一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，研究食品中黃曲霉毒素的提取、凈化及富集新方法，結(jié)合高效液相色譜?在線柱后光化學(xué)衍生?熒光檢測(cè)器檢測(cè)食品中黃曲霉毒素。該法采用分散磁固相微萃取與分散液液微萃取技術(shù)結(jié)合，進(jìn)行樣品中黃曲霉毒素的分離、凈化及富集。與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中黃曲霉毒素測(cè)方法相比，該法具有檢測(cè)所用有機(jī)溶劑量少，分析時(shí)間短，操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本低、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。
【專利說明】
一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法。屬于食品檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃曲霉毒素(AFT)是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。 黃曲霉毒素(Aflatoxin,，簡(jiǎn)稱AFT)是20世紀(jì)60年代初發(fā)現(xiàn)的一種劇毒的真菌代謝產(chǎn)物，主 要由黃曲霉菌(Aspergillus flaws)和寄生曲霉菌(Aspergillus parasiticus)等侵染農(nóng) 產(chǎn)品之后產(chǎn)生，是目前已知最強(qiáng)的致癌物之一，毒性極強(qiáng)。1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組 織癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為一級(jí)致癌物。
[0003] 隨著國(guó)際上和我國(guó)黃曲霉毒素污染事件的頻頻發(fā)生，各國(guó)在食品領(lǐng)域的監(jiān)控越來 越嚴(yán)格。目前，普遍采用的檢測(cè)方法包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELASA)、免疫親和柱一熒光分光 光度計(jì)法(SFB)、免疫親和柱一高效液相色譜法(IAC-HPLC)以及HPLC-MS/MS法等。其中高 效液相色譜(HPLC)方法測(cè)定準(zhǔn)確，分辨率高，可同時(shí)測(cè)定多種黃曲霉毒素成分，完成定性、 定量測(cè)定而被廣泛應(yīng)用。由于食品樣品中含有大量化合物，需要對(duì)測(cè)量樣品進(jìn)行凈化處理 以及對(duì)毒素進(jìn)行富集，才能進(jìn)行檢測(cè)分析。
[0004] 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18979-2003采用的食品中黃曲霉毒素測(cè)定的樣品凈化方法是免疫 親和柱凈化法，采用該方法國(guó)標(biāo)做實(shí)驗(yàn)一批檢品實(shí)驗(yàn)成本約需160元，實(shí)驗(yàn)前處理耗時(shí)約 1.5h完成一批檢品。發(fā)明專利CN 104914196A雖然也進(jìn)行了改進(jìn)，用HC-C18+PSA作凈化材 料，但不明確所用材料，且存在分離困難及凈化效果差的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)成本低，樣品萃取凈化效果好，檢測(cè)時(shí)間短的食 品中黃曲霉毒素的測(cè)定方法。
[0006] -種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，包括以下步驟：
[0007 ] (1)食品樣品中待測(cè)黃曲霉毒素提取液的制備
[0008] ①對(duì)于大米、玉米、小麥、花生、核桃、杏仁及其制品提取方法為:準(zhǔn)確稱取粉碎均 質(zhì)后的樣品2~5g，精確至0.0 OOlg，加入體積分?jǐn)?shù)為70~80%的甲醇水溶液20~50mL，劇烈 振蕩lmin，50±2°C水浴超聲提取20~30min，以3500~5000r/min離心5~lOmin，取出上層 溶液，重復(fù)提取2~3次，合并上清液，待用；
