專利名稱：實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于檢測實(shí)體腫瘤的細(xì)胞放射敏感性的方法。
背景技術(shù)：
實(shí)體腫瘤細(xì)胞的放射敏感性檢測是研究預(yù)測實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射反應(yīng)性的基礎(chǔ),其前提條件是需先行建立靈敏、穩(wěn)定、可操作性強(qiáng)的實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測方法。為此，國外幾個(gè)主要放射生物研究中心多年來相繼開展了預(yù)測腫瘤放射敏感性的研究，并陸續(xù)推出了一些有潛在價(jià)值的檢測方法，如SF2 (2Gy照射后的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù))、Tpot (潛在倍增時(shí)間)、微核率、原代細(xì)胞克隆形成分析及細(xì)胞黏著分析等。由于這些實(shí)驗(yàn)方法操作復(fù)雜，穩(wěn)定性、成功率較低，至今多停留在體外培養(yǎng)細(xì)胞水平無法真正用于實(shí)體腫瘤活檢組織細(xì)胞放射敏感性檢測。發(fā)明人經(jīng)過多年的實(shí)踐摸索，結(jié)合實(shí)際對“彗星(Comet)”分析法(Ostling于1984年首先推出的檢測外周血及體外培養(yǎng)細(xì)胞DNA鏈斷裂的實(shí)驗(yàn)方法)不斷進(jìn)行改良研究，終于研發(fā)和建立了可用于實(shí)體腫瘤活檢組織樣品細(xì)胞放射敏感性檢測的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種可用于實(shí)體腫瘤組織樣品的細(xì)胞放射敏感性檢測的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測方法，其特征在于，步驟如下:( I)取受檢腫瘤樣品組織，制備成單細(xì)胞懸液；(2)取體外懸浮培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞作為外參對照；分別將受檢腫瘤樣品和作為外參對照的淋巴瘤細(xì)胞的單細(xì)胞懸液分為照射組和空白對照組，照射組的單細(xì)胞懸液均采用5Gy劑量X射線單次照射，空白對照組的單細(xì)胞懸液均不進(jìn)行放射線照射；(3)將各組單細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞裂解及漂洗；(4)經(jīng)裂解后的各組細(xì)胞進(jìn)行電泳；(5)對電泳后的各組細(xì)胞進(jìn)行PI染色；(6)在熒光顯微鏡下，對受檢腫瘤樣品的照射組和空白對照組細(xì)胞分別進(jìn)行腫瘤/正常細(xì)胞分類采圖，同時(shí)對外參對照細(xì)胞進(jìn)行采圖；(7)對受檢腫瘤樣品細(xì)胞中的腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞和外參對照細(xì)胞的圖像進(jìn)行測量和數(shù)據(jù)處理，判斷受檢腫瘤樣品細(xì)胞的放射敏感性。如上所述的檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述單細(xì)胞懸液的制備方法可采用機(jī)械研磨法或消化液消化法。如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，步驟(3)中所述細(xì)胞裂解及漂洗的操作為:將空白對照組照射組的細(xì)胞懸液分別與1%低溶點(diǎn)瓊脂糖混合后鋪在預(yù)冷的載玻片上制成瓊脂糖膠板；將各膠板在裂解液中裂解50-60分鐘，之后漂洗3次。
