專利名稱：：1,3,5-三取代的三唑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及2-[3-(2，2_二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯_5_基氨基)_5_(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺及其藥學上可接受的鹽，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物以及它們在治療中的用途。本發(fā)明涉及α7煙堿樣(nicotinic)乙酰膽堿受體的選擇性的、有效的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑，其具有增加煙堿樣受體激動劑的效力的性能。
背景技術(shù)：
：EP1044970描述了作為神經(jīng)肽Y受體配體的3-烷基氨基-1，2，4-三唑類化合物。MakaraG.M·，等的論文(OrganicLetters(2002)Vol.4(10)；1751-1754)描述了3_烷基氨基-1，2，4-三唑類化合物的固相合成并舉例說明了N-(4-甲氧基苯基)-l-甲基-5-(4-甲基苯基)-1Η-1，2，4-三唑-3-胺[CASNo:433710-55_5]的不成功合成，卻沒有關(guān)于此化合物的潛在治療應用的記載，特別是沒有關(guān)于此化合物作為α7煙堿樣乙酰膽堿受體的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的用途的記載。ChenChen等人在Bioorganic&MedicinalChemistryLetters11(2001)3165-3168中描述了1_烷基_3_氨基-5-芳基-IH-[1，2，4]三唑類化合物，特別是N-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-5-(2,4-二氯苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-胺的合成，并描述了它們作為促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子-1(CRFl)拮抗劑的用途。
背景技術(shù)：
：膽堿能受體通常結(jié)合內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(ACh)，由此引起離子通道的開放。分別基于蠅蕈堿和煙堿的激動劑活性，哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的ACh受體可以被分成毒蕈堿亞型(mAChR)和煙堿樣亞型(nAChR)。所述煙堿樣乙酰膽堿受體是含有五個亞單元的配體門控離子通道?；谒鼈兊陌被嵝蛄?，nAChR亞單元基因家族成員已經(jīng)被分成兩組；一組含有所謂的β亞單元，以及第二組含有α亞單元。三種α亞單元，α7、α8和α9，當單獨表達時已經(jīng)表明形成了功能性受體，并由此推測生成同源低聚五聚受體?，F(xiàn)已開發(fā)出nAChR的變構(gòu)轉(zhuǎn)變狀態(tài)模型，其涉及至少一種靜止狀態(tài)，一種活化狀態(tài)和一種"脫敏"封閉的通道狀態(tài)，一種過程，通過該過程使得受體變?yōu)閷觿┎幻舾?。不同的nAChR配體可以使與其優(yōu)先結(jié)合的受體的構(gòu)象狀態(tài)穩(wěn)定。例如，激動劑ACh和(-)“煙堿分別使活性化和脫敏化狀態(tài)穩(wěn)定。煙堿樣受體的活性的改變與許多疾病有關(guān)。其中一些，例如重癥肌無力和常染色體顯性遺傳的夜間額葉癲癇(ADNFLE)與煙堿樣傳遞活性的減少有關(guān)，或者由于受體數(shù)量的減少或脫敏增加。煙堿樣受體減少還被假設(shè)是調(diào)節(jié)認知缺陷，在疾病如阿爾茨海默氏病和精神分裂癥中可見。來自煙草的煙堿的作用同樣被煙堿樣受體調(diào)節(jié)，由于煙堿的作用是穩(wěn)定處于脫敏狀態(tài)的受體，因此煙堿樣受體的活性增加可以降低吸煙的欲望。結(jié)合nAChRs的化合物已經(jīng)被建議用于治療一定范圍的涉及膽堿能功能減少的疾病，例如學習缺陷、認知缺陷、注意力缺陷或記憶喪失。α7煙堿樣受體活性的調(diào)節(jié)在許多疾病中被期望是有益的，所述疾病包括阿爾茨海默氏病、萊維體癡呆、注意力缺陷活動過強癥、焦慮癥、精神分裂癥、躁狂癥、躁狂性抑郁癥、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特(氏)綜合征、腦損傷或其它其中存在膽堿能突觸喪失的神經(jīng)病學、變性或精神障礙，包括時差綜合征、煙堿成癮、疼痛。然而，用煙堿樣受體激動劑治療，其與ACh作用在相同的部位，是成問題的，因為ACh通過過程(包括脫敏)和非競爭性阻斷不僅激活而且阻滯受體活性。此外，延長激活似乎引起持久失活。因此，ACh激動劑有望減少活性以及增強活性。一般地，在煙堿樣受體上，以及特別是在α7-煙堿樣受體上，脫敏限制了所施加的激動劑的作用的持續(xù)時間。發(fā)明概述我們現(xiàn)已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，2-[3-(2，2_二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯_5_基氨基)-5-(2，6_二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺可以提高激動劑在煙堿樣乙酰膽堿受體上的效力。