[0299] 在本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式中，溶劑選自芳香姪，特別是甲苯，=甲基苯或 =氣甲基苯。 陽300]制各式II的化合物（螺環(huán)呵噪四気冊瞄刪）的一般方法
[0301]
[0302] 式II的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法（例如類似于路線4)通過在式II'的 化合物的嘲噪氮上引入R3基團進行制備，其中R1、R2和R3定義如上（路線7)。 。30引制各式I的化合物的一般方法
[0304]
[0305] 式I的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法（例如類似于路線4)通過在式I'的化 合物的嘲噪氮上引入R3基團進行制備，其中R1、R2和R3定義如上（路線8)。 。30引式I-a化合物的餓基還原的一般方法
[0307]
[030引式I-a的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法通過還原式II的化合物的幾基進行 制備，其中Ri、R2和R3定義如上（路線9)。對于式II化合物的幾基的還原可W通過在溶 劑（例如MeOH、CH2CI2和THF等）中在0°C至室溫下利用還原劑（例如NaBH4、NaB&CN和 NaBH(0Ac)3等）獲得。 陽30引 式I-b化合物的叛甚尿原胺化的一般方法
[0310]
[0311] 式I-b的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法通過式II化合物的幾基的還原胺化 進行制備，其中Ri、R2和R3定義如上，并且R和R'各自獨立地是氨、低級烷基、低級環(huán)烷基、 低級締基、低級訣基、苯基、芐基或甲苯基，其任選地被面素取代；或R和R'與它們連接的 氮原子一起形成環(huán)胺（路線10)。式II化合物的幾基的還原胺化可W通過在溶劑（例如 邸2化和THF等）中，在0°C至室溫下利用還原劑（例如NaBH4、NaBH3CN和NaBH(OAc)3等）， 胺（RR'NH)(例如甲胺、二甲胺、環(huán)丙胺、苯胺、芐基胺、嗽晚和嗽嗦等）獲得。 峽。]式I-C化合物的叛甚親巧加成的一般方法[031引
[0314]式I-C化合物可W根據(jù)本領域已知的方法通過式II化合物的幾基的親核加成反 應進行制備，其中Ri、R2和R3定義如上，并且R是任選地被面素取代的低級烷基、低級環(huán)燒 基、低級締基、低級訣基、苯基或芐基（路線11)。式II的化合物的幾基的親核加成反應可W 在溶劑（例如CH2Cl2、DMF和THF等）中在-78°C至室溫下利用親核試劑（例如化i、RM濁r、 R2化Li)或金屬（例如Li、Mg、化和In)和面代烷基（R幻（例如漠甲燒、締丙基漠、芐基漠 等）獲得。 峽巧]式I-d化合物的叛甚的脯化的一般方法
[0316]
[0317] 式I-d的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法通過式II化合物的幾基的目虧化反應 進行制備，其中Ri、R2和R3定義如上，R和R'各自獨立地是氨、低級烷基、低級環(huán)烷基、低級 締基、低級訣基、苯基、芐基，任選地被面素取代，或低級烷基橫酷基、芳基橫酷基；或R和R' 和它們連接的氮原子一起形成雜芳基（路線12)。式II化合物的幾基的阱化反應可W在 溶劑（例如邸2化和THF等）中在0°C至室溫下利用阱衍生物（HsN-NRR'）（例如甲阱、二甲 阱、苯基阱、芐基阱、嗽晚阱、對甲苯橫酷阱和1-獻嗦基阱等）獲得。 峽1引式I-e化合物的叛甚府化的一般方法
[0319]