如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，取濃度為2-5 X IO4個(gè)/mL的細(xì)胞懸液0.25mL與1%低溶點(diǎn)瓊脂糖0.75mL混合。如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，所述裂解液的組成為:lmol/L氯化鈉和0.003mol/L十二烷基肌氨酸鈉的混合溶液，PH12.8-13.0。如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，步驟(4)中所述電泳的操作為:細(xì)胞裂解及漂洗后，將所述膠板置于電泳液中進(jìn)行電泳20分鐘；所述電泳液的成分為:2mmol/L的E:DTA和0.03mol/L的NaOH的混合溶液。如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，步驟(5)中所述PI染色的時(shí)間為20分鐘，染色時(shí)PI染液的終濃度為3.7 u mol/L。如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，步驟(6)中所述腫瘤/正常細(xì)胞分類采圖的操作為:在熒光顯微鏡下觀察瓊脂糖膠板內(nèi)的受檢腫瘤樣品細(xì)胞，從膠板的左上角起、以之字形順序、根據(jù)細(xì)胞核DNA含量對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行分類采圖，其中腫瘤細(xì)胞的DNA含量較正常細(xì)胞為大，對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞分別采集100幅以上的細(xì)胞圖像。如上所述的檢測方法，優(yōu)選地，步驟(7)中所述對圖像的數(shù)據(jù)處理的操作為:對圖像進(jìn)行細(xì)胞彗星尾力矩的測量，受檢腫瘤樣品細(xì)胞的放射敏感度等于95%受檢腫瘤樣品細(xì)胞與外參對照細(xì)胞的彗星尾力矩差值之比；所述彗星尾力矩，是指細(xì)胞圖像上彗星尾部的長度與尾部DNA百分?jǐn)?shù)的乘積；所述彗星尾力矩差值，是指照射組細(xì)胞的彗星尾力矩值與自身空白對照細(xì)胞的彗星尾力矩值的差值；所述的95%受檢腫瘤樣品細(xì)胞，是將占細(xì)胞總數(shù)5%的壞死細(xì)胞的尾力矩值不納入分析，壞死細(xì)胞的尾力矩值體現(xiàn)為極端數(shù)值，將之去除以排除干擾。如上所述的檢測方法，其中，所述的實(shí)體腫瘤組織是指腫瘤鱗癌組織、腫瘤腺癌組織或腫瘤未分化癌組織。本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明提供了一種用于實(shí)體腫瘤活檢組織樣品細(xì)胞放射敏感性檢測的方法。在“彗星”分析法的改進(jìn)上，本發(fā)明方法首先設(shè)計(jì)并規(guī)范了檢測過程中系統(tǒng)誤差的校正指標(biāo)和方法；首先設(shè)計(jì)并建立了對腫瘤樣品中混合存在的腫瘤細(xì)胞和正常組織細(xì)胞進(jìn)行分別分析放射敏感性的檢測方法；并且提供了與本發(fā)明方法相適應(yīng)的實(shí)體腫瘤樣品放射敏感性檢測報(bào)告的閱讀方法。利用本發(fā)明方法,可在轉(zhuǎn)化研究(translational Res)中，通過定量分析實(shí)體腫瘤組織樣品細(xì)胞的DNA損傷效應(yīng)，評(píng)估實(shí)體腫瘤組織細(xì)胞的放射敏感性，以得到體外培養(yǎng)細(xì)胞檢測難以實(shí)現(xiàn)的更接近在體腫瘤細(xì)胞實(shí)際放射反應(yīng)性的分析結(jié)果。通過比較不同實(shí)體腫瘤細(xì)胞的放射敏感性差異可以闡釋各種作用因素(物理/化學(xué)/生物)對實(shí)體腫瘤放射敏感性的影響及機(jī)制，以加深對臨床腫瘤個(gè)體間放射敏感性差異的理解。


圖1為鼻咽癌樣品的細(xì)胞放射敏感性的分析報(bào)告圖例之一，其中圖1A (A1-A8)是作為外參對照的體外培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，圖1B (B1-B8)是受測樣品經(jīng)分類采圖后的正常細(xì)胞的分析報(bào)告，圖1C(Cl-CS)是受測樣品經(jīng)分類采圖后的腫瘤細(xì)胞的分析報(bào)告。
圖2為鼻咽癌樣品的細(xì)胞放射敏感性的分析報(bào)告圖例之二，其中圖2A (A1-A8)是受測樣品經(jīng)分類采圖后的正常細(xì)胞的分析報(bào)告，圖2B (B1-B8)是受測樣品經(jīng)分類采圖后的腫瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，圖2C(C1-C8)是作為外參對照的體外培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞的分析報(bào)告。