專利名稱：：對(duì)血球比率低敏感性的血糖試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種測(cè)量全血樣品中葡萄糖濃度的干相試紙；更確切地說，是一種對(duì)血樣的血球比率相對(duì)不敏感的試紙。目前在臨床實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)生診室、醫(yī)院和家庭中廣泛使用含有以酶為主的組合物的干相試紙測(cè)定生物液體樣品的葡萄糖濃度。實(shí)際上，這種試紙已成為全球幾百萬糖尿病患者中多數(shù)人的每日必需品。因?yàn)樘悄虿?huì)引起血液化學(xué)中危險(xiǎn)的異常變化，所以它會(huì)導(dǎo)致視力下降、腎衰竭以及其他嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)后果。為了把這些后果的危險(xiǎn)性降到最低，多數(shù)糖尿病患者必須自已定期進(jìn)行測(cè)試，然后再相應(yīng)地通過例如控制飲食和/或注射胰島素來調(diào)節(jié)自身的葡萄糖濃度。有些患者必須一天四次或多次經(jīng)常性地測(cè)試其血糖濃度。對(duì)那些為調(diào)整糖的攝取和/或胰島素注射液的使用而必須控制飲食的糖尿病患者，以及在這方面必須通過頻繁地檢測(cè)血糖濃度來作為指導(dǎo)的那些糖尿病患者來說需要一種快速、廉價(jià)和精確的葡萄糖檢測(cè)試紙。含有指示劑的試紙是公知的，它能根據(jù)點(diǎn)到試紙上血樣的葡萄糖濃度的不同而轉(zhuǎn)變?yōu)椴煌顪\的顏色。這類試紙中的一些包括一種能夠?qū)⑵咸烟茄趸癁槠咸撬醿?nèi)酯和過氧化氫的酶，如葡糖氧化酶。它們也含有一種可氧化的染料和一種具有過氧化活性的物質(zhì)，其中的過氧化活性物質(zhì)能在過氧化氫存在下有選擇性地催化可氧化染料的氧化(參見，如1990年6月19日公布的Phillips等的美國專利4,935,346)。無論是在家中、醫(yī)生診室中、臨床或醫(yī)院中進(jìn)行葡萄糖測(cè)定，它的精確性和可重視性都十分重要，對(duì)顏色顯示的試紙來說，理想地是顏色變化顯著并且對(duì)血液中葡萄糖之外的其他化合物的變化不敏感。對(duì)可讀試紙來說，視力可能已受到損害的糖尿病患者有一種能夠根據(jù)葡萄糖濃度的不同顯示出顯著的顏色變化的檢測(cè)試劑是更為重要的。在給定波長處具有吸收和/或反射的變化的顏色改變對(duì)讀數(shù)試紙的精確性也是很重要的。各種干擾因素的存在會(huì)影響試紙的性能，有些人已經(jīng)認(rèn)識(shí)到了降低或消除臨床化學(xué)中的這些干擾因素影響的必要。例如1994年1月19公布的Arter等人的歐州專利申請(qǐng)93111290.8公開了一種測(cè)定含水液體中分析物的分析成分。該成分包括一種能與液體中存在的自由巰基鍵合的試劑。Arter等人的主要目的是測(cè)定被分析物如乙酰氨基笨、水揚(yáng)酸酯、肌酸酐，膽固醇，HDL膽固醇，甘油酸酯，葡萄糖和尿酸。他們使用產(chǎn)生過氧化氫的酶，并通過過氧化物酶偶氧化還原化學(xué)對(duì)其測(cè)定?？赡艽嬖谟谝后w中的干擾巰基(如存在于服用某些藥的人的血清中的N-乙酰巰基丙氨酸)即使在被分析物不存在的情況下也可能誘發(fā)氧化/還原反應(yīng)。Arter等人利用加入能與巰基反應(yīng)并鍵合的試劑的方法來解決干擾自由巰基的問題。適宜的試劑包括馬來酰亞胺，N-乙基馬來酰亞胺、碘乙酰胺、硝酸銀和氯化金。