專(zhuān)利名稱(chēng)：葡聚糖鐵的制備方法
一種預(yù)防、治療仔豬和牲畜缺鐵性貧血的藥品葡聚糖鐵的制備方法。
眾所周知，在家畜促長(zhǎng)方面，葡聚糖鐵對(duì)仔豬特別有效，因?yàn)樽胸i一生下來(lái)普遍地嚴(yán)重缺鐵，從母奶中獲得的鐵不能滿(mǎn)足生長(zhǎng)的需要，而缺鐵會(huì)造成仔豬體弱多病、生長(zhǎng)緩慢，因此國(guó)內(nèi)外都對(duì)初生的仔豬進(jìn)行補(bǔ)充鐵質(zhì)的注射。但是在目前所用于牲畜的葡聚糖鐵由于平均分子量(10萬(wàn)～20萬(wàn))，且含鐵量低，注射容量大，造成多次注射和干擾群體，注射部位常有不良色斑;有的產(chǎn)品中重金屬含量高，毒性大，據(jù)u.s4180567號(hào)專(zhuān)利介紹采用葡聚糖(dextran)為原料，經(jīng)過(guò)降解、絡(luò)合、精制、配制、包裝、滅菌而成，但此法利用特微分子(分子量為4000～6000)的葡聚糖為原料，因而生產(chǎn)成本高，原料難得，且含鐵量低，不到100mg/ml。英國(guó)1088829號(hào)專(zhuān)利提出了制備葡聚糖鐵的方法，但該法需多次絡(luò)合，分級(jí)沉淀，工藝復(fù)雜。英國(guó)雖生產(chǎn)出含鐵量高達(dá)200mg/ml的產(chǎn)品，但重金屬含量較高，且產(chǎn)品昂貴。因此，都迫切希望制備出一種含鐵濃度高、粘度低，毒性小，生產(chǎn)成本低，效果好的產(chǎn)品，以滿(mǎn)足社會(huì)的需要。
本發(fā)明者為了克服上述不足，經(jīng)過(guò)反復(fù)認(rèn)真研究，提出了把分子量在10000～15000的葡聚糖經(jīng)過(guò)堿化、絡(luò)合、精制、配制及滅菌便得到本發(fā)明所提出的葡聚糖鐵。
根據(jù)本發(fā)明，所說(shuō)的堿化就是把高分子量的葡聚糖進(jìn)行降解至4000～6000的分子量。由于分子量過(guò)高或者過(guò)低都不能得到滿(mǎn)意的絡(luò)合物。本發(fā)明提出了在攪拌情況下，向裝有蒸餾水的反應(yīng)器中加入葡聚糖其加入量與蒸餾水之比為0.5～0.8∶1(以重量計(jì)，下同)升溫到70～85℃，糊化半小時(shí)。堿化溫度最好為55～65℃，攪拌0.5～1小時(shí)，再滴加堿性溶液。作為這類(lèi)溶液有Na(OH)、Na2CO3、KOH、NH4(OH)、K2CO3等溶液。其使用濃度為30～40%，其加入量與葡聚糖之比為0.5～0.7∶1，加完堿液后，繼續(xù)恒溫半小時(shí)，再降至室溫，用6N的鹽酸中和，便得到PH為5左右的堿化葡聚糖液。
根據(jù)本發(fā)明所說(shuō)的絡(luò)合是把堿化葡聚糖液加入到反應(yīng)器中與水溶性鐵鹽進(jìn)行絡(luò)合，作為這些鐵鹽有三氯化鐵、硫酸鐵、硝酸鐵、高氯酸鐵、三氯醋酸鐵、醋酸鐵、檸檬酸鐵、檸檬酸鐵銨、硝酸鐵銨、甘油磷酸鐵;其加入量以鐵與葡聚糖之比為0.6～0.8∶1。由于三價(jià)鐵是以氫氧化鐵的形式與葡聚糖類(lèi)進(jìn)行絡(luò)合的，形成的絡(luò)合物為非離子型，溶于水形成膠體溶液，不是真溶液，只有在適當(dāng)?shù)臈l件下才能穩(wěn)定。因此，本發(fā)明者提出了在向堿化葡聚糖液加入鐵鹽溶液的同時(shí)，還加入20%氫氧化鈉溶液，使絡(luò)合過(guò)程中的PH逐步提高，最終為7～8。同時(shí)用水浴控制絡(luò)合溫度，在70～100℃，最好為70～90℃，絡(luò)合時(shí)間為4～8小時(shí)，最好為5～7小時(shí)，絡(luò)合是在攪拌的情況下進(jìn)行的，絡(luò)合完畢后，再升溫至水浴沸騰。保持半小時(shí)，再在半小時(shí)內(nèi)降至50℃下，靜置過(guò)夜后，便得到絡(luò)合液。
根據(jù)本發(fā)明，所說(shuō)的精制是指把絡(luò)合反應(yīng)后所得到絡(luò)合液進(jìn)一步去雜。由于絡(luò)合反應(yīng)除得到葡聚糖鐵外，還有未反應(yīng)完的葡聚糖、鐵鹽及生成的少量鐵的氫氧化物沉淀。若不除去，就會(huì)使產(chǎn)品毒性增高。本發(fā)明者提出，將靜置后的絡(luò)合液過(guò)濾，然后用2～3倍(體積)濾液的酒精進(jìn)行沉淀分離，再過(guò)濾并將沉淀物壓干。壓干物放入燒杯中再加入蒸餾水溶解。加入蒸餾水量至原絡(luò)合液容量，待溶解完全后，再重復(fù)上述操作一次，所得沉淀物經(jīng)在65～80℃左右溫度下烘干，即為本發(fā)明，所提出的葡聚糖鐵。