圖3為鼻咽癌樣品的細(xì)胞放射敏感性的分析報(bào)告圖例之三，其中圖3A (A1-A8)是受測樣品經(jīng)分類采圖后的正常細(xì)胞的分析報(bào)告，圖3B (B1-B8)是受測樣品經(jīng)分類采圖后的腫瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，圖3C(C1-C8)是作為外參對照的體外培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞的分析報(bào)告。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測方法，其主要原理及功效在于:首先，在現(xiàn)有腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測的實(shí)驗(yàn)操作中，實(shí)驗(yàn)條件及試劑、儀器設(shè)備的穩(wěn)定與否是構(gòu)成系統(tǒng)誤差的主要原因，因此在本發(fā)明檢測方法中，我們設(shè)計(jì)了以體外培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞作為外參對照，以外參對照細(xì)胞照射與不照射細(xì)胞的尾力矩(TailMoment,TM)差值作為基準(zhǔn)指標(biāo)，以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)誤差的校正(包括試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)條件等存在的誤差)和腫瘤樣品細(xì)胞放射敏感性分析的陽性參照。數(shù)百例的腫瘤樣品檢測實(shí)踐證明，這是確保在腫瘤樣品細(xì)胞放射敏感性檢測中降低系統(tǒng)誤差對檢測結(jié)果判斷干擾及正確判斷受檢樣品細(xì)胞放射敏感性差異的關(guān)鍵因素，這在國內(nèi)外均未有先例。其次，已知實(shí)體腫瘤是異質(zhì)性非常明顯的細(xì)胞群體，即正常細(xì)胞及不同分化程度的腫瘤細(xì)胞交織混合存在。細(xì)胞群的細(xì)胞異質(zhì)性對正確判斷實(shí)體腫瘤放射敏感性具有重要影響。因此，要分析檢測腫瘤樣品中不同性質(zhì)和類型的細(xì)胞的放射敏感性，首先應(yīng)對受檢細(xì)胞群的異質(zhì)性細(xì)胞加以區(qū)分，才能實(shí)現(xiàn)合理地體現(xiàn)異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞群不同細(xì)胞的放射敏感性差異，進(jìn)而恰當(dāng)分析和預(yù)測實(shí)體腫瘤的放射敏感性。第三，病理形態(tài)學(xué)觀察顯示，受檢腫瘤樣品中主要包含兩類細(xì)胞:一類是正常細(xì)胞(包括彌散分布的小淋巴細(xì)胞及纖維細(xì)胞)，另一類是不同分化程度的腫瘤細(xì)胞。其中，各個(gè)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核雖大小不一，但均明顯大于正常的淋巴/纖維細(xì)胞，熒光染色后DNA含量也明顯大于淋巴/纖維細(xì)胞(細(xì)胞核的大小與DNA含量正相關(guān))。因此，在本發(fā)明檢測方法中，我們設(shè)計(jì)了根據(jù)受檢細(xì)胞熒光染色后熒光強(qiáng)度的大小(體現(xiàn)出細(xì)胞核的DNA含量)，在熒光顯微鏡下對腫瘤/正常細(xì)胞進(jìn)行分類采圖的操作步驟，以使“彗星”分析結(jié)果能合理地體現(xiàn)異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞群體不同細(xì)胞的放射敏感性。本發(fā)明的具體步驟為:(I)取受檢腫瘤樣品組織，制備單細(xì)胞懸液；單細(xì)胞懸液的制備方法可采用現(xiàn)有技術(shù)中的機(jī)械研磨法或消化液消化法。(2)取體外懸浮培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞作為外參對照；分別將受檢腫瘤樣品和作為外參對照的淋巴瘤細(xì)胞的單細(xì)胞懸液分為照射組和空白對照組，照射組的單細(xì)胞懸液均采用5Gy劑量X射線單次照射，空白對照組的單細(xì)胞懸液均不進(jìn)行放射線照射；(3)將各組的細(xì)胞懸液與1%低溶點(diǎn)瓊脂糖(Agarose，Type VII，SIGMA)混合后鋪在預(yù)冷的載玻片上制成瓊脂糖膠板；優(yōu)選地，分別取濃度約為2-5 X IO4個(gè)/mL細(xì)胞懸液