具有這種作用類型的化合物被稱為"正變構(gòu)調(diào)節(jié)齊U"，其可能用于治療與煙堿樣傳遞減少有關(guān)的病癥。在治療背景下，這種化合物可以恢復正常的神經(jīng)元間傳達，而不會影響激活的時間曲線。此外，正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑預期不會產(chǎn)生在反復或長期施用激動劑后可能出現(xiàn)的受體的長期失活。本發(fā)明的正nAChR調(diào)節(jié)劑可用于治療或預防精神障礙、智力損傷障礙或疾病、其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的炎性疾病或病癥。本發(fā)明涉及具有正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑性質(zhì)的2-[3-(2，2_二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基氨基)-5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺，其提高激動劑在α7煙堿樣受體上的效力。本發(fā)明還涉及制備它們的方法以及包含它們的藥物組合物。本發(fā)明還涉及這種衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療或預防精神障礙、智力損傷障礙或疾病、或其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的病癥。本發(fā)明的化合物及其鹽在結(jié)構(gòu)上不同于現(xiàn)有技術(shù)的化合物，并且作為α7煙堿樣乙酰膽堿受體的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑具有其提高的藥理學活性，其具有其提高的水溶性和其改善的體外心血管安全參數(shù)，特別是降低的對hERG鉀通道的親合力。本發(fā)明涉及化合物(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其藥學上可接受的鹽或水合物或溶劑化物。對于治療用途，式(I)化合物的鹽是其中所述抗衡離子是藥學上可接受的那些。然而，非藥學上可接受的鹽也發(fā)現(xiàn)是有用的，例如在制備或純化藥學上可接受的化合物的過程中。所有鹽，不管它們是藥學上可接受的或藥學上不可接受的，都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本文的上下文中所述的藥學上可接受的加成鹽是指包含化合物(I)能夠生成的治療活性的無毒酸加成鹽形式。所述藥學上可接受的酸加成鹽可以方便地通過將所述堿形式用這些適宜的酸處理來獲得。適宜的酸包含，例如，無機酸如氫鹵酸，例如鹽酸或氫溴酸，硫酸、硝酸、磷酸等酸；或有機酸例如，諸如乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(例如乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、水楊酸、對氨基水楊酸、雙羥萘酸等酸。相反地，通過用適宜的堿處理，所述鹽形式可以轉(zhuǎn)化成游離堿形式。術(shù)語水合物和溶劑化物是指所述式(I)的化合物以及其鹽可以形成的水合物和醇化物。式(I)的化合物還可以以互變異構(gòu)體形式存在。雖然沒有明確地表示在上面式中的這些形式被旨指包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)?；衔锏闹苽洹愕兀景l(fā)明的化合物可以通過一系列步驟制得，其每個步驟是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的。特別地，本專利申請中的化合物可以根據(jù)下列制備方法(方案1至5)進行制備。方案1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>所述?；螂?II)以兩階段制得。在第一階段中，所述?；?I)與一價陽離子硫氰酸鹽，例如硫氰酸銨反應，得到相應的?；惲蚯杷猁}。此反應可以使用丙酮作為溶劑并在0°C至70°C的溫度、優(yōu)選在室溫下進行。在第二階段中，反應可以有利地在相同的反應介質(zhì)中進行，不需要分離中間體?；惲蚯杷猁}，加入苯胺(III)，得到式(II)的N-?；螂濉４朔磻ǔＴ?°C至70°C的溫度下進行，優(yōu)選在室溫下進行(方案1)。方案2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>在下一步中，N-酰基硫脲(II)的S-甲基化得到式(IV)的N-?；紒啺被虼?carbomimidothioicacid)，甲酯衍生物。此轉(zhuǎn)化需要存在堿，優(yōu)選強無機堿，如NaH或碳酸鉀，并且在非質(zhì)子傳遞溶劑例如DMF、THF等中，在-70°C至室溫的溫度范圍內(nèi)進行，優(yōu)選在0°C下進行(方案2)。方案3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>使用2-胼基乙酸乙酯鹽酸鹽，可以將式(IV)的N-?；紒啺被虼峒柞パ苌镛D(zhuǎn)化為式(V)的1，2，4_三唑。此轉(zhuǎn)化反應典型地在質(zhì)子溶劑如甲醇或高級醇中進行并需要室溫至150°C的溫度。在一種具體實施方案中，所述高級醇是叔丁醇以及所述反應溫度在70°C至120°C之間，最優(yōu)選為100°C。優(yōu)選加入化學計算量的堿。