一種利莫那班的快速檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學檢測領(lǐng)域，涉及一種利莫那班快速檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)不合理、缺乏運動等因素引起的肥胖 問題日益嚴重。世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)顯示:2014年18歲及以上的成年人中有39%的人超重，13% 的人肥胖。肥胖可誘發(fā)或加重糖尿病、脂肪肝、心腦血管系統(tǒng)疾病、睡眠呼吸暫停綜合癥、肌 肉骨骼疾患以及某些癌癥等，已成為影響人類健康的十大主要威脅之一。隨著人們對減肥 的迫切需求，各種減肥產(chǎn)品也日益增多，魚龍混雜。化學藥物快速減肥通常會帶來明顯的不 良反應，而中成藥、保健食品和食品大部分來源于天然物質(zhì)，被認為具有較高的安全性，在 減肥市場中廣受消費者青睞，但其存在起效慢或效果不明顯的缺點。為謀取高額利益，部分 不法分子利用人們急于見效的心理，在其中非法添加具有減肥作用的化學藥品，消費者在 不知情的情況下長期服用會使健康受到不同程度的危害，嚴重者甚至可導致死亡。
[0003] 利莫那班是(rimonabant)法國Sanofi-Aventis公司研發(fā)的首個用于肥胖癥治療 的大麻素 1型受體(CB1)拮抗劑，2006年7月首次在英國上市，目前已被40多個國家批準，在 20多個國家上市，能顯著地降低體重、縮小腰圍，減少心血管疾病等危險因素，而且還可以 改善血脂和胰島素抵抗以及代謝綜合征等。盡管利莫那班對于肥胖的治療頗具效果，但近 些年來所報道的不良反應如癲癇發(fā)作、抑郁、焦慮、失眠、攻擊性和自殺傾向等神經(jīng)和精神 方面的副作用也日益受到關(guān)注。由于利莫那班治療減肥的效果顯著且便宜易得，具有被非 法添加到減肥類中成藥和保健食品中的巨大風險，因此亟需開發(fā)快速、可靠的檢測方法，以 保障人民群眾的飲食用藥安全。目前報道的利莫那班的檢測方法主要為高效液相色譜法和 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，存在檢測周期長、過程繁瑣、檢測成本高、對操作人員的要求高 等問題，不利于在基層部門廣泛開展，無法滿足現(xiàn)場快速監(jiān)督檢驗工作的需求。本發(fā)明針對 目前市場上的大部分減肥類中成藥、保健食品和食品提供一種準確快速的利莫那班檢測方 法，以滿足檢驗及監(jiān)管的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺點，提供一種利莫那班的快速檢測方法，具 有分析成本低、不需要使用貴重分析儀器，專屬性強，靈敏度高，檢驗結(jié)果正確率高等優(yōu)點， 適用于減肥類中成藥、保健食品和食品中是否添加利莫那班的現(xiàn)場快速檢測。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采取如下技術(shù)方案： 一種利莫那班的快速檢測方法，步驟為： 1) 向待測樣品中加入堿化液，堿化液加入量為3mL/g待測樣品，振搖2~4min，再加入與 堿化液等體積的萃取液，振搖2~4min，靜置分層3~5min，取上層溶液； 2) 向步驟1)上層溶液中按體積比1:1加入酸化液，振搖2~4min，靜置3~5min，觀察溶 液中是否生成白色絮狀不溶物:如果溶液中沒有生成白色絮狀不溶物，則待測樣品不含有 利莫那班;如果溶液中有白色絮狀不溶物生成，則繼續(xù)采用步驟3)進行后續(xù)處理； 3)取步驟2)含有白色絮狀不溶物的溶液，3000r/min離心3~5min，取離心后白色不溶 物，滴加復溶液至白色不溶物完全溶解后，再滴加3~5滴檢測液，若溶液中產(chǎn)生桔紅色沉淀 為待測樣品中含有利莫那班，若溶液中無桔紅色沉淀生成則待測樣品中不含利莫那班。
[0006] 步驟1)中，所述的堿化液為強堿-水溶液，其中強堿濃度〇. 4~0.6mo 1 /L，所述的強 堿為氫氧化鈉和氫氧化鉀中一種或二者混合，優(yōu)選〇.5mol/L的氫氧化鈉-水溶液。
[0007] 步驟1)中，所述的萃取液為非極性有機溶劑，優(yōu)選石油醚、正己烷和環(huán)己烷中的一 種或幾種混合。
[0008] 步驟2)中，所述的酸化液為無機酸的水溶液，濃度為0.9~1. lmol/L，所述的無機 酸為鹽酸、硫酸和磷酸的一種或幾種混合;優(yōu)選lmol/L的鹽酸水溶液。
[0009] 步驟3)中，所述的復溶液為低級醇溶液，所述的低級醇為甲醇和乙醇的一種或二 者混合;優(yōu)選乙醇。
[0010]步驟3)中，所述的檢測液為碘化鉍鉀試液，所述碘化鉍鉀試液配制方法為:取次硝 酸鉍0.85g，加冰醋酸10ml和水40ml充分溶解后，再加質(zhì)量分數(shù)4%的碘化鉀水溶液20ml，混 合均勻，即得。