[0009] ②對(duì)于醬油、食醋、植物油脂提取方法為:準(zhǔn)確稱取5.00~10.00g樣品，加入2~5g NaCl和體積分?jǐn)?shù)為70~80 %的甲醇水溶液20~50mL，渦旋混合1~3min，定量濾紙過濾，準(zhǔn) 確吸取5.00mL濾液，加入10mL超純水稀釋，混勻，待用。
[0010] (2)提取液凈化
[0011] 往步驟（1)提取液中加入50~100yL離子液體，渦旋混合1~2min，形成均相溶液， 加入2~5倍體積的超純水，加入本發(fā)明制備的有機(jī)酸包覆磁性納米材料2.0~10.0 mg，渦旋 混合1~3min，放置10~20min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物；加入5~10mL超純 水，禍旋混合lmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入洗脫劑，禍旋混合1~3min， 外加磁場(chǎng)作用下分離，重復(fù)2~3次，合并洗脫液，洗脫液經(jīng)0.45wii濾膜過濾，得到待測(cè)樣品 溶液；
[0012] ⑶測(cè)定
[0013]各取標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測(cè)樣品溶液50此，在設(shè)定的液相色譜條件下進(jìn)樣，采用高效 液相色譜-在線柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，得到待測(cè)樣品中黃曲霉毒素含量。
[0014]步驟（1)所述的有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備包括以下步驟:稱取適量二價(jià)鐵 鹽和三價(jià)鐵鹽，用l〇〇mL去離子水溶解，配制成Fe2+和Fe3+的混合溶液，惰性氣體保護(hù)下，水 浴加熱機(jī)械攪拌10~15min，加入有機(jī)酸的丙酮或甲醇溶液，繼續(xù)攪拌5min后，再加入沉淀 劑濃氨水，同時(shí)攪拌30min后，自然冷卻至室溫;外加磁場(chǎng)作用下固液分離，產(chǎn)物用去離子 水/甲醇各洗滌2~3次除去多余的有機(jī)酸的丙酮或甲醇溶液，在60~80 °C真空干燥24~48h 即得有機(jī)酸包覆磁性納米材料。
[0015]所述的食品樣品中待測(cè)黃曲霉毒素包括:黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2。
[0016] 所述的有機(jī)酸包覆磁性納米材料中有機(jī)酸為蓖麻油酸、棕櫚油酸、油酸、正壬酸、 正癸酸中之一種。
[0017] 所述的提取凈化中離子液體包括1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽、1-戊基-3-甲 基-咪唑六氟磷酸鹽、1-己基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽、1-庚基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽、 1-辛基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽之一種。
[0018] 所述的提取凈化中洗脫劑為乙腈，用量為0.5~lmL。
[0019] 所述的設(shè)定的液相色譜條件為:C18色譜柱(4.6mmX 250mm，5.Own)，流動(dòng)相甲醇-水（45:55)，流速1.〇11117111111，進(jìn)樣量50此，柱溫箱30°(：。檢測(cè)器為熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng) 360nm，發(fā)射波長(zhǎng)440nm;高效液相色譜儀(配備熒光檢測(cè)器）；光化學(xué)衍生器。
[0020] 所述的有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備中所述Fe2+和Fe3+的混合溶液中，F(xiàn)e2+與 Fe 3+的摩爾比為1:1~5。
[0021] 所述的有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備中所述惰性氣體為氮?dú)?，機(jī)械攪拌速度為 600~lOOOrpm，水浴加熱溫度為70~85°C。
[0022] 所述的有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備中所述含有機(jī)酸的丙酮或甲醇溶具體為， 5mL丙酮或甲醇中含100~400yg有機(jī)酸，沉淀劑濃氨水的用量為10~20mL。