所述堿可以是無機堿，如乙酸鉀或碳酸鉀，然而更優(yōu)選地，所述堿是叔胺，如二異丙基乙胺等等(方案3)。方案4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>通過用過量的乙胺在質(zhì)子溶劑中在0°C至80°C的溫度下處理，優(yōu)選在室溫(方案4)下處理，式(V)的[1，2，4]三唑-1-基]-乙酸乙酯被轉(zhuǎn)化為相應的[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺(VI)。方案5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>最終的式⑴的二甲基-取代的吡啶并三唑可以通過將2-氯吡啶基前體(VI)用過量(3-15當量)的格利雅試劑MeMgBr在催化量的乙酰丙酮鐵(III)存在下在由75%至85體積％THF和15%至25體積％NMP組成的溶劑系統(tǒng)中處理制備。所述轉(zhuǎn)化可以在0°C至50°C的溫度范圍內(nèi)進行，最優(yōu)選在0°C至25°C的溫度范圍內(nèi)進行(方案5)。藥理學本發(fā)明的化合物被發(fā)現(xiàn)是α7煙堿樣受體的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑。α7煙堿樣受體(α7nAChR)屬于cys-loop，離子移變(ionotropic)的配體門控離子通道的超家族，其包括5-HT3、GABAa和甘氨酸受體家族。它被乙酰膽堿及其分解(breakdown)產(chǎn)物膽堿激活，且α7nAChR的一個主要特點是其在激動劑長期存在下它的快速脫敏作用。其是在腦中的第二種最豐富的煙堿樣受體亞型且是釋放許多神經(jīng)遞質(zhì)的重要調(diào)節(jié)劑。其離散分布在與注意力和認知歷程相關(guān)的數(shù)個腦結(jié)構(gòu)中，例如海馬和額葉前部的皮質(zhì)，并在人類中涉及各種精神和神經(jīng)障礙。它還涉及到膽堿能炎性途徑。其與精神分裂癥相關(guān)的遺傳學證據(jù)是見于精神分裂癥標記(感覺門控缺陷)與α7基因的核心啟動子區(qū)域中的15ql3_14和多晶型現(xiàn)象上的α7位置之間的強烈連接的形式。病理學證據(jù)指向在精神分裂癥患者大腦的海馬、前葉和有色帶的皮質(zhì)、在帕金森氏病和阿爾茨海默氏病和在自閉癥的腦室壁核和核心(nucleusreuniens)中失去α7免疫反應性和α-Btx-結(jié)合。藥理學證據(jù)例如與正常者比較，精神分裂癥患者的明顯抽煙習慣已經(jīng)被解釋成患者試圖自身投藥醫(yī)治(medicate)以補償在α7煙堿能(nicotinergic)傳遞中的缺乏。在當前腦膽堿能活性低(例如第2睡眠階段)時給藥煙堿并在精神分裂癥患者中暫時恢復正常感覺門控的動物和人類二者的模型中，感覺門控中缺陷的瞬時正?；?脈沖前抑制PPI)已經(jīng)被解釋成α7煙堿樣受體的瞬時激活接著進行脫敏的結(jié)果。因此，有充分的理由來推測，激活α7nAChR對于許多CNS(精神病學的和神經(jīng)病學的)障礙將具有治療上有益的效果。正如已提及的那樣，所述α7nAChR在天然遞質(zhì)乙酰膽堿以及外源性配體如煙堿的持續(xù)存在下迅速脫敏。在脫敏狀態(tài)下，所述受體保持配體結(jié)合但在功能上是失活的。這對天然遞質(zhì)如乙酰膽堿和膽堿不是太大的問題，因為這些是非常強烈的分解(乙酰膽堿酯酶)和清除(膽堿運輸者(transporter))機理的底物。這些遞質(zhì)分解/清除機理在生理學有用范圍內(nèi)可能保持在可激活和脫敏的a7nAChRs之間的平衡。然而，合成的激動劑，其不是天然分解和清除機理的底物，可以理解為具有潛在的能力，以進行可過度刺激并且還將a7nAChR群體平衡推向持續(xù)地脫敏狀態(tài)，這在其中在a7nAChR表達或功能方面中的缺陷起作用的疾病中是不合意的。激動劑在本質(zhì)上必須靶向ACh結(jié)合袋，其對于不同的煙堿樣受體亞型高度地保守，導致其它煙堿樣受體亞型的非專一性激活作用的潛在危害反應。因此，為了避免這些潛在傾向性，對于a7激動作用的一個替代治療策略是增強受體對于具有正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑(PAM)的天然激動劑的反應。PAM定義為一種藥劑，其結(jié)合至與激動劑結(jié)合部位不同的位置，且因此不能預期具有激動劑或脫敏性質(zhì)，但是增強a7nAChR對于天然遞質(zhì)的反應。該策略的價值是對于給定量的遞質(zhì)，a7nAChR反應的大小在PAM存在下大于沒有PAM時可能的傳遞水平。所以對于其中在a7nAChR蛋白中有缺陷的障礙，在α7煙堿能傳遞中PAM誘發(fā)的增加可能是有利的。因為PAM依賴于天然遞質(zhì)的存在，過度刺激的可能性受到天然遞質(zhì)的分解/清除機理的限制?；诙ㄐ缘膭恿W性質(zhì)，本發(fā)明的化合物分為類型1-4，其根據(jù)全細胞電壓鉗記錄進行測定。這種分類基于如上文所述的a7ΡΑΜ化合物對于由激動劑使用所引起的信號的作用。特別地，所述激動劑是濃度為ImM的膽堿。在一種優(yōu)選的實驗背景中，如下文所述，所述α7PAM化合物和膽堿同時給予所述細胞。如下文所述的脫敏作用是在全細胞電壓鉗電生理學測定中使用激動劑期間當激活時受體的關(guān)閉，被視為通過激動劑最初激活后外向電流的減少。PAM類型1-4的定義如下文所述類型1化合物提高由ImM膽堿引起的電流的作用大小，但是最低限度地改變所述受體的動力學。特別地，由激動劑引起的脫敏的速度和程度沒有受影響。