1993年2月9日公布的Ismail等人的美國專利5185247公開了一種以酶為主的試紙，它是通過添加了各種成分來穩(wěn)定的。這些成分包括具有熱穩(wěn)定性試劑中的咪唑，但是它僅對(duì)浸漬了“抗壞血酸干擾成分”的試紙有效，其中的“抗壞血酸干擾成分”包括氧化汞和肌氨酸。因?yàn)橹亟饘傺趸镉卸?，一般最好不加入試劑中?993年12月15日公布的Matzinger等人的歐州專利申請(qǐng)93303643、6公開了一種測(cè)定全血中葡萄糖濃度的試紙。該試紙有一個(gè)測(cè)試墊板，它含有通過改變顏色來指示葡萄糖濃度的試劑系統(tǒng)。測(cè)試墊板是由各向異性膜構(gòu)成的，靠近主表面有相對(duì)較大的孔，靠近反面的孔較小。在墊板的大孔面粘附有一個(gè)多孔轉(zhuǎn)運(yùn)基質(zhì)。將全血樣品點(diǎn)到轉(zhuǎn)運(yùn)基質(zhì)上，基質(zhì)將樣品中可檢測(cè)部分轉(zhuǎn)運(yùn)到墊板的大孔面。然后樣品中的葡萄糖向反面移動(dòng)，并與試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化，變色可從墊板的小孔面看到，并指示出樣品中的葡萄糖濃度。Kiser等人的美國專利5306623公開了一種測(cè)血糖試紙，它包括一個(gè)從全血中分離紅細(xì)胞的分離基質(zhì)。檢測(cè)試劑與被分離后的成分反應(yīng)引起變色，從而指示血液中的葡萄糖濃度。公開的分離層包涵物組分是聚丙烯聚合物(CarbopolR)，在這些“分離成分”(也稱作“血球比率調(diào)節(jié)劑”，沒有進(jìn)一步解釋)一般存在于單獨(dú)的分離層中同時(shí)，Kiser等人還公開了一個(gè)單層基質(zhì)，它包括既含有可產(chǎn)生信號(hào)的成分又含有分離血液成分的試劑。無論是任何情況下，確切地說分離成分的用量范圍是7％到35％w/v。實(shí)際上在這些試劑中Cavbopol不會(huì)以這種濃度范圍使用。眾所周知測(cè)血糖時(shí)干擾因素會(huì)影響試紙的顏色變化。例如，測(cè)定葡萄糖中顏色變化的強(qiáng)弱一般好象與血液中紅細(xì)胞的濃度(血球比率)有關(guān)。這就需要有一種試紙，該試紙?jiān)诒┞队诤咸烟堑难褐袝r(shí)，它能隨著葡萄糖濃度的持續(xù)產(chǎn)生顯著的顏色變化。理想地是，即使該試紙暴露于血球比率水平在25％到60％的范圍內(nèi)變化的全血樣品中時(shí)，它也能夠精確地顯示出大約40到500mg/dl范圍內(nèi)的葡萄糖濃度。按照本發(fā)明，測(cè)定含有紅細(xì)胞的全血樣品葡萄糖濃度的試紙包括(a)一種各向異性膜，它的樣品面上有較大的孔，檢測(cè)面上的孔較小，該膜適合于在樣品面上接受樣品，然后使樣品流向檢測(cè)面；和(b)浸漬到膜上的檢測(cè)試劑，它包括(i)一種由葡萄糖和氧生成過氧化氫的成分；(ii)一種與過氧化氫發(fā)生顏色變化的指示劑；(iii)一種丙烯酸聚合物，濃度范圍在約0.1％到約4％w/v，這樣，在測(cè)定葡萄糖濃度時(shí)紅細(xì)胞產(chǎn)生的任何影響都可利用丙烯酸聚合物使其降低。在本發(fā)明的方法中，測(cè)定含有紅細(xì)胞的全血樣品中的葡萄糖濃度的方法包括以下步驟(a)準(zhǔn)備一個(gè)各向異性膜，該膜(i)有一個(gè)樣品面，上有較大的孔和一個(gè)上有較小孔的檢測(cè)面；和(ii)浸漬有能與葡萄糖反應(yīng)而引起檢測(cè)面變色的檢測(cè)試劑，該試劑包括葡萄糖氧化酶，過氧化物酶，可氧化染料或染料對(duì)，和濃度約0.1％到4％w/v的丙烯酸聚合物；(b)將血液點(diǎn)到膜的樣品面上；(c)測(cè)定檢測(cè)面的顏色變化來檢測(cè)血液中的葡萄糖濃度。