對發(fā)光強度二-xio對照三個平行樣的平均發(fā)光值6)空心菜食用安全性結(jié)果評價<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例3:黃瓜的檢測1)發(fā)光細菌Q67的準(zhǔn)備發(fā)光細菌菌種采用青?；【鶴67菌株(WZ^ioi/^力"e/7^^Q67)，其培養(yǎng)基成分，包括MgS042.47g，MgC030.79g,MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaC030.103g,KC10.122g，NaCl8.29g，Mg(HC03)20.50g,酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，瓊脂20g，溶于1000mL蒸餾水中。制成斜面，于121。C滅菌20min。貯于4。C冰箱備用。2)測試用菌液的制備用上述青?；【鶴67菌株的斜面菌種，移接到新鮮斜面上，20-22°C培養(yǎng)12-14h，此時細菌發(fā)光明亮，用10ml生理鹽水(0.85%Nacl溶液)將菌苔從斜面上輕柔沖刷下來，搖勻，用少量生理鹽水調(diào)整菌液濃度，使菌液濃度0D660^0.3左右，取O.lml菌液，加入置有2ml生理鹽水的樣品測試管中，用測光儀檢測發(fā)光。3)黃瓜樣品的準(zhǔn)備用削皮刀取表黃瓜皮部位，取有代表性的表皮樣品50g，操作者需戴無菌手套，用50ml無菌生理鹽水浸泡15min，用旋渦震蕩器震蕩lmin，，取上清液備用，對照選用無污染黃瓜，用上述樣品處理方法同樣處理備用。4)發(fā)光檢測準(zhǔn)備好三個測試杯，每個小杯各平行樣，對照也取三個測量杯，各加入2ml上清液同樣設(shè)置三個平行樣。依次加入0.2ml測試用菌液(5.3.2)每個測量杯加菌液的時間間隔為15s，放置30min后，發(fā)光檢測儀依次相隔15s測定各測量杯的發(fā)光強度，計算相對發(fā)光強度。5)相對發(fā)光強度的計算祥品三個平行樣的平均發(fā)光值相對發(fā)光強度-X咖《對照三個平行樣的平均發(fā)光值6)黃瓜食用安全性結(jié)果評價<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求1、一種快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，用于蔬菜生產(chǎn)和流通過程中進行安全性快速檢測，其特征在于所述的綜合毒性快速檢測的方法，包括如下步驟1)發(fā)光細菌的準(zhǔn)備，2)制備測試用菌液，3)選擇蔬菜樣品，4)發(fā)光檢測，5)相對發(fā)光強度的計算，6)蔬菜食用安全性結(jié)果評價；經(jīng)過發(fā)光細菌的準(zhǔn)備和樣品的預(yù)處理，隨后進行發(fā)光檢測，由此判斷樣品是否存在生物毒性。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，其特征在于所述的發(fā)光細菌的準(zhǔn)備，其菌種采用青?；【鶴67菌株，Q67菌株培養(yǎng)基成分，包括MgS。42.47g,MgC030.79g,MgBr20.09g，MgCl20.109g,CaC030.103g，KC10.122g,NaCl8,29g，Mg(HC03)20.50g,酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，瓊脂20g，溶于lOOOmL蒸餾水中，于121。C滅菌20min，制成斜面。貯于4'C冰箱備用。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，其特征在于.所述的青海弧菌Q67菌株的斜面菌種，移接到新鮮斜面上，20-22。C培養(yǎng)12-14h，此時細菌發(fā)光明亮，用lOml生理鹽水O.85。/。Nacl溶液，將菌苔從斜面上輕柔沖刷下來，搖勻，用少量生理鹽水調(diào)整菌液濃度，使菌液濃度0D660"0.3左右，取O.lml菌液，加入置有2ml生理鹽水的樣品測試管中，用測光儀檢測發(fā)光。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，其特征在于所述的樣品的檢測程序，1)取有代表性蔬菜樣品50g，葉菜類蔬菜取葉片部位，瓜果類蔬菜用削皮刀取表皮部位，操作者需戴無菌手套，用50ml無菌生理鹽水浸泡15min，用旋渦震蕩器震蕩lmin，取上清液備用，對照選用同類無污染蔬菜50g，用上述樣品備用，2)發(fā)光檢測，準(zhǔn)備好三個測試杯，每個小杯各平行樣，對照也取三個測量杯，各加入2ml上清夜同樣設(shè)置三個平行樣，依次加入0.2ml測試用菌液，每個測量杯加菌液的時間間隔為15s，放置30min后，發(fā)光檢測儀依次相隔15s測定各測量杯的發(fā)光強度，計算相對發(fā)光強度，3)相對發(fā)光強度的計算。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，其特征在于:所述的發(fā)光檢測，準(zhǔn)備好三個測試杯，每個小杯各平行樣，對照也取三個測量杯，各加入2ml上清夜同樣設(shè)置三個平行樣，依次加入0.2ml測試用菌液，每個測量杯加菌液的時間間隔為15s，放置30min后，發(fā)光檢測儀依次相隔15s測定各測量杯的發(fā)光強度。6、根據(jù)權(quán)利要求l所述的快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，其特征在于所述的相對發(fā)光強度的計算，其公式為相對發(fā)光強度等于樣品三個平行的平均發(fā)光值除以對照三個平行樣的平均發(fā)光值乘以ioo%。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，其特征在于所述的蔬菜食用安全性結(jié)果評價，經(jīng)過評價結(jié)果分為安全、可疑和不安全。全文摘要本發(fā)明涉及一種快速檢測蔬菜綜合毒性的方法，屬于食品安全檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，所述的發(fā)光細菌檢測法，包括如下步驟1)發(fā)光細菌的準(zhǔn)備，2)制備測試用菌液，3)選取蔬菜樣品，4)進行發(fā)光檢測，5)發(fā)光強度的計算，6)蔬菜食用安全性結(jié)果評價。經(jīng)過發(fā)光細菌的準(zhǔn)備和樣品的預(yù)處理，隨后進行發(fā)光檢測，由此判斷樣品是否存在生物毒性。發(fā)光細菌菌種采用青?；【鶴67菌株，菌株的斜面菌種，移接到新鮮斜面上，20-22℃培養(yǎng)12-14h，此時細菌發(fā)光明亮，然后進行發(fā)光檢測，相對發(fā)光強度的計算，蔬菜食用安全性結(jié)果評價。文檔編號G01N21/76GK101339134SQ200810041699公開日2009年1月7日申請日期2008年8月14日優(yōu)先權(quán)日2008年8月14日發(fā)明者吳淑杭,周德平,姜震方,朱文杰申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院