0.25mL與1%低溶點(diǎn)瓊脂糖0.75mL,混勻。(4)將制成的各組膠板在裂解液中裂解50-60分鐘，之后漂洗3次；優(yōu)選地，所述裂解液的組成為lmol/L氯化鈉和0.003mol/L十二烷基肌氨酸鈉的混合溶液，pH12.8-13.0。
(5)經(jīng)裂解并漂洗后，各組細(xì)胞進(jìn)行電泳20分鐘；優(yōu)選地，電泳液的成分為2mmol/L的EDTA和0.03mol/L的NaOH的混合溶液。(6)電泳后的各組細(xì)胞進(jìn)行PI (Propidium 1dide，碘化丙啶)染色20分鐘；優(yōu)選地，PI染液的終濃度為3.7 μ mol/L。(7)在熒光顯微鏡(BX51，Olympus ; 100W汞燈，620nm通濾片)下，對受檢腫瘤樣品的照射組和空白對照組細(xì)胞分別進(jìn)行腫瘤/正常細(xì)胞分類采圖:觀察瓊脂糖膠板內(nèi)的細(xì)胞，從膠板的左上角起以“之”字形順序、根據(jù)細(xì)胞核DNA含量對腫瘤細(xì)胞(大細(xì)胞)和正常細(xì)胞(小細(xì)胞)進(jìn)行分類采圖，每類各采集100幅左右細(xì)胞圖像。(8)對受檢腫瘤樣品細(xì)胞中的腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞和外參對照細(xì)胞的圖像進(jìn)行細(xì)胞彗星尾力矩(TM)的分析測量，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并繪制受照射細(xì)胞及空白對照細(xì)胞的DNA含量及TM分布的散點(diǎn)圖和直方圖。每例受檢腫瘤樣品的細(xì)胞放射敏感性分析都包含淋巴瘤細(xì)胞外參對照的“彗星”分析結(jié)果、正常細(xì)胞(淋巴/纖維細(xì)胞)的“彗星”分析結(jié)果及腫瘤細(xì)胞的“彗星”分析結(jié)果。在DNA含量分布圖上，橫坐標(biāo)為由細(xì)胞圖像上的灰值強(qiáng)度量化衡量的DNA含量數(shù)值，具體來說:細(xì)胞圖像中DNA表現(xiàn)為一定灰度值的像素點(diǎn)，這些灰度區(qū)域呈現(xiàn)出連續(xù)或發(fā)散的狀態(tài)，通過圖像處理算法，把這些符合一定灰度閾值的像素點(diǎn)分割出來，并通過閉運(yùn)算，將分散的孤立區(qū)域連續(xù)起來。計(jì)算這些連續(xù)區(qū)域的面積作為DNA含量數(shù)值。在分辨率一定的情況下，同一系統(tǒng)下采集的各個(gè)細(xì)胞圖象所計(jì)算出來的灰值強(qiáng)度完全可以反映出不同照射劑量下的細(xì)胞DNA含量的變化。圖中的橫坐標(biāo)是代表DNA含量的灰度區(qū)域面積值，縱坐標(biāo)是同一照射劑量下相同DNA含量的細(xì)胞個(gè)數(shù)。(9)以“放射敏感度”作為評(píng)價(jià)受檢樣品的細(xì)胞放射敏感性的指標(biāo)，放射敏感度=95%受檢腫瘤樣品細(xì)胞與外參對照淋巴瘤細(xì)胞的TM差值之比，放射敏感度值越大說明受檢樣品細(xì)胞對放射線照射越敏感。所述TM差值是指5Gy劑量照射后的照射組細(xì)胞的TM值與自身O照射的空白對照細(xì)胞的TM值的差值。實(shí)施例1圖1為鼻咽癌樣品的細(xì)胞放射敏感性的分析報(bào)告圖例。圖1A1-A8是作為外參對照的體外培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，用以進(jìn)行系統(tǒng)誤差的校正及放射敏感性評(píng)估的陽性參照。由圖1Al至圖1A8，依次為O照射下細(xì)胞DNA含量分布的直方圖和散點(diǎn)圖、5Gy照射后細(xì)胞DNA含量分布的直方圖和散點(diǎn)圖、O照射下細(xì)胞尾力矩(TM)分布的直方圖和散點(diǎn)圖以及5Gy照射后細(xì)胞尾力矩分布的直方圖和散點(diǎn)圖。如圖所示，在本實(shí)驗(yàn)條件下，淋巴瘤細(xì)胞的DNA含量多分布在35-40道右側(cè)。且由TM分布圖可見，5Gy照射組的TM值明顯大于O照射對照組的TM值(在顯微鏡下體現(xiàn)為，5Gy照射組的細(xì)胞核多有“彗尾”形成，而O照射對照組的細(xì)胞核多呈圓形)，說明其對放射敏感。圖1B1-B8是某受測鼻咽癌樣品經(jīng)分類采圖后的正常細(xì)胞的分析報(bào)告，由圖1Bl至圖1B8，各圖的實(shí)驗(yàn)條件和統(tǒng)計(jì)內(nèi)容與由A1-A8 —致，下文中的圖1C1-C8，以及圖2A1-A8、B1-B8、C1-C8和圖3A1-A8、B1-B8和C1-C8各圖也均按此順序排列，不再贅述。如圖所示，正常細(xì)胞的DNA含量主要在20-25道左側(cè)。圖C1-C8是同一受測鼻咽癌樣品經(jīng)分類采圖后的腫瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，其DNA含量多在35-40道右側(cè)。
