專利名稱：：包含改性糖部分的免疫刺激寡核苷酸類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明主要涉及免疫學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及具有增強免疫刺激能力的治療性寡核苷酸。2、
背景技術(shù)：
的討論細菌DNA對于激活B細胞和天然殺傷細胞具有免疫刺激效果，但是脊椎動物DNA不具有(Tokunaga,T.,etal.,1988.Jpn.J.CancerRes.79:682_686；Tokunaga,Τ.,etal.，1984，JNCI72:955_962；Messina,J.P.，etal.，1991，J.Immunol.147:1759_1764；andreviewedinKrieg,1998,In:AppliedOligonucleotideTechnology,C.A.SteinandA.M.Krieg,(Eds.)，JohnWileyandSons,Inc.，NewYork,NY,pp.431-448)。現(xiàn)在理解細菌DNA的這些免疫刺激效應(yīng)為在特定堿基背景中的未甲基化的CpG二核苷酸(CpG基序)的存在的結(jié)果，其在細菌DNA中是常見的，但是在脊椎動物DNA中為甲基化的和表現(xiàn)不足的(underrepresented)(Kriegetal,1995Nature374546-549；Krieg,1999Biochim.Biophys.Acta93321:1_10)。細菌DNA的免疫刺激效應(yīng)可以用包含這些CpG基序的合成寡脫氧核苷酸(ODN)模擬。此類CpGODN對人類和鼠白細胞具有高度的刺激效應(yīng)，誘導(dǎo)B細胞增殖；細胞因子和免疫球蛋白分泌；天然殺傷(NK)細胞裂解活性和IFN-Y分泌；和樹突細胞(DCs)和其它抗原呈遞細胞的激活以表達共刺激分子和分泌細胞因子，特別是在促進Thl-樣T細胞應(yīng)答的發(fā)展上重要的Thl-樣細胞因子。天然磷酸二酯主鏈CpGODN的這些免疫刺激效應(yīng)的高度CpG特異性在于如果將CpG基序甲基化，改變?yōu)镚pC，或否則消除或改變，該效應(yīng)顯著降低(Kriegetal,1995Nature374546-549；Hartmannetal,1999Proc.Natl.Acad.SciUSA969305-10)。在早期研究中，認為免疫刺激CpG基序符合化學(xué)式嘌呤_嘌呤-CpG-嘧啶-嘧PgKriegetal,1995Nature374546-549；Pisetsky,1996J.Immunol.156421-423；Hackeretal.，1998EMB0J.17:6230_6240；Lipfordetal,1998TrendsinMicrobiol.6496-500).然而，現(xiàn)在清楚小鼠淋巴細胞對不符合該“化學(xué)式的”磷酸二酯CpG基序良好地應(yīng)答，并且對于人類B細胞和樹突細胞而言同樣如此(Yietal.，1998J.Immunol.1605898-5906)且對于人類B細胞和樹突細胞也是同樣的(Hartmannetal,1999Proc.Natl.Acad.SciUSA96:9305_10；Liang,1996J.Clin.Invest.98:1119_1129)。將DNA和RNA寡核苷酸通過外切核酸酶和內(nèi)切核酸酶進行消化，其分別降解在核酸分子末端處和內(nèi)部位點處的核苷酸間的磷酸酯鍵合。降解率可以依賴于核酸的位置而變化，例如細胞外(快速地)vs細胞內(nèi)(通常較慢)，以及在后一情況下包含核酸的細胞內(nèi)區(qū)室，例如溶酶體(快速地)VS細胞質(zhì)(較慢)。這樣，增加寡核苷酸抗核酸酶的能力具有通過延長其在細胞中的功能壽命增強其功效的潛力。已經(jīng)報道許多方法產(chǎn)生RNA和DNA的穩(wěn)定化形式。參見，例如，UhlmarmEetal.(1990)ChemRev90:543-84。不幸的是，許多這些方法尚未產(chǎn)生令人滿意的備選方案，這要么因為獲得的穩(wěn)定性是不充分的，要么因為在穩(wěn)定性上的增益與功能的損失相關(guān)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供化學(xué)上改性的寡核苷酸，其特征在于與相應(yīng)的天然發(fā)生的DNA分子相比其對核酸酶和酸的增加的穩(wěn)定性。本發(fā)明主要涉及這樣的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其包含包括至少一個FANA改性的嘌呤核苷的免疫調(diào)節(jié)基序。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸用于要求調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的組合物或方法的任何設(shè)置或應(yīng)用。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸具有在制備藥物組合物，包括佐劑、疫苗和其它藥劑上的特定用途，以用于治療各種狀況，包括感染、癌癥、過敏、自體免疫疾病、炎癥疾病和哮喘。本發(fā)明的一個方面為長度上8-200個核苷酸的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，包括至少一個免疫調(diào)節(jié)ZNYZ基序，其中Z為嘌呤核苷或2‘-脫氧-2‘-氟-β-D-阿拉伯糖(FANA)-改性的嘌呤核苷，N為Τ，Α，或5-取代的U，Y為嘧啶核苷，并且其中至少一個Z包括FANA-改性的嘌呤核苷。在一種實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)基序為ZNYZN1N2N3Np在另一實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)基序為ZNYG基序，其中YG為內(nèi)部嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸。在一種實施方式中Z為G。在另一實施方式中至少一個G包括FANA-改性。在一種實施方式中，N為Τ。在另一實施方式中，N為5-氯-尿嘧啶、5-碘-尿嘧啶、5-乙基-尿嘧啶、5-丙基-尿嘧啶、5_丙炔基-尿嘧啶或(Ε)-5-(2-溴乙烯基)-尿嘧啶。在一種實施方式中所述寡核苷酸包括在所述免疫調(diào)節(jié)基序5'的至少4個核苷酸。在另一實施方式中在免疫調(diào)節(jié)基序外部的至少一個核苷酸具有FANA改性。在一種實施方式中所述寡核苷酸不是反義寡核苷酸。在另一實施方式中所述寡核苷酸包括多個內(nèi)部YZ二核苷酸。在還另一實施方式中每個內(nèi)部YZ二核苷酸的Z包括FANA-改性。在某些實施方式中Z為鳥嘌呤核苷、2'-脫氧鳥嘌呤核苷、2'-脫氧_7脫氮鳥嘌呤核苷、2'-脫氧-6-硫代鳥嘌呤核苷、阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷(arabin0gUan0Sine)、2'-脫氧肌苷、2'-脫氧2'-取代的阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷、2'-0-取代-阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷或其它非天然嘌呤核苷。在一種實施方式中Z為G。在一種實施方式中Y為C并且Z為G，并且其中所述CG二核苷酸的C為未甲基化的。在另一實施方式中Y為胞嘧啶、2'-脫氧胞嘧啶、2'-脫氧胸腺嘧啶核苷、阿拉伯糖基胞嘧啶核苷(arabinocytidine)、1-(2‘-脫氧-B-D-呋喃核糖基(ribofuranosyl))-2-氧-7-脫氮一8—甲基嘌呤、2'-脫氧-2'-取代的阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、2'-0-取代的阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、2'-脫氧-5-羥基胞嘧啶核苷、2'-脫氧-N4-烷基胞嘧啶核苷、2'-脫氧-硫代尿苷或其它非天然嘧啶核苷。在一種實施方式中所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸為免疫刺激寡核苷酸。在另一實施方式中所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸為免疫抑制寡核苷酸。在各種實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸為A，B,C，P，T，E或S類寡核苷酸。在一種實施方式中，所述寡核苷酸少于15個核苷酸長。在另一實施方式中，所述寡核苷酸具有至少一個穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合(internucleotidelinkage)。在一種實施方式中所述至少一個穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合選自硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、硫代甲基磷酸酯、乙酸磷酸酯、Rp-硫代磷酸酯、Sp-硫代磷酸酯、硼烷磷酸酯(boranophosphate)或3'-硫甲縮醛(thioformacefal)。在一種實施方式中所述寡核苷酸具有第二類型的糖改性。在一種實施方式中，所述第二類型的糖改性選自2'-0-甲基核糖、2'-0-亞丙基核糖(propanylribose)、2'_0_丁基核糖、2'-0-(2-甲氧基乙基)、2'-0,4'-C-亞烷基-聯(lián)核糖(亞烷基為亞甲基(LNA)或亞乙基)、2'-脫氧_2'-氟代核糖、3'-O-甲基核糖、1'，2'-二脫氧核糖；阿拉伯糖、1'-甲基阿拉伯糖、3'-羥甲基阿拉伯糖、4'_羥甲基-阿拉伯糖或1，5_脫水己糖醇。在一種實施方式中所述寡核苷酸具有至少一個3'-3'核苷酸間鍵合。在另一實施方式中所述寡核苷酸具有至少一個5'-5'核苷酸間鍵合。在還另一實施方式中所述寡核苷酸具有至少一個2'-5'核苷酸間鍵合。在一種實施方式中，所述寡核苷酸為支鏈寡核苷酸。在另一實施方式中，所述寡核苷酸具有至少一個回文序列。在另一實施方式中，所述寡核苷酸具有至少一個的(G)11序列(η為4至10)。在另一實施方式中，所述寡核苷酸包括至少一個疏水性T類似物。在另一實施方式中，所述寡核苷酸包括至少一個5-取代的U類似物。在還另一實施方式中所述寡核苷酸具有親脂性改性。在一種實施方式中所述寡核苷酸包括連接子。在另一實施方式中所述連接子為d-間隔子、1，3_丙二醇連接子、丙三醇或丙三醇同系物。本發(fā)明的另一方面為在受試者中刺激免疫應(yīng)答的方法，包括以有效量施用至受試者以本發(fā)明的任何免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以刺激免疫應(yīng)答。在一種實施方式中，所述方法為在受試者中治療癌癥的方法，包括以有效量施用至患有癌癥的受試者以本發(fā)明的任何免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以治療癌癥。在另一實施方式中所述方法進一步包括施用至受試者以抗癌治療。在一種實施方式中，所述抗癌治療為放療、化療、免疫治療、癌癥疫苗、激素治療或生物應(yīng)答改性劑。在一種實施方式中，所述方法為在受試者中治療感染性疾病的方法，包括以有效量施用至患有或具有患有感染性疾病風(fēng)險的受試者以本發(fā)明的任何免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以治療所述感染性疾病。在一種實施方式中所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸靜脈內(nèi)地施用。