對(duì)于血樣中的葡萄糖濃度超過了可檢測(cè)范圍的樣品來說，本發(fā)明的試紙?zhí)峁┝艘环N相對(duì)簡單并迅速測(cè)定葡萄糖濃度的方法。對(duì)于血球比率水平在25％到60％范圍內(nèi)的全血樣品，試紙能得出基本不變的葡萄糖濃度值。試紙的樣品面用來接受含有紅細(xì)胞和葡萄糖的全血樣品，在合理的限度內(nèi)，樣品的體積既不需要測(cè)定，也不需要控制。膜的多孔性使得液體能夠通過毛細(xì)管作用從樣品面流到檢測(cè)面。因此，檢測(cè)試劑能與血液中的葡萄糖反應(yīng)而引起檢測(cè)面上或附近的顏色變化。顏色的改變?nèi)Q于樣品中的葡萄糖濃度。血液中的葡萄糖濃度可以用多種方式測(cè)定，例如，通過對(duì)此檢測(cè)面的顏色與已校準(zhǔn)過的參照物或色度表；通過反射光度學(xué)；或通過對(duì)應(yīng)于葡萄糖濃度范圍的一系列的段，觀察在特定時(shí)間內(nèi)最后一個(gè)變色的段來確定葡萄糖濃度。色澤深的紅細(xì)胞會(huì)使顏色變化不易察覺，在各向異性膜的樣品面附近會(huì)將其濾出，并逐漸由樣品面上的大孔流向檢測(cè)面上的小孔。能用于本發(fā)明試紙各種成分的物質(zhì)有多種。其中一些已分別在1994年4月26日和1995年5月23日公布的Kiser等人的美國專利5306623和5418142中公開，本文將其引用為參考文獻(xiàn)。檢測(cè)試劑含有一種成分如葡萄糖氧化酶，它能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為過氧化氫，和一種或多種用于測(cè)定由樣品中的葡萄糖產(chǎn)生的過氧化氫的成分。測(cè)定過氧化氫的成分可以是過氧化物酶，優(yōu)選馬蘿葡過氧化物酶，和一種在反應(yīng)過程中能變色的“指示劑”。這種指示劑可以是一種可氧化染料或染料對(duì)，過氧化物酶能在過氧化氫存在的條件下催化指示劑的氧化反應(yīng)。檢測(cè)試劑還包括一種丙烯酸聚合物，它能降低測(cè)定葡萄糖濃度時(shí)血球比率(全血樣品中紅細(xì)胞所占的百分比)的變化產(chǎn)生的影響。本發(fā)明中的試紙和方法用于測(cè)定血樣中的葡萄糖濃度時(shí)，所允許的葡萄糖濃度范圍大約是40到500毫克/分升，血球比率水平范圍大約是25％到60％。圖1是本發(fā)明中試紙膜的透視圖。圖2是本發(fā)明中可直接讀數(shù)的試紙樣品面的平面圖。圖3是圖2所示試紙檢測(cè)面的平面圖。圖4是本發(fā)明中雙層試紙的透視圖。本發(fā)明是一種測(cè)定全血中血糖濃度的干相試紙。這種試紙的關(guān)鍵部分是摻有檢測(cè)試劑的多孔膜。試紙會(huì)隨著點(diǎn)在其上的血樣中的葡萄糖而變色。該膜可以由一個(gè)均勻組分或一種包被基質(zhì)組成，它有一個(gè)用于點(diǎn)樣的樣品面，和一個(gè)可觀察到顏色變化的檢測(cè)面。該膜優(yōu)選是各向異性的；更優(yōu)選有一個(gè)寬的孔徑范圍。例如，最大孔的孔徑與最小孔的孔徑的比率大約在100-400范圍內(nèi)。膜的孔徑最小的一面，空體積也相對(duì)較小，一般膜物質(zhì)非常緊密，其中的一層就可占膜厚度的20％。