[0023] 本發(fā)明米用分散磁固相微萃取與分散液液微萃取技術(shù)結(jié)合，分散液液微萃取中離 子液體及制備的磁性納米材料對(duì)黃曲霉毒素有萃取及吸附的雙重作用，使其既有好的萃取 效果又有好的凈化效果；由于制備材料為納米級(jí)，材料用量少，只需幾毫克，成本低廉，只需 幾元錢;材料具有的超順磁性，在外加磁場(chǎng)可以快速分離，樣品凈化時(shí)間短，只需幾分鐘。這 些特點(diǎn)都本發(fā)明所用的技術(shù)在黃曲霉毒素測(cè)定中具有巨大的優(yōu)勢(shì)。
[0024]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0025] 1.本發(fā)明米用分散磁固相微萃取與分散液液微萃取技術(shù)結(jié)合，分散液液微萃取中 離子液體及制備的磁性納米材料對(duì)黃曲霉毒素有萃取及吸附的雙重作用，使其既有好的萃 取效果又有好的凈化效果。
[0026] 2.本發(fā)明制備的有機(jī)羧酸改性磁性納米材料對(duì)黃曲霉毒素有特異性吸附，同時(shí)由 于比表面大，在使用時(shí)用量低，同時(shí)洗脫時(shí)，先用水洗除極性成分，再用乙腈洗脫黃曲霉毒 素，凈化效果明顯。
[0027] 3.利用制備材料的超順磁性，用外磁場(chǎng)收集萃取目標(biāo)物的萃取劑，分離操作簡(jiǎn)單、 快速，有機(jī)溶劑用量極小。
[0028] 4.結(jié)合高效液相色譜-在線柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測(cè)器檢測(cè)食品中黃曲霉毒素， 檢測(cè)限低，靈敏度高，加標(biāo)回收率高。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。
[0030] 實(shí)施例1利用本發(fā)明檢測(cè)花生中黃曲霉毒素的含量，步驟為：
[0031] 1、有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備：稱取4.10g硫酸亞鐵銨（（NH4)2Fe(S〇4)2 ? 6H20)，13.52g氯化鐵(FeCl3 ? 6H20)，用100mL去離子水溶解后，轉(zhuǎn)到于250mL三頸瓶中，在氮 氣保護(hù)下，水浴加熱至80°C，機(jī)械攪拌10min(轉(zhuǎn)速為lOOOrpm)，然后加入5mL含200yL正壬酸 的甲醇溶液，繼續(xù)攪拌5min，加入10mL濃氨水，混合液繼續(xù)反應(yīng)30min后，自然冷卻至室溫 后，用外加磁場(chǎng)收集產(chǎn)物棄去反應(yīng)液，磁性材料用100mL去離子水洗滌2次，100mL甲醇洗滌2 次，100mL去離子水洗滌3次，在60°C真空干燥48h即得正壬酸包覆磁性納米材料。
[0032] 2、取適量黃曲霉毒素對(duì)照品儲(chǔ)備液，用70%甲醇稀釋得濃度分別為0.02、0.05、 0.1、0.3、0.5、1.0yg/mL 的對(duì)照品溶液，過0 ? 45m 有機(jī)濾膜，C18 色譜柱(4 ? 6mm X 250mm，5 ? 0y m)，流動(dòng)相甲醇-水(45:55; v/v)，流速1. OmL/min，進(jìn)樣量50yL，柱溫箱30°C。檢測(cè)器為熒光 檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)440nm;Agilent 1200高效液相色譜儀（四元栗，自動(dòng)進(jìn)樣 器，配備熒光檢測(cè)器）；光化學(xué)衍生器。以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 計(jì)算回歸方程，相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、線性范圍等見表1，樣品中加標(biāo)回收率見表2。 [0033]表1黃曲霉毒素的線性方程、相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、線性范圍
[0035]表2空白樣品中黃曲霉毒素的加標(biāo)回收率
