專利名稱：登革熱病毒中和抗體及其用途的制作方法
登革熱病毒中和抗體及其用途本申請(qǐng)要求2008年10月13日提交的申請(qǐng)?zhí)枮镹o. 61/104，911，發(fā)明名稱為“登革熱病毒中禾口抗體及其用途(Dengue virus neutralizing antibodies and Use Thereof)，， 的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
登革熱病毒(DENV)是嚴(yán)重威脅世界健康的人類病原體。估計(jì)這些病毒每年引起數(shù)十萬(wàn)例的登革熱、登革出血熱和登革熱休克綜合征。黃病毒屬有四種密切相關(guān)的登革熱病毒血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4。這四種病毒通過(guò)埃及伊蚊(Aedes aegypti)——一種高度城市化的、成功抵抗所有試圖對(duì)其進(jìn)行殺滅和控制努力的蚊子—— 叮咬而在人與人之間傳播。免疫接種被認(rèn)為是控制登革熱的唯一有效方法。為此，一些四價(jià)登革熱候選疫苗已處于研發(fā)的最后階段。
首次感染一種登革熱病毒血清型可誘導(dǎo)針對(duì)同源血清型的終生免疫。不過(guò)，這對(duì)不同血清型的感染沒(méi)有交叉保護(hù)作用。實(shí)際上，由于存在抗體依賴性感染增強(qiáng)作用(ADE)， 針對(duì)一種血清型的已有的免疫力可增加不同血清型引起的登革熱感染和登革出血熱的風(fēng)險(xiǎn)。在ADE中，因先前登革熱感染或由母親被動(dòng)轉(zhuǎn)移來(lái)的抗體會(huì)形成感染性免疫復(fù)合物，后者結(jié)合攜帶Fc-受體的單核巨噬細(xì)胞系中的細(xì)胞，導(dǎo)致有效感染。
因此，目前需要能夠預(yù)防登革熱病毒感染而不增加抗體依賴性感染增強(qiáng)作用的風(fēng)險(xiǎn)的材料和方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明部分基于發(fā)現(xiàn)了中和登革熱病毒感染而不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用的抗體和抗體混合物(cocktails)。因此，在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種人抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段，其中和登革熱病毒，其中所述抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包含人抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段，其中和登革熱病毒，其中所述抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段的Fc區(qū)包含突變，且其中所述突變降低抗體與Fc受體的結(jié)合。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，本發(fā)明包含藥物組合物，其包含兩種或更多種人抗體或其抗原結(jié)合片段。所述抗體或抗原結(jié)合片段通過(guò)結(jié)合每一登革熱病毒血清型的至少兩種不同的表位而中和登革熱病毒血清型DENV-l、DENV-2、DENV-3和DENV-4。所述藥物組合物的抗體不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明包含一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一種具有以下任一序列的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)序列SEQ ID NO :1-6、17-22、33-38、49-54、67-72、 83-88、99、100、105-110、121-123、124、125、135-139、149、153-158、169-174、185-188 或 189，其中所述抗體中和登革熱病毒感染。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明包含一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含具有氨基酸序列SEQ ID NO: 13的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO: 14的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 30的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 45的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 46的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 61的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 62的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 65的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 62的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 79的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 80的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 95的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 96的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 95的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 103的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :117 的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO :118的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 131的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO :132的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列 SEQ ID NO 145的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO :146的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 151的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO :146的輕鏈可變區(qū)； 或具有氨基酸序列SEQ ID NO :165的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO :166的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :181的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 182的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :195的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 196的輕鏈可變區(qū)，其中所述抗體中和登革熱病毒感染。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明包含重組抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段，其能中和登革熱病毒。所述重組抗體、抗體變體或抗原結(jié)合片段不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。