因此，對ImM膽堿的化合物調(diào)節(jié)的響應在不存在α7ΡΑΜ化合物的情況下為ImM膽堿響應的線性比例之結(jié)束。類型2化合物提高由ImM膽堿引起的電流的作用大小，同時減小脫敏的速度和/或程度。類型3化合物提高由ImM膽堿引起的電流的作用大小。當在最高達10μM的較高濃度下進行測試時，它們完全抑制脫敏，特別是ImM膽堿應用250毫秒。類型4化合物允許受體的最初脫敏作用，接著在激動劑使用期間受體再打開。在α7ΡΑΜ化合物的低效力濃度下，激動劑誘導的激活，接著是脫敏，仍然可以從化合物誘導的再打開分離而作為最初內(nèi)向電流的最大值。在α7ΡΑΜ化合物的較高效力濃度下，由于脫敏作用使得再打開發(fā)生得比關(guān)閉更快，以便初始電流最大值消失。因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種治療方法，其包括給藥或者正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑作為唯一的活性物質(zhì)，由此調(diào)節(jié)內(nèi)源性煙堿樣受體激動劑如乙酰膽堿或膽堿的活性，或給藥正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑以及煙堿樣受體激動劑。在本發(fā)明此方面的一種具體形式中，所述治療方法包含用在此所述的α7煙堿樣受體的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑和α7煙堿樣受體激動劑或部分激動劑進行治療。具有α7煙堿樣受體激動活性的適宜化合物的實例包括，但不局限于-1，4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷_4_羧酸，4_溴苯基酯，一鹽酸鹽(SSR180711A)；-(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2.]辛烷-3，5‘-噁唑烷]_2‘-酮;-3-[(2，4_二甲氧基)亞芐基]-假木賊因二鹽酸鹽(GTS-21)；-[N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛_3_基]_4_氯苯甲酰胺鹽酸鹽]PNU-282987)。本發(fā)明的化合物可用于治療或預防精神障礙、智力損傷障礙或疾病、或其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體活性是有益的病癥。本發(fā)明的方法的一個具體方面是一種治療學習缺陷、認知缺陷、注意力缺陷或記憶喪失的方法，在許多疾病中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體活性被期望是有益的，所述疾病包括阿爾茨海默氏病、萊維體癡呆、注意力缺陷活動過強癥、焦慮癥、精神分裂癥、躁狂癥、躁狂性抑郁癥、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特(氏)綜合征、腦損傷或其它其中存在膽堿能突觸喪失的神經(jīng)病學、變性或精神疾病，包括時差綜合征、煙堿成癮、疼痛。所述化合物還可以發(fā)現(xiàn)作為抗炎藥物的治療用途，因為所述煙堿樣乙酰膽堿受體a7亞單元對通過膽堿能炎性途徑抑制細胞因子合成來說是必不可少的。其中可以用所述化合物進行治療的適應癥的實例是內(nèi)毒素血癥、內(nèi)毒素休克、敗血病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、多發(fā)性硬化、炎性腸病、炎性膽病、克羅恩病、胰腺炎、心力衰竭和同種異體移植排斥。鑒于上述藥理學性質(zhì)，所述化合物及其藥學上可接受的加成鹽可以用作藥物。特別地，本發(fā)明的化合物可用于制備藥物，所述藥物用于治療或預防精神障礙、智力損傷障礙或疾病或其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的病癥。鑒于所述化合物的用途，本發(fā)明提供了一種治療患有下述疾病的溫血動物包括人類的方法，或防止溫血動物包括人類的方法，所述溫血動物患有其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的疾病，例如精神分裂癥、躁狂癥和躁狂性抑郁癥、焦慮癥、阿爾茨海默氏病、學習缺陷、認知缺陷、注意力缺陷、記憶喪失、萊維體癡呆、注意力缺陷活動過強癥、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特(氏)綜合征、腦損傷、時差綜合征、煙堿成癮和疼痛。所述方法包含給藥于包括人類在內(nèi)的溫血動物，即全身性或局部給藥，優(yōu)選口服給藥，有效量的式(I)化合物，包括其所有立體化學異構(gòu)形式、其藥學上可接受的加成鹽、溶劑化物或水合物。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員將會認識到，本發(fā)明的PAM’s的治療有效量是足以調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體活性的數(shù)量并且該數(shù)量尤其是可以根據(jù)疾病的類型、治療制劑中化合物的濃度以及患者的狀況進行改變。一般地，作為治療劑所給予的PAM的數(shù)量以用于治療其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的疾病，例如精神分裂癥、躁狂癥和躁狂性抑郁癥、焦慮癥、阿爾茨海默氏病、學習缺陷、認知缺陷、注意力缺陷、記憶喪失、萊維體癡呆、注意力缺陷活動過強癥、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特(氏)綜合征、腦損傷、時差綜合征、煙堿成癮和疼痛，將由主治醫(yī)師根據(jù)具體情況而確定。