根據(jù)本發(fā)明所說(shuō)的配制及滅菌是指葡聚糖鐵經(jīng)磨碎后裝入容器中，加入一定量的苯酚、食鹽和注射用水混合液，在一定溫度下完全溶解后，配成含鐵量為150mg/ml的葡聚糖鐵注射液，再經(jīng)過(guò)濾包裝，于110～120℃(約1kg/cm2蒸汽壓)下，蒸汽滅菌30分鐘即為本發(fā)明所提出的產(chǎn)品。
根據(jù)本發(fā)明所提出的制備方法所制備出的產(chǎn)品具有含鐵量高、重金屬含量少、粘度低、毒性小、產(chǎn)品穩(wěn)定。制備成本低，用于仔豬注射，可提高出欄率7%以上、增重率10～25%。
實(shí)施例1堿化在帶有攪拌器和水浴加熱的500ml三口燒瓶?jī)?nèi)，加入蒸餾水200ml，開(kāi)動(dòng)攪拌器，加入125g葡聚糖(分子量10000～15000，過(guò)80目)，升溫到80℃，糊化30分鐘，然后滴加50ml、40%的氫氧化鈉溶液，加完堿液后，恒溫堿化30分鐘，即得到深棕色的溶液，再將溫度降到室溫，用6N鹽酸中和至PH＝4.0，所得溶液即為堿化葡聚糖液。
絡(luò)合于2000ml三口燒瓶中，加入堿化葡聚糖液，邊攪拌，水浴升溫75℃，同時(shí)滴加40%的三氯化鐵溶液873.8ml，和20%的NaOH溶液807ml進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，滴加完畢后，再用20%NaOH溶液調(diào)PH＝7.5，然后升溫至水沸騰，保持30分鐘，再于半小時(shí)內(nèi)將反應(yīng)液降至50℃下，靜置過(guò)夜。
精制將靜置過(guò)夜的絡(luò)合液，先用濾紙抽濾，再用3號(hào)垂熔玻璃漏斗抽濾，濾液計(jì)量后倒入燒杯中，并作出液面標(biāo)記;再用2.5倍(體積)的酒精進(jìn)行沉淀、布濾、壓干得沉淀物倒入原燒杯中，加蒸餾水到原標(biāo)記，使沉淀物完全溶解，重復(fù)上面過(guò)程再沉淀一次，所得沉淀經(jīng)70℃烘干即為比較純的葡聚糖鐵。
配制及滅菌葡聚糖鐵經(jīng)磨碎，裝入瓶中，加入1%的酚水357ml在85℃溫度下完全溶解后，配成含鐵量為150mg/ml的膠體葡聚糖注射液。再過(guò)濾，包裝，于110～120℃下蒸煮滅菌30分鐘即為樣品1。
實(shí)施例2制備過(guò)程與例1同，但絡(luò)合時(shí)水浴溫度為80℃，加入的40%三氯化鐵溶液為800ml，所得產(chǎn)品為樣品2。
實(shí)施例3制備過(guò)程與例1同，但絡(luò)合時(shí)水浴溫度為85℃，加入的40%三氯化鐵溶液為950ml，所得產(chǎn)品為樣品3。
實(shí)施例4其它方法與1同，配制成含鐵量為100mg/ml的制劑，即為樣品4。
用化學(xué)法分析產(chǎn)品中絡(luò)合鐵、游離鐵、氯化鈉及雜質(zhì)含量，測(cè)定PH值和粘度，其結(jié)果列于表Ⅰ，并與英國(guó)繁生公司產(chǎn)“血多素”和加拿大得士龍產(chǎn)“富來(lái)血鐵針”進(jìn)行對(duì)照。
表Ⅰ
由表Ⅰ可以看出，按本發(fā)明所提出的方法制備出的產(chǎn)品具有粘度適宜，符合注射用標(biāo)準(zhǔn)，鉛、砷含量低、含鐵量高等特征。
應(yīng)用例1把出生2～3天后的仔豬，隨機(jī)每窩仔豬分成兩組。即一組作實(shí)驗(yàn)，一組對(duì)照，試驗(yàn)組每頭注射樣品1一毫升，對(duì)照組不注射，各組均于試驗(yàn)后20日采血測(cè)定其血液血紅蛋白含量(g/dl)，各組仔豬均于試驗(yàn)時(shí)和45日齡離乳時(shí)分別稱(chēng)重，并統(tǒng)計(jì)其增重和存活情況。其結(jié)果列于表Ⅱ和表Ⅲ。
表Ⅱ仔豬注射樣品1血液血紅蛋白含量表
從表Ⅱ可看出注射本發(fā)明所提出的產(chǎn)品與對(duì)照組進(jìn)行比較，血紅蛋白增加77.47%。
從表Ⅲ和表Ⅳ可知，注射樣品1后比對(duì)照組分別增重18.7%，存活率提高6.76%。
比較例實(shí)驗(yàn)方法與檢測(cè)手段與應(yīng)用例相同，用加拿大產(chǎn)“富來(lái)血鐵針”作對(duì)照。其結(jié)果列于表Ⅵ、表Ⅷ。
表Ⅵ注射不同鐵制劑仔豬血液血紅蛋白含量表