在另一方面，本發(fā)明包含核酸分子，其包含編碼中和登革熱病毒感染的本發(fā)明的抗體或抗體片段的多核苷酸。在另一方面，本發(fā)明包含表達(dá)本發(fā)明的抗體的細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明包含一種分離或純化的免疫原性多肽，其包含結(jié)合本發(fā)明的抗體的表位。
本發(fā)明還包含藥物組合物，其包含本發(fā)明的抗體、抗體變體或抗原結(jié)合片段、本發(fā)明的核酸或本發(fā)明的免疫原性多肽，以及藥用可接受的稀釋劑或載體和任選存在的用于延長(zhǎng)所述抗體或其抗原結(jié)合片段的半衰期的物質(zhì)(agent)。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供抑制或預(yù)防登革熱病毒感染或登革熱病毒相關(guān)疾病的方法或治療登革熱病毒感染或登革熱病毒相關(guān)疾病的方法。所述方法包括給有需要的對(duì)象施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的抗體、抗體變體、抗原結(jié)合片段或藥物組合物。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明包含篩選能夠誘導(dǎo)或揭示針對(duì)登革熱病毒的免疫應(yīng)答的多肽的方法，包括使用本發(fā)明的抗體、抗體片段或變體篩選多肽文庫(kù)。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明包含監(jiān)測(cè)抗登革熱病毒疫苗的質(zhì)量的方法。所述方法包括使用本發(fā)明的抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段來(lái)核實(shí)所述疫苗的抗原含有具有正確構(gòu)象的特異性表位。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明包含疫苗，其包含特異性結(jié)合本發(fā)明的抗體、抗體片段或變體的表位。
本發(fā)明也包括本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、本發(fā)明的核酸、本發(fā)明的免疫原性多肽或本發(fā)明的藥物組合物用于(i)制備治療登革熱病毒感染的藥物，(ii)疫苗或 (iii)診斷登革熱病毒感染中的用途。此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段用于通過(guò)核實(shí)疫苗的抗原含有具有正確構(gòu)象的特異性表位而監(jiān)測(cè)抗DENV疫苗的質(zhì)量的用途。
在另一方面，本發(fā)明包含表位，其特異性結(jié)合本發(fā)明的任一抗體或其抗原結(jié)合片段，所述表位用于(i)治療，( )制備治療登革熱病毒感染的藥物，(iii)作為疫苗或(iv) 篩選能夠中和登革熱病毒感染的配體。


圖1 使用野生型抗登革熱病毒抗體以各血清型登革熱病毒在VERO細(xì)胞和K562 細(xì)胞上進(jìn)行病毒中和和增強(qiáng)測(cè)試。登革熱病毒抗體以劑量依賴性方式抑制靶病毒對(duì)VERO 細(xì)胞的感染。對(duì)于K562細(xì)胞，抗體導(dǎo)致劑量依賴性感染增強(qiáng)作用(ADE)。
圖2 重鏈中具有CH2 L4A和L5A取代的抗登革熱病毒抗體(LALA變體)與非修飾的抗體一樣中和靶病毒對(duì)VERO細(xì)胞的感染。但是LALA變體完全消除靶病毒對(duì)K562細(xì)胞的抗體依賴性感染增強(qiáng)作用。
發(fā)明詳述 本發(fā)明基于發(fā)現(xiàn)了中和登革熱病毒(DENV)感染而不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用(ADE)的抗體和抗體混合物。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明包含人抗體、變體抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和登革熱病毒而不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。所述抗體或抗體片段能夠中和一種以上登革熱病毒血清型，例如，登革熱病毒血清型 DENV-1、DENV-2、DENV-3 和 DENV-4 的 2 種、3 種或全部 4 種。
本發(fā)明還包含藥物組合物，其包含，例如，包含兩種或更多種人抗體、抗體變體或其抗原結(jié)合片段的抗體混合物。本發(fā)明的包含人抗體、抗體片段或變體混合物的藥物組合物中和全部四種登革熱病毒血清型，即DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗體、抗體片段或變體的混合物通過(guò)結(jié)合各登革熱病毒血清型的至少兩種不同的表位而中和登革熱病毒。要注意到是，藥物組合物中的抗體、變體貨物片段不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述混合物包含兩種抗體、或其片段或變體。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述混合物包含三種抗體、或其片段或變體。在另一實(shí)施方式中，所述混合物包含三種以上抗體，例如，4、5、6、7或8種抗體。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“片段”、“抗體片段”和“抗原結(jié)合片段”可互換地使用，指的是本發(fā)明抗體的保持所述抗體的抗原結(jié)合活性的任何片段。示例性抗體片段包括但不限于Fab、 Fab，、F(ab' ) 2、Fv 和 scFv 片段。
術(shù)語(yǔ)“突變”和“取代”可互換地使用，指的是一或多個(gè)核酸或氨基酸殘基的改變。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“變體”和“抗體變體”可互換地使用，指的是本發(fā)明抗體的保持所述抗體的抗原結(jié)合活性的任何變體。術(shù)語(yǔ)變體包括那些包含突變和/或取代的抗體。示例性抗體變體包括但不限于那些在位置CH2 4、5或兩者處具有L取代為A的變體。
本發(fā)明的抗體 本發(fā)明提供抗體，所述抗體中和登革熱病毒，但不引起登革熱病毒感染的ADE?！爸泻涂贵w”是能夠中和病原體在宿主體內(nèi)引發(fā)感染和/或使感染持續(xù)存在的能力的抗體。本發(fā)明的抗體能夠中和一或多種登革熱病毒血清型DENV-l、DENV-2、DENV-3和DENV-4。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體中和一種以上，例如，2、3或全部4種登革熱病毒血清型。在另一個(gè)實(shí)施方式中，包含兩種或更多種抗體、抗體片段或變體的藥物組合物可中和全部4種登革熱病毒血清型。在另一實(shí)施方式中，所述包含兩種或更多種抗體、抗體片段或變體的藥物組合物通過(guò)靶向每一登革熱病毒血清型的兩種不同表位而中和登革熱病毒感染。這些抗體、抗原結(jié)合片段和變體，如本文所述，經(jīng)適當(dāng)配制后可用作預(yù)防劑或治療劑或用作診斷工具。
本發(fā)明的抗體可以是單克隆的，例如，人單克隆抗體或重組抗體。本發(fā)明還提供本發(fā)明的抗體的片段，特別是那些保持所述抗體的抗原結(jié)合活性的片段。盡管說(shuō)明書中，包括權(quán)利要求書中，在某些部分可能明確提到抗體片段、變體和/或抗體衍生物，但要理解，術(shù)語(yǔ)“抗體”或“本發(fā)明的抗體”包括抗體的所有范疇，即，抗體片段、抗體變體和抗體衍生物。
