專利名稱：大賴草的一種dna指紋圖譜及其獲取方法與專用引物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物，特別涉及大賴草的一種DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物。
背景技術(shù)：
賴草屬是小麥等農(nóng)作物的近緣屬，包括許多可以與小麥雜交的種。賴草屬植物常具有發(fā)達(dá)的橫走根莖，自交不親和性變異大，存在著豐富的遺傳變異，對(duì)改良農(nóng)作物具有重要的資源價(jià)值。大賴草(Leymus racemosus(Lam.)Tzvelve)是賴草屬的多年生牧草，其基因組是2n＝4x＝28，即NsNsXmXm。大賴草的分布區(qū)位于歐亞大陸。因?yàn)榫哂休^強(qiáng)的適應(yīng)性而被廣泛地用于草原建設(shè)，也常用來與小麥雜交以改善后者的抗逆性。
隨著PCR技術(shù)的日益完善，許多基于PCR的新技術(shù)大量涌現(xiàn)，其中，AFLP分子標(biāo)記技術(shù)在農(nóng)作物種子純度鑒定、植物種屬及品種親緣關(guān)系分析、植物基因作圖和分子標(biāo)記輔助育種等領(lǐng)域具有巨大應(yīng)用潛力。為了有效地開發(fā)利用大賴草的資源優(yōu)勢(shì)，需要建立大賴草的AFLP分子標(biāo)記技術(shù)體系。
發(fā)明創(chuàng)造內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供大賴草的一種DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物。
本發(fā)明所提供的大賴草DNA指紋圖譜，可由下述方法得到(1)用EcoRI和MseI雙酶切大賴草的基因組DNA，以所得的雙酶切片段為模板，在序列表中SEQ ID №13和SEQ ID №14的DNA序列引導(dǎo)下進(jìn)行非選擇性預(yù)擴(kuò)增；(2)以步驟(1)中得到的非選擇性預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，在下述引物對(duì)中的任意一對(duì)引導(dǎo)下進(jìn)行選擇性擴(kuò)增1)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №5的DNA序列；2)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №6的DNA序列；3)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №7的DNA序列；4)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №8的DNA序列；5)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №9的DNA序列；6)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №10的DNA序列；7)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №11的DNA序列；
8)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №12的DNA序列；9)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №5的DNA序列；10)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №6的DNA序列；11)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №7的DNA序列；12)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №8的DNA序列；13)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №9的DNA序列；14)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №10的DNA序列；15)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №11的DNA序列；16)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №12的DNA序列；17)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №5的DNA序列；18)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №6的DNA序列；19)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №7的DNA序列；20)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №8的DNA序列；21)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №9的DNA序列；22)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №10的DNA序列；23)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №11的DNA序列；24)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №12的DNA序列；25)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №5的DNA序列；26)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №12的DNA序列；27)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №7的DNA序列；28)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №8的DNA序列；29)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №9的DNA序列；30)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №10的DNA序列；31)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №11的DNA序列；32)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №6的DNA序列。
(3)將步驟(2)中得到的選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離DNA標(biāo)記，用銀染法顯示大賴草的DNA指紋圖譜。
序列表中的SEQ ID №1至4的DNA序列由18個(gè)堿基組成，SEQ ID №5至12的DNA序列由19個(gè)堿基組成，SEQ ID №13至14的DNA序列由16個(gè)堿基組成。
其中，步驟(1)中所述大賴草的基因組DNA可來自大賴草的任何器官，最好來自幼嫩葉片。步驟(2)中用于進(jìn)行所述選擇性擴(kuò)增的引物對(duì)優(yōu)選為步驟(2)中的1)至26)中的引物對(duì)中的任意一對(duì)。所述非選擇性預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增的反應(yīng)體系中的Mg2+濃度均為30-75mM，Taq DNA聚合酶濃度均為1.0-1.5U。步驟(3)中所述SDS聚丙烯酰胺凝膠的濃度為5.2-6.8％。
上述方法中，所述非選擇性預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增均為PCR擴(kuò)增。所述非選擇性預(yù)擴(kuò)增的反應(yīng)程序可為94℃進(jìn)行3min，94℃進(jìn)行30sec，56℃進(jìn)行30sec，72℃進(jìn)行1min，68℃進(jìn)行10min，共30個(gè)循環(huán)。所述選擇性擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)?4℃進(jìn)行1min，94℃進(jìn)行30sec，65℃進(jìn)行30sec，72℃進(jìn)行1min，共12個(gè)循環(huán)；再按以下循環(huán)程序進(jìn)行28個(gè)循環(huán)94℃進(jìn)行40s、56℃進(jìn)行40s、72℃進(jìn)行1min、72℃進(jìn)行10min。
