一種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素b1和b2的電化學(xué)免疫傳感器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和黃曲霉毒素B2的電化學(xué)免疫傳感器，屬于納米功能材料、生物傳感、絲網(wǎng)印刷和食品分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]黃曲霉毒素B1和黃曲霉毒素B2是食品污染中的一類主要污染物，可通過污染谷物及飼料進(jìn)入食物鏈，進(jìn)而污染肉、蛋、奶等動(dòng)物源性食品，進(jìn)入人體內(nèi)，通過對(duì)人和動(dòng)物機(jī)體內(nèi)DNA、RNA、蛋白質(zhì)和各種酶類的合成抑制以及對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞而引起中毒，甚至造成致癌、致畸、致突變等嚴(yán)重危害。
[0003]目前，黃曲霉毒素B1和B2的分析方法主要包括生物鑒定法、化學(xué)分析法(如薄層色譜法)、儀器分析法(如高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù))和免疫分析法(如酶聯(lián)免疫吸附法)等。但是，這些檢測(cè)方法存在檢測(cè)物單一、樣品前處理復(fù)雜、操作繁瑣、所需樣品用量大、耗時(shí)長等缺點(diǎn)，不能很好地滿足定量分析的需求。因此發(fā)展快速、簡便、靈敏的黃曲霉毒素B1和B2檢測(cè)手段顯得十分必要。
[0004]本實(shí)用新型涉及一種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2電化學(xué)免疫傳感器，使用雙通道絲網(wǎng)印刷電極制備的雙通道免疫傳感器可同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2，與其它檢測(cè)方法相比，具有靈敏度高，特異性好，成本低廉、快速方便和檢測(cè)效率高等優(yōu)勢(shì)，可實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素B1和B2的同時(shí)檢測(cè)。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005]本實(shí)用新型的技術(shù)方案是:
[0006]—種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，在聚對(duì)苯二甲酸二乙酯基底上依次印刷常溫固化導(dǎo)電銀膠制成電極連線和電極觸點(diǎn)；印刷導(dǎo)電碳油墨制成輔助電極；印刷比例為5:4:1導(dǎo)電油墨、石墨稀、金溶膠混合液(金-石墨稀導(dǎo)電油墨)制成兩個(gè)工作電極；印刷混合50%銀/氯化銀的導(dǎo)電油墨(導(dǎo)電銀油墨)制成參比電極；印刷絕緣漿料制成敏感池、絕緣層和電解池凹槽，制得雙通道絲網(wǎng)印刷電極；在其中的一個(gè)工作電極表面上，設(shè)有黃曲霉毒素B1抗體層，在另外一個(gè)工作電極表面上設(shè)有黃曲霉毒素B2抗體層；在兩個(gè)工作電極上分別滴加1%的牛血清白蛋白溶液，晾干，用超純水清洗，即制得同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2的電化學(xué)免疫傳感器；滴加待測(cè)樣品后，引出線端與電化學(xué)工作站連接，在電解池凹槽中加入對(duì)苯二酚溶液，即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。
[0007]本實(shí)用新型具備以下優(yōu)勢(shì):
[0008](1)本實(shí)用新型采用石墨烯、金溶膠，可顯著改善工作電極的導(dǎo)電能力，并能提高黃曲霉毒素B1和B2抗體固載量，提高了傳感器的靈敏度；
[0009](2)本實(shí)用新型傳感器利用抗原抗體的特異反應(yīng)，特異性好；
[0010](3)本實(shí)用新型傳感器檢測(cè)方法簡單、快速，易于推廣；
[0011](4)本實(shí)用新型制備的雙通道免疫傳感器，可實(shí)現(xiàn)對(duì)黃曲霉毒素B1和B2的快速同時(shí)測(cè)定，顯著提高了檢測(cè)效率。
【附圖說明】
[0012]圖1為雙通道絲網(wǎng)印刷電極六層網(wǎng)版的設(shè)計(jì)圖紙。