在這層中，孔徑優(yōu)選大約在0.1到0.8微米內(nèi)，公稱孔徑優(yōu)選在0.3-0.4微米內(nèi)。大孔的一面，孔徑優(yōu)選在約40微米到125微米范圍內(nèi)。當(dāng)血液被點(diǎn)到樣品(大孔)面上后，樣品逐漸穿透膜，流過的孔越來越小。最后，象紅細(xì)胞這樣的固體到達(dá)膜的某個(gè)位置就不再往下滲透。含有溶解的葡萄糖的剩余樣品卻會(huì)滲透到檢測(cè)面上。膜本身的各向異性使得過濾固體的同時(shí)仍能保持相對(duì)迅速的流速。由于樣品穿透膜后與試劑反應(yīng)引起檢測(cè)面附近的空體積中的吸光材料出現(xiàn)顏色或被漂白，所以實(shí)際上它會(huì)影響膜的反射能力。適宜的膜材料是聚砜和聚酰胺(尼龍)，也可使用其他具有類似性能的聚合物?？蓪?duì)聚合物進(jìn)行改良，引進(jìn)其他能提供帶電結(jié)構(gòu)的功能基團(tuán)，使得膜表面可以是中性的，正電性的或負(fù)電性的。制備構(gòu)成膜的多孔材料的優(yōu)選方法是鑄造一個(gè)沒有支持核芯的聚合物。這樣的膜可以是各向異性的聚砜膜，可從Memtec、Inc，Timonium，MD，得到。一般得到的膜的厚度大約小于200微米，優(yōu)選115到155微米。當(dāng)膜為尼龍或各向異性的聚砜時(shí)，最優(yōu)選的厚度大約是130到140微米。處理膜時(shí)，可將膜沉浸到檢測(cè)試劑各組分的混合液中并使其飽和。最好至少把某些成分順序摻入膜中。用機(jī)械方法如氣刀，刮刀或玻璃棒除去過量的試劑，然后將膜干燥。試劑主要集中在膜的小孔(檢測(cè))面附近。檢測(cè)試劑包括(i)一種用來將葡萄糖轉(zhuǎn)化為過氧化氫的成分，(ii)一種用于測(cè)定過氧化氫的成分，和(iii)一種在檢測(cè)葡萄糖濃度時(shí)，用來降低血樣的血球比率水平的影響成分。試劑也可以再包括一種分離成分，它能使把象紅細(xì)胞這樣的固體粘附或截留在膜中，從而有效地把固體從生物液體中除去。其他可添加的成分見下文的敘述及實(shí)施例。將葡萄糖轉(zhuǎn)化為過氧化氫的成分優(yōu)選葡萄糖氧化酶，一般可由黑曲霉或青霉得到。葡萄糖氧化酶能與葡萄糖和氧反應(yīng)生成葡糖酸內(nèi)酯和過氧化氫。葡糖氧化酶的最佳濃度根據(jù)指示劑系統(tǒng)的組成而定。例如，如果指示劑系統(tǒng)是MBTHSB-ANS(見下文描述)，那么適宜的葡糖氧化酶濃度為500-10000u/ml，更優(yōu)選約700-2000u/ml，最優(yōu)選為1000u/ml。一般來說，葡糖氧化酶的濃度越大，反應(yīng)開始進(jìn)行得越迅速，反之亦然。產(chǎn)生的過氧化氫與用來檢測(cè)它的成分反應(yīng)，其中包括一種過氧化物酶，它能選擇性地催化過氧化氫與指示劑之間的反應(yīng)。過氧化物酶利用過氧化氫作為氧化劑，它能從多種物質(zhì)中轉(zhuǎn)移氫原子。適宜的過氧化物酶可含有正鐵血紅素，這里從植物中得到的一種氯高鐵血紅素。從動(dòng)物中得到的過氧化物酶也是合適的，例如從動(dòng)物的甲狀腺中得到的。作為檢測(cè)過氧化氫的成分，更優(yōu)選的是馬蘿葡過氧化物酶。優(yōu)選用過氧化物酶催化；過氧化氫直接或間接反應(yīng)生成或分解能在預(yù)定波長范圍內(nèi)吸光的指示劑染料。優(yōu)選指示劑染料強(qiáng)吸收處的波長不同于樣品或者檢測(cè)試劑強(qiáng)吸收處的波長。指示劑被氧化后的最終產(chǎn)物可以是彩色的、暗淡色的、或者無色的，以此證明膜檢測(cè)面的顏色變化。