本發(fā)明的32個(gè)EcoRI-MseI引物組合的多態(tài)性帶數(shù)變化范圍為23-103條，優(yōu)化后的引物組合有26個(gè)，每個(gè)組合的多態(tài)性帶數(shù)等于或大于50。本發(fā)明獲得的大賴草DNA指紋圖譜多態(tài)性高、指紋豐富，將在大賴草種子純度鑒定、大賴草基因作圖和分子標(biāo)記輔助育種等領(lǐng)域中發(fā)揮重要作用。


圖1為20對(duì)引物組合獲得的AFLP DNA指紋圖譜具體實(shí)施方式
實(shí)施例1、用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)獲取大賴草的DNA指紋圖譜操作流程為提取DNA→雙酶切→引物設(shè)計(jì)→DNA擴(kuò)增→電泳→銀染顯色→獲得清晰指紋圖譜→統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。具體方法和過程如下1、DNA提取本實(shí)施例采用的大賴草來自我國青海。在植株生長旺盛期，將幼嫩葉片剪下立即放入液氮冷凍儲(chǔ)存，每份樣品0.5克。按照Rogers and Bendich(Plant Mol.Biol.1985569-76)的CTAB法提取基因組DNA。
2、雙酶切及連接用限制性內(nèi)切酶EcoRI和MseI雙酶切步驟1中的基因組DNA。反應(yīng)體系包括2μl 10×緩沖液(MseI的緩沖液II)；EcoRI(5U/μl)和MseI(10U/μl)各0.5μl；16μl ddH2O；共20μl反應(yīng)體系。37℃過夜酶切。
37℃連接5小時(shí)(20μl酶切反應(yīng)液；2μl 10×緩沖液；0.2μl 10mmATP；0.33μlT4DNA鏈接酶(3U/μl來自Promega Co.)；5pmol/μl EcoRI及5pmol/μlMseI接頭各1μl；3.47μl ddH2O)。
3、PCR反應(yīng)(1)非選擇性預(yù)擴(kuò)增非選擇性預(yù)擴(kuò)增可為下一步的選擇性擴(kuò)增提供更為合適的模板，也能通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA模板的質(zhì)量及數(shù)量。預(yù)擴(kuò)增引物如下EcoRI(EOO)5’-GACTGCGTACCAATTC-3’；MseI(MOO)5’-GATGAGTCCTGAGTAA-3’。
反應(yīng)體系20μl，其中包括2μl連接反應(yīng)物(連接反應(yīng)物包括30μl步驟2中的酶切反應(yīng)液；2μl 10×緩沖液；0.2μl 10mmATP；0.33μl T4DNA鏈接酶(3U/μl來自Promega Co.)；5pmol/μl EcoRI及5pmol/μl MseI接頭各1μl；3.47μl ddH2O)；各0.6μl的EcoRI及MseI預(yù)擴(kuò)增引物(50ng/μl)；0.2μl dNTP(10m M)；O.2μl TaqDNA聚合酶(5U/μl來自Promega Co.)；2μl 10×PCR緩沖液(無MgCl2)；1.2μlMgCl2(25mM)；13.2μl ddH2O)。預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)程序如下94℃進(jìn)行3min，94℃進(jìn)行30sec，56℃進(jìn)行30sec，72℃進(jìn)行1min，68℃進(jìn)行10min，共30個(gè)循環(huán)。PCR儀型號(hào)為PE9700 thermocycler(Perkin Elmer Corp.，NORWALK，CT，U.S.A)。預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物用ddH2O稀釋20倍進(jìn)行下一個(gè)PCR反應(yīng)。
(2)選擇性擴(kuò)增以非選擇性擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物為模板，所用引物對(duì)加入3個(gè)選擇性堿基(MseI引物)或加入2個(gè)選擇性堿基(EcoRI引物)EcoRI(+2)，5’-GACTGCGTACCAATTCAN-3’；MseI(+3)，5’-GATGAGTCCTGAGTAACNN-3’。
具體的接頭及引物序列如表1所示。
表1AFLP反應(yīng)接頭及選擇性引物


采用2+3引物組合共選用64個(gè)AFLP引物對(duì)。每個(gè)選擇性擴(kuò)增反應(yīng)總體積為20μl，其中包括0.2μl dNTP(10m M)、0.2μl Taq DNA聚合酶(5U/μl來自Promega Co.)、2μl 10×PCR緩沖液(無MgCl2)、1.2μl MgCl2(25mM)、0.4μl模板(10mM)、0.4μlEcoRI選擇性擴(kuò)增引物(25ng/μl)、1.2μl MseI選擇性擴(kuò)增引物(25ng/μl)、14.4μlddH2O)。選擇性擴(kuò)增反應(yīng)程序如下94℃進(jìn)行1min，94℃進(jìn)行30sec，65℃進(jìn)行30sec，72℃進(jìn)行1min，共12個(gè)循環(huán)；再按以下循環(huán)程序進(jìn)行28個(gè)循環(huán)94℃進(jìn)行40s、56℃進(jìn)行40s、72℃進(jìn)行1min、72℃進(jìn)行10min；最后4℃保溫。其中，PCR儀器的型號(hào)與步驟(1)同。
4、電泳將步驟3中得到的選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物在95℃變性5min，然后在6％的SDS聚丙烯酰胺膠上電泳。其中，上樣量為4.5ul(含1.8ul上樣緩沖液98％甲酰氨，10mM乙二胺四乙酸(pH8.0)，0.25％二甲苯青，0.25％溴酚藍(lán))。聚丙烯酰胺膠大小0.4mm×50cm。電泳條件80W下大約2.5h，電泳緩沖液0.5×TBE(上槽液)及1×TBE(下槽液，10×TBE90mM Tris-Cl，pH8.0，90mM硼酸，2mM乙二胺四乙酸，pH8.0)。
5、染色顯示擴(kuò)增產(chǎn)物用銀染的方法顯示(J.Genet.Breed.1997，51175-177.)。然后用molecular Imager FX(Bioi-RAD)掃描膠板，并進(jìn)行條帶的統(tǒng)計(jì)。AFLP分子量標(biāo)記選用MspI/PBR322 marker。結(jié)果表明采用2+3引物組合共選用64個(gè)AFLP引物對(duì)，其中的32對(duì)可以獲得重復(fù)性好的多態(tài)性，如表2所示，Leymus racemosus的AFLP結(jié)果共計(jì)出現(xiàn)2178條帶，變化范圍為23-103條帶。條帶出現(xiàn)最少的引物組合是E14M61，而E11M47和E13M59出現(xiàn)條帶最多?？梢垣@得重復(fù)性好的多態(tài)性的32對(duì)引物組合中每對(duì)引物組合平均產(chǎn)生68.1條帶。不同的引物組合產(chǎn)生的帶數(shù)差別很大。EcoRI引物E11，E12，E13，E14與八個(gè)MseI引物進(jìn)行組合后分別獲得的指紋條帶數(shù)是643、565、675、295個(gè)。引物M47、M49、M50、M60、M61和M62與四個(gè)不同EcoRI引物組合獲得的條帶數(shù)分別是290、235、269、261、304及265。相同的EcoRI引物與不同的MseI引物組合產(chǎn)生的帶數(shù)與位置是不同的，反之亦然。圖1中，M為MspI消化的pBR322 DNA(622bp-9bp)；1為E14M61；2為E14M47；3為E13M48；4為E14M49；5為E13M47；6為E12M62；7為E12M47；8為E11M49；9為E11M48；10為E12M61；11為E13M60；12為E11M62；13為E12M60；14為E11M61；15為E12M49；16為E13M61；17為E11M50；18為E11M47；19為E13M50；20為E11M59。