[0320] 式I-e的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法通過式II的化合物的幾基的目虧化反 應制備，其中Ri、R2和R3定義如上，且R是氨，低級烷基，低級環(huán)烷基，低級締基，低級訣基， 苯基，芐基或甲苯基，其任選地被面素取代（路線13)。式II化合物的幾基朽化可W在溶劑 (例如CH2CI2和THF等）在0°C至室溫下利用烷氧基胺衍生物化2N-0R'）（例如甲氧基胺、 苯胺和節(jié)氧基胺等）獲得。 防3川式I-f的化合物的餓基縮酪化的一般方法
[0322]
[0323] 式I-f的化合物可W根據(jù)本領域已知的方法通過式II的化合物的幾基縮醒化制 備，其中Ri，R2和R3定義如上，且R和R'是低級烷基，芐基或R和R' 一起形成-(CH2)"-(n=2或3)(路線14)。式II的化合物的幾基縮醒化可W在溶劑（例如CH2CI2,THF和丙酬 等）中在〇°C至室溫下利用醇（例如甲醇、己醇和芐基醇等）在酸（例如肥1，TsOH和TFA 等）存在下獲得。
[0324] 本發(fā)明的目標還是根據(jù)本文所描述的式I的化合物作用治療活性物質。
[0325] 在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方式中，根據(jù)本文所描述的式I的化合物用作用于治療或 預防增殖性疾病的治療活性物質。
[0326] 在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方式中，根據(jù)本文所描述的式I的化合物用作用于治療或 預防癌癥的治療活性物質。
[0327] 同樣地，本發(fā)明的一個目標是包含根據(jù)本文所描述的式I的化合物和藥學上可接 受的佐劑的藥物組合物。
[032引本發(fā)明的一個【具體實施方式】是如本文所描述的用于治療或預防增殖性疾病的藥 物組合物。
[0329] 本發(fā)明的一個【具體實施方式】是如本文所描述的用于治療或預防癌癥的藥物組合 物。
[0330] 本發(fā)明的另一個目標是根據(jù)本文所描述的式I的化合物用于制備治療或預防增 殖性疾病的藥物的用途。
[0331] 本發(fā)明的目標還是根據(jù)本文所描述的式I的化合物用于制備治療或預防癌癥的 藥物的用途。
[0332] 藥理學試驗
[0333] 式I的化合物和它們的藥學上可接受的鹽具有有價值的藥理學性質。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本 發(fā)明的化合物設及抗癌活性，內分泌/屯、血管活性和骨形成功能。根據(jù)下文給出的試驗對 該化合物進行研究。
[0334] 細胞毒性；
[0335] 在含有10% (v/v)胎牛血清（FCS)(由Sigma制造）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)K562細胞 (AmericanTypeQiltureCollection)至對數(shù)期。將細胞W5000個細胞/孔的密度接種 在96孔微量滴定板中的100yL細胞培養(yǎng)基中并在潮濕的解化器中在37°C和5%C〇2條件 下解育過夜。具有不同濃度的測試化合物W在1/10體積的培養(yǎng)基中的10倍濃度加入不 含F(xiàn)CS的孔中。在C〇2解化器中在37°C解育6-48小時后，每個孔中加入10yL存活細胞計 數(shù)試劑細胞計數(shù)1(11-8(5臟〇1/1151'-8,0.2111111〇1/11-]\16111〇巧口]\15，150臟〇1/1化(：1)(由 Dojindo制造），并在C〇2解化器中反應1至4小時。解育后，在450皿使用酶標儀確定由 WST-8減少產生的甲瑣（formazan)吸收。
[0336] 試驗讀數(shù)與存活細胞數(shù)目有關。小的數(shù)目對應著高抑制率而較大的數(shù)值對應著細 胞生長的低抑制率。為了確定式I的化合物的ICw值（即抑制50%細胞生長的濃度），在 根據(jù)經(jīng)驗選擇的濃度范圍內進行多個試驗W給出低、高和中等的生長抑制率并使用曲線擬 合軟件加W確定。