實(shí)施例2圖2為某鼻咽癌樣品經(jīng)細(xì)胞放射敏感性檢測后，表現(xiàn)為典型高放射敏感度(放射敏感型)的分析報(bào)告圖例。其分析結(jié)果表現(xiàn)出，經(jīng)5Gy照射后腫瘤樣品組織內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞(包括正常/腫瘤細(xì)胞)TM值均偏大，乃至大于經(jīng)5Gy照射后的外參對照細(xì)胞(在顯微鏡下體現(xiàn)為有明顯的“彗尾”形成)。圖2A1-A8、B1-B8和C1-C8分別為供試樣品的正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和外參對照淋巴瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，如圖所示，外參對照淋巴瘤細(xì)胞的TM差值為21.07，正常細(xì)胞的TM差值為23.6，放射敏感度為1.12 (23.6/21.07)，腫瘤細(xì)胞的TM差值為 42.36，放射敏感度為 2.01 (42.36/21.07)。臨床腫瘤實(shí)際放射反應(yīng)性測量結(jié)果顯示:受檢樣品的分析結(jié)果與臨床腫瘤消退率相吻合。50Gy照射后該受檢樣品供者的臨床腫瘤消退率為90%。實(shí)施例3圖3為某鼻咽癌樣品經(jīng)細(xì)胞放射敏感性檢測后，表現(xiàn)為典型低放射敏感度(放射不敏感型)的分析報(bào)告圖例。其分析結(jié)果表現(xiàn)出，經(jīng)5Gy照射后腫瘤樣品組織內(nèi)的正常細(xì)胞(淋巴、纖維細(xì)胞)和腫瘤細(xì)胞的TM值均遠(yuǎn)小于經(jīng)5Gy照射后的外參對照細(xì)胞(在顯微鏡下體現(xiàn)為無明顯的“彗尾”形成)。圖3A1-A8、B1-B8和C1-C8分別為供試正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和外參對照淋巴瘤細(xì)胞的分析報(bào)告，如圖所示，外參對照淋巴瘤細(xì)胞的TM差值為73.24，正常細(xì)胞的TM差值為1.13，放射敏感度為0.02( 1.13/73.24)，腫瘤細(xì)胞的TM差值為13.03，敏感度為 0.18 (13.03/73.24)。臨床腫瘤實(shí)際放射反應(yīng)性測量結(jié)果顯示:受檢樣品的分析結(jié)果與臨床腫瘤消退率相吻合。50Gy照射后該受檢樣品供者的臨床腫瘤消退率為28%。
權(quán)利要求
1.一種實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測方法，其特征在于，步驟如下: (1)取受檢腫瘤樣品組織，制備成單細(xì)胞懸液； (2)取體外懸浮培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞作為外參對照；分別將受檢腫瘤樣品和作為外參對照的淋巴瘤細(xì)胞的單細(xì)胞懸液分為照射組和空白對照組，照射組的單細(xì)胞懸液均采用5Gy劑量X射線單次照射，空白對照組的單細(xì)胞懸液均不進(jìn)行放射線照射； (3)將各組單細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞裂解及漂洗； (4)經(jīng)裂解后的各組細(xì)胞進(jìn)行電泳； (5)對電泳后的各組細(xì)胞進(jìn)行PI染色； (6)在熒光顯微鏡下，對受檢腫瘤樣品的照射組和空白對照組細(xì)胞分別進(jìn)行腫瘤/正常細(xì)胞分類采圖，同時(shí)對外參對照細(xì)胞進(jìn)行采圖； (7)對受檢腫瘤樣品細(xì)胞中的腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞和外參對照細(xì)胞的圖像進(jìn)行測量和數(shù)據(jù)處理,判斷受檢腫瘤樣品細(xì)胞的放射敏感性。
2.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述單細(xì)胞懸液的制備方法采用機(jī)械研磨法或消化液消化法。