[0038] 3、樣品處理:準(zhǔn)確稱取粉碎均質(zhì)后的花生樣品2g，精確至0.0 OOlg，加入體積分?jǐn)?shù) 為70 %的甲醇水溶液20mL，劇烈振蕩lmin，50 ± 2°C水浴超聲提取20min，以3500r/min離心 lOmin，取出上層溶液，重復(fù)提取2次，合并上清液；向其中加入50yL的1-辛基-3-甲基-咪唑 六氟磷酸鹽，渦旋混合lmin，形成均相溶液，加入70mL超純水，加入步驟1制備的正壬酸包覆 磁性納米材料2. Omg，禍旋混合lmin，放置lOmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加 入5mL超純水，禍旋混合lmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入乙腈0.3mL，禍旋 混合lmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，重復(fù)2次，合并乙腈，經(jīng)0.45wii濾膜過濾，得到待測(cè)樣品溶 液。
[0039] 4、測(cè)定:將處理好的待測(cè)樣品溶液在色譜條件與步驟2相同條件下進(jìn)樣檢測(cè)，得出 黃曲霉毒素的含量，其中黃曲霉毒素B2、G1、G2未檢出，黃曲霉毒素B1為5.49yg/kg。
[0040] 實(shí)施例2利用本發(fā)明檢測(cè)玉米中黃曲霉毒素的含量，步驟為：
[0041] 1、有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備:稱取2.00g氯化亞鐵(FeCl2 ? 4H2〇)，5.40g氯 化鐵(FeCl3 ? 6H2O)，用100mL去離子水溶解后，轉(zhuǎn)到于250mL三頸瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，機(jī)械 攪拌15min(轉(zhuǎn)速為600rpm)并水浴加熱至70°C，然后加入5mL含300yL正癸酸的甲醇溶液，繼 續(xù)攪拌5min，加入15mL濃氨水，混合液繼續(xù)反應(yīng)30min后，自然冷卻至室溫后，用外加磁場(chǎng)收 集產(chǎn)物棄去反應(yīng)液，磁性材料用l〇〇mL去離子水洗滌2次，100mL甲醇洗滌2次，100mL去離子 水洗滌2次，在80°C真空干燥24h即得正癸酸包覆磁性納米材料。
[0042] 2、取適量黃曲霉毒素對(duì)照品儲(chǔ)備液與實(shí)施例1相同。
[0043] 3、樣品處理:準(zhǔn)確稱取粉碎均質(zhì)后的玉米樣品3g，精確至0.0001 g，加入體積分?jǐn)?shù) 為75 %的甲醇水溶液30mL，劇烈振蕩lmin，50 ± 2°C水浴超聲提取25min，以4000r/min離心 8min，取出上層溶液，重復(fù)提取3次，合并上清液；向其中加入100yL的1-庚基-3-甲基-咪唑 六氟磷酸鹽，渦旋混合2min，形成均相溶液，加入120mL超純水，加入步驟1制備的正癸酸包 覆磁性納米材料5. Omg，禍旋混合2min，放置15min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物； 加入8mL超純水，禍旋混合2min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入乙腈0.4mL，禍 旋混合lmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，重復(fù)2次，合并乙腈，經(jīng)0.45m濾膜過濾，得到待測(cè)樣品 溶液。
[0044] 4、測(cè)定:將處理好的待測(cè)樣品溶液在色譜條件與步驟2相同條件下進(jìn)樣檢測(cè)，得出 黃曲霉毒素的含量，其中黃曲霉毒素B2、G2未檢出，黃曲霉毒素B1為30.1yg/kg、黃曲霉毒素 G1 為21.0yg/kg。
[0045]實(shí)施例3利用本發(fā)明檢測(cè)核桃中黃曲霉毒素的含量，步驟為：
[0046] 1、有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備:稱取2.00g氯化亞鐵(FeCl2 ? 4H20)，5.62g硫 酸鐵(Fe2(S〇4)3 ? 9H20)，用100mL去離子水溶解后，轉(zhuǎn)到于250mL三頸瓶中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下， 機(jī)械攪拌12min(轉(zhuǎn)速為800rpm)并水浴加熱至85°C，然后加入5mL含400此油酸的丙酮溶液， 繼續(xù)攪拌5min，加入20mL濃氨水，混合液繼續(xù)反應(yīng)30min后，自然冷卻至室溫后，用外加磁場(chǎng) 收集產(chǎn)物棄去反應(yīng)液，磁性材料用l〇〇mL去離子水洗滌2次，100mL甲醇洗滌3次，100mL去離 子水洗滌2次，在70°C真空干燥30h即得油酸包覆磁性納米材料。