[0337] 根據(jù)式I的示例性化合物在本試驗中的抑制活性（嗎。）特別是小于1000yM，更 特別是小于100yM。iCw值可W通過對數(shù)轉化為picW值（-logicW)，其數(shù)值越高預示指 數(shù)也高。ICg。值不是一個絕對值，而是依賴實驗條件，例如所采用的濃度。
[033引己糖激酶2的抑制
[0339] 眾所周知，腫瘤細胞主要依賴糖酵解產生能量和進行中間代謝，該現(xiàn)象被稱為 Warburg效應。己糖激酶-II(HK-II)是一種關鍵的糖酵解酶，其催化葡萄糖向葡萄糖-6-磯 酸醋轉換的第一步。HK-n在許多種腫瘤中高度表達而且它的表達與葡萄糖攝取，腫瘤惡化 和預后存活差相關。對HK-II活性的抑制可W減少腫瘤細胞的生長并誘導細胞調亡。
[0340] 將試驗化合物加到HK-II的典型反應混合物中，并且使用TranscreenerI'ADP申I 試驗檢測生成的ADP的濃度炬ellBrookL油S,Madison,WI,USA)。
[0341] 結果顯示于表1中。
[0342]表1
[0343]
[0344]
[0345] 此外，上面的一些化合物，例如化合物No. 3ac、3油、3ae、3af和3aj顯示出了針對 WNT和KRas信號通路均被激活的腫瘤細胞的選擇性致死活性。
[0346] 藥物組合物
[0347] 式I的化合物W及它們的藥學上可接受的鹽可W用作藥物，例如W藥物制劑的形 式。藥物制劑可W口服施用，例如W片劑、包衣片、糖衣丸、硬膠囊和軟膠囊、溶液劑、乳劑或 懸浮劑的形式。然而施用還可W通過直腸給藥（例如W栓劑的形式）或非腸道給藥（例如 W注射劑的形式）。
[034引式I的化合物和它們的藥學上可接受的鹽可W用藥學上惰性的，用于制備片劑、 包衣片、糖衣丸（gragees)和硬膠囊的無機或有機賦形劑加工。乳糖，玉米淀粉或其衍生 物、滑石硬脂酸或其鹽等可W用作例如片劑，糖衣丸和硬膠囊的賦形劑。
[0349] 適用于軟膠囊的賦形劑例如植物油、蠟、油脂、半固體和液體多元醇等。
[0巧0] 適用于制備溶液劑和糖漿劑的賦形劑例如水、多元醇、庶糖、轉化糖、葡萄糖等。
[035。 適用于注射劑的賦形劑例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。
[0352] 適用于栓劑的賦形劑例如天然的油或硬化的油、蠟、油脂、半液體或液體多元醇 等。
[0353] 此外，藥物制劑可W含有防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色 劑、調味劑、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑、遮蔽劑或抗氧化劑。它們還可w包含其它有治療 價值的物質。
[0354] 劑量可W在寬范圍內變化且在每種具體情況下當然要適合個體需求。通常，口服 施用的情況下，通式I化合物的每人每天的合適的劑量應當是大約10至lOOOmg，但必要的 時候可W超過上述上限。
[0巧5] 通過實施例在下文中闡述本發(fā)明，該實施例不具有限定作用。
[0356] 如果得到的制備樣品是對映異構體和非對映異構體的混合物，純的對映異構體或 非對映異構體可W通過本文描述的方法或本領域技術人員已知的方法（例如手性色譜或 結晶）分離。
[0巧7] 1.締酬的制備 防35引?化)-庚-3-備-2-刪（備酉同la) 防359]
[0360]締酬la購自AlfaAesar且不經(jīng)純化使用。 陽36。?化）-姿-3-備-2-刪（備刪化）
[0362]
[036引締酬化和Ic購自WakoPure化emicalIn化stries且不經(jīng)進一步純化使用。
[0364] ?(E)-5-甲辜每己一3- -2-酉同（酉同Ic)