3.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中所述細(xì)胞裂解及漂洗的操作為:將空白對照組和照射組的細(xì)胞懸液與1%低溶點(diǎn)瓊脂糖混合后鋪在預(yù)冷的載玻片上制成瓊脂糖膠板；將膠板在裂解液中裂解50-60分鐘，之后漂洗3次。
4.按權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，取濃度為2-5X IO4個(gè)/mL的細(xì)胞懸液0.25mL與1%低溶點(diǎn)瓊脂糖0.75mL混合。
5.按權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述裂解液的組成為:lmol/L氯化鈉和0.003mol/L十二烷基肌氨酸鈉的混合溶液，pH12.8-13.0。
6.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(4)中所述電泳的操作為:細(xì)胞裂解及漂洗后，將所述膠板置于電泳液中進(jìn)行電泳20分鐘；所述電泳液的成分為:2mmol/L的EDTA和0.03mol/L的NaOH的混合溶液。
7.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(5)中所述PI染色的時(shí)間為20分鐘，染色時(shí)PI染液的終濃度為3.7 u mol/L。
8.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(6)中所述腫瘤/正常細(xì)胞分類采圖的操作為:在熒光顯微鏡下觀察瓊脂糖膠板內(nèi)的受檢腫瘤樣品細(xì)胞，從膠板的左上角起、以之字形順序、根據(jù)細(xì)胞核DNA含量對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行分類采圖，其中腫瘤細(xì)胞的DNA含量較正常細(xì)胞為大，對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞分別采集100幅以上的細(xì)胞圖像。
9.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(7)中所述對圖像的數(shù)據(jù)處理的操作為:對圖像進(jìn)行細(xì)胞彗星尾力矩的測量，受檢腫瘤樣品細(xì)胞的放射敏感度等于95%受檢腫瘤樣品細(xì)胞與外參對照細(xì)胞的彗星尾力矩差值之比；所述彗星尾力矩差值為照射組細(xì)胞的彗星尾力矩值與自身空白對照細(xì)胞的彗星尾力矩值的差值。
10.按權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的實(shí)體腫瘤組織是指腫瘤鱗癌組織、腫瘤腺癌組織或腫瘤未分化癌組織。
全文摘要
一種實(shí)體腫瘤細(xì)胞放射敏感性檢測方法取受檢腫瘤樣品組織，制備成單細(xì)胞懸液；取體外懸浮培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞作為外參對照；分別將受檢腫瘤樣品和作為外參對照的淋巴瘤細(xì)胞的單細(xì)胞懸液分為照射組和空白對照組，照射組的單細(xì)胞懸液均采用5Gy劑量X射線單次照射，空白對照組的單細(xì)胞懸液均不進(jìn)行放射線照射；將各組單細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞裂解及漂洗；經(jīng)裂解后的各組細(xì)胞進(jìn)行電泳；對電泳后的各組細(xì)胞進(jìn)行PI染色；在熒光顯微鏡下，對受檢腫瘤樣品的照射組和空白對照組細(xì)胞分別進(jìn)行腫瘤/正常細(xì)胞分類采圖，同時(shí)對外參對照細(xì)胞進(jìn)行采圖；對受檢腫瘤樣品細(xì)胞中的腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞和外參對照細(xì)胞的圖像進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，判斷受檢腫瘤樣品細(xì)胞的放射敏感性。
文檔編號(hào)G01N23/00GK103091341SQ20131000951
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月10日
發(fā)明者高黎, 楊偉志, 房超 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院, 北京大恒圖像視覺有限公司