一般地，適宜的劑量是在治療位點產(chǎn)生0.5ηΜ至200μΜ,更通常5ηΜ至50μM的PAM的濃度的劑量。為了獲得這些治療濃度，向需要治療的患者可能給藥0.005mg/kg至10mg/kg體重，特別是0.lmg/kg至0.50mg/kg體重。實現(xiàn)治療效果所需要的本發(fā)明化合物，在本文中也被稱為活性組分，的數(shù)量當然隨具體情況而改變，隨具體的化合物、給藥途徑、接受者的年齡和狀況以及所治療的具體障礙或疾病而改變。治療方法還可以包括以每日攝取1-4次之間的給藥方案給予所述活性組分。在這些治療方法中，本發(fā)明的化合物優(yōu)選在給藥(admission)前進行配制。如下文所述，適宜的藥物制劑是通過已知方法使用公知的和容易得到的組分進行制備。本發(fā)明還提供用于預防或治療其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的疾病的組合物，所有疾病為例如精神分裂癥、躁狂癥和躁狂性抑郁癥、焦慮癥、阿爾茨海默氏病、學習缺陷、認知缺陷、注意力缺陷、記憶喪失、萊維體癡呆、注意力缺陷活動過強癥、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特(氏)綜合征、腦損傷、時差綜合征、煙堿成癮和疼痛。所述組合物包含治療有效量的式(I)化合物和藥學上可接受的載體或稀釋劑。雖然所述活性組分有可能單獨給藥，但是所述活性組分優(yōu)選以藥物組合物的形式存在。因此，本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物以及藥學上可接受的載體或稀釋劑。所述載體或稀釋劑必須是"可接受的"，在這種意義上其與組合物的其它組分相容并且對于其接受者是無毒害作用的。本發(fā)明的藥物組合物可以通過藥學領(lǐng)域中公知的任何方法進行制備，例如，使用Gennaro等人Remington'sPharmaceuticalSciences(第18版,Mack出版社，1990,尤其是參見第8部分藥物制劑及其制備)中所述的那些方法。作為活性組分的治療有效量的具體化合物，其以堿形式或加成鹽形式存在，與藥學上可接受的載體以密切混合的形式結(jié)合，根據(jù)給藥所期望的制劑形式，所述藥學上可接受的載體可以呈寬范圍的各種形式。這些藥物組合物理想地是呈單元劑型，其優(yōu)選適于全身性給藥如口服、經(jīng)皮或腸胃外給藥；或局部給藥如通過吸入、鼻噴霧、滴眼劑或通過乳劑、凝膠、香波等等。例如，在制備口服劑型的組合物中，可以使用任何常見的藥物介質(zhì)，諸如，例如，水、二元醇類、油類、醇類等，在口服液體制劑例如混懸液、糖漿、酏劑和溶液的情況中或固體載體例如淀粉、糖、高嶺土、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等，在粉劑、丸劑、膠囊和片劑的情況中。因為它們易于給藥，片劑和膠囊代表最有利的口服單位劑型，在這種情況下，很明顯使用固體藥物載體。對于腸胃外組合物，所述載體通常包含無菌水，至少在很大程度上，盡管還可以包括其它組分，例如，以用以幫助溶解?？梢灾苽淇勺⑸淙芤海?，其中載體包含鹽水溶液、葡萄糖溶液或鹽水和葡萄糖溶液的混合物?？勺⑸浠鞈乙阂彩强梢灾苽涞?，在此情況中，可以使用適宜的液體載體、懸浮劑等。在適合于經(jīng)皮給藥的組合物中，所述載體任選包含滲透增強劑和/或適宜的可濕潤劑，任選與少比例的任何性質(zhì)的適宜添加劑混合，所述添加劑應不會對皮膚造成任何明顯的有害作用。所述添加劑可以有助于向皮膚給藥和/或可以有助于制備所需的組合物。這些組合物可以以各種方式給藥，例如作為經(jīng)皮貼片、作為點片、或作為軟膏劑的形式給藥。為了易于給藥和劑量均勻，將上述藥物組合物配制成劑量單位形式是特別有利的。在本說明書和權(quán)利要求書中使用的劑量單位形式是指適合作為單元劑量的物理上不連續(xù)(discrete)的單位，每一單位含有計算產(chǎn)生所需治療效果的預先確定量的活性組分，以及所需的藥物載體。這些劑量單位形式的實例是片劑(包括劃痕的(scored)或包衣的片劑)，膠囊，丸劑，粉袋，扁片(wafers)，可注射溶液或混懸液，一茶匙容量，一湯匙容量等，以及其單獨的(segregated)倍數(shù)。本發(fā)明的化合物可用于全身性給藥，例如口服、經(jīng)皮或腸胃外給藥；或局部給藥如通過吸入、鼻噴霧、滴眼劑或通過乳劑(cream)、凝膠、香波等等。所述化合物優(yōu)選通過口服給藥。給藥的準確劑量和頻率取決于所使用的具體的式(I)化合物，被治療的具體病癥，被治療的病癥的嚴重程度，具體患者的年齡、體重、性別、疾病的程度、和一般身體狀況以及個體可能正在采取的其它藥療法(medication)，其為本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員眾所周知。此外，顯而易見的是，所述有效的每日用量可以根據(jù)被治療的患者的反應和/或根據(jù)處方本發(fā)明化合物的醫(yī)生的評估而減低或增加。式(I)的化合物還可以與其它常規(guī)的a7煙堿樣受體激動劑聯(lián)合應用，諸如，例如1，4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷-4-羧酸，4-溴苯基酯，一鹽酸鹽(SSR180711A)；㈠-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2.]