[0047] 2、取適量黃曲霉毒素對(duì)照品儲(chǔ)備液與同實(shí)施例1。
[0048] 3、樣品處理:準(zhǔn)確稱取粉碎均質(zhì)后的核桃樣品5g，精確至0.0001 g，加入體積分?jǐn)?shù) 為80 %的甲醇水溶液50mL，劇烈振蕩lmin，50 ± 2°C水浴超聲提取25min，以5000r/min離心 5min，取出上層溶液，重復(fù)提取2次，合并上清液；向其中加入80yL的1-己基-3-甲基-咪唑六 氟磷酸鹽，渦旋混合2min，形成均相溶液，加入250mL超純水，加入步驟1制備的油酸包覆磁 性納米材料10 . Omg，禍旋混合3min，放置20min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物；加 入10mL超純水，禍旋混合3min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物；加入乙腈0.5mL，禍 旋混合lmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，重復(fù)2次，合并乙腈，經(jīng)0.45m濾膜過濾，得到待測(cè)樣品 溶液。
[0049] 4、測(cè)定:將處理好的待測(cè)樣品溶液在色譜條件與步驟2相同條件下進(jìn)樣檢測(cè)，得出 黃曲霉毒素的含量，黃曲霉毒素B1為1.24yg/kg、黃曲霉毒素B2為0.61yg/kg、黃曲霉毒素G1 為1 ? 15iig/kg、黃曲霉毒素 G2 為0.51iig/kg。
[0050] 實(shí)施例4利用本發(fā)明檢測(cè)醬油中黃曲霉毒素的含量，步驟為：
[00511 1、有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備：稱取4.10g硫酸亞鐵銨（（NH4)2Fe(S04)2 ? 6H20)，11.24g硫酸鐵(Fe2(S04)3 ? 9H20)，用100mL去離子水溶解后，轉(zhuǎn)到于250mL三頸瓶中， 在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，機(jī)械攪拌l0min(轉(zhuǎn)速為lOOOrpm)并水浴加熱至80°C，然后加入5mL含300yL 蓖麻油酸的丙酮溶液，繼續(xù)攪拌5min，加入15mL濃氨水，混合液繼續(xù)反應(yīng)30min后，自然冷卻 至室溫后，用外加磁場(chǎng)收集產(chǎn)物棄去反應(yīng)液，磁性材料用100mL去離子水洗滌2次，100mL甲 醇洗滌3次，100mL去離子水洗滌2次，在80°C真空干燥24h即得蓖麻油酸包覆磁性納米材料。 [0052 ] 2、取適量黃曲霉毒素對(duì)照品儲(chǔ)備液與同實(shí)施例1。
[0053] 3、樣品處理:準(zhǔn)確稱取醬油樣品5g，精確至0 . OOOlg，加入2g NaCl和體積分?jǐn)?shù)為 70 %的甲醇水溶液50mL，渦旋混合lmin，定量濾紙過濾，準(zhǔn)確吸取5 . OOmL濾液，加入10mL超 純水稀釋，混勻；向其中加入50yL的1-戊基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽，渦旋混合lmin，形成 均相溶液，加入150mL超純水，加入步驟1制備的蓖麻油酸包覆磁性納米材料4. Omg，禍旋混 合lmin，放置lOmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物；加入10mL超純水，渦旋混合 3min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入乙腈0.5mL，禍旋混合lmin，外加磁場(chǎng)作 用下分離，重復(fù)2次，合并乙腈，經(jīng)0.45m濾膜過濾，得到待測(cè)樣品溶液。
[0054] 4、測(cè)定:將處理好的待測(cè)樣品溶液在色譜條件與步驟2相同條件下進(jìn)樣檢測(cè)，得出 黃曲霉毒素的含量，其中黃曲霉毒素G1、G2未檢出，黃曲霉毒素B1為5.30yg/kg、黃曲霉毒素 B2為0?86yg/kg。
[0055]實(shí)施例5利用本發(fā)明檢測(cè)花生油中黃曲霉毒素的含量，步驟為：
