專利名稱：一種紅參有效組分的制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于中藥領域，涉及中藥有效組分，具體涉及從紅參中提取有效組分的制 備方法及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
腫瘤是一種常見病、多發(fā)病，其中惡性腫瘤是目前危害人類健康最嚴重的一類疾 病。我國危害性最為嚴重的腫瘤為肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、大腸癌、肝癌、乳腺癌、宮頸 癌、白血病及淋巴瘤等。特別是肝癌的發(fā)生率近年來有所增加。值得重視，這些腫瘤的病因 學、發(fā)病學及其防治，均為我國腫瘤研究的重點。尋找高效低毒的抗癌藥物以及抗癌輔助藥 物是當前腫瘤研究的重要內(nèi)容。紅參是五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的栽培品經(jīng)蒸制后的干燥根 及根莖，具有大補元氣，益血，養(yǎng)心安神的作用?，F(xiàn)代藥理研究及臨床流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)，人 參對多種腫瘤具有非器官特異性的預防作用，在降低腫瘤發(fā)生率、治療及預防腫瘤復發(fā)方 面有重要作用。紅參中含有多種人參皂苷，應用報道也比較多，本方法從紅參中分離制備出純度 較高的小極性環(huán)氧炔醇成分，具有較好的抑制腫瘤作用，對于開發(fā)治療腫瘤疾病的現(xiàn)代中 藥具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種紅參有效組分的制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)將紅參 藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠 進行拌樣，用正相硅膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I， 棄之，然后改用氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品粗品； 用制備液相色譜繼續(xù)分離得到樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動相為 水和乙腈，梯度洗脫，獲得的有效組分主要含有人參環(huán)氧炔醇。優(yōu)選的，本發(fā)明的紅參有效組分制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)將紅參藥材粉碎后 加入體積比為1:0. 8 1. 2的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流0. 8 1. 2小時，提取廣3次，合并濾 液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進行拌樣，用正相硅膠柱對其進行分離， 首先用體積比為47飛3:1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄之，然后改用體 積比為纊13:1的氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品粗 品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動相 為水和乙腈，梯度洗脫。最佳的，本發(fā)明的紅參有效組分制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)取紅參藥材，將 其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合并得 提取液I。將提取液I濃縮成浸膏，用乙醇溶解浸膏，采用正相硅膠柱對其進行分離，首 先用體積比為50: 1的石油醚乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，然后改用體積比為10: 1的氯仿甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，洗脫液II濃縮干燥后得樣品粗品；用制 備液相色譜繼續(xù)分離得到樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18 ； 10. OmmX 250mm, 5Mm)，流動相為水A和乙腈B,梯度洗脫程序如下:0min, 50% B, 20in, 95%B ；流速為3. 0 ml/min，柱溫為室溫；樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時 間段11. 4-18. 3min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分；
本發(fā)明的另一個目的是提供上述方法獲得的有效組分在制備治療和預防腫瘤疾病藥 物中的應用。經(jīng)藥理實驗證明，本發(fā)明提供的紅參有效組分可以.抑制人源鼻咽癌細胞、人 源乳腺癌細胞等腫瘤細胞。本發(fā)明提供的紅參有效組分作為活性成分，加入藥劑學上接受的輔料，按照藥劑 學上記載的制劑的制備方法制成制劑。所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發(fā)明的有益效果為提供的制備方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在 生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。根據(jù)本發(fā)明方法制備獲得的紅參有效組分可在制備治療和 預防腫瘤疾病藥物中的應用。


圖1是紅參有效組分的HPLC色譜圖，其中1為人參環(huán)氧炔醇。圖2是紅參有效組分1號色譜峰質(zhì)譜圖。
具體實施例方式下面將結(jié)合附圖和實施例進一步詳細說明本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容和有益效果，該實施 例僅用于說明本發(fā)明而非對本發(fā)明的限制。實施例一紅參有效組分的制備
將200g紅參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液I，將提取液I濃 縮成浸膏7. 6g，用乙醇溶解浸膏，采用正相硅膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙 酯作為洗脫劑，得洗脫液I，然后改用氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，濃縮干燥后得 樣品2. Sg ；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備 柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段 11. 4-18. 3min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0. 28go實施例二紅參有效組分的制備