辛烷-3，5'-噁唑烷]-2'-酮；3-[(2，4_二甲氧基)亞芐基]-假木賊因二鹽酸鹽(GTS-21)；或[N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-氯苯甲酰胺鹽酸鹽]PNU-282987)。因此，本發(fā)明還涉及式(I)化合物與a7煙堿樣受體激動劑的聯(lián)合。所述聯(lián)合可以用作藥物。本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)品，其包含(a)式⑴化合物，和㈦“煙堿樣受體激動劑，作為混合制劑，用于同時、分開或連續(xù)給藥以治療其中調(diào)節(jié)a7煙堿樣受體是有益的疾病。不同的藥物可以與藥學上可接受的載體一起合并成單一制劑。具體實施例方式實驗部分下面實施例說明本發(fā)明化合物的幾種制備方法。除非另有說明，所有起始原料得自市購供應商并且其使用無需進一步純化。在上下文中，“DMF〃是指N，N-二甲基甲酰胺;“NMP〃是指1_甲基_2_吡咯烷酮；“THF"是指四氫呋喃和"DIPE"是指二異丙醚。對于本發(fā)明的中間體和化合物的LCMS-表征，使用下列方法。一般程序10HPLC測定使用AllianceHT2790(Waters)系統(tǒng)進行，如在下面各方法中所述，其包含具有脫氣裝置的四元泵、自動進樣器、柱恒溫箱(對于LCMS的程序1設(shè)在60°C，對于LCMS程序2設(shè)在40°C)、二極管-陣列檢測器(DAD)和柱。來自柱的液流被分流至MS光譜儀(spectrometer)。MS檢測器配置有電噴射離子化源。質(zhì)譜通過在1秒內(nèi)從100掃描到1000獲得，使用0.1秒的停留時間。毛細管針電壓是3kV，源溫維持在140°C。氮氣被用作噴霧器氣體。數(shù)據(jù)獲取使用Waters-MicromassMassLynx-Openlynx數(shù)據(jù)系統(tǒng)來進行。LCMS程序1除一般程序外反相HPLC在XterraMSC18柱(3.5iim，4.6x100mm)上以1.6ml/min的流速進行。使用三種流動相(流動相A95%25mM乙酸銨+5%乙腈；流動相B乙腈；流動相C甲醇)，以運行梯度條件在6.5分鐘內(nèi)以100%A至50%B和50%C運行，在0.5分鐘內(nèi)至100%B，接著保持這些條件1分鐘，然后用100%A再平衡1.5分鐘。使用10ul的注射體積。對于正電離模式，錐電壓是10V，對于負電離模式，錐電壓是20V。LCMS程序2(僅用于中間體)除一般程序外反相HPLC在Chromolith(4.6x25mm)上以3ml/min的流速進行。使用三種流動相(流動相A:95%25mM乙酸銨+5%乙腈；流動相B乙腈；流動相C甲醇)，以運行梯度條件在0.9分鐘內(nèi)96%A、2%B和2%C，至49%B和49%C，在0.3分鐘內(nèi)至100%B，然后保持0.2分鐘。使用2iU的注射體積。對于正電離模式，錐電壓是10V，對于負電離模式，錐電壓是20V。熔點熔點(m.p.)用DSC823e(Mettler-Toledo)進行測定。熔點用30°C/分鐘的溫度梯度進行測量。最高溫度是400°C。獲得的數(shù)值存在通常與這種分析方法相關(guān)的實驗不確定性。A.中間體的制備描述11-(2_氯-6-甲基-吡啶-4-羰基)-3-(2，2_二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-硫脲(D1)硫氰酸，銨鹽(11)(9.35g；0.1230mol)在2_丙酮(300ml)中在室溫下進行攪拌。然后，加入2-氯-6-甲基-4-吡啶碳酰氯(22.2g；0.1170mol)，將所述反應混合物在室溫下攪拌2小時。加入在一些2-丙烷中的2，2-二氟-1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-胺(19.2g；0.lllOmol)，所述反應混合物在室溫下攪拌1小時。然后，將反應混合物傾倒冰上，濾出殘余物并干躁。收率38.lg中間體D1。LCMS保留時間1.03；[M-HF峰384；LCMS步驟2描述2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>NaH,60%(2.2g；0.0550mol)在THF(170ml)中在冰浴上在N2中進行攪拌。然后，加入中間體D1(19.3g；0.500mol)，并在0°C下攪拌1小時。然后，加入CH3I(7.8g；0.0550mol)，將所述反應混合物溫熱至室溫過夜。加入水，在真空中蒸除THF。濾出沉淀，用水洗滌并干燥。收率22.86g中間體D2。保留時間1.15；[M-H]_峰398；LCMS步驟2LCMS描述3[5-(2-烯-5-基氨基)_<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>將中間體D2(13.6g;0.0340mol)、2-胼基乙酸乙酯，鹽酸鹽(11)(10.5g；0.0680mol)、N-乙基-N-(l-甲基乙基)-2-丙胺(13.2g；0.1020mol)和t_Bu0H(400ml)回流2小時。然后，將反應混合物蒸發(fā)。加入水，所述產(chǎn)物用CH2C12萃取。有機層在MgS04*干燥，過濾，在真空中蒸發(fā)。然后，將殘余物在乙醇/HC1中加熱到60°C達1小時。將反應混合物部分蒸發(fā)，濾出沉淀并干燥。收率4.57g中間體D3。