[0056] 1、有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備：稱取4.10g硫酸亞鐵銨（（NH4)2Fe(S04)2 ? 6H20)，8.10g氯化鐵(FeCl3 ? 6H20)，用100mL去離子水溶解后，轉(zhuǎn)到于250mL三頸瓶中，在氮 氣保護(hù)下，機(jī)械攪拌12min(轉(zhuǎn)速為800rpm)并水浴加熱至75°C，然后加入5mL含500yL棕櫚油 酸的丙酮溶液，繼續(xù)攪拌5min，加入20mL濃氨水，混合液繼續(xù)反應(yīng)30min后，自然冷卻至室溫 后，用外加磁場(chǎng)收集產(chǎn)物棄去反應(yīng)液，磁性材料用100mL去離子水洗滌2次，100mL甲醇洗滌3 次，100mL去離子水洗滌2次，在80°C真空干燥24h即得棕櫚油酸包覆磁性納米材料。
[0057] 2、取適量黃曲霉毒素對(duì)照品儲(chǔ)備液與同實(shí)施例1。
[0058] 3、樣品處理:準(zhǔn)確稱取花生油樣品10g，精確至0.OOOlg，加入5g NaCl和體積分?jǐn)?shù) 為80 %的甲醇水溶液20mL，渦旋混合lmin，定量濾紙過濾，準(zhǔn)確吸取5.00mL濾液，加入10mL 超純水稀釋，混勻；向其中加入70此的1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽，渦旋混合lmin，形 成均相溶液，加入l〇〇mL超純水，加入步驟1制備的棕櫚油酸包覆磁性納米材料7. Omg，禍旋 混合lmin，放置lOmin，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入10mL超純水，渦旋混合 3min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入乙腈0.5mL，禍旋混合lmin，外加磁場(chǎng)作 用下分離，重復(fù)2次，合并乙腈，經(jīng)0.45m濾膜過濾，得到待測(cè)樣品溶液。
[0059] 4、測(cè)定:將處理好的待測(cè)樣品溶液在色譜條件與步驟2相同條件下進(jìn)樣檢測(cè)，得出 黃曲霉毒素的含量，黃曲霉毒素B1為3.18yg/kg、黃曲霉毒素B2為0.82yg/kg、黃曲霉毒素G1 為1.60iig/kg、黃曲霉毒素 G2 為0.61iig/kg。
[0060] 以上實(shí)施例與GB/T 18979-2003食品中黃曲霉毒素測(cè)定比較，結(jié)果見表3。
[0061]表3測(cè)定結(jié)果比較(yg/kg)

[0064] "」'代表未檢出
[0065] 由表3結(jié)果可知：用本發(fā)明微萃取分離凈化方法結(jié)合高效液相色譜-在線柱后光化 學(xué)衍生-熒光檢測(cè)器檢測(cè)食品中黃曲霉毒素與GB/T18979-2003測(cè)定方法相比，結(jié)果一致，但 因處理步驟少，所用時(shí)間短，處理成本低，有機(jī)溶劑用量少更具優(yōu)勢(shì)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于該方法包括以下步驟： (1) 食品樣品中待測(cè)黃曲霉毒素提取液的制備 ① 對(duì)于大米、玉米、小麥、花生、核桃、杏仁及其制品待測(cè)樣進(jìn)行提取方法為:準(zhǔn)確稱取 粉碎均質(zhì)后的待測(cè)樣樣品2~5g，精確至O . OOOlg，加入體積分?jǐn)?shù)為70~80%的甲醇水溶液 20~50mL，劇烈振蕩Imin，50 ± 2Γ水浴超聲提取20~30min，以3500~5000r/min離心5~ IOmin，取出上層溶液，重復(fù)提取2~3次，合并上清液，待用;或者 ② 對(duì)于醬油、食醋、植物油脂待測(cè)樣提取方法為:準(zhǔn)確稱取5.00~10.0 Og待測(cè)樣樣品， 加入2~5g NaCl和體積分?jǐn)?shù)為70~80%的甲醇水溶液20~50mL，渦旋混合1~3min，定量濾 紙過濾，準(zhǔn)確吸取5. OOmL濾液，加入IOmL超純水稀釋，混勻，待用。 (2) 提取液凈化 往步驟（1)提取液中加入50~IOOyL離子液體，渦旋混合1~2min，形成均相溶液，加入2 ~5倍體積的超純水，加入本發(fā)明制備的有機(jī)酸包覆磁性納米材料2.0~10.0 mg，渦旋混合1 ~3min，放置10~20min，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物;加入5~IOmL超純水，禍旋 混合Imin，外加磁場(chǎng)作用下分離，收集磁性聚合物；加入洗脫劑，禍旋混合1~3min，外加磁 場(chǎng)作用下分離，重復(fù)2~3次，合并洗脫液，洗脫液經(jīng)0.45μπι濾膜過濾，得到待測(cè)樣品溶液； (3) 測(cè)定 各取標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測(cè)樣品溶液20yL，在設(shè)定的液相色譜條件下進(jìn)樣，采用高效液相 色譜-在線柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，得到待測(cè)樣品中黃曲霉毒素含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于步驟 (1)所述有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備包括以下步驟:稱取適量二價(jià)鐵鹽和三價(jià)鐵鹽，用 IOOmL去離子水溶解，配制成Fe2+和Fe3+的混合溶液，在惰性氣體保護(hù)下，水浴加熱機(jī)械攪拌 10~15min，加入沉淀劑濃氨水，同時(shí)加入有機(jī)酸的丙酮或甲醇溶液，攪拌30min后，自然冷 卻至室溫;在外加磁場(chǎng)作用下固液分離，產(chǎn)物用去離子水/甲醇洗滌3~5次除去多余的有機(jī) 酸的丙酮或甲醇溶液，在60~80°C真空干燥24~48h即得有機(jī)酸包覆磁性納米材料。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 食品樣品中待測(cè)黃曲霉毒素包括:黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 有機(jī)酸包覆磁性納米材料中有機(jī)酸為蓖麻油酸、棕櫚油酸、油酸、正壬酸、正癸酸中之一種。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 提取凈化中離子液體包括1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽、1-戊基-3-甲基-咪唑六氟磷酸 鹽、1-己基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽、1-庚基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽、1-辛基-3-甲基-咪 唑六氟磷酸鹽之一種。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 提取凈化中洗脫劑為乙腈，用量為〇. 5~lmL。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 設(shè)定的液相色譜條件為:C18色譜柱(4.6mm X 250mm，5. Ομπι)，流動(dòng)相甲醇-水(45:55)，流速 1.0mL/min，進(jìn)樣量50yL，柱溫箱30°C。檢測(cè)器為熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng) 440nm;高效液相色譜儀(配備熒光檢測(cè)器）；光化學(xué)衍生器。8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備中所述Fe2+和Fe3+的混合溶液中，F(xiàn)e2+與Fe 3+的摩爾比為I: I ~5〇9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備中所述惰性氣體為氮?dú)?，機(jī)械攪拌速度為600~1000 rpm， 水浴加熱溫度為70~85 °C。10. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的新方法，其特征在于所述 有機(jī)酸包覆磁性納米材料的制備中所述含有機(jī)酸的丙酮或甲醇溶具體為，5mL丙酮或甲醇 中含100~400yg有機(jī)酸，沉淀劑濃氨水的用量為5~10mL。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105911157SQ201610216595
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月8日
【發(fā)明人】焦揚(yáng), 楊亞玲, 趙嬌
【申請(qǐng)人】云南健牛生物科技有限公司