專利名稱：唾液乳桿菌及其代謝物的制備方法和組合物以及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)及代謝物制備方法和組合物以及治療和/或預(yù)防癌癥的方法，具體地，涉及一種唾液乳桿菌、一種唾液乳桿菌的代謝物的制備方法、一種組合物和所述的唾液乳桿菌的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
唾液乳桿菌為革蘭氏染色陽性的無芽孢桿菌，廣泛分布于含有碳水化合物的動植物發(fā)酵產(chǎn)品中，也見于溫血?jiǎng)游锏目谇弧㈥幍篮湍c道內(nèi)，在植物體表、乳制品、肉制品、啤酒、葡萄酒、果汁、麥芽汁、發(fā)酵面團(tuán)、污水以及人畜糞便中，均可分離到。該菌分解糖的能力較強(qiáng)，分解蛋白質(zhì)類的能力較低。一些如泡菜、腌菜、酒和酸奶食品生產(chǎn)過程中廣泛用到該菌。CN 101538545A公開了唾液乳桿菌的一種菌株，以及包含該菌株的食品組合物，并且公開了該菌株能夠刺激免疫并具有92. 91%的體外脫除4-硝基喹啉-I-氧化物(4-NQ0)的基因毒性的能力。但實(shí)驗(yàn)證明，該菌株在體內(nèi)脫除4-NQ0的基因毒性較低。

發(fā)明內(nèi)容
為了進(jìn)一步在體內(nèi)脫除4-NQ0的基因毒性，本發(fā)明的發(fā)明人篩選到特定的一株唾液乳桿菌的菌株，實(shí)驗(yàn)證明該菌株具有較高的體內(nèi)脫除4-NQ0的基因毒性的能力，由此得到本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種唾液乳桿菌，該唾液乳桿菌屬于唾液乳桿菌唾液亞種(Lactobacillus salivarius subsp. Salivarius),于 2010 年 I 月 22 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO 3606o本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述唾液乳桿菌的代謝物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述唾液乳桿菌的代謝物的制備方法，所述唾液乳桿菌為如上所述的唾液乳桿菌，該方法包括在能使所述唾液乳桿菌存活的條件下，使所述唾液乳桿菌的活菌體與液相介質(zhì)接觸，得到接觸后的產(chǎn)物，并且分離接觸后的產(chǎn)物中的液相產(chǎn)物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，該組合物含有如上所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或如上所述的方法制備的唾液乳桿菌的代謝物作為活性成分。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述唾液乳桿菌在制備用于預(yù)防和/或治療癌癥的藥物或功能食品中的應(yīng)用，所述藥物或功能食品含有如上所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或如上所述的唾液乳桿菌的代謝物作為活性成分。本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括使用如上所述的組合物制備預(yù)防和/或治療癌癥的制劑，并將所述制劑施用于有需要的對象。本發(fā)明提供的唾液乳桿菌能夠經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生大量活菌體，也能夠通過新陳代謝活動產(chǎn)生代謝物。所述唾液乳桿菌的活菌體和所述唾液乳桿菌的代謝物均能在體內(nèi)脫除4-NQ0的基因毒性。并且含有唾液乳桿菌的活菌體和/或所述唾液乳桿菌的代謝物的組合物能夠有效地起到預(yù)防和/或治療癌癥的作用，特別是能夠有效地起到預(yù)防和/或治療消化道癌癥的作用。 本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式
部分予以詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式以下對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式
僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。為了進(jìn)一步在體內(nèi)脫除4-NQ0的基因毒性，本發(fā)明提供了一種唾液乳桿菌，該唾液乳桿菌是該唾液乳桿菌屬于唾液乳桿菌唾液亞種(Lactobacillussalivarius subsp.Salivarius)，于2010年I月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO 3606o本發(fā)明提供的唾液乳桿菌能夠經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生大量唾液乳桿菌的活菌體，所述培養(yǎng)的方法沒有特別的要求，只要是能使所述唾液乳桿菌增殖即可，例如可以將IO7量級的菌株接種于乳桿菌培養(yǎng)基，并且在厭氧或好氧條件下，在15-38°c的溫度下培養(yǎng)8-72小時(shí)后，得到培養(yǎng)液。所述乳桿菌培養(yǎng)基可以為公知的各種適合乳桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基，例如可以為乳汁和/或《乳酸菌一生物學(xué)基礎(chǔ)及應(yīng)用》(楊潔彬，輕工業(yè)出版社，1996年出版)中所述的乳酸菌(MRS)培養(yǎng)基。本發(fā)明可以進(jìn)一步分離上述培養(yǎng)液中的唾液乳桿菌的活菌體，所述分離的方法沒有特別的限制，只要是能從培養(yǎng)液中富集菌體即可，例如可以通過離心和/或過濾的方法實(shí)現(xiàn)，所述離心和所述過濾的條件可以為公知的條件，本發(fā)明在此不再贅述。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述唾液乳桿菌的代謝物。其中，所述的“代謝物”的概念是指所述唾液乳桿菌通過新陳代謝活動產(chǎn)生的物質(zhì)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述唾液乳桿菌的代謝物的制備方法，所述唾液乳桿菌可以為如上所述的唾液乳桿菌，該方法可以包括在能使所述唾液乳桿菌存活的條件下，使所述唾液乳桿菌的活菌體與液相介質(zhì)接觸，得到接觸后的產(chǎn)物，并且分離接觸后的產(chǎn)物中的液相產(chǎn)物。其中，能使所述唾液乳桿菌存活的條件沒有特別的要求，只要是能使所述唾液乳桿菌維持生命活動即可，例如《乳酸菌——生物學(xué)基礎(chǔ)及應(yīng)用》(楊潔彬，輕工業(yè)出版社，1996年出版)中所述的條件。其中，所述唾液乳桿菌的活菌體與所述液相介質(zhì)之間的用量比沒有特別的要求，可以是獲得活菌體代謝物常用的選擇，為了獲得較多的代謝物，優(yōu)選情況下，相對于IO6CFU的所述唾液乳桿菌的活菌體，液相介質(zhì)的用量為O. 5-100ml，進(jìn)一步優(yōu)選為l-10ml。其中，所述接觸的接觸時(shí)間沒有特別的要求，只要是能讓活菌體的代謝物分散于所述液相介質(zhì)中即可，為了獲得較多的代謝物，優(yōu)選情況下，所述接觸的接觸時(shí)間為O. 3-10小時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為1-5小時(shí)。其中，所述液相介質(zhì)選擇沒有特殊要求，只要是能使得活菌體維持產(chǎn)生代謝物的活動并能分散代謝物即可，為了獲得較多的代謝物，優(yōu)選情況下所述液相介質(zhì)為水、生理鹽水和磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中的一種或多種。為了避免鹽離子對代謝物的生物活性的影響，進(jìn)一步優(yōu)選所述液相介質(zhì)為水。所述生理鹽水和磷酸鹽緩沖溶液的組成已為本領(lǐng)域公知，本發(fā)明在此不再贅述。
所述液相產(chǎn)物可以直接作為唾液乳桿菌的代謝物，也可以將所述液相產(chǎn)物濃縮或干燥后得到的產(chǎn)物作為唾液乳桿菌的代謝物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，該組合物含有如上所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或如上所述的方法制備的唾液乳桿菌的代謝物作為活性成分。其中，以所組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的活菌體的含量可以為
105-1010CFU/g,進(jìn)一步優(yōu)選為106-109CFU/g。其中，以所組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的代謝物中的干物質(zhì)的重量計(jì)算，所述唾液乳桿菌的代謝物的含量為O. 1-99. 9重量％，進(jìn)一步優(yōu)選為1-99重量％，更進(jìn)一步優(yōu)選為10-90重量％。本發(fā)明中，干物質(zhì)是指有機(jī)體在10°C -90°C的恒溫下，充分干燥，余下的物質(zhì)的重量。符合上述要求的組合物可以包括所述唾液乳桿菌的培養(yǎng)液(例如經(jīng)該唾液乳桿菌發(fā)酵制得的發(fā)酵乳制品)、分離的所述唾液乳桿菌的活菌體、使所述唾液乳桿菌的活菌體與所述液相介質(zhì)接觸后的產(chǎn)物、去除接觸后的產(chǎn)物中的固相物質(zhì)得到的液相產(chǎn)物以及將所述液相產(chǎn)物進(jìn)一步濃縮或干燥后得到的濃縮產(chǎn)物或干燥產(chǎn)物中的一種或多種。所述組合物可以為功能食品組合物，該功能食品組合物含有作為活性成分的所述唾液乳桿菌的活菌體和/或所述唾液乳桿菌的代謝物和食物。一般地，以所組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的活菌體的含量可以為105-101(lCFU/g，進(jìn)一步優(yōu)選為