也就是說，通過彩色區(qū)域被漂白了?；蛘邿o色區(qū)域產(chǎn)生顏色，檢測(cè)試劑可以指示樣品中葡萄糖的存在。本發(fā)明中有用的指示劑包括單一組分和兩種組分的色原物質(zhì)。單一組分系統(tǒng)包括芳香胺，芳香醇，吖嗪和聯(lián)苯胺，如N-四甲聯(lián)苯胺-HCL。適宜的兩種組分系統(tǒng)包括一種成分是MBTH，MBTH的衍生物(參見美國專利申請(qǐng)?zhí)?8/302575，本文引用為參考文件)，或者4-氨基安替比林，另一種成分是芳香胺，芳香醇，結(jié)合胺，共軛醇或其香醛或脂族醛。典型的兩種組分系統(tǒng)是3-二甲氨基苯甲酸、(DMAB)與3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸化物(MBTH)一起，3，5-二氯-2-羧基苯磺酸(DCHBS)，MBTH一起，以及8-苯胺基-1-萘磺酸銨(ANS)與3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙N-磺?；交撬徕c(MBTHSB)一起。優(yōu)選MBTHSB-ANS。用于降低血樣中血球比率對(duì)測(cè)定葡萄糖影響的成分是一種丙烯酸聚合物(-CH2-CH-COOH)n。這種聚合物的常用商品名為CARBOPOL。聚合物的分子量范圍優(yōu)選約是200000到4000000。最優(yōu)選的分子量大約為750000。濃度的優(yōu)選范圍是0.1-4.0％w/v，最優(yōu)選大約為0.5％w/v。以50-400mg/dl的濃度含有葡萄糖的生物液體采用本發(fā)明方法最好。本發(fā)明的方法表明當(dāng)所測(cè)樣品的葡萄糖濃度在優(yōu)選范圍內(nèi)時(shí)，特別是當(dāng)血球比率水平在優(yōu)選范圍25-60％內(nèi)時(shí)，樣品中每單位葡萄糖濃度變色的一致性較常規(guī)試紙好。葡萄糖水平越高，這種有益效果越突出。在本發(fā)明試紙的優(yōu)選實(shí)施方案中，試劑包括用于抑制變色反應(yīng)的抑制劑。在這種實(shí)施方案中，涂敷或浸漬在膜上的檢測(cè)試劑在試紙表面上是不均勻的。實(shí)際上，優(yōu)選用一系列平行帶或“效果段”的形式把試劑摻入到膜中，相鄰效果段的組分濃度逐漸增大，它的有效抑制濃度也逐漸增大。這樣每個(gè)有效段就會(huì)需要樣品的葡萄糖濃度越來越高才能引起變色。這樣的試紙是可“直接讀數(shù)”的，即，它能直接看見并讀出定量結(jié)果。這一實(shí)施方案在1995年3月27日申請(qǐng)的美國專利號(hào)411238中有詳細(xì)說明，本文把該申請(qǐng)作為參考文件。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑不合抑制劑，但是試紙除了被浸漬到膜上的試劑外，還包括一個(gè)粘附在膜樣品面上的雙層多孔轉(zhuǎn)運(yùn)層。在這個(gè)“雙層”的實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)運(yùn)層用來接受全血樣品并將樣品中的可檢測(cè)部分轉(zhuǎn)運(yùn)到膜的樣品面，樣品可通過毛細(xì)管作用移動(dòng)。轉(zhuǎn)運(yùn)層優(yōu)選延伸到檢測(cè)墊板的一個(gè)或多個(gè)底端，以便于形成一個(gè)容納過量血樣的蓄液池。相應(yīng)地，轉(zhuǎn)運(yùn)層優(yōu)選能容納大約10-50微升血液，更優(yōu)選大約35微升血液并將大約3-10微升血液轉(zhuǎn)運(yùn)到膜上。