無(wú)意于受到任何理論的限制，認(rèn)為抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用是由抗體的Fc區(qū)，特別是IgG分子的重鏈Fc區(qū)與宿主細(xì)胞的Fc受體(例如，F(xiàn)c γ受體)的結(jié)合引起的。而本發(fā)明則提供這樣的抗體，包括IgG分子，它們與Fc受體(FcR)的結(jié)合是降低的。 在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體的Fc區(qū)包含一或多個(gè)突變。所述突變可以是任何降低抗體與Fc受體結(jié)合的突變。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體的Fc區(qū)包含在位置Ο 4、 5或兩者處的取代。通常，野生型IgGl和IgG3的CH2的位置4和5處的氨基酸是亮氨酸 (“L”)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體在位置Cffi4、5或兩者處包含不是的L的氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體在位置Ο 4或5或兩者處包含丙氨酸(“Α”)。包含CH2L4A和L5A取代的抗體在本文中稱為“LALA”變體。
或者，本發(fā)明提供不具有Fc區(qū)的抗體片段，因此它們不結(jié)合FcR。示例性抗體片段包括但不限于 Fab、Fab，、F (ab' )2、Fv 和 scFv。
本發(fā)明的一些示例性抗體(每種抗體均包含三個(gè)重鏈⑶R和三個(gè)輕鏈OTR)的重鏈和輕鏈序列已經(jīng)確定。根據(jù)IMGT編號(hào)系統(tǒng)[1，2，3]對(duì)⑶R氨基酸的位置進(jìn)行定義。序列表中給出了本發(fā)明的多種示例性抗體的⑶R、重鏈、輕鏈的序列以及編碼所述⑶R、重鏈、 輕鏈的核酸分子的序列。表1分別給出了本發(fā)明的示例性抗體的6個(gè)CDR、重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的SEQ ID NO。表2給出了編碼本發(fā)明的示例性抗體的CDR、重鏈和輕鏈的核酸分子的序列的SEQ ID NO。
表1 抗體⑶R、重鏈和輕鏈的氨基酸SEQ ID
權(quán)利要求
1.一種人抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和登革熱病毒，其中所述抗體不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。
2.一種人抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和登革熱病毒，其中所述抗體的Fc區(qū)包含突變，且其中所述突變降低所述抗體與Fc受體的結(jié)合。
3.權(quán)利要求1或2的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體的Fc區(qū)包含CH2L4A突變、CH2 L5A突變或兩者。
4.權(quán)利要求1或2的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體或重組抗體。
5.權(quán)利要求1或2的抗體，其中所述抗體中和兩種、三種或四種登革熱病毒血清型中的一種以上登革熱病毒。
6.一種藥物組合物，其包含兩種或更多種人抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段通過(guò)結(jié)合每一登革熱病毒血清型的至少兩種不同的表位而中和登革熱病毒血清型DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4，且其中所述抗體不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用。
7.權(quán)利要求6的組合物，其包含三種或更多種中和登革熱病毒血清型DENV-l、DENV-2、 DENV-3和DENV-4的人抗體或其抗原結(jié)合片段。
8.權(quán)利要求6的組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段中的每一個(gè)均在Fc區(qū)包含突變，所述突變降低所述抗體與Fc受體的結(jié)合。
9.權(quán)利要求6的組合物，其中每一所述抗體或其抗原結(jié)合片段的Fc區(qū)包含CH2L4A突變、CH2 L5A突變或兩者。
10.權(quán)利要求6的組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體或重組抗體。
11.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一種具有以下任一序列的互補(bǔ)決定區(qū) (CDR)序列=SEQ ID NO :1-6、17-22、33-38、49-54、67-72、83-88、99、100、105-110、121-123、 124、125、135-139、149、153-158、169-174、185-188 或 189，其中所述抗體中和登革熱病毒感染。
12.權(quán)利要求1、2或11的抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自以下一組中的重鏈 CDRl =SEQ ID NO :1、17、33、49、67、83、105、121、135、149、153、169 和 185 ；選自以下一組中的重鏈 CDR2 =SEQ ID NO :2、18、34、50、68、84、106、122、136、154、170 和 186 ；和選自以下一組中的重鏈 CDR3 =SEQ ID NO :3、19、35、51、69、85、107、123、137、155、171 和 187，其中所述抗體中和登革熱病毒感染。
13.權(quán)利要求1、2或11的抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自以下一組中的輕鏈 CDRl =SEQ ID NO :4、20、36、52、70、86、99、108、138、156、172 和 188 ；選自以下一組中的輕鏈 CDR2 =SEQ ID NO :5、21、37、53、71、87、109、124、157和 173 ；和選自以下一組中的輕鏈CDR3 SEQ ID NO :6、22、38、54、72、88、100、110、125、139、158、174 和 189，其中所述抗體中和登革熱病毒感染。
14.權(quán)利要求12的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體包含重鏈，所述重鏈具有序列為 SEQ ID NO :1 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO :2 的 CDRH2、序列為 SEQ ID NO :3 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 17 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO 18 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :19 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 33 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO :34 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO 35 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 49 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO 50 的 CDRH2 和序列為SEQ ID NO :51 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 67 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO 68 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO 69 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 83 