專利名稱：一種治療肝癌的靶向藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及生物醫(yī)學(xué)中治療腫瘤的靶向藥物，具體涉及一種治療肝癌的靶向藥物組合物。
背景技術(shù)：
臨床研究顯示，惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率逐年增高，已成為嚴(yán)重影響人民健康的主要疾病。目前，腫瘤治療進(jìn)入分子靶向時代。而靶向抑制腫瘤供應(yīng)血管的抗血管生成治療策略，從理論上講具有抗瘤譜廣、不易產(chǎn)生耐藥及藥物易于到達(dá)靶部位等特點成為腫瘤生物治療研究熱點。腫瘤血管生成是一個涉及多種細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞外基質(zhì)降解及重塑的復(fù)雜過程。其中，腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子SPl (其結(jié)構(gòu)模擬圖如圖1所示)及其下游血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因在腫瘤血管生成中發(fā)揮了重要作用?，F(xiàn)有技術(shù)公開了轉(zhuǎn)錄因子spl是第一個被克隆和純化的核轉(zhuǎn)錄因子，屬于spl/ Kriippel (specificity protein/Kr Uppel-like factor)轉(zhuǎn)錄因子家族。Spl 通過結(jié)合到基因啟動子區(qū)的GC盒(-GGGCGGG-)或GT盒(CACCC-)發(fā)揮其調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄作用。受Spl 調(diào)節(jié)的下游基因眾多，廣泛參與細(xì)胞的代謝、生長、分化等重要生理過程。越來越多的研究表明，Spl參與了腫瘤血管形成、細(xì)胞增殖和凋亡，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。光輝霉素(mithramycin A，MIT)屬于抗腫瘤抗生素類藥物，曾經(jīng)廣泛應(yīng)用于治療惡性高鈣血癥、白血病和睪丸精原細(xì)胞瘤等疾病，但其在高劑量下雖顯示出具有抗所述的腫瘤的效果，但同時具有嚴(yán)重副作用，因此限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。近年來，研究發(fā)現(xiàn)低劑量的MIT能特異性結(jié)合到富含GC區(qū)域的染色質(zhì)，阻斷上游啟動子區(qū)富含GC的相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。目前，在眾多的抗血管生成腫瘤治療靶點中，以針對血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)為靶點設(shè)計的單克隆抗體藥物bevacizumab (貝伐單抗，商品名=Avastin)最早應(yīng)用于臨床。研究顯示，bevacizumab能阻斷VEGF與其受體結(jié)合，從而抑制VEGF介導(dǎo)的腫瘤血管生成活性。臨床應(yīng)用bevacizumab，多與細(xì)胞毒化療藥物聯(lián)合，使其增加療效。臨床實踐顯示，單獨應(yīng)用bevacizumab的抗腫瘤治療作用有限，其有效性持續(xù)時間不長，需加大劑量維持治療，并能逐漸誘導(dǎo)耐藥。對此現(xiàn)象初步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)低劑量的bevacizumab能誘導(dǎo)腫瘤組織正反饋加強(qiáng)VEGF等血管生成促進(jìn)因子的表達(dá)，從而削弱了 bevacizumab的抗血管生成效應(yīng)。目前，尋找多靶點的控制腫瘤效果好，毒副作用低的用于治療腫瘤的靶向藥物已成為有關(guān)研究人員，醫(yī)務(wù)工作者和腫瘤患者的共同期望。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中抗血管生成單藥治療藥效減低的缺陷，提供一種新的用于治療腫瘤的靶向藥物，具體涉及一種治療肝癌的靶向藥物組合物。