轉(zhuǎn)運(yùn)層可由天然纖維組成，如棉花或紙，也可以是聚酯，聚酰胺，聚乙烯和其他合成聚合物。聚乙烯是優(yōu)選的轉(zhuǎn)運(yùn)層的材料，例如，可從thePorexCorpofFairburn，Georgia，得到多孔聚乙烯。在這個(gè)實(shí)施方案中，任選的試紙也可包括一個(gè)粘附到膜檢測(cè)面上的支持層，并且上有一個(gè)可觀察顏色變化的孔。膜檢測(cè)面的顏色變化優(yōu)選用光敏元件測(cè)定，從而得出血糖濃度。當(dāng)通過光敏元件(即通過反射光度學(xué))進(jìn)行測(cè)定時(shí)，在檢測(cè)面暴露于光源下之前或之后，一個(gè)或多個(gè)已校準(zhǔn)的參照色澤表也暴露于光源下。例如，光可從色澤表和檢測(cè)面順序反射到光敏元件上。光敏元件根據(jù)順序暴露于光源下的參照物和檢測(cè)面而產(chǎn)生信號(hào)變化。這些信號(hào)變化與樣品中的葡萄糖濃度水平有定量的關(guān)系，樣品中的葡萄糖濃度是根據(jù)由相似視圖方法和已知葡萄糖濃度的樣品而預(yù)先得到的數(shù)學(xué)公式計(jì)算出的。這一實(shí)施方案的細(xì)節(jié)參見1995年6月22日申請(qǐng)相關(guān)美國專利申請(qǐng)493435，本文將該專利引用為參考文件。下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。圖1所示為本發(fā)明用于測(cè)定全血樣品中葡萄糖含量的膜10。盡管是以拱形位置顯示的，但膜10是有柔韌性的，使用時(shí)一般為平面。膜包括一個(gè)用來點(diǎn)樣的樣品面12和一個(gè)控制面14，控制面14上或附近的顏色變化可指示葡萄糖的存在，變色是葡萄糖與浸漬在孔16中的試劑相互作用的結(jié)果。樣品面12附近的孔徑最好較大，接近檢測(cè)面14的孔徑逐漸減小。這樣的孔徑坡度是用來阻止樣品面及附近的紅細(xì)胞的，從而它們的顏色不會(huì)阻礙指示葡萄糖存在的變色觀察。在直接讀數(shù)的試紙中，圖1所示的膜是夾在兩個(gè)覆蓋層之間的，覆蓋層可由本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的任何適當(dāng)?shù)臒崴懿牧夏?gòu)成。圖2和圖3分別是試紙20樣品面22和檢測(cè)面24的平面圖。使用時(shí)，把血樣點(diǎn)到樣品面22上的窗口26中。樣品通過毛細(xì)管作用縱向擴(kuò)展到試紙的頂層和底層并滲入膜內(nèi)。通風(fēng)孔28使樣品更易流入試紙。樣品在任意一個(gè)透明窗口30和32中的出現(xiàn)證明用于進(jìn)行測(cè)定的樣品已足夠了。檢測(cè)面24上的指示劑圈如34，允許顯色反應(yīng)所需的氧進(jìn)入并標(biāo)有血糖的濃度。在測(cè)定中，如果樣品的血糖濃度剛好或超過了某指示劑圈對(duì)應(yīng)的量，它就會(huì)隨之變色。一個(gè)任選的化學(xué)計(jì)時(shí)器圈36指示讀取試紙的足夠時(shí)間已過去(有關(guān)計(jì)時(shí)器的細(xì)參參見1995年3月27日申請(qǐng)的相關(guān)美國專利411238)。圖3顯示的結(jié)果表明，樣品的葡萄糖濃度至少為120mg/dl，但低于150mg/dl。注意圖3所示的葡萄糖反應(yīng)引起的變色是從白色變?yōu)椴噬Ｈ欢?