[0365]
[0366] 締酬Ic購自Tokyo化emicalIn化st巧且不經(jīng)進一步純化使用。 陽367] ?化）-6-龍甚R-3-備-2-刪（備刪Id)
[0368]
[036引3-苯基丙-1-醒巧.OmmoU溶解于邸2化（15血）中。向該溶液中加入1-(立苯 基麟締）-2-丙酬巧.Ommol)并且溶液回流2化。混合物濃縮并通過閃柱色譜（己燒/己酸 己醋）純化得到締酬Id。63% ;無色油狀物。 370] ?化）-宰-3-備-7-快-2-刪（備刪le)
[0371]
[0；37引戊-4-訣-1-醇（lOmmoU，PCC(4. 3g，20mm0U和娃藻 ± (4. 3g)的混合物在CH2Cl2(30血）中室溫下攬拌比?；旌衔镉肅&C12稀釋，過濾并濃縮。生成的淺黃色油狀 物溶解在CH2Cl2(30mL)中。向該溶液中加入1-(立苯基麟締）-2-丙酬（33mm0U并且溶 液回流2化?；旌衔餄饪s并通過閃柱色譜（己燒/己酸己醋）純化得到締酬le。30% ;無 色油狀物。光譜數(shù)據(jù)與先前H.Wu,S.Rado址it,J.M. 0'Brien,A.M. ;Hoveyda,J.Am.Qiem. Soc. 2012, 134, 8277報道的光譜數(shù)據(jù)吻合。 37引?化)-宰-3. 7-二備-2- §同（備§同If)
[0374]
[0375] 標題化合物類似于締酬le由戊-4-締-1-醇制備。44 % ;無色油 狀物。iH匪R(400MHz,CDCI3): 5 6.80 6.09 5.81 5.0 9-5. 01 (m, 2H)，2. 35-2. 30 (m, 2H)，2. 30-2. 17 (m, 5H)。"CNMR(l〇〇MHz，CDCI3) :5 198.6, 147. 4, 137. 0, 131.6, 115. 7, 32. 1，31. 7, 26. 9。
[OW引 ?巧)-2-巧-氧代己-3-締-1-基）異嗎I噪腑-1. 3-二酬（締酬Ig)
[0377]
[037引標題化合物類似于締酬le由2-(3-哲基丙基）異嘲噪咐-1,3-二酬制 備。58 %;無色固體；mp:93-95。電NMR(400MHz，CDCl3):5 7. 77-7. 74(m，2H)，7.68 -7. 64(m，2H)，6. 71(dt，J= 16.0Hz，7. 2Hz，lH)，6. 00(d，J= 16. 0Hz，lH)，3. 79(t，J =7. 2Hz, 2H)，2. 59-2. 53 (m, 2H)，2. 16 (s, 3H)。"cNMR(lOOMHz,CDCI3) :5 198. 2, 168. 1，143.6, 134. 1，133. 3, 131.8, 123. 3, 36. 3, 31.6, 26. 7。 37引 ?化)-7-((叔T甚二甲甚甲巧院甚）氧）庚-3-備-2-刪（備刪比)
[0380]
[0381]標題化合物類似于締酬le由3-((叔了基二甲基甲娃烷基）氧） 丙-1-醇制備。41 % ;無色油狀物。咱NMR(400MHz，CDCl3): 56. 83(化，J= 16.OHz, 7. 2Hz, 1H)，6. 09 (化，J= 16.OHz, 1.6Hz, 1H)，3. 64 (t,J=6. 4Hz, 2H)，2. 32-2. 27 (m, 2H)，2. 24 (s, 3H)，1. 72-1. 65 (m, 2H)，0. 90 (s, 9H)，0. 05 (s,6H)。"CNMRQOOMHz,CDCI3) :5 198.6, 148. 2, 131. 4, 62. 2, 31. 2, 29. 0, 26.8, 25. 9, 18. 3, -5. 34。 陽38引?化)-7-氯庚-3-備-2-刪（備酉同li)
[0383]