在另一實施方式中所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸皮下地施用。在一種實施方式中所述感染性疾病為病毒疾病。在另一實施方式中所述病毒疾病為乙肝、丙肝、巨細胞病毒(CMV)、乳頭瘤病毒、HIV或單純皰疹病毒(HSV)。在還另一實施方式中所述感染性疾病為利什曼原蟲(Leishmania)、李斯特菌(Listeria)或炭疽。在又一實施方式中所述方法進一步包括施用至受試者以抗病毒劑、抗細菌劑、抗寄生生物劑或抗真菌劑。在一種實施方式中，所述方法為在受試者中治療過敏的方法，包括以有效量施用至患有過敏的受試者以本發(fā)明的任何免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以治療過敏。在一種實施方式中所述過敏為過敏性鼻炎。在另一實施方式中所述方法進一步包括施用至受試者以抗過敏藥劑。在一種實施方式中所述受試者為患有或有以下風(fēng)險的受試者特應(yīng)性皮炎(濕疹)、過敏性鼻炎或鼻炎、花粉熱、結(jié)膜炎、支氣管哮喘、蕁麻疹(蕁麻疹(hives))或食物過敏。在另一實施方式中所述抗過敏藥劑為抗-IgE抗體、抗組胺劑、皮質(zhì)類留醇或前列腺素誘導(dǎo)劑。在一種實施方式中，所述方法為在受試者中治療哮喘的方法，包括以有效量施用至患有哮喘的受試者以本發(fā)明的任何免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以治療哮喘。在一種實施方式中所述方法進一步包括施用至受試者以哮喘藥劑。在一種實施方式中所述哮喘藥劑為PDE-4抑制劑、支氣管擴張劑/β-2激動劑、K+通道開放劑、VLA-4拮抗劑、神經(jīng)激肽拮抗劑、血栓素Α2(ΤΧΑ2)合成抑制劑、黃嘌呤、花生四烯酸拮抗劑、5-脂肪氧合酶抑制劑、ΤΧΑ2受體拮抗劑、ΤΧΑ2拮抗劑、5-lipox激活蛋白質(zhì)的抑制劑、或蛋白酶抑制劑。在另一實施方式中，所述方法為在受試者中抑制免疫應(yīng)答的方法，包括以有效量施用至受試者以本發(fā)明的任何免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以抑制免疫應(yīng)答。在另一實施方式中所述受試者具有炎癥疾病或自體免疫疾病。在另一實施方式中所述受試者為具有自體免疫疾病的受試者。在另一實施方式中所述受試者為患有炎癥或有患炎癥疾病風(fēng)險的受試者。在還另一實施方式中所述炎癥疾病為膿毒癥。本發(fā)明在其應(yīng)用方面不限于在以下說明書提出的或在附圖中描述的詳細結(jié)構(gòu)和組分的排列。本發(fā)明能夠以各種方式適合其它實施方式和實踐或?qū)嵤?。同樣地，本文所用的措辭和術(shù)語為旨在描述和不應(yīng)該作為限制?！鞍?including)“、“包括(comprising)“或〃具有(having),““包含(containing)"、“包括(involving)“禾口本文的其變體，旨在包括其后列出的項目和其等效物以及另外的項目。附圖不旨在限于比例。在圖中，在各種圖中描述的各相同的或幾乎相同的組分用相似的數(shù)字表示。為清楚起見，在每一圖中不是每一組分都可以被標記。在附圖中圖1為顯示2‘-氟-阿拉伯糖基-核酸(FANA)和2‘0_甲基(2‘OMe)的化學(xué)結(jié)構(gòu)的圖。該圖還描述FANA和2'OMe的不同形式，證明2'-氟-阿拉伯糖基-核酸為優(yōu)選的B-DNA構(gòu)象(2‘-內(nèi)(endo))。圖2為顯示具有鳥嘌呤核苷殘基的FANA改性的核酸為抗酸穩(wěn)定的。將FANA核酸SEQIDNO1和SEQIDNO5的脫嘌呤作用動力學(xué)與非FANA親本SEQIDNO8的動力學(xué)比較。所述核酸在0.IMHCI中孵育，并且通過RP-HPLC定量游離的嘌呤堿基來測定脫嘌呤作用。χ軸為以分鐘為單位的時間，y軸為以納克(ng)為單位的鳥嘌呤濃度。圖3為顯示通過B類FANA核酸的TLR9-介導(dǎo)的NF-KB激活。將FANA核酸SEQIDNO1-7的活性與非FANA親本核酸SEQIDNO:8的活性比較。hTLR9_LUC_293細胞與指示量的核酸孵育，并且16h后通過測定熒光素酶活性確定NF-KB活性。刺激指數(shù)參考培養(yǎng)基背景的熒光素酶活性來計算。χ軸為以μM為單位的ODN濃度的對數(shù)，并且y軸為以pg/ml為單位的IFN-α濃度。圖4為顯示在CpG基序中引入FANA-G導(dǎo)致hTLR9_介導(dǎo)的IFN-α產(chǎn)生的增加。C類FANA核酸SEQIDNO:9_14的活性與非FANA親本SEQIDNO15和SEQIDNO:16(在3'末端具有3'-0-甲基鳥嘌呤核苷的親本)。人類PBMC用增加量的C類核酸孵育24小時，并且通過ELISA確定IFN-α水平。結(jié)果顯示3個供體的平均士SEM。χ軸為以μΜ為單位的ODN濃度的對數(shù)，并且y軸為以pg/ml為單位的IFN-α濃度。具體實施例方式本發(fā)明部分基于具有增加穩(wěn)定性而在免疫調(diào)節(jié)能力上沒有伴隨的降低的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸。已知具有特定免疫調(diào)節(jié)基序的寡核苷酸(ODN)例如通過與toll-樣受體9(TLR9)的相互作用，刺激免疫系統(tǒng)。然而，寡核苷酸遭受體內(nèi)內(nèi)-和外-核酸酶的降解。CpGODN的特定化學(xué)改性，例如核苷酸間的變體鍵或糖殘基的改變，用于調(diào)節(jié)其抗核酸酶的穩(wěn)定性，以及其細胞攝取特性和其免疫刺激特征。不幸的是，在某些情形下這些改性能夠可能通過干擾這些寡核苷酸被其受體的識別，導(dǎo)致這些寡核苷酸刺激免疫系統(tǒng)的能力的特定損失。在某些方面本發(fā)明涉及這樣的發(fā)現(xiàn)，通過在免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸中的2'-脫氧-β-D-核糖核苷被2'-脫氧-2'-氟-β-D-阿拉伯糖基(FANA)改性的核苷取代對ODN賦予所期望的穩(wěn)定性，但是保留完整的生物活性。此外，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)這些ODN在酸pH下也更穩(wěn)定，表明FANA-改性的0DN在口服應(yīng)用中的潛力。即使當FANA位于在刺激基序內(nèi)的內(nèi)部核苷時此類增加的活性也觀察到。在本發(fā)明的某些方面，所述寡核苷酸具有免疫調(diào)節(jié)基序序列ZNYZ，其中Z各自獨立地為嘌呤核苷或FANA-改性的嘌呤核苷，N為T，A，或5-取代的U。Y為嘧啶核苷。在本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)基序中至少一個Z為FANA-改性的嘌呤核苷。所述寡核苷酸包括一個或多個的此類基序。在某些情況下所述寡核苷酸具有多個內(nèi)部YZ二核苷酸。一個或多個的這些二核苷酸可以具有FANA-改性的嘌呤。在某些情況下，所有的YZ二核苷酸具有FANA-改性的嘌呤。在某些情況下，所述免疫調(diào)節(jié)基序進一步定義為ZNYG基序，其中YG為內(nèi)部嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸。在一些實施方式中N為T。所述免疫調(diào)節(jié)基序可以在四個或更多個核苷酸的下游。所述內(nèi)部嘧啶_鳥嘌呤二核苷酸典型地未甲基化。在某些情況下，所述免疫調(diào)節(jié)基序進一步定義為ZNYZN#2N3N4，其中N為T或A。在某些情況下，Z為鳥嘌呤核苷、2'-脫氧鳥嘌呤核苷、2'-脫氧-7脫氮鳥嘌呤核苷、2'-脫氧-6-硫代鳥嘌呤核苷、阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷、2'-脫氧肌苷、2'-脫氧2'-取代的阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷、2'-0-取代-阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷或其它非天然嘌呤核苷。在某些情況下，在上述的免疫調(diào)節(jié)基序中存在超過一個FANA-改性的嘌呤核苷。在某些情況下，在所述基序外部存在1個或多個FANA-改性的嘌呤核苷。本發(fā)明的所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以為免疫刺激寡核苷酸。上述的免疫調(diào)節(jié)基序可用于之前所述類的免疫刺激寡核苷酸的背景，包括0DN類例如A類，B類，C類，E類，T類和P類。在本發(fā)明的某些實施方式中所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸包括為"CpG二核苷酸"的免疫刺激基序。CpG二核苷酸可以為甲基化或未甲基化的。包含至少一個未甲基化的CpG二核苷酸的免疫刺激寡核苷酸為這樣的寡核苷酸分子，其包含未甲基化的胞嘧啶_鳥嘌呤二核苷酸序列(即，未甲基化的5'胞嘧啶核苷，后面是3'鳥嘌呤核苷并且通過磷酸酯鍵連接)并且其激活免疫系統(tǒng)；此類免疫刺激寡核苷酸為CpG寡核苷酸。CpG寡核苷酸已經(jīng)在許多授權(quán)專利、公開的專利申請和其它出版物中描述，包括美國專利Nos.6，194，388；6,207，646；6，214，806；6,218,371；6，239，116；和6，339,068。包含至少一個甲基化的CpG二核苷酸的免疫刺激寡核苷酸為這樣的寡核苷酸，其包含甲基化的胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸序列(即，甲基化的5'胞嘧啶核苷，后面是3'鳥嘌呤核苷并且通過磷酸酯鍵連接)并且其激活免疫系統(tǒng)。在其它實施方式中所述免疫刺激寡核苷酸無CpG二核苷酸。這些無CpG二核苷酸的寡核苷酸稱為非CpG寡核苷酸，并且它們具有非CpG免疫刺激基序。優(yōu)選這些為富T0DN,例如具有至少80%T的0DN。丨‘B類〃0DN在激活B細胞上是有力的，但是在誘導(dǎo)IFN_a和NK細胞激活上相對弱。B類CpG寡核苷酸典型地為完全穩(wěn)定化的，并且在某些優(yōu)選的堿基背景中包括未甲基化的CpG二核苷酸。參見例如美國專利Nos.6，194,388；6,207,646；6，214，806；6，218，371；6，239，116；和6，339，068。另一類對于誘導(dǎo)IFN-a和NK細胞激活是有力的，但是在刺激B細胞時相對弱；此類被稱為"A類"。A類CpG寡核苷酸典型地在5'和3'末端處具有穩(wěn)定化的聚-G序列和包含回文磷酸二酯CpG二核苷酸的至少6個核苷酸的序列)。參見，例如，公開的專利申請PCT/US00/26527(W001/22990)。另一類CpG寡核苷酸激活B細胞和NK細胞并且誘導(dǎo)IFN-a；此類稱為C類?！癈類"免疫刺激寡核苷酸包含至少兩個獨特基序，對免疫系統(tǒng)的細胞具有唯一的和期望的刺激效應(yīng)。這些0DN的一些具有傳統(tǒng)的"刺激"CpG序列和"富GC"或"B-細胞中和"基序二者。這些組合基序寡核苷酸具有免疫刺激效應(yīng)，其落入與傳統(tǒng)的"B類"CpG0DN相關(guān)的效應(yīng)(其為B細胞激活和樹突細胞(DC)的強誘導(dǎo)劑)和與免疫刺激寡核苷酸的最近描述的類別(“A類"CpG0DN)(其為IFN-a和天然殺傷(NK)細胞激活的強誘導(dǎo)劑，但是B細胞和DC激活的相對弱的誘導(dǎo)劑)相關(guān)的那些效應(yīng)之間的某處。KriegAMetal.(1995)Nature374546-9；BallasZKetal.(1996).JImmunol1571840-5；YamamotoSetal.(1992)JImmunol148:4072_6。盡管優(yōu)選的B類CpGODN常常具有硫代磷酸酯主鏈并且優(yōu)選的A類CpG0DN具有混合或嵌合的主鏈，C類組合基序免疫刺激寡核苷酸可以具有穩(wěn)定化的例如硫代磷酸酯、嵌合、或磷酸二酯主鏈，并且在某些優(yōu)選的實施方式中，它們具有半軟主鏈。