本發(fā)明的靶向藥物組合物，其特征在于，其包括低劑量光輝霉素(mithramycin A， MIT)和抗VEGF抗體(VEGF-Ab)藥物。本發(fā)明中，所述的抗VEGF抗體藥物選自單克隆抗體藥物bevacizumab(貝伐單抗，商品名Avastin)本發(fā)明的靶向藥物組合物，能阻斷與腫瘤血管生成密切相關(guān)的腫瘤組織中轉(zhuǎn)錄因子SPl的活性，抑制轉(zhuǎn)錄因子SPl下游VEGF表達(dá)。其中的MIT和VEGF-Ab針對不同的作用靶點，MIT阻斷造成VEGF-Ab耐藥的信號通路，進(jìn)而對腫瘤血管生成發(fā)揮協(xié)同抑制作用，能更加有效的抑制腫瘤血管生成，抑制腫瘤的生長。本發(fā)明的靶向藥物組合物，聯(lián)合應(yīng)用低劑量MIT和VEGF抗體(VEGF-Ab)進(jìn)行體外 (細(xì)胞水平)和在體(荷瘤裸鼠模型)水平協(xié)同多靶點抗腫瘤血管生成作用及分子機(jī)制實驗研究。并通過對低劑量MIT和VEGF-Ab在細(xì)胞水平和荷瘤裸鼠體內(nèi)協(xié)同抗腫瘤血管生成的藥效學(xué)、藥理學(xué)、藥代動力學(xué)作用和早期安全性的研究，設(shè)定本發(fā)明的靶向藥物組合物中的MIT和VEGF抗體藥的合理有效的劑量，制成多靶點聯(lián)合抑制腫瘤血管生成的新藥。本發(fā)明所述的靶向藥物組合物，它含以下物質(zhì)作為活性成分(1)光輝霉素(mithramycin A, MIT)；( 抗VEGF抗體藥物，本發(fā)明中，抗VEGF抗體藥物為單克隆抗體藥物bevacizumab (貝伐單抗，商品名 Avastin)上述活性成分的劑量如下述(1)光輝霉素的劑量為0. 10mg/kg/次，(2)單克隆抗體藥物bevacizumab的劑量為25 μ g/次，本發(fā)明中，MIT采用常規(guī)的制備工藝，制備成不同的藥物劑型供使用，如制成口服液、膠囊、粉劑或針劑等。本發(fā)明所述的靶向藥物組合物可以采用皮下注射或靜脈注射方式使用。本發(fā)明中，采用MIT聯(lián)合VEGF-Ab bevacizumab進(jìn)行在體肝癌荷瘤裸鼠模型實驗， 觀察對腫瘤血管生成及調(diào)控其生成的細(xì)胞因子的影響。采用肝癌裸鼠荷瘤模型，每周兩次腹膜內(nèi)注射不同劑量的MIT(0. lmg/kg)聯(lián)合應(yīng)用bevacizumab (25 μ g、50 μ g、100 μ g)。結(jié)果顯示，bevacizumab產(chǎn)生了劑量依賴性的抑制血管生成和抗腫瘤生長作用，并且單獨給予MIT或bevacizumab只能產(chǎn)生微弱的抑制血管生成和抗腫瘤生長作用。但給與本發(fā)明藥物組合物，其中含MIT (0. 10mg/kg/次)， VEGF-Ab(25y g/次)，結(jié)果顯示，產(chǎn)生明顯協(xié)同抑制血管生成和抗腫瘤生長效應(yīng)。其他實驗組，如，單用PBS/IgG組、bevacizumab組、MIT+bevacizumab組裸鼠體重未發(fā)生明顯的變化。 結(jié)果表明，本發(fā)明藥物組合物其中含MIT (0. 10mg/kg/次)，VEGF-Ab (25 μ g/次)，比單獨使用MIT或bevacizumab得到更高的抗腫瘤效果，而不增加藥物毒性。結(jié)果顯示，在較低安全劑量范圍內(nèi)單用MIT，即不能對實驗動物的正常生理活動產(chǎn)生影響又不能抑制肝腫瘤血管生成及生長(或僅有微弱影響)；但給與本發(fā)明藥物組合物， 其中含MIT (0. 10mg/kg/次)和VEGF-Ab (25 μ g/次)時，則能夠抑制腫瘤血管生成，進(jìn)而抑制肝腫瘤的生長。本發(fā)明實驗證實所述的的靶向藥物組合物，可顯著提高抑制腫瘤的生的治療效果。尤其是靶向治療肝癌的效果。本發(fā)明的靶向藥物組合物，為解決目前臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的抗血管生成單藥化療藥效減低難題提供了新的解決方法。


圖1是轉(zhuǎn)錄因子Spl結(jié)構(gòu)模擬圖。