[0011] 利莫那班化學名為5-(4-氯苯基)-1-(2，4_二氯苯基)-4-甲基-N-(l-哌啶基)-1Η-P比挫-3_甲酰胺，分子式為C22H21CI3N4O，分子量為463.79，結(jié)構(gòu)式如式（I)所不：
利莫那班化學結(jié)構(gòu)中具有吡唑和哌啶等含氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)，在堿性條件下呈游離生物堿， 不溶于水而溶于有機溶劑;在酸性條件下氮原子能接受質(zhì)子帶正電荷、呈游離態(tài)的陽離子， 極性增大，既不溶于石油醚等非極性有機溶劑也不溶于水，但易溶于甲醇等極性較大的有 機溶劑。利莫那班在酸性條件下，吡唑環(huán)和哌啶環(huán)上的堿性氮原子可與生物堿鑒別試劑反 應，如與碘化鉍鉀試液反應，生成桔紅色沉淀，現(xiàn)象明顯。但中成藥、保健食品和食品中成分 復雜，有大量有色物質(zhì)(如植物色素等)及生物堿類成分，他們中有些能溶于有機溶劑，而有 些則可溶于水，如不分離，則會嚴重干擾快速檢測方法的沉淀或顯色反應的觀察，難以得出 正確的判斷結(jié)果。
[0012]本發(fā)明采用稀的強堿-水溶液為堿化液，使利莫那班呈游離生物堿，增大其在有機 溶劑的溶解度，同時可以使待測樣品分散均勻，提高提取效率。萃取液選擇與堿化液不互溶 的非極性有機溶劑，在保證提取效率增強檢測靈敏度的同時可顯著降低水溶性植物色素的 干擾。用無機酸-水溶液為酸化液使利莫那班母核質(zhì)子化，降低其在萃取液中的溶解度，生 成既不溶于萃取液也不溶于酸化液的不溶物。該不溶物為白色絮狀且介于萃取液層與酸化 液層中間，離心后呈白色餅狀，且易溶于甲醇等極性有機溶劑，以此特征專屬性好，特異性 強，可以判斷初步是否含利莫那班。進一步，取白色不溶物的低級醇溶液，利用碘化鉍鉀試 液進行檢測，利莫那班可與之形成桔紅色不溶物，從而進一步確認是否為利莫那班。在堿化 分散、萃取分離和酸化沉淀過程中三次利用不同物質(zhì)的溶解性差異分離除去干擾物，通過 兩個不同機理的沉淀反應判斷待測樣品中是否含有利莫那班。
[0013] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果如下： 1)待測樣品通過堿化分散、萃取分離、酸化沉淀三步即可根據(jù)沉淀反應初步判斷樣品 中是否含有利莫那班，對可疑的的陽性樣品利用生物堿沉淀反應進一步確認，即可準確判 斷，且所用堿化液、萃取液、酸化液、復溶液、檢測液均為普通的化學試劑，操作簡便，分析成 本低。
[0014] 2)待測樣品經(jīng)堿化處理可分散均勻且增大被測成分在萃取液中的溶解度;萃取液 選擇非極性有機溶劑可排除水溶性干擾物的影響；萃取液酸化后使被測成分沉淀出來，消 除了脂溶性色素及酸溶性生物堿的干擾，專屬性強;對沉淀復溶后利用生物堿鑒別試劑進 一步確認，對樣品中是否有利莫那班做出更準確地判斷。
[0015] 3)本發(fā)明的檢測方法中，所用堿化液、萃取液、酸化液、復溶液、檢測液的專屬性 強，通過堿化分散、萃取分離和酸化沉淀過程中三次利用不同物質(zhì)的溶解性差異分離除去 干擾物，通過兩個不同機理的沉淀反應確證待測樣品中是否含有利莫那班。方法反應靈敏 度高、檢測結(jié)果正確率高、反應迅速，現(xiàn)象明顯，適用于現(xiàn)場快速檢測。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合具體實施例進一步描述本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下， 根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。 [0017]本發(fā)明快速檢測方法驗證： 萃取液選擇原則：（1)與堿化液(水)不互溶，便于目標物的萃取分離；（2)對利莫那班有 適宜溶解度，溶解度越大，沉淀反應越明顯；（3)對利莫那班的無機酸鹽溶解度盡可能低，溶 解度越低靈敏度越高； 復溶液選擇原則：（1)對利莫那班的無機酸鹽溶解性好;（2)與碘化鉍鉀試液(水)互溶。
[0018] 本發(fā)明參考《中國藥典》2015年版溶解度試驗法考察了利莫那班及其鹽酸鹽在以 不同溶劑中的溶解性。結(jié)果見下表1: 豐1太Γ3、換念11 fth、換你
實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):石油醚等非極性有機溶劑符合萃取液的選擇原則；乙酸乙酯和二氯甲 烷等中等極性的有機溶劑雖然也符合萃取液的選擇原則，但由于對鹽酸利莫那班微溶，會 導致檢測靈敏度降低，不適合于含利莫那班量低的樣品檢測；甲醇和乙醇符合復溶液選擇 原則。
[0019] 實施例1:茶劑的檢測 試劑配制:堿化液為0.5mol/L氫氧化鈉-水溶液;