這類已經(jīng)描述于2002年8月19日提交的美國專利申請US10/224，523，將其全部內(nèi)容在此弓|入以作參考。“E類"寡核苷酸具有增強的誘導(dǎo)IFN-a分泌的能力。這些0DN具有YGZ基序5'和/或3'的親脂性取代的核苷酸類似物。E類化學(xué)式的化合物可以為，例如，任何以下親脂性取代的核苷酸類似物取代的嘧啶、取代的尿嘧啶、疏水性T類似物、取代的甲苯、取代的咪唑或吡唑、取代的三唑、5-氯-尿嘧啶、5-溴-尿嘧啶、5-碘-尿嘧啶、5-乙基-尿嘧啶、5-丙基-尿嘧啶、5-丙基尿嘧啶、(E)-5-(2-溴乙烯基)_尿嘧啶或2.4-二氟-甲苯。E類寡核苷酸至少描述于臨時專利申請US60/847，811。當未按照本發(fā)明的0DN和IFN-相關(guān)細胞因子和趨化因子改性時，與B類或C類寡核苷酸相比"T類"寡核苷酸誘導(dǎo)較低濃度的IFN-a的分泌，而同時維持與B類寡核苷酸類似的誘導(dǎo)IL-10的水平的能力。T類寡核苷酸描述于至少美國專利申請No.11/099,683,將其全部內(nèi)容在此引入以作參考?！癙類"免疫刺激寡核苷酸具有幾種結(jié)構(gòu)域，包括5'TLR激活結(jié)構(gòu)域、2雙鏈形成區(qū)域(duplexformingregions)和任選的間隔子和3‘尾。該類寡核苷酸在某些情況下具有誘導(dǎo)比C類高得多濃度的IFN-a分泌的能力。P類寡核苷酸具有體內(nèi)和/或體外自發(fā)的自我組裝成多聯(lián)體的能力。不受這些分子的作用方法的任何特定理論限制，一種可能的假設(shè)為該性質(zhì)賦予P類寡核苷酸以在特定免疫細胞內(nèi)更高度交聯(lián)TLR9的能力，與之前所述類別的CpG寡核苷酸相比誘導(dǎo)獨特模式的免疫激活。TLR9受體的交聯(lián)可以通過在漿細胞樣樹突細胞中的I類IFNR反饋環(huán)路誘導(dǎo)更強的IFN-a分泌的激活。P類寡核苷酸至少描述于美國專利系列號11/706，561。本發(fā)明的所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以為免疫抑制寡核苷酸。上述免疫調(diào)節(jié)基序可用于之前所述類的免疫抑制寡核苷酸(包括0DN類例如"S類")的背景。無論何時需要抑制免疫刺激，抑制性，或S類0DN是有用的。抑制性0DN可用于預(yù)防和治療膿毒性休克、炎癥、過敏、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病(GvHD)、自體免疫疾病、Thl-或Th2-介導(dǎo)的疾病、細菌感染、寄生性感染、自然流產(chǎn)和腫瘤。抑制性0DN通?？捎糜谝种票磉_相關(guān)TLR的所有細胞的激活，并且更特異地抑制抗原呈遞細胞、B細胞、漿細胞樣樹突細胞(pDCs)、單核細胞、單核細胞_衍生細胞、嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞的激活。S類0DN進一步至少描述于美國專利系列號10/977，560。除了穩(wěn)定性FANA嘌呤核苷酸之外，所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以具有穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合的主鏈，或具有穩(wěn)定化的和磷酸二酯核苷酸鍵合的嵌合主鏈。“穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合(核苷酸間鍵合)“將意味著與磷酸二酯核苷酸間鍵合相比，對體內(nèi)降解(例如經(jīng)由外-或內(nèi)-核酸酶)相對抗性的核苷酸間鍵合。優(yōu)選的穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合不限制地包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、硫代甲基磷酸酯、乙酸磷酸酯、Rp-硫代磷酸酯、Sp-硫代磷酸酯、硼烷磷酸酯或3'-硫甲縮醛，或其組合。其它穩(wěn)定化的核苷酸包括非離子性DNA類似物，例如烷基_和芳基_磷酸酯(其中帶電荷的膦酸酯氧被烷基或芳基基團取代)、磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中帶電荷的氧部分被烷基化。在其任何一個或兩個末端包含二元醇、例如四甘醇或六乙二醇的寡核苷酸也已經(jīng)顯示對核酸酶降解為實質(zhì)上抗性的。為了本發(fā)明的目的，嵌合主鏈是指部分穩(wěn)定化的主鏈，其中至少一個核苷酸間鍵合為磷酸二酯或磷酸二酯樣，并且其中至少一個其它核苷酸間鍵合為穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合，其中所述至少一個磷酸二酯或磷酸二酯樣鍵合和所述至少一個穩(wěn)定化的鍵合是不同的。由于已經(jīng)報道硼烷磷酸酯鍵合相對于磷酸二酯鍵合是穩(wěn)定化的，為了主鏈的嵌合性質(zhì)，依賴于上下文，硼烷磷酸酯鍵合可以分類為磷酸二酯樣或穩(wěn)定化的。例如，在一種實施方式中根據(jù)本發(fā)明的嵌合主鏈可以包括至少一個磷酸二酯(磷酸二酯或磷酸二酯樣)鍵合和至少一個硼烷磷酸酯(穩(wěn)定化的)鍵合。在另一實施方式中根據(jù)本發(fā)明的嵌合主鏈可以包括硼烷磷酸酯(磷酸二酯或磷酸二酯樣)鍵合和至少一個硫代磷酸酯(穩(wěn)定化的)鍵合。改性的主鏈例如硫代磷酸酯可以使用自動化技術(shù)使用磷酰胺或H-膦酸酯化學(xué)法來合成。芳基-和烷基膦酸酯可以例如按照美國專利No.4，469，863所述制造；并且烷基磷酸三酯(其中帶電荷的氧部分為烷基化的，如美國專利No.5，023，243和歐洲專利No.092，574所述)可以通過自動化固相合成使用商業(yè)上可獲得試劑來制備。制造其它DNA主鏈改性和取代的方法已經(jīng)描述。UhlmannEetal.(1990)ChemRev90544；GoodchildJ(1990)BioconjugateCheml165。用于制備嵌合寡核苷酸的方法也是已知的。例如Uhlmann等授權(quán)的專利已經(jīng)描述此類技術(shù)?；旌现麈湼男缘?DN可以使用商業(yè)上獲得的DNA合成儀和標準磷酰胺化學(xué)法來合成。(F.E.Eckstein,“OligonucleotidesandAnalogues-APracticalApproach"IRLPress.Oxford,UK,1991,andM.D.MatteucciandM.H.Caruthers,TetrahedronLett.21,719(1980))。偶聯(lián)后，PS鍵合使用Beaucage試劑(R.P.Iyer，W.Egan，J.B.ReganandS.LBeaucaRe,J.Am.Chem.Soc.112,1253(1990))(0.075M，在乙腈中)或苯乙酰二硫化物(PADS)通過硫化來導(dǎo)入，然后用乙酸酐、在四氫呋喃中的2，6_盧剔啶(118；vvv)和N甲基咪唑(16%，在四氫呋喃中)加帽。該加帽步驟在硫化反應(yīng)之后進行以在硫代磷酸酯鍵合應(yīng)該位于的位置處最小化不期望的磷酸二酯(P0)鍵合的形成。在引入磷酸二酯鍵合的情況下，例如在CpG二核苷酸處，中間的磷-III通過用在水/吡啶中的碘溶液處理來氧化。從固相載體分離后并且通過用濃縮的氨最后去保護(在50°C下15hrs)后，0DN通過使用NaCl-梯度液的Gen-PakFax柱(Millipore-Waters)上(例如緩沖液A:在乙腈/水=14/vv的pH6.8的10mMNaH2P04；緩沖液B在乙腈/水=14/vv的1.5MNaCIUOmMNaH2P04；5至60%B；在30分鐘以lml/min)的HPLC或通過毛細凝膠電泳來分析°所述0DN可以在SourceHighPerformancecolumn(AmershamPharmacia)上通過HPLC或通過FPLC來純化。將HPLC-均相級分合并并且經(jīng)由C18柱或通過超濾來脫鹽。所述0DN通過MALDI-T0F質(zhì)譜來分析以確認計算的質(zhì)量。本發(fā)明的寡核苷酸還可以包括其它改性。這些包括非離子性DNA類似物，例如烷基-和芳基-磷酸酯(其中帶電荷的膦酸酯氧被烷基或芳基基團取代)、磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中帶電荷的氧部分被烷基化。在任何一個或兩個末端包含二元醇、例如四甘醇或六乙二醇的寡核苷酸也已經(jīng)顯示對核酸酶降解為實質(zhì)上抗性的。半軟(semi-soft)寡核苷酸為具有部分穩(wěn)定化主鏈的免疫刺激寡核苷酸，其中磷酸二酯或磷酸二酯樣核苷間鍵合僅在至少一個內(nèi)部嘧啶核苷-鳥嘌呤核苷(YG)二核苷酸內(nèi)出現(xiàn)。半軟寡核苷酸比具有全部穩(wěn)定化主鏈的免疫刺激寡核苷酸具有許多優(yōu)點。例如，相對于相應(yīng)的全部穩(wěn)定化的免疫刺激寡核苷酸，半軟寡核苷酸可以擁有增加的免疫刺激潛力。在一些實施方式中所述YZ二核苷酸為YG二核苷酸，其中G為鳥嘌呤核苷或改性的鳥嘌呤核苷。在一些實施方式中所述鳥嘌呤核苷為FANA-改性的鳥嘌呤核苷。除了在優(yōu)選內(nèi)部位置的磷酸二酯或磷酸二酯樣核苷酸間鍵合之外，免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸將通常包括對降解為抗性的5'和3'末端。此類抗降解末端可以包括任何合適的改性，其導(dǎo)致與相應(yīng)地未改性的末端相比對外切核酸酶消化增加的抗性。例如，所述5'和3'末端可以通過其中包括至少一個所述主鏈的磷酸酯改性來穩(wěn)定化。在優(yōu)選的實施方式中，所述在各末端處所述至少一個主鏈的磷酸酯改性為獨立地硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，甲基膦酸酯或甲基硫代磷酸酯核苷酸間鍵合。在另一實施方式中，所述抗降解末端在3‘末端處包括被肽或酰胺鍵合連接的一個或多個核苷酸單元。磷酸二酯核苷酸間鍵合為特征在于在自然中發(fā)現(xiàn)的寡核苷酸的鍵合類型。所述磷酸二酯核苷酸間鍵合包括被兩個橋氧原子側(cè)接并且還被兩個另外的氧原子(一個帶電，另一個不帶電)結(jié)合的磷原子。當降低寡核苷酸的組織半衰期是重要的時，磷酸二酯核苷酸間鍵合是特別優(yōu)選的。磷酸二酯樣核苷酸間鍵合為含磷橋基團，其與磷酸二酯化學(xué)地和/或非對映體地(diastereomerically)地類似。與磷酸二酯相似性的測定包括對核酸酶消化的易感性和激活RNA酶H的能力。這樣例如磷酸二酯，而不是硫代磷酸酯寡核苷酸對核酸酶消化是易感性的，而磷酸二酯和硫代磷酸酯寡核苷酸都激活RNA酶H。在優(yōu)選的實施方式中所述磷酸二酯樣核苷酸間鍵合為硼烷磷酸酯(或等效地，硼烷膦酸酯)鍵合。美國專利No.5，177，198；美國專利No.5，859，231；美國專利No.6，160，109；美國專利No.6，207，819；Sergueevetal.，(1998)JAmChemSoc120:9417-27。在另一優(yōu)選實施方式中，所述磷酸二酯樣核苷酸間鍵合為非對映體地純Rp硫代磷酸酯。認為非對映體地純Rp硫代磷酸酯對于核酸酶消化是更易感受性的，并且比混合或非對映體地純Sp硫代磷酸酯更擅長激活RNA酶H。CpG寡核苷酸的立體異構(gòu)體為共同未決的(co-pending)的1999年7月27日提交的美國專利申請09/361，575，以及出版的PCT申請PCT/US99/17100(W000/06588)的主題。應(yīng)該注意為了本發(fā)明的目的，術(shù)語磷酸二酯樣核苷酸間鍵合特定地排除二硫代磷酸酯和甲基膦酸酯核苷酸間鍵合。與天然RNA和DNA相比，本發(fā)明的免疫刺激寡核苷酸可以包括各種化學(xué)改性和取代，包括磷酸二酯核苷酸間橋，3-D-核糖單元和/或天然核苷酸堿基(腺嘌呤、鳥嘌呤、11胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)。