，系統(tǒng)也可改變對(duì)指示劑染色的處理方式，使其通過誘導(dǎo)葡萄糖氧化作用而被破壞，與此相對(duì)應(yīng)的變色是從彩色變?yōu)榘咨D4是一個(gè)雙層試紙的透視圖，其中圖1所示的膜10的大孔面與轉(zhuǎn)運(yùn)層40粘合在一起。小孔面粘附到任選的支持物42上。支持物42有一個(gè)孔44，通過它，光敏元件(圖中沒有顯示)能夠測(cè)定由血樣中的葡萄糖與膜10中的試劑相互反應(yīng)而產(chǎn)生的檢測(cè)面46上的顏色變化。下面的實(shí)施例證明丙烯酸聚合物有效地降低了本發(fā)明的試紙對(duì)樣品中血球比率水平的敏感性。實(shí)施例不起任何限制作用。實(shí)施例各級(jí)聚丙烯酸由AldrichChemical，Milwaukee，WI購得，使用時(shí)未精制。用作參照物的CarbopclR910(聚丙烯酸)由BFGoodrich，Cleveland，OH購得。由Aldrich和BFGoodrich處購得的聚丙烯酸的物理和化學(xué)性質(zhì)非常相似。將聚丙烯酸懸浮于乙腈中并使其緩慢分散到攪拌的酶溶液中(表1)。用0.1M檸檬酸二鈉調(diào)節(jié)該溶液后，所得到的混合物反應(yīng)1小時(shí)。將所得到的黃褐色溶液涂覆到聚砜膜上，該聚砜膜由MemtecCorp，SanDiego，CA制造。把涂覆后的膜放在循環(huán)熱氣爐中56℃下干燥10分鐘，它的顏色變?yōu)榱咙S色。干燥后的膜再用染料溶液(表2)涂覆并在上述條件下再次干燥。然后將膜插入測(cè)定血糖的試紙中。表1酶溶液<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="770">成分用量水575mL檸檬酸鈉6.96g檸檬酸5.64gEDTA的二鈉鹽0.42g葡糖氧化酶562，110U馬蘿葡過氧化物酶403，676UCroteinSPA(一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，包括水解膠原蛋白，由Croda，NewYork，NY得到)7.20gGantrezS95(一種著色劑，包括聚乙烯酸可由GAF，NewYork，NY得到)2.25g甘露糖醇5.00g</table></tables>表2染料溶液把用三種不同分子量的聚丙烯酸以及Carbopol910處理后的試紙用于三個(gè)血球比率值25％，43％和60％條件下測(cè)定全血的葡萄糖濃度。結(jié)果見表3，同時(shí)得到的結(jié)果包括不含聚丙烯酸的對(duì)照品。聚丙烯酸對(duì)血球比率調(diào)節(jié)的不同程度一般與聚合作用的水平相對(duì)應(yīng)。當(dāng)分子量增大時(shí)，血球比率的影響減弱，但是完成反應(yīng)的時(shí)間延長，色彩強(qiáng)度降低了。進(jìn)一步說，大分子量的聚合物是不可溶的，這是制造過程中所不希望的。因此，對(duì)于聚丙烯酸的最佳分子量的選擇采用了一個(gè)折中值大約750000。表3含有聚丙烯酸的葡萄糖試紙的血球比率性能*數(shù)值越大，意味著顏色越深**理想比值為1.00對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說應(yīng)當(dāng)明白以上描述和實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)說明，并不用于限定本發(fā)明?？勺鞒霰疚闹兴岬降脑敿?xì)說明的各種改變?nèi)圆怀霰景l(fā)明的范圍和構(gòu)思。