[0384] 標題化合物類似于締酬le由3-氯丙-1-醇制備。81 % ;無色油狀 物。iHNMR(400MHz，CDCl3) : 56. 78 (dt，J16.0Hz,6.8Hz, 1H),6. 13(dt，J= 16.OHz, 1. 2Hz,IH)，3. 57 (t,J=6. 4Hz, 2H)，2. 44-2. 38 (m, 2H)，2. 26 (s, 3H) 2. 00-1. 92 (m, 2H)。"cNMRQOOMHz,CDCI3) : 5 198. 3, 146. 0, 132. 0, 44. 0, 30.8, 29. 5, 27. 1。 陽3財 ?化)-4-龍甚T-3-備-2-刪（備刪1i)
[0386]
[0387] 締酬Ij購自A1化ich且不經(jīng)進一步純化使用。
[038引 2.說紅類物質的制備 陽38引 ?嗎I噪腑-2. 3-二酬（誌紅2a)
[0390]
[03W]說紅2a購自化calaitesque且不經(jīng)純化使用。 陽39引 ? 4-氯呵噪腑-2. 3-二刪（諭奸化)
[0393]
[0394] 說紅化購自Tokyo化emicalIn化st巧且不經(jīng)純化使用。 陽39引 ? 4-演呵噪腑-2. 3-二刪（諭奸2c)
[0396]
[0397] 說紅2c購自Tokyo Qiemical IndustiT且不經(jīng)純化使用。 陽39引 ?5-甲基嗎I噪腑-2. 3-二酬（誌紅2d)
[0399]
[0400] 說紅2d購自Tokyo化emical In化st巧且不經(jīng)純化使用。
[0401] ? 5-演呵噪腑-2. 3-二刪（諭奸2e)
[0402]
[0403] 說紅2e購自Tokyo化emical In化st巧且不經(jīng)純化使用。
[0404] ? 6-氯呵噪腑-2. 3-二刪（諭奸2f)
[0405]
[0406] 說紅2f購自Tokyo化emical In化st巧且不經(jīng)純化使用。
[0407] 3.催化劑的制備
[0408].胺A
[0409] 胺A通過已報道的方法合成。
[0410]
[0411] 在0°C下向辛可巧定（2. 9g，10mm〇U和；己胺（4. 2血，30mm〇U的邸2(：12溶液 (200mL)中滴加甲橫酷氯（1.56mL，20mmol)并且混合物在相同溫度下攬拌。比后，混合物 用飽和Na肥〇3(100mLX3)和鹽水（100mLX2)洗漆，用Na2S〇4干燥并濃縮。剩余物溶解于 DMF/H20(5:l，60血）中。向該溶液中加入NaN3a.3g，20mmol)且生成的混合物在90°C下攬 拌化。冷卻至室溫后，將混合物傾入水中并用己酸己醋萃?。?00血X3)。合并有機層，用水 (100血X2)和鹽水（100血X2)洗漆，用Na2S〇4干燥并濃縮。剩余物通過閃柱色譜（CH2CI2/MeOH= 40/1至20/1)純化W提供相應的黃色油狀物的疊氮化合物衍生物（2.Og，產率63% )。將疊氮化物衍生物溶解于THF/H20(7: 1，70mL)中并加入S苯基麟化Og，6. 3mmol)?；旌?物在50°C下攬拌22h。冷卻至室溫后，濃縮混合物并用肥1水溶液（1N，lOmLX。萃取。合 并水層，用邸2化（1〇血洗漆，用飽和K2CO3調至堿性并用邸2化（100血萃取。合并 有機層，用鹽水洗漆（100mLX2)，用Na2S〇4干燥，濃縮。剩余物通過閃柱色譜（CHsCls/MeOH = 20/1至C&Cls/MeOH/S己胺=10/1/1)純化W提供淺黃色粘稠油狀物胺A(l. 23g，67%) 。電NMR(400MHz,CDCI3) : 58.88(d,J= 4. 4Hz,IH)，8. 34 (brs,IH)，8. 20 (d,J=8. 4Hz,IH)， 7. 69 (m,IH)，7. 57 (m,IH)，7. 50 (brd,J= 4. 4Hz,IH)，5. 78 (ddd,J= 17. 2Hz, 10.OHz, 7.細z, IH)，5. 00-4. 93 (m, 2H)，4. 69 (brd,J=8.OHz,IH)，3. 28-3. 