對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言化學(xué)改性的實例是已知的并且描述于例如UhlmannEetal.(1990)ChemRev90:543;“ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs"SynthesisandProperties&SynthesisandAnalyticalTechniques,S.Agrawal,Ed,HumanaPress,Totowa,USA1993；CrookeSTetal.(1996)AnnuRevPharmacolToxicol36107-129；andHunzikerJetal.(1995)ModSynthMethods7:331-417。根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸可以具有一種或多種改性，其中與由天然DNA或RNA組成的相同序列的寡核苷酸相比，各改性位于特定的磷酸二酯核苷酸間橋處和/或在特定3-D-核糖單元處和/或在特定的天然核苷酸堿基位置處。例如，本發(fā)明涉及這樣的寡核苷酸，其可以包括一種或多種改性，并且其中各改性獨立地選自a).位于核苷酸3'和/或5'末端的磷酸二酯核苷酸間橋被改性的核苷酸間橋(internucleotidebridge)取代，b).位于核苷酸3'和/或5'末端的磷酸二酯橋被脫磷橋(cbphosphobridge)取代，c).來自糖磷酸酯主鏈的糖磷酸酯單元被另一單元取代，d).0-D-核糖單元被改性的糖單元取代，和e).天然核苷酸堿基被改性的核苷酸堿基取代。寡核苷酸的化學(xué)改性的更具體的實施例如下。位于核苷酸3'和/或5'末端的磷酸二酯核苷酸間橋可以被改性的核苷酸間橋取代，其中所述改性的核苷酸間橋例如選自硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，NRf-磷酰胺，硼烷磷酸酯，a-羥基苯基膦酸酯、磷酸酯-(Q-CJ-O-烷基酯、磷酸酯-[(C6_C12)芳基-(c「-c21)-o-烷基]酯、(C「C8)烷基膦酸酯和/或(C6_C12)芳基膦酸酯橋、(C7-C12)-a-羥甲基-芳基(例如公開于W095/01363)，其中(C6_C12)芳基，(C6_C20)芳基和(C6"C14)芳基任選地被鹵素、烷基、烷氧基、硝基、氰基取代，并且其中R1和R2相互獨立地為氫、(CrC18)-烷基，(c6-c2Q)-芳基，(c6-c14)-芳基-(CrC8)-烷基，優(yōu)選氫、(CrC8)-烷基，優(yōu)選(Ci-C；)-烷基和/或甲氧基乙基，或R1和R2與攜帶它們的氮原子一起形成5-6元雜環(huán)，其可以另外的包含來自0、S和N的其它的雜原子。位于核苷酸3'和/或5'末端的磷酸二酯橋被脫磷橋(脫磷橋描述于例如UhlmannEandPeymanAin"MethodsinMolecularBiology",Vol.20,"ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs",S.Agrawal,Ed.,HumanaPress,Totowa1993,Chapter16,pp.355ff)取代，其中脫磷橋例如選自脫磷橋甲縮醛(formacetal)、3'-硫甲縮醛、甲基羥基胺、肟、亞甲基二甲基_胼撐(hydrazo)、二甲基砜和/或甲硅烷基基團。來自糖磷酸酯主鏈(即，糖磷酸酯主鏈由糖磷酸酯單元組成)的糖磷酸酯單元(即3-D-核糖和磷酸二酯核苷酸間橋一起形成糖磷酸酯單元)可以被另一單元取代，其中另一單元例如適合于構(gòu)建"嗎啉基-衍生物"寡聚體(如例如描述于StirchakEPetal.(1989)NucleicAcidsRes17:6129_41)，g卩，例如被嗎啉基-衍生物單元取代；或構(gòu)建聚酰胺核酸(“PNA"；如例如描述于NielsenPEetal.(1994)BioconjugChem5:3_7)，即，例如被PNA主鏈單元，例如被2-氨基乙基甘氨酸取代。術(shù)語"核酸"和"寡核苷酸"還包括具有取代或改性的核酸或寡核苷酸，例如在堿基和/或糖中。例如，它們包括具有主鏈糖的核酸，其在共價地連接至除了2'位置的羥基基團和除了在5'位置的磷酸酯基團或羥基基團的低分子量有機基團。這樣改性的核酸可以包括2'-0-烷基化核糖基團。此外，改性的核酸可以包括糖例如代替核糖的阿拉伯糖或2'-氟代阿拉伯糖。這樣，所述寡核苷酸可以在主鏈組成上是異源的，由此包含任何可能的連接在一起的聚合物單元的組合例如肽-核酸(其具有具有核酸堿基的氨基酸主鏈)。寡核苷酸還包括取代的嘌呤和嘧啶例如C-5丙炔嘧啶和7-脫氮-7-取代嘌呤改性堿基。WagnerRffetal.(1996)NatBiotechnoll4:840_4。嘌呤和嘧啶包括但不限于腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-氟代胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯代嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、次黃嘌呤和其它天然或非天然發(fā)生的核苷堿基、取代和未取代的芳香部分(aromaticmoieties)。其它此類改性對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。改性堿基為這樣的任何堿基，其與在DNA和RNA中典型地發(fā)現(xiàn)的天然發(fā)生的堿基例如T，C，G，A和U化學(xué)上明顯不同但其與這些天然發(fā)生的堿基共有基本的或堿基化學(xué)結(jié)構(gòu)。改性的核苷酸堿基可以為例如選自次黃嘌呤、尿嘧啶、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、5-(CrC6)-烷基尿嘧啶、5-(C2-C6)-鏈烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)-炔基尿嘧啶、5-(羥甲基)尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(CrC6)-烷基胞嘧啶、5-(C2-C6)-鏈烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)-炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、N2-二甲基鳥嘌呤、2，4_二氨基-嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7-脫氮嘌呤，優(yōu)選7-脫氮-7-取代的和/或7-脫氮-8-取代的嘌呤、5-羥甲基胞嘧啶、N4-烷基胞嘧啶例如N4-乙基胞嘧啶、5-羥甲基胞嘧啶、6-硫代鳥嘌呤、硝基吡咯、C5-丙炔基嘧啶和二氨基嘌呤例如2，6-二氨基嘌呤、5-甲基胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、次黃嘌呤或天然核苷酸堿基的其它改性。該列表旨在列舉而不解釋為受限。除了上述FANA-改性之外，本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以具有其它類型的糖改性。如同F(xiàn)ANA改性一樣，核糖單元或0-D-2'-脫氧核糖單元可以被改性的糖單元代替，其中所述改性的糖單元為例如選自0-D-核糖，a-D-2'-脫氧核糖、L-2'-脫氧核糖、2'-F-2'-脫氧核糖、2'-0-(C1-C6)烷基-核糖，優(yōu)選2'-0-(C1-C6)烷基-核糖為2'-0-甲基核糖、2'-0-(C2-C6)鏈烯基-核糖、2'_-核糖、2'-NH2-2'-脫氧核糖、3-D-木糖基(xylo)-呋喃糖、a-阿拉伯呋喃糖、2,4-二脫氧-D-erythro-hexo-吡喃糖和碳環(huán)的(描述于例如FroehlerJ(1992)AmChemSoc114:8320)和/或開鏈糖類似物(描述于例如Vandendriesscheetal.(1993)Tetrahedron497223)和/或雙環(huán)糖(bicyclosugar)類似物(描述于例如TarkovMetal.(1993)HelvChimActa76481)。在一些實施方式中，所述改性為2'-0-甲氧基乙基核糖、2'-0-亞丙基核糖、2'-0-丁基核糖、2'-0-(2-甲氧基乙基)、2'-0,4'-C-亞烷基-聯(lián)核糖(亞烷基為亞甲基(LNA)或亞乙基)、2'-脫氧-2'-氟代核糖、3'-0-甲基核糖、1'，2'-二脫氧核糖；阿拉伯糖、1'-甲基阿拉伯糖、3'-羥甲基阿拉伯糖、4'-羥甲基-阿拉伯糖或1，5-脫水己糖醇。在本文所述的特定化學(xué)式中，定義了一組改性堿基。例如字母Y用于表示嘧啶，并且在一些實施方式中為包含胞嘧啶或改性胞嘧啶的核苷。本文所用的改性胞嘧啶為胞嘧啶的天然發(fā)生或非天然發(fā)生的嘧啶堿基類似物，其可以取代該堿基而不削弱該寡核苷酸的免疫刺激活性。改性胞嘧啶包括但不限于5-取代的胞嘧啶例如(5-甲基-胞嘧啶、5-氟-胞嘧啶、5-氯-胞嘧啶、5-溴-胞嘧啶、5-碘-胞嘧啶、5-羥基-胞嘧啶、5-羥甲基-胞嘧啶、5-二氟甲基-胞嘧啶、和未取代的或取代的5-炔基-胞嘧啶)、6_取代的胞嘧啶、N4-取代的胞嘧啶(例如N4-乙基-胞嘧啶)、5_氮雜-胞嘧啶、2-巰基-胞嘧啶、異胞嘧啶、假-異胞嘧啶、具有稠環(huán)系統(tǒng)的胞嘧啶類似物(例如N，N'-亞丙基胞嘧啶或吩口惡嗪)，和尿嘧啶5‘-取代的尿嘧啶類似物例如5-氟-尿嘧啶，5-溴-尿嘧啶，5-溴乙烯基-尿嘧啶，4_硫代-尿嘧啶，5-羥基-尿嘧啶，5-丙炔基-尿嘧啶。一些優(yōu)選的胞嘧啶包括5-甲基-胞嘧啶，5-氟-胞嘧啶，5-羥基-胞嘧啶，5-羥甲基-胞嘧啶，和N4-乙基-胞嘧啶。在本發(fā)明的另一實施方式中，所述胞嘧啶堿基被普通堿基(universalbase)(例如3_硝基吡咯，P-堿基)、芳香環(huán)系統(tǒng)例如氟代苯或二氟代苯)或H原子(dSpacer)取代。字母Z用于表示嘌呤或無堿基殘基，在一些實施方式中為鳥嘌呤或改性鳥嘌呤堿基。本文所用的改性鳥嘌呤為鳥嘌呤的天然發(fā)生或非天然發(fā)生的嘌呤堿基類似物，其可以取代該堿基而不削弱該寡核苷酸的免疫刺激活性。改性的鳥嘌呤包括但不限于7-脫氮鳥嘌呤，7-脫氮-7-取代的鳥嘌呤(例如7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤)，7-脫氮-8-取代的鳥嘌呤，次黃嘌呤，N2-取代的鳥嘌呤(例如N2-甲基-鳥嘌呤)，5-氨基-3-甲基-3H，6H-噻唑[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮，2，6-二氨基嘌呤，2-氨基嘌呤，嘌呤，吲哚，腺嘌呤，取代的腺嘌呤(例如N6-甲基-腺嘌呤，8-氧-腺嘌呤)8-取代的鳥嘌呤(例如8-羥基鳥嘌呤和8-溴鳥嘌呤)，和6-硫代鳥嘌呤。這些改性的鳥嘌呤堿基可以為FANA改性的殘基。在本發(fā)明的另一實施方式中，在免疫調(diào)節(jié)基序中的鳥嘌呤堿基的一種被普通堿基(例如4-甲基_吲哚，5-硝基-吲哚和K-堿基)、芳香環(huán)系統(tǒng)(例如苯并咪唑或二氯-苯并咪唑，1-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-羧酸酰胺)或氫原子(dSpacer)取代。在該實施方式中其它鳥嘌呤堿基為FANA-改性的殘基。在一些實施方式中所述寡核苷酸包一種或多種回文序列。如本文所用，“回文結(jié)構(gòu)(palindrome)“和等價地，“回文序列"是指反向重復(fù)，即序列例如ABCDEE'D'C'B'A'，其中A和A'，B和B'，等為能夠形成通常的Watson-Crick堿基對的堿基。在一些情況下所述回文為富GC的。富GC的回文結(jié)構(gòu)為具有至少三分之二的G和C的堿基組成的回文。在一些實施方式中富GC的結(jié)構(gòu)域優(yōu)選3'于"B細胞刺激結(jié)構(gòu)域"。