將500g紅參藥材粉碎后加入體積比為1:1. 2的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1. 2小時， 提取2次，合并濾液得提取液I，將提取液I濃縮成浸膏21. 0g，用乙醇溶解浸膏，采用正相 硅膠柱對其進行分離，首先用體積比為47: 1石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I， 然后改用體積比為8: 1氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品3. 9g ；用 制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動相為 水和乙腈，梯度洗脫，流速為3ml/min，柱溫為室溫，在時間段11. 4-18. 3min收集溶液，溶液 經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分0. 71g。
實施例三紅參有效組分的制備
取紅參藥材250g，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小 時，提取2次，濾液合并得提取液I。將提取液I濃縮成浸膏得10. 2g，用乙醇溶解浸膏，采 用正相硅膠柱對其進行分離，首先用體積比為50: 1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得 洗脫液I，然后改用體積比為10: 1的氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，濃縮干燥后 得樣品2. Og ；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制 備柱(Lichrospher C18; 10. Ommχ
250mm, 5 μιη )，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min，50% B, 20 min,95%B ； 30min，100% B ；50min, 100% B ；流速為:3ml/min，柱溫為室溫；樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備 液相色譜分離，在時間段11. 4-18. 3min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分0. 35g。 該有效組分主要含有人參環(huán)氧炔醇，其色譜圖及質(zhì)譜圖見圖廣2。實施例四滴丸的制備
取紅參有效組分0. 2g與4. 2g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，藥液滴至6、V液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。實施例五凍干粉針劑的制備
取紅參有效組分0. 2g、葡萄糖1. Sg、硫代硫酸鈉0. 36g和蒸餾水400ml，上述組分混合 均勻后，分裝160支，冷凍干燥，即得。實施例六紅參有效組分的活性評價實驗
體外培養(yǎng)Kb、K562、MCF-7腫瘤細胞，開展紅參組分抗腫瘤細胞增殖活性評價實驗。培 養(yǎng)條件37°C，5%二氧化碳，培養(yǎng)液配比90% DMEM培養(yǎng)基或RPMI1640培養(yǎng)基+ 10%胎牛 血清(體積比)+ 200U/L雙抗。將得到的紅參有效組分用無糖Hanks液(加入少量DMSO助 溶)溶解后加入96孔板培養(yǎng)的腫瘤細胞孵育48小時，采用MTT法評價其抗腫瘤增殖活性。 結(jié)果表明，紅參有效組分對于Kb、K562、MCF-7腫瘤細胞這三種腫瘤細胞增殖具有顯著抑制 作用，且在其濃度為50，100，200μδ/πι1時，對Kb細胞增殖的抑制率分別為15. 6 38.8% 和 98. 5%ο
權(quán)利要求
1.一種紅參有效組分的制備方法，其特征在于，通過以下步驟獲得將紅參藥材粉碎 后加入體積比為1:0. 8^1. 2的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流0. 8^1. 2小時，提取廣3次，合并 濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，用乙醇溶解浸膏，并將其與硅膠進行拌樣，用正相硅 膠柱對其進行分離，首先用體積比為47飛3:1的石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液 I，棄之，然后改用體積比為纊13:1氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮 干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半 制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分；該有效 組分中主要含有人參環(huán)氧炔醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅參有效組分的制備方法，其特征在于，半制備柱 是 Lichrospher C18 ； 10. Omm250mm, 5 μηι,流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min，50% B, 20 min,95%B ；流速 為3. 0 ml/min，柱溫為室溫；樣品用100%乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在11. 4-18. 3min 時間段收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法獲得的一種紅參有效組分在制備治療和預防腫瘤疾病 藥物中的應用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物由紅參有效組分加入藥劑學上 可接受的輔料，按照藥劑學上記載的制劑制備方法制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，所述制劑包括液體制劑或固體制劑。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種紅參有效組分的制備方法，將藥材通過加熱提取，濃縮，硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用制備液相色譜繼續(xù)分離，收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分，該有效組分主要含有人參環(huán)氧炔醇。本發(fā)明提供的紅參有效組分可在制備治療、預防腫瘤疾病藥物中的應用。本發(fā)明制備方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號A61K36/258GK102125589SQ20111005896
公開日2011年7月20日 申請日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者李云飛, 沈培強, 聶晶, 范驍輝, 葛志偉, 邵青 申請人:浙江大學