14 (m, 2H)，3. 05 (br,IH)，2. 82-2 .73 (m, 2H)，2. 27-2. 24 (m,IH)，1. 97 (brs, 2H)，1. 59-1. 51 (m, 3H)，1. 42-1. 37 (m,IH)，0. 75-0 .69(m,IH)。"cNMRQOOMHz,CDCI3) : 5 150. 4, 148.6, 148. 5, 141. 9, 130. 54, 130. 47, 129. 0， 127. 7, 126. 5, 123. 3, 119.6, 114. 3, 62. 0, 56. 3, 41. 0, 39. 9, 28. 1，27.6, 26. 0。ESI-HRMS:計 算值Ci9H24N3(MH+) 294. 1970,測量值 294. 1967。
[04。]?胺B、C、D巧H
[0413] 胺B和C通過用于合成胺A的方法從相應的金雞納生物堿醇合成。胺D通過報道 的方法從胺A合成。胺H通過報道的方法合成。
[0414]?胺E、F巧G
[0415]胺E、F和G各自購自TokyoQiemicalIndustiT,Wako化reQiemicalIndustries和A1化ich，且不經(jīng)純化使用。
[0416] ?酸I牽N
[0417] 酸I至N購自WakoPureQiemicalIndustries并且不經(jīng)純化使用。
[041引 ?硫脈0
[0419] 硫脈0購自Tokyo化emicalIn化st巧并且不經(jīng)純化使用。
[0420] 4.螺環(huán)四氨化喃酬和它們的衍生物的制備
[0421]連施例1 (產物3aa)
[0422] (2'S，6' 時-6' -丙基-5'，6' -二氨螺環(huán)[嘲噪咐-3, 2' -化喃]-2, 4(3'H)-二酬 (3aa主要非對映異構體）。
[0423]向胺A(^0. 04mmol, 11.8mg)和酸JX0.OSmmol, 22.Omg)的甲苯溶液（超 級脫水，0. 4血）中加入硫脈0(0. 04mmol,20.Omg),締酬la(l.Ommol)和說紅 2a(0. 2mmol，29. 4mg)?；旌衔铮ㄆ鹗紴閼腋∫海┦覝兀?4°C)攬拌至說紅消耗完（TLC監(jiān) 測）?；旌衔锿ㄟ^閃柱色譜純化（己燒/己酸己醋=2:1或己燒/丙酬=3:1)得到產物 3aa。將主要非對映異構體與次要非對映異構體分離。次要非對映異構體（如果存在）隨 主要非對映異構體一起獲得。純化前通過咱NMR分析確定化；反應混合物用CDCls稀釋并 對該混合物進行分析。表2和3中的收率是3的主要非對映異構體的收率（對于粗混合物 中化>14:1的情況）或主要和次要非對映異構體的聯(lián)合收率。主要非對映異構體的ee值 通過手性相HPLC確定。
[0424]
[04巧]無色晶體；mp118-120°C(來自己燒/CH2Cl2,99%ee)。[a]2>126.I(c0. 50，CH 2CI2, 99 %ee)。咱NMR(400MHz，CDCI3) : 58. 65 (s,IH)，7. 31 扣J= 7.6Hz,IH)，7. 18 (d,J =7.細z，lH)，7. 02(t，J= 7.6Hz，lH)，6. 96(d，J= 7.細z，lH)，4. 33(m，lH)，3. 09(d，J =14. 2Hz,IH)，2. 66-2. 61 (m, 2H)，2. 42 (d,J= 14. 2Hz,IH)，1. 75-1. 70 (m,IH)，1. 5 8-1.53(m，lH)，1.41-1.26(m，2H)，0. 84(t，J= 7. 6Hz，3H)。"c匪R(l〇〇MHz，CDCl3) :5 205. 5, 175. 3, 140. 5, 130. 3, 128. 3, 125. 5, 122.8, 111. 0, 78.8, 73. 0, 47. 7, 45. 5, 38. 3, 18. 2, 13. 7。ESI-HRMS:計算值C