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO 84 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :85 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO :105 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO 106 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :107 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO :121 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO 122 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :123 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO :135 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO :136 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :137 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 149 的 CDRH1、序列為 SEQ ID NO :136 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :137 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO 153 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO :154 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO :155 的 CDRH3 ；序列為 SEQ ID NO :169 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO :170 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO 171 的 CDRH3 ；和序列為 SEQ ID NO :185 的 CDRHl、序列為 SEQ ID NO :186 的 CDRH2 和序列為 SEQ ID NO 187 的 CDRH3。
15.權(quán)利要求13的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體包含輕鏈，所述輕鏈具有序列為 SEQ ID NO 4 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 5 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 6 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 20 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :21 的 CDRL2、序列為 SEQ ID N0:22 的 CDRL3; 序列為 SEQ ID NO 36 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :37 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :38 的 CDRL3;序列為 SEQ ID NO 52 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :53 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO: 54 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :70 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :71 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :72 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :86 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :87 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 88 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 99 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 53 的 CDRL2、 序列為 SEQ ID NO 100 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :108 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :109 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :110 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 70 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 124 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :125 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :138 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :109 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 139 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :156 的 CDRL1、序列為 SEQ ID NO 157 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 158 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 172 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :173 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :174 的 CDRL3 ；和序列為 SEQ ID NO :188 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :37 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :189 的 CDRL3。