106-109CFU/g;和/或，以所述組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的代謝物中的干物質(zhì)的重量計(jì)算，所述唾液乳桿菌的代謝物的含量為O. 1-99. 9重量進(jìn)一步優(yōu)選為1-99重量％，更進(jìn)一步優(yōu)選為10-90重量％。所述食物可以是任意類型的食物，例如果汁制品、乳制品、豆制品等。所述功能食品組合物中還可以含有常規(guī)的添加劑，例如香料、礦物質(zhì)、維生素、穩(wěn)定劑、增稠劑、防腐劑等。所述組合物可以為藥物，該藥物含有作為活性成分的所述唾液乳桿菌的活菌體和/或所述唾液乳桿菌的代謝物和藥學(xué)可接受的佐劑。該藥物可以為常規(guī)的各種劑型，例如普通片劑或糖包衣片劑、丸劑、錠劑、膠囊劑、滴劑、顆粒劑、軟膏劑、乳膏或凝膠劑。可以根據(jù)所要配制的劑型，選擇合適的佐劑的種類?？梢愿鶕?jù)所述唾液乳桿菌的活菌體和/或所述唾液乳桿菌的代謝物的有效量來設(shè)定其在藥品中的含量。所述唾液乳桿菌的活菌體和/或所述唾液乳桿菌的代謝物的有效量根據(jù)服用者的年齡和身體狀況而不同，優(yōu)選的范圍包括對所述唾液乳桿菌的活菌體而言，為IO5-IO12CFU/千克體重·天；對所述唾液乳桿菌的代謝物的有效量而言，以所述唾液乳桿菌的代謝物的干物質(zhì)的量計(jì)，為IO-IOOOOmg/千克體重·天。一般地，以所組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的活菌體的含量可以為105-101QCFU/g，進(jìn)一步優(yōu)選為106-109CFU/g ;和/或，以所述組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的代謝物中的干物質(zhì)的重量計(jì)算，所述唾液乳桿菌的代謝物的含量為O. 1-99. 9重量％，進(jìn)一步優(yōu)選為1-99重量％,更進(jìn)一步優(yōu)選為10-90重量％。本發(fā)明提供的上述組合物可以用于制備用于預(yù)防和/或治療癌癥的藥物或功能食品。本發(fā)明提供的上述組合物可以用于制備預(yù)防癌癥的功能食品，也可以用于制備預(yù)防和/或治療癌癥的藥物。
其中，所述藥物或功能食品含有如上所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或如上所述的唾液乳桿菌的代謝物作為活性成分本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括使用如上所述的組合物制備預(yù)防和/或治療癌癥的制劑，并將所述制劑施用于有需要的對象。其中，所述癌癥可以為消化道癌，例如口腔癌、食管癌、胃癌和腸癌等。
其中，所述施用的方法可以為口服或經(jīng)肛門給予。本發(fā)明中，液體和氣體的體積均為標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的體積。以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例I本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的唾液乳桿菌的活菌體。將唾液乳桿菌菌株用無菌接種環(huán)接種于IOL乳桿菌培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基，購自上海滬峰生物科技有限公司)，并且在厭氧條件下，在37°C的溫度下培養(yǎng)12小時(shí)后，得到培養(yǎng)液。將得到的培養(yǎng)液在4000g的速度下離心10分鐘后棄去上清，得到唾液乳桿菌的活菌體。實(shí)施例2本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的唾液乳桿菌的代謝物的制備方法。將實(shí)施例I得到的唾液乳桿菌的活菌體IO13CFU分散于2L去離子水中，在37°C下保持2小時(shí)后在4000g的速度下離心10分鐘，分離得到的離心后的產(chǎn)物中的上清液。該上清液即為唾液乳桿菌的代謝物(干物質(zhì)的含量為O. 1% )。對比例I按照實(shí)施例I相同的方法制備唾液乳桿菌的活菌體，不同的是所用的菌株為CN101538545A公開的菌株。測試?yán)齀本測試?yán)郎y試實(shí)施例I和對比例I獲得的活菌體和實(shí)施例2獲得的代謝物在體內(nèi)的脫除4-NQ0的基因毒性的能力。將FD334大鼠(體重180_220g，購自北京維通利華公司)分為6組(每組15只)，按表I所示的方案配制的飲用水喂養(yǎng)7周，其中，4-NQ0購自西格瑪公司，然后繼續(xù)正常飼養(yǎng) 25 周后觀察口腔癌的發(fā)生率(按 WHOCollaborating Centre for Oral PrecancerousLesions, Definition ofleukoplakia and related lesions An aid to studies onoralprecancer. Leukoplakia and related lesions. 46 (4) :518-539. 1976.中描述的方法判斷是否發(fā)生口腔癌)，結(jié)果列于表I。表I