在10堿基長的富GC的回文結(jié)構(gòu)的情況下，回文結(jié)構(gòu)這樣包含至少8個G'和C'。在12堿基長的富GC的回文結(jié)構(gòu)的情況下，回文結(jié)構(gòu)也包含至少8個G'和C'。在14堿基長的富GC的回文結(jié)構(gòu)的情況下，回文結(jié)構(gòu)的至少10個堿基為G'和C'。在一些實施方式中富GC的回文結(jié)構(gòu)排他的由G和C組成。在一些實施方式中寡核苷酸包含超過1個回文序列。DNA為通過3'-5'磷酸二酯鍵合連接的脫氧核糖核苷酸的聚合物。本發(fā)明的聚合物的單元還可以通過3'-5'磷酸二酯鍵合連接。然而，本發(fā)明還包括具有不常見核苷酸間鍵合的聚合物，所述不常見核苷酸間鍵合具體地包括5'-5',3'-3',2'-2'，2'-3'，和2'-5'核苷酸間鍵合。在一種實施方式中此類不常見鍵合從免疫刺激DNA基序中排除，即使一種或多種此類鍵合可以在聚合物內(nèi)的別處出現(xiàn)。對于具有游離端的聚合物，一個3'-3'核苷酸間鍵合的引入可以產(chǎn)生具有兩個游離5'末端的聚合物。相反地，對于具有游離端的聚合物，一個5'-5'核苷酸間鍵合的引入可以產(chǎn)生具有兩個游離3'末端的聚合物。本發(fā)明的免疫刺激組合物可以包含兩個或多個能夠通過支鏈單元連接的免疫刺激DNA基序。所述核苷酸間鍵合可以為3'-5'，5'-5'，3'-3'，2'-2'，2'-3'，或2'-5'鍵合。由此，根據(jù)脫氧核糖的碳原子選擇命名2'-5'。然而，如果使用非天然糖部分，例如環(huán)擴大(ring-expanded)的糖類似物(例如己糖、環(huán)己烯或吡喃糖)或二-或三環(huán)糖類似物，然后該命名根據(jù)單體的命名改變。該不常見核苷酸間鍵合可以為磷酸二酯鍵合，但其可備選地改性為硫代磷酸酯或如本文所述的任何其它改性鍵合。式I顯示支鏈DNA寡聚體和經(jīng)由核苷酸支鏈單元的本發(fā)明的改性寡核糖核苷酸類似物的通式結(jié)構(gòu)。由此Nu1,Nu2和Nu3通過3-5、5'-5'、3'-3'，2'-2'，2'-3'，或2'-5'-鍵合連接。DNA寡聚體的支鏈化可以包括使用非核苷酸連接子和無堿基間隔子。在一種實施方式中，Nu1,Nu2和Nu3代表相同或不同的免疫刺激DNA基序。<image>imageseeoriginaldocumentpage15</image>改性的寡核糖核苷酸類似物可以包含doubler(雙重)或trebler(三重)單元(GlenResearch，Sterling，VA)，特別是具有3'-3'鍵合的那些改性寡脫氧核糖核苷酸類似物。在一種實施方式中的doubler單元可以基于1，3_雙-[5-(4，4'-二甲氧基三苯甲氧基(trityloxy))戊基氨基]丙基_2_[(2_氰乙基)-(N，N-二異丙基)]-亞磷酰胺。在一種實施方式中的trebler單元可以基于三-2，2，2-[3-(4，4'-二甲氧基三苯甲氧基)丙氧基甲基]乙基-[(2-氰乙基)-(N，N-二異丙基)]-亞磷酰胺的引入。通過多個doubler(雙重)，trebler(三重)，或其它倍增單元使改性寡核糖核苷酸類似物支鏈化產(chǎn)生為本發(fā)明進一步實施方式的樹枝狀大分子(dendrimer)。與非支鏈形式的類似物相比，特別對于免疫刺激RNA和DNA(例如具有不同免疫效果的TLR3，TLR7，TLR8，和TLR9)的組合，支鏈化的改性寡核糖核苷酸可以產(chǎn)生受體的交聯(lián)。此外，支鏈或另外的多聚體類似物的合成可以抗降解而穩(wěn)定DNA，并且能夠使弱的或部分有效的DNA序列以發(fā)揮治療上有用水平的免疫活性。改性的寡脫氧核糖核苷酸類似物還可以包含由肽改性劑或寡核苷酸改性劑(GlenResearch)產(chǎn)生的連接子單元(linkerunit)。此外，改性的寡脫氧核糖核苷酸類似物可以包含一個或多個天然或非天然氨基酸殘基，其通過肽(酰胺)鍵合連接至所述聚合物。免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以包含至少一個間接鍵合。直接鍵合是指如本文所述的磷酸酯或改性磷酸酯鍵合，沒有插入的連接子部分(interveninglinkermoiety)。插入的連接子部分(interveninglinkermoiety)為不同于本文所述的磷酸酯或改性磷酸酯鍵合的有機部分，其可以包括例如聚乙二醇、1，2_丙二醇、甘油或甘油類似物、三甘醇、六乙二醇、dSpacer(即，無堿基脫氧核苷酸)、doubler單元，或trebler單元。該鍵合優(yōu)選由C，H，N,0，S，B,P和鹵素組成，包含3至300個原子。具有3個原子的實例為乙縮醛鍵合(0Dm-3'-0-CH2-0-3‘-0DN2)，將例如一個核苷酸的3'-羥基連接至第二寡核苷酸的3'-羥基。具有約300個原子的實例為PEG-40(四十烷聚乙二醇)。優(yōu)選的鍵合為磷酸二酯，硫代磷酸酯，甲基膦酸酯，磷酰胺，硼烷膦酸酯、酰胺、醚、硫醚、縮醛(aceta)、硫縮醛、尿素、硫脲、磺酰胺、席夫堿和二硫化物鍵合。還可以使用SolulinkBioConjugationSystem即，(www,trilinkbiotech.com)。如果寡核苷酸由兩個或多個序列部分組成，這些部分可以相同或不同。這樣，在具有3'3'-鍵合的寡核苷酸中，該序列可以為相同的5'-0DN1-3'3'-0DN1-5'或不同的5'-0DN1-3'3'-0DN2-5'。此外，各種寡核苷酸部分的化學(xué)改性以及連接它們的連接子可以不同。由于短寡核苷酸的攝入比長寡核苷酸的攝入似乎是較無效的，兩個或多個短序列的連接導(dǎo)致改進的免疫刺激。該短寡核苷酸的長度優(yōu)選2-20個核苷酸，更優(yōu)選3-16個核苷酸，但最優(yōu)選5-10個核苷酸。該寡核苷酸部分序列還可以通過非核苷酸連接子連接。非核苷酸連接子是指不是核苷酸或其聚合物(即，多核苷酸)的任何連接子元件，其中核苷酸包括嘌呤或嘧啶核苷堿基和糖磷酸酯，特別是非堿基連接子(dSpacers)、三甘醇單元或六乙二醇單元。此外優(yōu)選的連接子為烷基氨基連接子，例如C3，C6，C12氨基連接子和烷基硫醇連接子，例如C3或C6硫醇連接子。寡核苷酸還可以通過芳香殘基連接，所述芳香殘基可以被烷基或取代烷基進一步取代。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)ODN還可以采用同時具有一級和二級結(jié)構(gòu)的共價閉合的、啞鈴形分子的形式。在一種實施方式中，此類環(huán)狀寡核糖核苷酸包括通過插入的雙鏈片段(interveningdouble-strandedsegment)連接的兩個單鏈環(huán)。在一種實施方式中至少一個單鏈環(huán)包括本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)DNA基序。本發(fā)明的其它共價閉合的、啞鈴形分子包括嵌合DNA:RNA分子，其中，例如，雙鏈片段至少部分為DNA(例如，同源二聚體dsDNA或異源二聚DNA=RNA)，并且至少一個單鏈環(huán)包括本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)DNA基序。備選地，嵌合分子的雙鏈片段為DNA。免疫調(diào)節(jié)ODN可以分離。分離的分子為基本上純并且不包含其它物質(zhì)的分子，且通常發(fā)現(xiàn)所述其它物質(zhì)某種程度上在自然或在體內(nèi)系統(tǒng)中用于其指定用途和適合其指定用途。具體地，免疫調(diào)節(jié)ODN為基本上純的，并且基本上不含細胞的其它生物組分，以用于例如產(chǎn)生藥物制劑。由于本發(fā)明的分離的免疫調(diào)節(jié)ODN可以在藥物制劑中與藥學(xué)上可接受的載體混合，該免疫調(diào)節(jié)ODN可以僅構(gòu)成少量重量百分比的該制劑。雖然如此該免疫調(diào)節(jié)ODN為基本上純的，原因在于其已經(jīng)從活體系統(tǒng)中可與其相關(guān)的物質(zhì)充分地分離。為了促進攝入細胞，在一些實施方式中該免疫刺激寡核苷酸在長度上為8至100個堿基的范圍。典型地，如果充分的免疫刺激基序存在，比6個核苷酸大(甚至幾kb長)的任何大小的寡核苷酸能夠誘導(dǎo)根據(jù)本發(fā)明的免疫應(yīng)答。在一些實施方式中該寡核苷酸在長度上少于15個核苷酸。在一種實施方式中本發(fā)明的組合物進一步包括共價地連接至聚合物的至少一端的PolyG序列，其中各polyG序列獨立地包括4-10個連續(xù)地鳥苷核苷，所述鳥苷核苷選自鳥苷核糖核苷、鳥苷脫氧核糖核苷，和其任意組合。在一種實施方式中的PolyG序列包括穩(wěn)定化的核苷酸間磷酸酯鍵合，例如硫代磷酸酯鍵合。PolyG序列可以賦予許多生物和物理化學(xué)性質(zhì)，包括抗核酸酶的穩(wěn)定性、增強的細胞攝入，某些細胞因子的抑制、和二級或分子間結(jié)構(gòu)(包括所謂的G-四聯(lián)體)的形成。在一種實施方式中，該聚合物具有3'末端，并且該PolyG序列共價地連接至該3'末端。該polyG序列可以經(jīng)由任何合適的直接或間接鍵合，通常經(jīng)由主鏈鍵合共價地連接至該聚合物。在一方面本發(fā)明提供本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸和親脂性改性的綴合物。親脂性基團通常可以為、改性膽留醇基、膽固醇衍生物、還原的膽固醇(reducedcholesterol)、取代的膽固醇、膽留烷、C16烷基鏈、膽汁酸、膽酸、?；悄懰?、脫氧膽酸酯(鹽)、石膽酸油酯(oleyllitocholicacid)、膽烯酸油酯、糖脂、磷脂、鞘脂和類異戊二烯，例如類固醇、維生素，例如維生素E，飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸酯例如三甘油酯、芘、紫菜堿、Texaphyrine、金剛烷、吖啶、生物素、香豆素、熒光素、羅丹明、Texas-Red、地高辛、二甲氧基三苯甲基、叔丁基二甲氧基甲硅烷基、叔丁基二戊基甲硅烷基、花青染料(例如Cy3或Cy5)、Hoechst33258染料、補骨脂素或布洛芬。在特定實施方式中親脂性部分選自膽留基、棕櫚基和脂肪?；?。在一種實施方式中該親脂性部分為膽留基。認為在本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸中的一種或多種此類親脂性部分的引入賦予它們通過核酸酶抗降解的另外的穩(wěn)定性。當在本發(fā)明的單一免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸中存在兩個或多個親脂性部分時，各親脂性部分可以相互獨立地選擇。在一種實施方式中，該親脂性基團連接至該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的核苷酸的2'_位置。親脂性基團可以備選地或另外連接至免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的核苷酸的雜環(huán)核苷堿基。該親脂性部分可以經(jīng)由任何直接或間接的鍵合共價地連接至該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸。在一種實施方式中該鍵合為直接的并且為酯或酰胺。在一種實施方式中，該鍵合為間接的并且包括間隔子部分，例如一種或多種無堿基核苷酸殘基、多甘醇(oligoethyleneglycol)例如三甘醇(間隔子9)或六乙二醇(間隔子18)或烷烴-二醇，例如丁二醇。本發(fā)明包括本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸用于治療受試者的用途，所述受試者患有可以通過免疫應(yīng)答的刺激或抑制而治療的狀況。這樣，本發(fā)明的免疫刺激寡核苷酸用于治療感染、癌癥、過敏、哮喘、炎癥狀況或自體免疫疾病。在本發(fā)明的某些方面該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還用于治療有發(fā)展過敏或哮喘、具有感染性有機體的感染，或癌癥的風(fēng)險的受試者。