具體實施例方式實施例1 :MIT+bevacizumab聯(lián)合抑制肝癌血管新生及腫瘤生長1、實驗動物BALB/c裸鼠8周齡中科院上海分院實驗動物中心提供2、實驗材料MIT、bevacizumab、低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞株，MHCC97-HG(CGMCC No 1063)和 MHCC97-LG(CGMCC No :1062)。3、實驗方法采用上述肝癌細(xì)胞系，皮下注射及原位種植建立動物模型，檢測不同劑量的NS/LgG方案、MIT方案、bevacizumab方案和不同劑量組的本發(fā)明藥物組合物，對抑制腫瘤組織血管生成及抗腫瘤生長的作用。4、實驗結(jié)果bevacizumaM25y g、50y g、100y g)產(chǎn)生了劑量依賴性的抑制血管生成和抗腫瘤生長作用，并且單獨給予MIT(0. lmg/kg)或bevacizumab只能會產(chǎn)生微弱的抑制血管生成和抗腫瘤生長作用。但給與本發(fā)明藥物組合物，其中含MIT(0. 10mg/kg/次)， VEGF-Ab (25 μ g/次)，結(jié)果顯示，產(chǎn)生明顯協(xié)同抑制血管生成和抗腫瘤生長效應(yīng)。其他實驗組，如，單用PBS/IgG組、bevacizumab組、MIT+bevacizumab組裸鼠體重未發(fā)生明顯的變化。 結(jié)果表明，本發(fā)明藥物組合物，尤其是其中含MIT(0. 10mg/kg/次)，VEGF-Ab (25 μ g/次)， 比單獨使用MIT或bevacizumab得到更高的抗腫瘤效果，而不增加藥物毒性。實施例2 MIT+bevacizumab聯(lián)合治療抑制胰腺癌血管新生及腫瘤生長1、實驗動物BALB/c裸鼠8周齡中科院上海分院實驗動物中心提供，2、實驗材料MIT、bevacizumab、胰腺癌細(xì)胞株 PANC-1 和 BxPC3，3、實驗方法采用上述胰腺癌細(xì)胞系，皮下注射及原位種植建立荷瘤動物模型，檢測不同劑量的NS/LgG方案、MIT方案、be vac i zumab方案和不同劑量組合的 MIT+bevacizumab聯(lián)合化療新方案四種化療方案對抑制腫瘤組織血管生成及抗腫瘤生長的作用。4、實驗結(jié)果當(dāng)腫瘤達(dá)到實驗要求的大小時進(jìn)行化療時，bevacizumab (25 yg, 50ygU00yg)產(chǎn)生了劑量依賴性的抑制血管生成和抗腫瘤生長作用，并且單獨給予 MIT (0. lmg/kg)或bevacizumab只能會產(chǎn)生微弱的抑制血管生成和抗腫瘤生長作用。但給與本發(fā)明藥物組合物，其中含MIT (0. 10mg/kg/次)，VEGF-Ab (25 μ g/次)，結(jié)果顯示，產(chǎn)生協(xié)同抑制血管生成和抗腫瘤生長效應(yīng)。單用PBS/IgG組、bevacizumab組、本發(fā)明藥物組合物組裸鼠體重未發(fā)生明顯的變化。因此，本發(fā)明藥物組合物尤其是其中含MIT (0. 10mg/kg/ 次)，VEGF-Ab (25 μ g/次)是比單用MIT或bevacizumab會得到更高的抗腫瘤效果，而不增加藥物毒性。
權(quán)利要求
1.一種治療肝癌的靶向藥物組合物，其特征在于，其包括低劑量光輝霉素MIT和抗 VEGF抗體藥物；所述的光輝霉素MIT的劑量為0. 10mg/kg/次，抗VEGF抗體藥物的劑量為 25 μ g/次。
2.按權(quán)利要求1所述的治療肝癌的靶向藥物組合物，其特征在于，所述的抗VEGF抗體藥物為單克隆抗體藥物bevacizumab。
3.按權(quán)利要求1所述的治療肝癌的靶向藥物組合物，其特征在于，所述的光輝霉素， MIT其劑型是口服液、膠囊、粉劑或針劑。
4.權(quán)利要求1所述的靶向藥物組合物在制備靶向抑制轉(zhuǎn)錄因子SPl抑制劑中的用途。
5 權(quán)利要求1所述的靶向藥物組合物在制備抗腫瘤血管生成和抑制腫瘤生長藥物中的用途。
6.按權(quán)利要求5的用途，其特征在于，所述的腫瘤是肝癌。
全文摘要
本發(fā)明屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及生物醫(yī)學(xué)中治療腫瘤的靶向藥物，具體涉及一種治療肝癌的靶向藥物組合物。本發(fā)明的靶向藥物組合物包括低劑量0.10mg/kg/次光輝霉素MIT和25μg/次抗VEGF抗體藥物；本發(fā)明進(jìn)行了在體肝癌、胃癌、胰腺癌荷瘤裸鼠模型實驗，觀察對腫瘤血管生成及調(diào)控其生成的細(xì)胞因子的影響。結(jié)果顯示，在較低安全劑量范圍內(nèi)單用MIT，即不能對實驗動物的正常生理活動產(chǎn)生影響又不能抑制肝腫瘤血管生成及生長或僅有微弱影響；但給與本發(fā)明藥物組合物時，則能夠抑制腫瘤血管生成，進(jìn)而抑制肝腫瘤的生長，而不增加藥物毒性。
文檔編號A61K39/395GK102258781SQ20101018700
公開日2011年11月30日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者王理偉 申請人:上海市第一人民醫(yī)院