16.權(quán)利要求14的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體包含輕鏈，所述輕鏈具有序列為 SEQ ID NO 4 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 5 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 6 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 20 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 21 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 22 的 CDRL3 ； 序列為 SEQ ID NO 36 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 37 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 38 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 52 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 53 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 54 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 70 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :71 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 72 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 86 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 87 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 88 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 99 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 53 的 CDRL2、 序列為 SEQ ID NO 100 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :108 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :109 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :110 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 70 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO 124 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :125 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :138 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :109 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 139 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO :156 的CDRL1、序列為 SEQ ID NO 157 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO 158 的 CDRL3 ；序列為 SEQ ID NO 172 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :173 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :174 的 CDRL3 ；和序列為 SEQ ID NO :188 的 CDRLl、序列為 SEQ ID NO :37 的 CDRL2、序列為 SEQ ID NO :189 的 CDRL3。
17.權(quán)利要求1、2或11的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)與以下任一序列具有至少70%的序列相同性=SEQ ID NO :13、29、45、61、65、79、95、117、131、145、151、165、181或 195。
18.權(quán)利要求1、2或11的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)與以下任一序列具有至少70%的序列相同性=SEQ ID NO :14、30、46、62、80、96、103、118、132、146、166、182或 196。
19.權(quán)利要求1、2或11的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)具有以下任一氨基酸序列:SEQ ID NO :13、29、45、61、65、79、95、117、131、145、 151、165、181或195，且其中所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)具有以下任一氨基酸序列SEQ ID NO :14、30、46、62、80、96、103、118、132、146、166、182 或 196。
20.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含具有氨基酸序列SEQ ID N0:13的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO: 14的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 30的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 45的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 46的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 61的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 62的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 65的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 62的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :79的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID N0:80的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 95的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 96的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO 95的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 103的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :117的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 118的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :131的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 132的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :145的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 146的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :151的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 146的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :165 的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO :166的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列SEQ ID NO :181的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 182的輕鏈可變區(qū)；或具有氨基酸序列 SEQ ID NO :195的重鏈可變區(qū)和具有氨基酸序列SEQ ID NO 196的輕鏈可變區(qū)，其中所述抗體中和登革熱病毒感染。