本文所用的有風(fēng)險的受試者為具有任何暴露至引起感染的病原體或具有癌癥或過敏的任何風(fēng)險或發(fā)展癌癥的風(fēng)險的受試者。例如，有風(fēng)險的受試者可以為計劃旅行至其中發(fā)現(xiàn)特定類型的傳染原的地區(qū)的受試者，或其可以為通過生活方式或醫(yī)學(xué)途徑暴露至可能包含感染性有機體的體液或間接暴露至有機體的受試者，或甚至為生活在其中已經(jīng)鑒定出感染性有機體或過敏原的任何受試者。有發(fā)展感染風(fēng)險的受試者還包括醫(yī)療機構(gòu)推薦用特定的感染性有機體抗原接種的普通人群。如果抗原為過敏原和受試者發(fā)展對該特定抗原的過敏性應(yīng)答以及受試者可以暴露至抗原，即在花粉季節(jié)，那么該受試者有暴露至該抗原的風(fēng)險。有發(fā)展過敏或哮喘風(fēng)險的受試者包括已經(jīng)鑒定為在免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸治療期間具有過敏或哮喘但不具有活動性疾病(activedisease)的受試者以及由于遺傳或環(huán)境因子認為有發(fā)展這些疾病的風(fēng)險的受試者。有發(fā)展癌癥風(fēng)險的受試者為具有發(fā)展癌癥的高可能性的那些。這些受試者包括，例如，具有遺傳異常(其存在已經(jīng)證明與發(fā)展癌癥的更高可能性相關(guān))的受試者，和暴露至致癌試劑例如煙草、石棉、或其它化學(xué)毒素的受試者，或其之前已經(jīng)就癌癥治療并且在明顯的緩解中的受試者。當有發(fā)展癌癥(對其受試者有發(fā)展的風(fēng)險)的受試者用對該癌癥類型特異的抗原和CpG免疫刺激寡核苷酸治療時，受試者可以能夠殺死它們發(fā)展的癌細胞。如果腫瘤開始在受試者中形成，受試者將發(fā)展針對腫瘤抗原的特異性免疫應(yīng)答?；加羞^敏的受試者為應(yīng)答于過敏原患有過敏反應(yīng)或有風(fēng)險發(fā)展過敏反應(yīng)的受試者。過敏是指針對物質(zhì)(過敏原)的獲得性超敏性。過敏狀況包括但不限于濕疹、過敏性鼻炎(rhinitis)或鼻炎(coryza)、花粉熱、結(jié)膜炎、支氣管哮喘、蕁麻疹(urticaria)((蕁麻疹(hives))或食物過敏，和其它特應(yīng)性狀況。過敏通常由針對無害過敏原的IgE抗體產(chǎn)生引起。由全身性或粘膜施用免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸誘導(dǎo)的細胞因子主要是稱為Thl的類(實例為IL-12，IP-ο,IFN-α和IFN-γ)，并且這些誘導(dǎo)體液和細胞免疫應(yīng)答。與IL-4和IL-5細胞因子相關(guān)的其它主要類型的免疫應(yīng)答，命名為Th2免疫應(yīng)答。通常，似乎過敏性疾病通過Th2類免疫應(yīng)答介導(dǎo)?；诿庖哒{(diào)節(jié)寡核苷酸在受試者中將免疫應(yīng)答從主要Th2(其與IgE抗體的產(chǎn)生和過敏相關(guān))改變?yōu)槠胶獾腡h2/Thl應(yīng)答(其針對過敏反應(yīng)為保護性的)的能力，用于誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的免疫應(yīng)答的有效劑量可以施用至受試者以治療或預(yù)防哮喘和過敏。這樣，該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸在治療過敏性和非過敏性狀況例如哮喘中具有顯著的治療效用。Th2細胞因子，特別是IL-4和IL-5在哮喘受試者的氣道中升高。這些細胞因子促進哮喘性炎癥應(yīng)答的重要方面，包括IgE同位素交換(isotopeswitching)、嗜酸性細胞趨化性(eosinophilchemotaxis)和激活以及肥大細胞生長。Thl細胞因子，特別是IFN-γ和IL-12，能夠抑制Th2克隆的形成和Th2細胞因子的產(chǎn)生。哮喘是指特征在于炎癥、氣道狹窄和氣道對吸入劑(inhaledagent)的增加反應(yīng)性的呼吸系統(tǒng)的障礙。哮喘為經(jīng)常地，盡管非排他性地與特應(yīng)性癥狀相關(guān)。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還可以與抗過敏治療組合施用。用于治療或預(yù)防過敏的傳統(tǒng)方法涉及過敏藥劑或脫敏治療的使用。用于治療或預(yù)防過敏的一些發(fā)展的治療包括中和抗-IgE抗體的使用。阻斷過敏反應(yīng)化學(xué)介體的效應(yīng)的抗組胺和其它藥物有助于調(diào)節(jié)過敏癥狀的嚴重性，但不預(yù)防過敏反應(yīng)，并且對繼發(fā)的過敏應(yīng)答無效果。通過給予少量劑量的過敏原，通常通過在皮膚下注射進行脫敏治療，以誘導(dǎo)針對過敏原的IgG-型應(yīng)答。認為IgG抗體的存在有助于中和由于IgE抗體的誘導(dǎo)引起的介體的產(chǎn)生。最初，受試者用非常低劑量的過敏原治療以避免誘導(dǎo)的嚴重反應(yīng)，并且該劑量緩慢地增加。該類型的治療是危險的，因為受試者實際上施用引起過敏反應(yīng)的化合物，并且能夠引起嚴重的過敏反應(yīng)?？惯^敏藥劑包括，但不限于，抗組胺、糖皮質(zhì)激素和前列腺素誘導(dǎo)劑?？菇M胺為對抗由肥大細胞或嗜堿細胞釋放的組胺的化合物。這些化合物在本領(lǐng)域是已知的并且通常用于治療過敏。抗組胺包括，但不限于，阿伐斯汀(acrivastine)、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、倍他司汀、溴非尼臘明、氯苯丁嗪(buclizine)、西替立嗪、西替立嗪類似物、氯屈米、氯馬斯汀、CS560、賽庚啶、地氯雷他定、右氯苯那敏、依巴斯汀、依匹那丁、非索非那定、HSR609、羥嗪、左卡巴司汀、氯雷他定、甲基東莨菪堿、咪唑斯汀、諾阿斯米唑、苯茚達明、普魯米近、吡拉明、特非那定和曲尼司特。糖皮質(zhì)激素包括，但不限于，甲基強的松龍，脫氫皮質(zhì)(留)醇，潑尼松，氯地米松，布地縮松，地塞米松，氟尼縮松，丙酸氟替卡松和曲安西龍。盡管地塞米松為具有抗炎癥作用的糖皮質(zhì)激素，其不是經(jīng)常地以吸入形式用于治療過敏或哮喘，因為其是高度吸收的，并且其以有效劑量具有長期的抑制副作用。然而，根據(jù)本發(fā)明地塞米松可用于治療過敏或哮喘，因為當與本發(fā)明的組合物組合施用時其能夠以低劑量施用以降低副作用。與糖皮質(zhì)激素使用相關(guān)的一些副作用包括咳嗽、發(fā)聲困難、鵝口瘡(念珠菌病)，并且以更高劑量時，全身性效應(yīng)例如腎上腺抑制、葡萄糖耐受不良、骨質(zhì)疏松癥、無菌性骨壞死、白內(nèi)障形成、生長抑制、高血壓、肌無力、皮膚變薄(skinthinning)和易瘀紫(easybruising)。Barnes&Peterson(1993)AmRevRespirDis148:S1-S26；andKamadaAKetal.(1996)AmJRespirCritCareMed153:1739-48。本發(fā)明的寡核苷酸和方法可以單獨使用或與用于治療哮喘的其它試劑和方法組合使用。在一個方面本發(fā)明提供治療患有哮喘的受試者的方法。根據(jù)本發(fā)明這方面的方法包括施用至患有哮喘的受試者以有效量的本發(fā)明的組合物以治療受試者的步驟。在一個方面本發(fā)明提供治療患有哮喘的受試者的方法。根據(jù)本發(fā)明這方面的方法包括施用至患有哮喘的受試者以有效量的本發(fā)明的組合物和抗哮喘治療以治療受試者的步驟。本文所用的〃哮喘〃是指特征在于炎癥、氣道狹窄和氣道對吸入劑(inhaledagent)的增加反應(yīng)性的呼吸系統(tǒng)的障礙。哮喘為頻繁地，盡管非排他性地與特應(yīng)性或過敏性狀況相關(guān)。哮喘的癥狀包括由氣流阻塞引起的哮鳴、氣絕、胸悶和咳嗽的復(fù)發(fā)性的發(fā)作(recurrentepisodes)。與哮喘相關(guān)的氣道炎癥可以通過觀察許多生理學(xué)改變，例如氣道上皮細胞的脫落、基膜下的膠原沉積、水腫、肥大細胞激活、炎癥細胞滲透，包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和淋巴細胞。作為氣道炎癥的結(jié)果，哮喘患者通常經(jīng)受氣道高應(yīng)答性、氣流受限、呼吸癥狀和疾病慢性。氣流受限包括急性支氣管收縮、氣道水腫、粘液栓形成、和氣道重塑、通常導(dǎo)致支氣管阻塞的特征。在哮喘的某些情況下，可以出現(xiàn)亞基底膜纖維化(sub-basementmembranefibrosis)，導(dǎo)致肺功能中的持續(xù)異常。過去幾年的研究已經(jīng)揭露哮喘可能由炎癥細胞、介體(mediator)和在氣道中駐留的其它細胞和組織產(chǎn)生。肥大細胞、嗜酸性粒細胞、上皮細胞、巨噬細胞和激活的T細胞都在與哮喘相關(guān)的炎癥過程中起重要作用。DjukanovicRetal.(1990)AmRevRespirDisl42:434-457。認為這些細胞可以通過分泌預(yù)形成和新合成的介體影響氣道功能，所述介體可以直接或間接地作用在局部組織上。還已經(jīng)意識到T淋巴細胞的亞群(Th2)在調(diào)節(jié)氣道中的過敏炎癥上通過釋放選擇性細胞因子和建立疾病慢性(diseasechronicity)起重要作用。RobinsonDSetal.(1992)NEnglJMed326:298_304。哮喘為在發(fā)育的不同階段產(chǎn)生的復(fù)雜疾病，并且可以基于癥狀的程度分類為急性、亞急性或慢性。急性炎癥應(yīng)答與細胞的早期補充入氣道有關(guān)。亞急性炎癥應(yīng)答包括細胞的補充以及引起更持久模式炎癥的駐留細胞(residentcell)的激活。慢性炎癥應(yīng)答的特征在于細胞損傷的持續(xù)水平和正在進行的修復(fù)過程，其可以導(dǎo)致在氣道中的永久異常?！盎加邢氖茉囌?為患有特征在于炎癥和氣道狹窄和氣道對吸入劑(inhaledagent)的增加反應(yīng)性的呼吸系統(tǒng)的障礙的受試者。與哮喘的起始相關(guān)的因素包括，但不限于，過敏原、低溫、鍛煉、病毒感染和SO2。如上所述，哮喘可以與Th2_類型的免疫應(yīng)答有關(guān)，其至少部分特征在于Th2細胞因子IL-4和IL-5，以及抗體亞型轉(zhuǎn)變?yōu)镮gE。Thl和Th2免疫應(yīng)答相互對立的調(diào)節(jié)，因此針對Thl-型免疫應(yīng)答的免疫應(yīng)答的偏移可以預(yù)防或加劇Th2-型免疫應(yīng)答，包括過敏。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸因此單獨地用于治療患有哮喘的受試者，因為所述類似物可以偏移(skewing)針對Thl-型免疫應(yīng)答。作為選擇或另外，本發(fā)明的改性寡核糖核苷酸類似物可以與過敏原組合使用以治療患有哮喘的受試者。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還可以與哮喘治療組合施用。用于治療或預(yù)防哮喘的傳統(tǒng)方法包括使用抗過敏治療(如上所述)和許多其它試劑，包括吸入劑(inhaledagent)0用于治療哮喘的藥物通常分成兩類，快速緩解藥物和長期控制藥物。哮喘患者每日(onadailybasis)服用長期控制藥物以實現(xiàn)和保持持續(xù)哮喘的控制。長期控制藥物包括抗炎癥試劑例如糖皮質(zhì)激素、色甘酸鈉(chromolynsodium)和萘多羅米；長作用支氣管擴張劑，例如長作用β2_激動劑和甲基黃嘌呤；和白三烯改性劑?？焖倬徑馑幬锇ǘ套饔忙?_激動劑、抗-膽堿能藥物和合成的糖皮質(zhì)激素。存在與這些藥物的每一個相關(guān)的許多副作用，沒有藥物單獨或組合能夠預(yù)防或完全治療哮喘?？瓜幬锇ǎ幌抻?