權(quán)利要求
1.一種唾液乳桿菌，該唾液乳桿菌屬于唾液乳桿菌唾液亞種(LactobaciIIussalivarius subsp. Salivarius),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO :3606。
2.權(quán)利要求I所述的唾液乳桿菌的代謝物。
3.權(quán)利要求2所述的唾液乳桿菌的代謝物的制備方法，該方法包括在能使所述唾液乳桿菌存活的條件下，使所述唾液乳桿菌的活菌體與液相介質(zhì)接觸，得到接觸后的產(chǎn)物，并且分離接觸后的產(chǎn)物中的液相產(chǎn)物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，相對于IO6CFU的活菌體，所述液相介質(zhì)的用量為0.5-100ml，所述接觸的接觸時(shí)間為0. 3-10小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其中，所述液相介質(zhì)為水、生理鹽水和磷酸鹽緩沖液中的一種或多種。
6.一種組合物，該組合物含有權(quán)利要求I所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或權(quán)利要求2所述的唾液乳桿菌的代謝物作為活性成分。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中，以所組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的活菌體的含量為105-101(lCFU/g ;和/或 以所組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述唾液乳桿菌的代謝物中的干物質(zhì)的重量計(jì)算，所述唾液乳桿菌的代謝物的含量為0. 1-99. 9重量％。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的組合物，其中，該組合物為功能食品組合物，該食品組合物還含有食物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或I所述的組合物，其中，該組合物為藥物組合物，該藥物組合物還含有藥學(xué)可接受的佐劑。
10.權(quán)利要求I所述的唾液乳桿菌在制備用于預(yù)防和/或治療癌癥的藥物或功能食品中的應(yīng)用，所述藥物或功能食品含有權(quán)利要求I所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或權(quán)利要求2所述的唾液乳桿菌的代謝物作為活性成分。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種唾液乳桿菌，該唾液乳桿菌屬于唾液乳桿菌唾液亞種(Lactobacillus salivarius subsp.Salivarius)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO3606。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述唾液乳桿菌的代謝物的制備方法，所述唾液乳桿菌為如上所述的唾液乳桿菌。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，該組合物含有如上所述的唾液乳桿菌的活菌體和/或如上所述的方法制備的唾液乳桿菌的代謝物。本發(fā)明還提供了所述組合物在制備用于預(yù)防和/或治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的唾液乳桿菌的活菌體和唾液乳桿菌的代謝物均能在體內(nèi)脫除4-NQO的基因毒性，從而起到有效地預(yù)防和/或治療癌癥的作用。
文檔編號A61K35/74GK102618452SQ201110034420
公開日2012年8月1日 申請日期2011年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月1日
發(fā)明者任發(fā)政, 姜鷺, 張明, 朱郡, 王芳, 郭慧媛 申請人:任發(fā)政