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一種瑞士乳桿菌的PCR快速檢測特異引物及方法與流程

文檔序號:12167875閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種瑞士乳桿菌的PCR快速檢測特異引物,所述引物為一對,上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.利用權(quán)利要求1所述PCR快速檢測特異引物PCR快速檢測瑞士乳桿菌的方法,步驟如下:

(1)提取待測樣品中的DNA,制得基因組DNA;

(2)以步驟(1)制得的基因組DNA為模板,利用權(quán)利要求1所述PCR快速檢測特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,制得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;

(3)將步驟(2)制得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,當(dāng)結(jié)果中存在一條分子量為538bp的核酸條帶,則檢測樣品含有瑞士乳桿菌;當(dāng)結(jié)果中不存在分子量為538bp的核酸條帶,則檢測樣品中不含有瑞士乳桿菌。

3.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟(2)中,PCR擴(kuò)增體系如下,體系總體積為25μl:

基因組DNA2μl;10×PCR Buffer 2.5μl;Mg2+濃度1.5mmol/L;Taq酶1U;dNTP濃度0.1mmol/L;上游引物10pmol;下游引物10pmol;ddH2O補(bǔ)加至25μl。

4.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟(2)中,PCR擴(kuò)增程序如下:

95℃預(yù)變性5min;95℃變性30sec,53℃退火30s,72℃延伸40sec,35個循環(huán);72℃終延伸5min。

5.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,采用質(zhì)量百分比為1.5%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,PCR上樣緩沖液濃度為10×。

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