，PDE-4抑制劑、支氣管擴張劑/β-2激動劑、K+離子開放劑、VLA-4拮抗劑、神經(jīng)因子拮抗劑、血栓素Α2(ΤΧΑ2)合成抑制劑、黃嘌呤、花生四烯酸拮抗劑、5脂肪氧合酶抑制劑、ΤΧΑ2受體拮抗劑、ΤΧΑ2拮抗劑、5-lipox激活蛋白的抑制劑和蛋白酶抑制劑。支氣管擴張劑/β2激動劑為引起支氣管擴張或平滑肌舒張的一類化合物。支氣管擴張劑/β2激動劑包括，但不限于，沙美特羅，沙丁胺醇(salbutamol)，舒喘靈(albuterol)，特布他林，D2522/福莫特羅，非諾特羅，比托特羅，吡布特羅甲基黃嘌呤(pirbuerolmethylxanthines)和間羥異丙腎上腺素(orciprenaline)。長作用β2激動劑和支氣管擴張劑為用于長期預(yù)防除了抗炎癥治療之外的癥狀的化合物。長作用β2激動劑包括，但不限于沙美特羅和舒喘靈。這些化合物通常與糖皮質(zhì)激素組合，并且通常不使用任何炎癥治療的使用。在過度劑量下它們已經(jīng)與副作用例如心動過速、骨骼肌震顫、血鉀過少和QTc間隔的延長相關(guān)。甲基黃嘌呤，包括例如茶堿，已經(jīng)用于長期控制和預(yù)防癥狀。這些化合物引起由于磷酸二酯酶抑制和可能的腺嘌呤核苷拮抗引起的支氣管擴張。劑量相關(guān)急性毒性為使用這些類型化合物的特定問題。結(jié)果，必須監(jiān)視例行的血清濃度以解決在代謝清除中由于個體差異導(dǎo)致的毒性和窄的治療范圍。副作用包括心動過速、心律失常(tachyarrhythmias)、惡心和嘔吐、中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激、頭痛、癲癇發(fā)作(seizures)、吐血、高血糖和血鉀過少。短作用β2激動劑包括，但不限于舒喘靈(albuterol)，比托特羅、吡布特羅和特布他林。與施用短作用β2激動劑相關(guān)的一些副作用包括心動過速、骨骼肌震顫、血鉀過少、乳酸增加、頭痛和高血糖。色甘酸鈉和萘多羅米用作長期控制藥物以用于治療由于鍛煉引起的原發(fā)性哮喘(primarilyasthma)癥狀和由于過敏原引起的過敏性癥狀。認為這些化合物對于過敏原通過干擾氯通道功能阻斷早期和晚期反應(yīng)。它們還穩(wěn)定肥大細胞膜和抑制介體的激活和介體從inosineophils和上皮細胞釋放。通常需要4至6周時間階段的施用以實現(xiàn)最大益處。抗膽堿能藥物通常用于緩解急性支氣管痙攣。認為這些化合物通過競爭性抑制毒蕈堿膽堿能受體(muscariniccholinergicreceptors)起作用?？鼓憠A能藥物包括，但不限于異丙托溴銨。這些化合物僅逆轉(zhuǎn)膽堿能介導(dǎo)的支氣管痙攣，而不改變與抗原的任何反應(yīng)。副作用包括口腔干燥和呼吸道分泌、在某些個體中增加的喘息、和如果噴射在眼中的視力模糊。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還可用于治療氣道重塑。氣道重塑由在氣道中的平滑肌細胞增殖和/或膜下加厚導(dǎo)致，并且最后引起導(dǎo)致限制氣流的氣道狹窄。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以進一步預(yù)防重塑和可能地甚至降低由重塑過程導(dǎo)致的組織累積(tissuebuild-up)ο本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還可用于治療癌癥?；加邪┌Y的受試者為具有可檢測癌細胞的受試者。該癌癥可以為惡性或非惡性癌癥。癌癥或腫瘤包括但不限于膽道癌；腦癌；乳腺癌；子宮頸癌；絨毛膜癌；結(jié)腸癌；子宮內(nèi)膜癌；食管癌；胃癌；上皮內(nèi)瘤變、淋巴瘤；肝癌；肺癌(例如小細胞和非小細胞)；黑色素瘤；成神經(jīng)細胞瘤；口腔癌、卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；直腸癌；肉瘤；皮膚癌；睪丸癌；甲狀腺癌和腎癌，以及其它癌癥和肉瘤。在一種實施方式中，所述癌癥為多毛細胞白血病、慢性髓細胞性白血病、皮膚T-細胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、濾泡性淋巴瘤、惡性黑色素瘤、鱗狀細胞癌、腎細胞癌、前列腺癌、膀胱細胞癌或結(jié)腸癌。免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以單獨或與抗癌治療一起施用?？拱┲委煱ǖ幌抻诜暖煛⒒?、免疫治療、癌癥疫苗、激素治療、生物應(yīng)答改性劑和外科手術(shù)方法。癌癥藥劑是指將其施用至受試者以旨在治療癌癥的試劑。如本發(fā)明所用，“治療癌癥"包括預(yù)防癌癥的發(fā)展、降低癌癥的癥狀、和/或抑制已建立癌癥的生長。在另一方面，將癌癥藥劑施用至有發(fā)展癌癥風(fēng)險的受試者以旨在降低發(fā)展癌癥的風(fēng)險。用于治療癌癥的各種類型藥劑此處描述。為了本說明書的目的，癌癥藥劑分類為化療劑、免疫治療劑、癌癥疫苗、激素治療和生物應(yīng)答改性劑。此外，本發(fā)明的方法旨在包括伴隨免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸一起使用的超過一種癌癥藥劑的使用。作為實例，如果合適，該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以與化療劑和免疫治療劑二者一起施用。備選地，癌癥藥劑可以包括免疫治療劑和癌癥疫苗，或化療劑和癌癥疫苗，或化療劑、免疫治療劑和癌癥疫苗，所有都施用至一個受試者以旨在治療患有癌癥或有發(fā)展癌癥風(fēng)險的受試者。所述化療劑可以選自甲氨蝶呤、長春新堿、亞德里亞霉素、順鉬、不含糖氯乙基亞硝基脲、5-氟代尿嘧啶、絲裂霉素C、博萊霉素、阿霉素、氮烯唑胺、紫杉醇、fragyline,MeglamineGLA、戊柔比星、卡莫司汀和聚苯丙生(poliferposan)、MMI270、BAY12-9566、RAS法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(famesyltransferaseinhibitor)、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、MMP,MTA/LY231514、LY264618/洛美曲索(Lometexol)、Glamolec,CI-994、TNP-470、Hycamtin/拓撲替康(Topotecan)、PKC412、Valspodar/PSC833>Novantrone/米托1；酉昆(Mitroxantrone)、Metaret/蘇才立明、巴馬司ftk(Batimastat)、E7070、BCH—4556、CS—682、9-AC、AG3340、AG3433、Incel/VX_710、VX-853、ZDOlOUISI641、ODN698、TA2516/Marmistat>BB2516/Marmistat>CDP845、D2163、PD183805、DX8951f>LemonalDP2202、FK317、Picibanil/0K-432、AD32/戊柔比星、美他特龍(Metastron)/鍶衍生物、Temodal/替莫唑胺、Evacet/脂質(zhì)體阿霉素、Yewtaxan/紫杉醇、Taxol/紫杉醇、Xeload/卡培他濱、Furtulon/脫氧氟尿苷、Cyclopax/口服紫杉醇、OralTaxoicUSPU-077/順鉬、HMR1275/夫拉平度、CP-358(774)/EGFR、CP-609(754)/RAS致癌基因抑制劑、BMS-182751/口服鉬、UFT(Tegafur/Uracil)、Ergamisol/左咪唑(Levamisole)、Eniluraci1/776C85/5FU增強劑、Campto/左咪唑(Levamisole)>Camptosar/依立替康(Irinotecan)>Tumodex/雷替曲塞(Ralitrexed)、Leustatin/克拉屈濱(Cladribine)、Paxex/紫杉醇、Doxil/脂質(zhì)體阿霉素、Caelyx/脂質(zhì)體阿霉素、Fludara/氟達拉濱、Pharmarubicin/表柔比星、DepoCyt,ZD1839、LU79553/雙-萘酰亞胺(Naphtalimide)、LU103793/多拉司他汀(Dolastain)、Caetyx/月旨質(zhì)體阿霉素、Gemzar/吉西他濱(Gemcitabine)、ZD0473/Anormed、YM116、碘籽(Iodineseeds)、CDK4和CDK2抑制劑、PARP抑制劑、D4809/Dexifosamide,Ifes/Mesnex/拉科酰胺(Ifosamide)、Vumon/替尼泊苷、Paraplatin/卡波鉬、Plantinol/順鉬、V印eside/依托泊苷、ZD9331,Taxotere/多西他奇、鳥嘌呤阿拉伯糖苷的前藥、Taxane類似物、亞硝基脲、烷基化劑例如美法侖和環(huán)磷酰胺、氨魯米特、天冬酰胺酶、白消安、卡波鉬、苯丁酸氮芥、阿糖胞嘧啶核苷HC1、更生霉素、正定霉素HCI、雌氮芥磷酸鈉、依托泊苷(VP16-213)、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、氟他胺、羥基脲(羥基尿素)、異環(huán)磷酰胺、干擾素α_2a、α_2b、醋酸亮丙瑞林(LHRH-釋放因子類似物)、Lomustine(CCNU)、MechlorethamineHCI(氮芥)、巰基嘌呤、巰乙磺酸鈉(Mesna)、米托坦(o.p'-DDD)、米托蒽醌HCI、奧曲肽(Octreotide)、光神霉素(Plicamycin)、甲基節(jié)胼(Procarbazine)HCl、鏈佐星(Str印tozocin)，枸櫞酸它莫西芬、硫代鳥嘌呤、噻替派、硫酸長春堿、安吖啶(m-AMSA)、阿扎胞嘧啶核苷、促紅細胞生成素(Erthropoietin)、六甲三聚氰胺(HMM)、白介素2、丙米腙(甲基-GAG；甲基乙二醛雙-丙脒腙；MGBG)、噴司他丁(2'脫氧柯福霉素)、甲基環(huán)己亞硝脲(Semustine)(甲基-CCNU)、替尼泊苷(VM-26)和硫酸長春地辛，但其不限于此。所述免疫治療劑可以選自Ributaxin、赫賽汀(Here印tin)、Quadramet,Panorex、IDEC-Y2B8、BEC2、C225、Oncolym、SMARTM195、ATRAGEN、Ovarex、Bexxar>LDP-03、iort6、MDX-210、MDX_11、MDX_22、0V103、3622W94、anti-VEGF、Zenapax、MDX_220、MDX-447、MELIMMUNE-2、MELIMMUNE-1、CEACIDE、Pretarget,NovoMAb_G2、TNT、Gliomab-H、GNI-250>EMD-72000>LymphoCide>CMA676>Monopharm-C>4B5>ioregf.r3>iorc5、BABS、anti-FLK-2、MDX-260、ANAAb、SMARTID1OAb、SMARTABL364Ab和ImmuRAIT-CEA，但其不限于此。癌癥疫苗可以選自EGF、抗-獨特型(idiotypic)癌癥疫苗、Gp75抗原、GMK黑色素瘤疫苗、MGV神經(jīng)節(jié)苷脂綴合物疫苗、Her2/neu、Ovarex、M-Vax,O-Vax,L-Vax,STn-KHLtheratope,BLP25(MUC-1)、脂質(zhì)體獨特型疫苗、黑素瘤疫苗(Melacine)、肽抗原疫苗、毒素/抗原疫苗、MVA-類疫苗、PACIS、BCG疫苗、TA-HPV、TA-CIN、DISC-病毒和ImmuCyst/TheraCys，但其不限于此。如本文所用，術(shù)語"癌癥抗原"和"腫瘤抗原"相互替換地使用以表示被癌細胞差異性表達并由此使用以靶向癌細胞的抗原。癌癥抗原為潛在地刺激明顯地腫瘤特異性免疫應(yīng)答的抗原。這些抗原的一些被編碼，盡管不必需通過正常細胞表達。這些抗原可以表征為在正常細胞中正常地沉默(即，不表達)的那些、僅在分化的特定階段表達的那些和為暫時表達的抗原例如胚胎和胎兒抗原。其它癌抗原被由于內(nèi)部缺失或染色體易位導(dǎo)致的突變細胞基因(例如致癌基因(例如激活的ras致癌基因)、抑制子基因(例如突變體p53)、融合蛋白)編碼。