21.權(quán)利要求1、2、6或11的抗體，其中所述抗體選自HMB-DV1、HMB-DV2、HMB-DV3、 HMB-DV4、HMB-DV5、HMB-DV6、HMB-DV7、HMB-DV8、HMB-DV9、HMB-DVlO, HMB-DVlU HMB-DVl2, HMB-DV13 和 HMB-DV14。
22.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是單克隆抗體、單鏈抗體、Fab、Fab，、F (ab' )2、FvjlKscFv0
23.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其與前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的抗體結(jié)合相同的表位，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段中和登革熱病毒感染。
24.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其與前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段中和登革熱病毒感染。
25.一種核酸分子，其包含編碼前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段的多核苷酸。
26.權(quán)利要求25的核酸分子，其中所述多核苷酸序列與以下核酸序列具有至少70%的相同性:SEQ ID NO :7-12、15、16、23-28、31、32、39-44、47、48、55-60、63、64、66、73-78、81、 82、89-94、97、98、101、102、104、111-116、119、120、126-128、129、130、133、134、140-143、 144、147、148、150、152159-164、167、168、175-180、183、184、190-193、194、197 和 198。
27.一種細(xì)胞，其表達(dá)權(quán)利要求I-M任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段。
28.一種永生化B細(xì)胞克隆，其表達(dá)權(quán)利要求I-M任一項(xiàng)的抗體。
29.一種分離或純化的免疫原性多肽，其包含結(jié)合權(quán)利要求I-M任一項(xiàng)的抗體的表位。
30.一種免疫原性多肽，其包含權(quán)利要求四的表位。
31.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-5或1114任一項(xiàng)的至少一種抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25或沈的核酸或權(quán)利要求30的免疫原性多肽，以及藥用可接受的稀釋劑或載體和任選存在的用于延長(zhǎng)所述抗體或其抗原結(jié)合片段的半衰期的物質(zhì)。
32.權(quán)利要求6-10任一項(xiàng)的藥物組合物，還包含藥用可接受的稀釋劑或載體和任選存在的用于延長(zhǎng)所述抗體或其抗原結(jié)合片段的半衰期的物質(zhì)。
33.權(quán)利要求31的藥物組合物，包含對(duì)第一表位具有特異性的第一抗體或其抗原結(jié)合片段和對(duì)第二表位具有特異性的第二抗體或其抗原結(jié)合片段。
34.抑制登革熱病毒感染或登革熱病毒相關(guān)疾病的方法，其包括以下步驟給有需要的對(duì)象施用治療有效量的至少一種權(quán)利要求1-5或Il-M任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求6-10或31-33任一項(xiàng)的組合物。
35.權(quán)利要求34的方法，還包括施用第二治療劑。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述第二治療劑是抗病毒劑。
37.抑制登革熱病毒感染或登革熱病毒相關(guān)疾病的方法，其包括以下步驟給有需要的對(duì)象施用治療有效量的對(duì)第一種表位具有特異性的權(quán)利要求1-5或Il-M任一項(xiàng)的第一抗體或其抗原結(jié)合片段和對(duì)第二種不同表位具有特異性的第二抗體或其抗原結(jié)合片段。
38.一種治療登革熱病毒感染或登革熱病毒相關(guān)疾病的方法，其包括以下步驟鑒定需要治療的患者，和給所述患者施用治療有效量的權(quán)利要求1-5或Il-M任一項(xiàng)的純化的中和性人單克隆抗體或抗體片段或權(quán)利要求6-10或31-33任一項(xiàng)的藥物組合物。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述治療包括施用兩種或更多種所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
40.權(quán)利要求38的方法，其中所述治療包括施用三種或更多種所述抗體或其抗原結(jié)合片段。
41.篩選能夠誘導(dǎo)針對(duì)登革熱病毒的免疫應(yīng)答的多肽的方法，包括使用權(quán)利要求1-5 或Il-M任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段篩選多肽文庫(kù)。
42.監(jiān)測(cè)抗登革熱病毒疫苗的質(zhì)量的方法，包括使用權(quán)利要求1-5或1114任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段核實(shí)所述疫苗的抗原含有具有正確構(gòu)象的特異性表位。
43.一種疫苗，其包含特異性結(jié)合權(quán)利要求1-5或1114任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段的表位。
44.權(quán)利要求I-M任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25或沈的核酸、權(quán)利要求30的免疫原性多肽或權(quán)利要求6-10或31-33任一項(xiàng)的藥物組合物的以下用途(i)用于制備治療登革熱病毒感染的藥物，(ii)用于疫苗或(iii)用于診斷登革熱病毒感染。
45.權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段的用途，用于通過(guò)核實(shí)疫苗的抗原含有具有正確構(gòu)象的特異性表位而監(jiān)測(cè)抗登革熱病毒疫苗的質(zhì)量。
46.特異性結(jié)合權(quán)利要求I-M任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段的表位，其用于(i)治療，( )制備治療登革熱病毒感染的藥物，(iii)作為疫苗，或(iv)篩選能夠中和登革熱病毒感染的配體。
全文摘要
本發(fā)明涉及中和登革熱病毒感染而不引起抗體依賴性登革熱病毒感染增強(qiáng)作用的抗體及其抗原結(jié)合片段以及抗體及其抗原結(jié)合片段的混合物。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生此類抗體和抗原結(jié)合片段的永生化B細(xì)胞以及結(jié)合此類抗體和抗原結(jié)合片段的表位。此外，本發(fā)明還涉及所述抗體、抗原結(jié)合片段和表位在篩選方法以及在登革熱病毒感染的診斷和治療中的用途。
文檔編號(hào)C07K16/10GK102272155SQ200980140759
公開(kāi)日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2009年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月13日
發(fā)明者A·蘭扎韋基亞 申請(qǐng)人:生物醫(yī)學(xué)研究所