表2EcoRI-MseI引物組合在大賴草上獲得的AFLP條帶數(shù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)施例2、用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)獲取大賴草的DNA指紋圖譜中的PCR條件的優(yōu)化在試驗(yàn)過程中，PCR條件優(yōu)化很重要，尤其是合適的Mg2+濃度，為此做了一系列Mg2+的濃度梯度20、30、50、75及90mM，并對(duì)來自不同公司的DNA聚合酶(Promegaand TaKaRa)進(jìn)行了優(yōu)化試驗(yàn)。研究結(jié)果顯示，30-75mM的Mg2+效果最好；1.0-1.5U的Taq酶效果較好；而且Promega的DNA聚合酶產(chǎn)品比較經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
序列表<160>14<210>1<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>1gactgcgtac caattcaa18<210>2<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>2gactgcgtac caattcac18<210>3<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>3gactgcgtac caattcag18<210>4<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>4gactgcgtac caattcat18<210>5<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>5gatgagtcct gagtaacaa19<210>6<211>19<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>
<400>6gatgagtcct gagtaacac19<210>7<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>7gatgagtcct gagtaacag19<210>8<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>8gatgagtcct gagtaacat19<210>9<211>19<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>
<400>9gatgagtcct gagtaacta19<210>10<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>10gatgagtcct gagtaactc19<210>11<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>11gatgagtcct gagtaactg19<210>12<211>19<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>
<400>12gatgagtcct gagtaactt19<210>13<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>13gactgcgtac caattc16<210>14<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>14gatgagtcct gagtaa1權(quán)利要求
1.一種獲取大賴草DNA指紋圖譜的專用引物，是序列表中SEQ ID №13和SEQID №14的DNA序列和下述引物對(duì)中的任意一對(duì)1)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №5的DNA序列；2)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №6的DNA序列；3)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №7的DNA序列；4)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №8的DNA序列；5)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №9的DNA序列；6)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №10的DNA序列；7)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №11的DNA序列；8)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №12的DNA序列；9)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №5的DNA序列；10)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №6的DNA序列；11)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №7的DNA序列；12)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №8的DNA序列；13)序列表中EQ ID №2和SEQ ID №9的DNA序列；14)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №10的DNA序列；15)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №11的DNA序列；16)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №12的DNA序列；17)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №5的DNA序列；18)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №6的DNA序列；19)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №7的DNA序列；20)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №8的DNA序列；21)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №9的DNA序列；22)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №10的DNA序列；23)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №11的DNA序列；24)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №12的DNA序列；25)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №5的DNA序列；26)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №12的DNA序列27)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №7的DNA序列；28)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №8的DNA序列；29)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №9的DNA序列；30)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №10的DNA序列；31)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №11的DNA序列；32)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №6的DNA序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的專用引物，其特征在于所述專用引物為序列表中SEQID №13和SEQ ID №14的DNA序列以及所述1)至26)中的引物對(duì)中的任意一對(duì)。