[0013]圖2為雙通道絲網(wǎng)印刷電極結(jié)構(gòu)圖。1、電極連線，2、電極觸點(diǎn)，3、輔助電極，4、工作電極，5、參比電極，6、敏感池，7、絕緣層，8、電解池凹槽。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)一步說明本實(shí)用新型。
[0015]實(shí)施例1雙通道絲網(wǎng)印刷電極的制備
[0016]結(jié)合附圖1和附圖2，進(jìn)行雙通道絲網(wǎng)印刷電極的制備，整個(gè)印刷電極在厚度為
0.5mm、長度為50mm、寬度為25mm的聚對(duì)苯二甲酸二乙酯板，制備步驟如下:
[0017](1)在PET基底上印刷常溫固化導(dǎo)電銀膠制成的電極連線1和電極觸點(diǎn)2 ;
[0018](2)印刷導(dǎo)電碳油墨制成輔助電極3 ；
[0019](3)印刷比例為5:4:1導(dǎo)電油墨、石墨烯、金溶膠混合液制成工作電極4 ;
[0020](4)印刷混合50%銀/氯化銀的導(dǎo)電油墨制成參比電極5 ；
[0021 ] (5 )印刷絕緣漿料制成敏感池6、絕緣層7和電解池凹槽8，制得雙通道絲網(wǎng)印刷電極。
[0022]實(shí)施例2同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2的電化學(xué)免疫傳感器的制備及應(yīng)用
[0023](1)取一片實(shí)施例1制備的雙通道絲網(wǎng)印刷電極，用超純水沖洗，去掉電極表面的其他物質(zhì)，在每個(gè)工作電極表面分別設(shè)置一層羧基化石墨烯，制成羧基化石墨烯層，常溫干燥；
[0024](2)在(1)制得的其中一個(gè)工作電極的羧基化石墨稀層上，滴涂ΙΟμ?，lOPg/mL的黃曲霉毒素B1抗體，4°C條件下晾干，制成黃曲霉毒素B1抗體層；
[0025](3)在(1)制得的另一個(gè)工作電極的羧基化石墨稀層上，滴涂10PL，10Pg/mL的黃曲霉毒素B2抗體，4°C條件下晾干，制成黃曲霉毒素B2抗體層；
[0026](4)在(2)和(3)制得的電極表面滴涂1%的牛血清白蛋白溶液，晾干后，用超純水清洗，制得雙通道免疫傳感器；
[0027](5)分別取ΙΟμ?樣品溶液滴涂于(4)制得雙通道免疫傳感器的工作電極上，保持電極濕潤2h ；
[0028](6)在電解池凹槽內(nèi)，加入150μ? pH為7.4的含有鐵氰化鉀的PBS緩沖溶液，利用方波伏安法，對(duì)樣品中黃曲霉毒素B1和B2進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，包括聚對(duì)苯二甲酸二乙酯基板上的1個(gè)導(dǎo)電碳油墨輔助電極(3)、2個(gè)金-石墨烯導(dǎo)電油墨工作電極(4)、1個(gè)導(dǎo)電銀油墨參比電極(5)，其中引出導(dǎo)電銀膠電極連線⑴與導(dǎo)電銀膠電極觸點(diǎn)⑵連接，電極區(qū)域設(shè)置有敏感池(6)和電解池凹槽(8)，周圍覆蓋有絕緣漿料制成的絕緣層(7);在其中的一個(gè)工作電極表面上，設(shè)有黃曲霉毒素B1抗體層和牛血清白蛋白層，在另外一個(gè)工作電極表面上設(shè)有黃曲霉毒素B2抗體層和牛血清白蛋白層；加入待測(cè)樣品后，引出線端與電化學(xué)工作站連接，在電解池凹槽中加入對(duì)苯二酚溶液，即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2的電化學(xué)免疫傳感器。在聚對(duì)苯二甲酸二乙酯基板上依次印刷引線１、觸點(diǎn)２、輔助電極３、兩個(gè)工作電極４、參比電極５，制得雙通道絲網(wǎng)印刷電極。然后在其工作電極上制備黃曲霉毒素B1和B2抗體層，制得同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和B2雙通道絲網(wǎng)印刷免疫傳感器。本傳感器成本低、檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、操作方便，適用于黃曲霉毒素B1和B2的快速同時(shí)測(cè)定。
【IPC分類】G01N33/558
【公開號(hào)】CN204989190
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520456127
【發(fā)明人】楊磊, 魏琴, 胡麗華, 龐雪輝, 吳丹, 杜斌, 張勇
【申請(qǐng)人】濟(jì)南大學(xué)
【公開日】2016年1月20日
【申請(qǐng)日】2015年6月30日