LCMS保留時間1.03；[M-Hr峰450；LCMS步驟2描述42-[5-(2_氯-6-甲基-吡啶-4-基)-3-(2，2_二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基氨基)_[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺(D4)2-氯-N-[(2，2-二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯_5_基氨基)-甲基硫烷基-甲基]-6-甲基-異煙酰胺(D2)中間體D4(0.70g;0.0016mol)、乙酰丙酮鐵(III)(0.067g;0.0002mol)、THF(20ml)和1-甲基-2-吡咯烷酮(5ml)在0°C下在N2中進行攪拌。加入在乙醚中的過量CH3MgBr(2M)，將所述混合物帶至室溫。然后，所述反應混合物用CH30H分解，在真空中蒸發(fā)。加入水和CH2C12，所述混合物在dicalite中過濾。濾液蒸發(fā)，加入水和DIPE。濾出沉淀，溶于CH2C12中，在MgS04中干燥，過濾并在真空中蒸發(fā)。將所述殘余物在水中攪拌，濾出沉淀并干燥。收率400mg化合物E1。熔點242.28°CLCMS保留時間5.12；[M+H]+峰431；LCMS步驟1NMR(BrukerDPX360MHz,DMS0-d6)8ppm9.62(s),8.37(t,J=5.4Hz)，7.67(d,J=2.1Hz)，7.38(s)，7.29(d,J=8.8Hz)，7.22(dd,J=8.8,2.2Hz)，4.84(s)，3.13(qd,J=7.2,5.5Hz)，2.50(s)，1.03(t，J=7.2Hz)C.藥理學實施例實施例C.lb刃32±通量成像(FDSS)材料a)分析緩沖液Hanks緩沖鹽水溶液(HBSS，Invitrogen，比利時)，補充以10mMHEPES(Invitrogen,比禾lj時)，CaCl2至最終濃度5mM，0.1%牛血清白蛋白VACI在CH30H(40ml；2M)中的中間體D3(lg；0.0022mol)和乙胺在室溫下攪拌過夜。由反應混合物中結(jié)晶出產(chǎn)物。濾出晶體，并干燥。收率700mg中間體D4。LCMS保留時間0.95；[M-HF峰449；LCMS步驟2B.最終化合物的制備2-[3-(2，2_二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯_5_基氨基)_5_(2，6_二甲基-口比唳-4-基)_[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺(E1)13(Sigma-AldrichNV,比利時)。b)鈣敏感染料-F1UO-4AMFluo-4AM(MolecularProbes,USA)10%Pluronicacid(MolecularProbes,USA)的DMSO中，得到一種儲備液，將該儲備液在補充以5mMprobenicid(Sigma,AldrichNV，比利時)的分析緩沖液中進行稀釋，以得到最終濃度2μΜ。c)384-孔板黑色384孔板黑色/透明板，PDL預涂覆(Corning，Incorporated,USA)d)鈣通量測量使用功能性藥物篩選系統(tǒng)(FDSS，Hamamatsu)測量胞內(nèi)游離鈣通量信號。方法使hα7-wtnAChR-表達GH4C1細胞的單層在多孔板(特別是涂覆有聚_D_賴氨酸的黑邊、透明底的384孔板)中生長24小時，然后填裝熒光鈣指示劑，在一種具體實施方案中是裝填fluo-4AM達最高120分鐘。在持續(xù)監(jiān)視FDSS中的由熒光的細胞鈣活動期間，通過將待測試化合物和α7煙堿樣受體激動劑施加至裝載的細胞而實時檢測PAM活性。當化合物給出的峰熒光響應大于激動劑單獨的響應時，被認為是a7nAChRPAM’S。在一種具體實施方案中，所述a7煙堿樣受體激動劑是膽堿，在一個更具體的實施方案中，膽堿以100μM的亞最大濃度施加。在本發(fā)明的另一環(huán)境(setting)中，待測試化合物在a7煙堿樣受體激動劑之前施加，在一種具體實施方案中，在所述激動劑之前最高達10分鐘施加。從單獨接受膽堿或分析緩沖液的孔中的熒光峰差異，計算各板上對膽堿的對照響應。本發(fā)明的化合物在從0.01μM至30μM的濃度范圍內(nèi)進行測試。當在30μM濃度進行測試時，當其強化膽堿信號至少250%時，化合物被認為是具有使人感興趣的活性(在沒有PAM的情況下，100μM膽堿的效力被定義為100%)。EC50值(效力)，最大作用(%效力)和Hill斜率通過擬合sigmoidal方程對數(shù)據(jù)進行估算，使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,Inc.,SanDiego,CA)當獲得清晰的頂端平臺的sigmoidal曲線時，EC5tl(或PEC5tl)以涉及半最大作用的濃度進行測定。當經(jīng)由在穩(wěn)定過度表達人類野生型α7受體的GH4C1細胞中的全細胞電壓鉗電生理學測量時，本發(fā)明的化合物對于膽堿的響應也具有增強的作用，正如下文所述。實施例C.2全細胞電壓鉗記錄來自哺乳動物細胞的全細胞電壓鉗記錄提供強力的方法以評價認為是配體門控離子通道的亞單元的膜蛋白的功能。這些蛋白通過內(nèi)源性或外源性配體進行的激活造成與受體相關(guān)的孔的開啟，離子由此流下至其電化學梯度。在hα7-wtnAChR表達GH4C1重組細胞系的情況中，對比受體的鈣的優(yōu)先滲透性表示鈣經(jīng)由ACh、膽堿以及其它煙堿樣配體激活后流入細胞內(nèi)，造成鈣電流。因為這種受體在激動劑存在下迅速脫敏，所以重要的是使用能夠非?？焖俚霓D(zhuǎn)換溶液(<100ms)的應用系統(tǒng)，以防止受體響應在施加激動劑的時間的同時部分或全部被脫敏。因此，評價煙堿效力增強的第二種方便技術(shù)是來自偶合有快速應用系統(tǒng)的hα7-wtnAChR表達GH4C1細胞的全細胞電壓鉗記錄。材料a)分析緩沖液外部記錄溶液由152mMNaCl、5mMKClUmMMgCl2、ImM鈣、IOmMHEPES組成；pH7.3。