3.一種獲取大賴草DNA指紋圖譜的方法，包括以下步驟(1)用EcoRI和MseI雙酶切大賴草的基因組DNA，以所得的雙酶切片段為模板，在序列表中SEQ ID №13和SEQ ID №14的DNA序列引導(dǎo)下進(jìn)行非選擇性預(yù)擴(kuò)增；(2)以步驟(1)中得到的非選擇性預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，在下述引物對(duì)中的任意一對(duì)引導(dǎo)下進(jìn)行選擇性擴(kuò)增1)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №5的DNA序列；2)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №6的DNA序列；3)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №7的DNA序列；4)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №8的DNA序列；5)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №9的DNA序列；6)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №10的DNA序列；7)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №11的DNA序列；8)序列表中SEQ ID №1和SEQ ID №12的DNA序列；9)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №5的DNA序列；10)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №6的DNA序列；11)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №7的DNA序列；12)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №8的DNA序列；13)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №9的DNA序列；14)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №10的DNA序列；15)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №11的DNA序列；16)序列表中SEQ ID №2和SEQ ID №12的DNA序列；17)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №5的DNA序列；18)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №6的DNA序列；19)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №7的DNA序列；20)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №8的DNA序列；21)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №9的DNA序列；22)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №10的DNA序列；23)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №11的DNA序列；24)序列表中SEQ ID №3和SEQ ID №12的DNA序列；25)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №5的DNA序列；26)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №12的DNA序列27)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №7的DNA序列；28)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №8的DNA序列；29)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №9的DNA序列；30)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №10的DNA序列；31)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №11的DNA序列；32)序列表中SEQ ID №4和SEQ ID №6的DNA序列；(3)將步驟(2)中得到的選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離DNA標(biāo)記，用銀染法顯示大賴草的DNA指紋圖譜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述大賴草的基因組DNA來自幼嫩葉片。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于用于進(jìn)行所述選擇性擴(kuò)增的引物對(duì)為所述步驟(2)中的1)至26)中的引物對(duì)中的任意一對(duì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述非選擇性預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增的反應(yīng)體系中的Mg2+濃度均為30-75mM。
7.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述非選擇性預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增的反應(yīng)體系中的Taq DNA聚合酶濃度均為1.0-1.5U。
8.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述SDS聚丙烯酰胺凝膠的濃度為5.2-6.8％。
9.利用權(quán)利要求3至8中任意一項(xiàng)所述的方法得到的大賴草DNA指紋圖譜。
全文摘要
本發(fā)明公開了大賴草的一種DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物。獲取大賴草DNA指紋圖譜的方法，包括以下步驟(1)用EcoRI和MseI雙酶切大賴草的基因組DNA，以所得的雙酶切片段為模板，在序列表中SEQ ID №13和SEQ ID №14的DNA序列引導(dǎo)下進(jìn)行非選擇性預(yù)擴(kuò)增；(2)以步驟(1)中得到的非選擇性預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，在選擇性擴(kuò)增引物對(duì)中的任意一對(duì)引導(dǎo)下進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，(3)將步驟(2)中得到的選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離DNA標(biāo)記，用銀染法顯示大賴草的DNA指紋圖譜。本發(fā)明的大賴草DNA指紋圖譜多態(tài)性高、指紋豐富，將在大賴草種子純度鑒定、大賴草基因作圖和分子標(biāo)記輔助育種等領(lǐng)域中發(fā)揮重要作用。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1680591SQ200410030889
公開日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2004年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月9日
發(fā)明者劉公社 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院植物研究所