從上表可以看出樣品1比富來(lái)血、樣品4的血紅蛋白分別提高5.73%和2.85%。而樣品4又比富來(lái)血提高7.45%。
表Ⅷ注射不同鐵制劑仔豬增重表
接上表
從表Ⅶ可以看出，注射樣品1后，仔豬的增重分別比樣品4、富來(lái)血提高7.72%和3.65%，樣品4比富來(lái)血提高3.09%。
表Ⅶ注射不同鐵制劑仔豬存活表
從表Ⅶ中可以看出，注射樣品1后，仔豬存活率分別比注射樣品4、富來(lái)血提高3.17%和1.91%，而樣品4又比富來(lái)血提高1.07%。
藥理研究1>小鼠溶血性貧血的保護(hù)作用選用樣品1與英國(guó)繁生公司(FISONS)生產(chǎn)的血多素和生理鹽水進(jìn)行對(duì)照。動(dòng)物為昆明雜種小鼠30只，體重20～25g，均勻分為三組，按下表所示劑量iHqd×4，于未次給藥后iH0.3ml，0.5%的鹽酸苯肼溶液，隔天1次共2次，分別于投毒前、給藥后、投毒后4天及8天，測(cè)定小鼠RBC及Hb。其結(jié)果列于下表
＊P＜0.05＊＊P＜0.012>對(duì)小鼠體重的影響取小鼠32只，體重15～18g，雌雄各半，均勻分為三組。鹽水組12只，其余每組10只，共給藥2次。實(shí)驗(yàn)期間每三天稱(chēng)體重一次，其結(jié)果列于下表
3>對(duì)小鼠肝、脾的影響取1投毒8天后小鼠脾臟稱(chēng)重、固定、常規(guī)制片、肝臟也按同法制片，其結(jié)果列于下表
從上述試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品1能增加正常小鼠RBC，對(duì)鹽酸苯肼引起的RBC減少也有明顯的對(duì)抗作用，對(duì)小鼠有明顯的抗貧血及促進(jìn)生長(zhǎng)作用，與英國(guó)血多素相比無(wú)明顯差別。
用小白鼠靜脈肌肉注射樣品1、2、3，采用Horn法測(cè)定小白鼠的LD50大于2400mg/kg體重，以急性毒性分級(jí)，屬實(shí)際無(wú)毒級(jí)。
權(quán)利要求
1.一種制備葡聚糖鐵的方法，其特征是用分子量為10000～15000的葡聚糖經(jīng)過(guò)堿化、絡(luò)合、精制、配制及滅菌后便得到含鐵量為150mg/ml的葡聚糖鐵注射液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的堿化其特征是在50～70℃最好為55～65℃，堿化時(shí)間為0.5～1小時(shí)，加入的堿溶液濃度為30～40%，堿溶液與葡聚糖之比為0.5～7∶1的條件下進(jìn)行的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的絡(luò)合，其特征是在鐵與葡聚糖之比為0.6～0.8∶1，絡(luò)合液最終PH值為7～8，絡(luò)合溫度為70～100℃，絡(luò)合時(shí)間為4～8小時(shí)，最好為5～7小時(shí)的條件下進(jìn)行的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的精制，其特征是在用2～3倍絡(luò)合液的酒精，進(jìn)行沉淀分離，過(guò)濾后將沉淀物壓干，加入蒸餾水至絡(luò)合液容量，溶解，再用2～3倍酒精沉淀分離的情況下進(jìn)行的。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于利用分子量為10000～15000的葡聚糖制備葡聚糖鐵的方法，經(jīng)過(guò)堿化、絡(luò)合、精制、配制及滅菌后，便得到鐵含量為150mg/ml的預(yù)防、治療仔豬和牲畜缺鐵性貧血的藥品。經(jīng)藥理試驗(yàn)證明有明顯的抗貧血及促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。用于仔豬?？墒棺胸i增重10～25％，存活率提高7％以上。粘度適中。雜質(zhì)含量少，制備方法簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)A61K33/26GK1041762SQ8810721
公開(kāi)日1990年5月2日 申請(qǐng)日期1988年10月14日 優(yōu)先權(quán)日1988年10月14日
發(fā)明者劉榮動(dòng), 馬振廣, 張國(guó)強(qiáng), 歐啟川 申請(qǐng)人:廣西化工研究所