權(quán)利要求1一種用于測(cè)定含有紅細(xì)胞的全血樣品中的葡萄糖濃度的試紙，它包括(a)一種各向異性膜，該膜具有一個(gè)上有相對(duì)較大孔的樣品面和一個(gè)上有相對(duì)較小孔的檢測(cè)面，該膜適用于樣品面接受樣品并通過它流向檢測(cè)面，(b)浸漬于膜上的檢測(cè)試劑，包括(i)一種用于把葡萄糖和氧轉(zhuǎn)化為過氧化氫的成分；(ii)一種能與過氧化氫反應(yīng)而發(fā)生顏色變化的指示劑；(iii)一種丙烯酸聚合物，其濃度在約0.1％到約4％w/v的范圍內(nèi)，由此，在測(cè)定葡萄糖濃度時(shí)，利用丙烯酸聚合物可降低紅細(xì)胞產(chǎn)生的任何影響。2按照權(quán)利要求1的試紙，還包括一個(gè)用來支持膜的熱塑塑料板。3按照權(quán)利要求1的試紙，其中用于把葡萄糖和氧轉(zhuǎn)化為過氧化氫的成分包括葡糖氧化酶。4按照權(quán)利要求1的試紙，其中指示劑包括過氧化物酶和一種選自下列基團(tuán)中的成分(a)3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸化物(MBTH)和3-二甲氨基苯甲酸(DMAB)；(b)MBTH和3，5-二氯-2-羥基苯磺酸(DCHBS)；(C)[3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙]N-磺氨基苯磺酸-鈉(MBTHSB)和8-苯胺基-1-萘磺酸銨(ANS)。5按照權(quán)利要求4的試紙，其中指示劑包括過氧化物酶和MBTHSB-ANS。6按照權(quán)利要求1的試紙，其中丙烯酸聚合物的分子量在約200000到約4000000的范圍內(nèi)。7按照權(quán)利要求6的試紙，其中丙烯酸聚合物的分子量約為750000。8按照權(quán)利要求1的試紙，它還包括一個(gè)粘附到膜樣品面上的多孔轉(zhuǎn)運(yùn)層，用它來接受樣品并將樣品的可檢測(cè)部分轉(zhuǎn)運(yùn)到膜的樣品面。9按照權(quán)利要求1的試紙，其中檢測(cè)試劑還包括一種抑制劑以抑制指示劑變色。10一種測(cè)量含有紅細(xì)胞的全血樣品中的葡萄糖濃度的方法，包括以下步驟(a)準(zhǔn)備一個(gè)各向異性膜，這種膜(i)有一個(gè)樣品面，上有相對(duì)較大的孔；和一個(gè)檢測(cè)面，上有相對(duì)較小的孔；(ii)浸漬有能與葡萄糖反應(yīng)而引起檢測(cè)面變色的檢測(cè)試劑，這些試劑包括葡糖氧化酶、過氧化物酶、可氧化染料或染料對(duì)，和濃度約0.1％到4％w/v的丙烯酸聚合物；(b)將血液點(diǎn)到膜的樣品面上；(c)測(cè)定檢測(cè)面的顏色變化來檢測(cè)血液中的葡萄糖濃度。全文摘要一種用于測(cè)定全血中葡萄糖濃度的試紙，測(cè)定時(shí)血球比率的干擾已被減弱。當(dāng)生物液體接觸到試紙時(shí)，它引起已浸漬到試紙上的試劑變色，從而測(cè)定液體中的葡萄糖濃度。但是，顏色的改變會(huì)受到紅細(xì)胞濃度(血球比率)的影響，由此會(huì)降低葡萄糖測(cè)定的準(zhǔn)確度。血球比率的影響可通過添加一種丙烯酸聚合物的方法來排除。文檔編號(hào)G01N33/52GK1158998SQ96119240公開日1997年9月10日申請(qǐng)日期1996年10月17日優(yōu)先權(quán)日1995年10月17日發(fā)明者Y·S·余申請(qǐng)人:生命掃描有限公司