內(nèi)部記錄溶液由140mMCsClUOmMHEPESUOmMEGTAUmMMgCl2組成，pH7.3。b)膜片鉗記錄使用膜片鉗放大器(Multiclamp700A,Axonlnstruments,CA,USA)進行。當填充內(nèi)部記錄溶液時，ha7-wtnAChR-表達GH4C1細胞的膜電勢在全細胞構(gòu)象(Hamill等人，1981)中以1.5-3ΜΩ尖端電阻的硼硅酸鹽玻璃電極進行電壓鉗制。在膜電阻>500ΜΩ且更優(yōu)選IGQ且串聯(lián)電阻<15ΜΩ和至少60%串聯(lián)電阻補償?shù)募毎线M行記錄。膜電勢鉗在_70mV。c)激動劑ACh、膽堿購自Sigma-AldrichNV，Belgium。d)化合物施加使用用于快速轉(zhuǎn)換溶液(轉(zhuǎn)換分解時間<100ms)的16-通道DynflowDF-16微流體系統(tǒng)(Cellectricon，Sweden)來施加對照物、激動劑和PAM化合物至hα7_wtnAChR表達GH4C1細胞。方法將ha7_wtnAChR表達GH4C1細胞放在位于Dynaflow灌流腔室內(nèi)的外部記錄溶液中并使其放置最高達20分鐘。用膜片吸管將個體細胞為全細胞膜片并溫和地提離腔室底部，進入外部記錄溶液的連續(xù)流動的灌流中(0.75μ1/πη)。在持續(xù)監(jiān)視細胞膜電流期間，經(jīng)由預先施加待測試化合物至裝填的細胞，隨后施加α7煙堿樣受體激動劑，實時檢測PAM活性。當化合物給出的電流響應大于激動劑單獨的響應時，被認為是a7nAChRPAM’s。在一種具體實施方案中，所述a7煙堿樣受體激動劑通過非選擇性煙堿樣激動劑激活，在一種更具體的實施方案中，所述激動劑是膽堿，以及在甚至更具體的實施方案中，以ImM的亞最大濃度施加膽堿。在本發(fā)明的另一環(huán)境(setting)中，待測試化合物在a7煙堿樣受體激動劑之前施加，在一種更具體的實施方案中，在所述激動劑之前最高達30秒施加。從在各細胞中對施加250ms的亞最大膽堿產(chǎn)生的電流曲線下的面積計算對照響應。曲線下的面積是經(jīng)時間的凈電流的積分且是通過通道的總離子通量的常見表示。由正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑引起的激動劑效力的增加以激動劑響應的"曲線下面積"(AUC)的增強百分比計算。由本發(fā)明化合物所引起的大于對照AUC的增強表明，預期具有有用的治療活性。表3對于化合物El的效力(pEOJ和％功效<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>類型2化合物減少了脫敏作用的速度和程度。權(quán)利要求式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或水合物或溶劑化物。FPA00001102495700011.tif2.一種化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于防止或治療或預防精神障礙、智力損傷障礙或疾病、其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的炎性疾病或病癥，其中所述化合物是權(quán)利要求1的化合物。3.—種藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體以及作為活性組分的治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。4.一種制備權(quán)利要求3所述的組合物的方法，其特征在于，將藥學上可接受的載體與治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物密切混合。5.一種產(chǎn)品，其包含(a)如權(quán)利要求1所述的化合物，和(b)α7煙堿樣受體激動劑，作為用于同時、分開或連續(xù)使用以預防或治療其中調(diào)節(jié)α7煙堿樣受體是有益的疾病的組合制劑。6.一種制備如權(quán)利要求1所述的化合物的方法，其包含式(VI)的中間體與過量格利雅試劑MeMgBr在催化量的乙酰丙酮鐵(III)存在下在由75%至85體積％THF和15%至25體積％NMP組成的溶劑系統(tǒng)中在0°C至50°C的溫度范圍內(nèi)進行反應的步驟，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>全文摘要本發(fā)明涉及1，3，5-三取代的三唑衍生物。本發(fā)明涉及2-[3-(2，2-二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基氨基)-5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]三唑-1-基]-N-乙基-乙酰胺及其類似物或其藥學上可接受的鹽，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物以及它們在治療中的用途。本發(fā)明特別涉及煙堿樣乙酰膽堿受體的有效的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑，其具有增加煙堿樣受體激動劑的效力的性能。文檔編號C07D405/14GK101827839SQ200880111953公開日2010年9月8日申請日期2008年10月15日優(yōu)先權(quán)日2007年10月18日發(fā)明者A·S·J·萊薩格,J·W·J·F·圖林,T·丁克洛申請人:詹森藥業(yè)有限公司