其它癌抗原還可被病毒基因例如在RNA和DNA腫瘤病毒上攜帶的那些編碼。在某些方面本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還可用于治療或預(yù)防病毒、細菌、真菌或寄生生物感染?；加懈腥镜氖茉囌邽橐呀?jīng)暴露至感染性病原體并且在體內(nèi)具有急性或慢性可檢測水平的病原體的受試者。該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以與抗原一起或不與抗原一起使用以建立抗原特異性全身性或粘膜免疫應(yīng)答，其能夠降低感染性病原體的水平或根除感染性病原體。本文所用的感染性疾病，為由在體內(nèi)外源微生物的存在導(dǎo)致的疾病。特別重要的是開發(fā)有效的疫苗策略和治療以保護身體的粘膜表面，其為病原體進入的開始位置。病毒為小的感染原，其通常包含核酸核心和蛋白質(zhì)外殼，但不是獨立地活有機體。病毒還可以采用缺乏蛋白質(zhì)的感染性核酸的形式。病毒不能在不存在活細胞下生存，在所述活細胞內(nèi)其可以復(fù)制。病毒通過胞吞作用或直接注射DNA(噬菌體)來進入特定的活細胞，并且增殖，引起疾病。增殖的病毒然后可以被釋放并且感染另外的細胞。一些病毒為包含DNA的病毒，其它為包含RNA的病毒。DNA病毒包括痘病毒(Pox)、皰疹(Herpes)、腺病毒(Adeno)、乳多空病毒(Papova)、細小病毒(Parvo)和肝炎DNA病毒(Hepadna)RNA病毒包括細小核糖核酸病毒(Picorna)、杯狀病毒(Calici)、Astro、披膜病毒(Toga)、黃病毒(Flavi)、冠狀病毒(Corona)、副粘病毒(Paramyxo)、正粘病毒(Orthomyxo)、布尼亞病毒(Bunya)、沙粒病毒(Arena)、彈狀病毒(Rhabdo)、絲狀病毒(Filo)、博爾納病毒(Borna)、呼腸孤病毒(Reo)、和逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retro)在某些方面，本發(fā)明還旨在治療其中朊病毒涉及疾病進程的疾病，例如牛海綿狀腦病(即，瘋牛病，BSE)或在動物中的癢病感染，或在人類中的克—雅病(Creutzfeldt-Jakobdisease)0病毒包括，但不限于，腸道病毒(包括，但不限于，小核糖核酸病毒科(picornaviridae)的病毒例如脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)、柯薩奇病毒(Coxsackievirus)、艾柯病毒(echovirus))、輪狀病毒、腺病毒和肝炎病毒例如肝炎A，B，CD和E。在人類中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的病毒具體實例包括但不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(Retroviridae)(例如人類免疫缺陷病毒，例如HIV-I(還稱為HTLV-III,LAV或HTLV-III/LAV,或HIV-III；或其它分離株，例如HIV-LP；小核糖核酸病毒科(picornaviridae)(例如脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)、A型肝炎病毒；腸道病毒，人類柯薩奇病毒(Coxsackievirus)，鼻病毒(rhinoviruses)，艾柯病毒(echoviruses))；杯狀病毒禾斗(Calciviridae)(例如弓|起胃腸炎的菌株)；披膜病毒科(Togaviridae)(例如馬腦炎病毒(equineencephalitisviruses)，風(fēng)疹病毒)；黃病毒科(Flaviviridae)(例如登革病毒，腦炎病毒，黃熱病毒)；冠狀病毒科(Coronaviridae)(例如冠狀病毒)；彈狀病毒科(Rhabdoviridae)(例如水皰口炎病毒，狂犬病毒)；纖絲病毒科(Filoviridae)(例如伊波拉病毒)；副粘病毒科(Paramyxoviridae)(例如副流感病毒，腮腺炎病毒，麻疹病毒，呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(Orthomyxoviridae)(例如流感病毒)；布尼亞病毒科(Bunyaviridae)(例如漢坦病毒(Hantaanviruses)，布尼亞病毒(bunyaviruses),白齡病毒(phleboviruses)禾口內(nèi)羅病毒(Nairoviruses))；沙粒病毒科(Arenaviridae)(出血熱病毒)；呼腸孤病毒科(Reoviridae)(例如呼腸孤病毒，環(huán)狀病毒(orbiviurses)和輪狀病毒)；雙核糖核酸病毒科(Birnaviridae)；肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)(B型肝炎病毒)；細小病毒科(Parvoviridae)(細小病毒)；乳多空病毒科(Papovaviridae)(乳頭狀瘤病毒，多瘤病毒(polyomaviruses))；腺病毒禾斗(Adenoviridae)(mostadenoviruses)；皰疫病毒禾斗(Herpesviridae)(單純皰疹病毒(HSV)1和2，水痘-帶狀皰疹病毒，巨細胞病毒(CMV))；痘病毒科(Poxviridae)(天花病毒，牛痘病毒，痘病毒)；虹彩病毒科(Iridoviridae)(例如非洲豬瘟病毒)；和其它病毒急性喉氣管支氣管炎病毒，α-病毒(Alphavirus)，卡波氏肉瘤(Kaposi'ssarcoma)-相關(guān)病毒皰疹病毒，雞新城疫病毒，尼帕病毒(Nipahvirus)，諾瓦克病毒(Norwalkvirus)，頭狀瘤病毒，副流感病毒，禽流感，SARs病毒，西尼羅病毒(WestNilevirus)。病毒性肝炎為肝的炎癥，其可以產(chǎn)生膨脹、壓痛，并且有時對肝造成永久損傷。如果肝的炎癥持續(xù)至少6個月或更長，將其稱為慢性肝炎。存在至少5種不同的已知引起病毒性肝炎的病毒，包括A，B,CD和E型肝炎。A型肝炎通常通過被人類糞便污染的食物或飲用水傳播。B型肝炎通過體液例如血液傳播。例如，其可以從母親至出生的兒童，通過性接觸、污染的輸血或針傳播。C型肝炎是相當常見的并且和B型肝炎一樣通常通過輸血和污染的針傳播。D型肝炎最常見于為B型肝炎病毒的攜帶者的IV藥物使用者，與B型肝炎共相關(guān)。E型肝炎與A型病毒性肝炎類似，并且通常與差的衛(wèi)生條件相關(guān)。革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌都可用作脊椎動物中的抗原。此類革蘭氏陽性細菌包括，但不限于巴斯德氏菌屬(Pasteurella)物種、葡萄球菌(Staphylococci)物種，和鏈球菌屬(Str印tococcus)物種。革蘭氏陰性細菌包括，但不限于，大腸桿菌(Escherichiacoli)、假單胞菌屬(Pseudomonas)物種和沙門氏菌屬(Salmonella)物種。感染性細菌的特定實例包括但不限于，幽門螺桿菌(Helicobacterpyloris)、萊姆病電累旋體(Boreliaburgdorferi)>軍團菌屬(Legionellapneumophilia)>(Mycobacteriasps(例如結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis))>(Μ·avium)、細胞內(nèi)分枝桿菌(M.intracellulare)、堪薩斯分支桿菌(M.kansaii)、戈登分支桿菌(M.gordonae))、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)、單核細胞增生李其Jf特菌(Listeriamonocytogenes)>化膿鏈球菌(Streptococcuspyogenes)(Α組鏈球菌)，無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)(B組鏈球菌)，鏈球菌(Streptococcus)(草綠色組(viridansgroup))、獎鏈球菌(Streptococcusfaecalis)、牛鏈球菌(Streptococcusbovis)、鏈球菌(Streptococcus)(厭氧性物種)，月市炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae),病原性彎曲桿菌屬亞禾中(pathogenicCampylobactersp.)、腸球菌(Enterococcussp.)、流胃口filff(Haemophilusinfluenzae)>^Hff(Bacillusantracis)>gP^#^ff菌(corynebacteriumdiphtheriae)、棒桿菌(corynebacteriumsp.)、紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)、產(chǎn)氣英月莫梭菌(Clostridiumperfringers)、破傷風(fēng)桿菌(Clostridiumtetani)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)、月市炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)、(Pasturellamultocida)、擬桿菌(Bacteroidessp·)、核粒梭桿菌(Fusobacteriumnucleatum)、念珠狀鏈桿菌(Streptobaci1Iusmoniliformis)^^白密螺旋體(Tr印onemapallidium)、細弱密螺旋體(Ti^ponemapertenue)、鉤端螺旋體(Leptospira)(Rickettsia)禾口Mfe歹[Jft方(Actinomycesisraelii).真菌的實例包括新型隱球菌(Cryptococcusneoformans)、莢膜組織胞漿菌(Histoplasmacapsulatum)、粗球抱子菌(Coccidioidesimmitis)、皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitidis)、沙目艮衣原體(Chlamydiatrachomatis)、白念珠菌(Candidaalbicans).其它感染性有機體(即，原生生物)包括瘧原蟲(Plasmodiumspp.)例如惡性皰原蟲(Plasmodiumfalciparum)、三日皰原蟲(Plasmodiummalariae)、卵形皰原蟲(Plasmodiumovale)、禾口間曰癥原蟲(Plasmodiumvivax)禾口剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)。血液-性的(Blood-borne)和/或組織寄生生包括物瘧原蟲(Plasmodiumspp.)、微小巴貝蟲(Babesiamicroti)、分歧巴貝蟲(Babesiadivergens)、熱帶利什曼原蟲(Leishmaniatropica)、種株利什曼原蟲(Leishmaniaspp.)、巴西利什曼原蟲(Leishmaniabraziliensis)、才土氏禾[K十員原蟲(Leishmaniadonovani)、_比Hfl蟲(Trypanosomagambiense)禾口羅德西亞Ifl蟲(Trypanosomarhodesiense)(^β^))>克魯斯錐蟲(Trypanosomacruzi)(恰加斯病)和剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)。其它醫(yī)學(xué)上相關(guān)的微生物已經(jīng)廣泛地描述于文獻，例如參見C.G.AThomas,MedicalMicrobiology,BailliereTindall,GreatBritain1983，將其全部內(nèi)容在此引入以作參考。本發(fā)明的寡核苷酸可以與抗微生物劑一起施用至受試者。本文所用的抗微生物齊U，是指天然發(fā)生的或合成的化合物，其能夠殺死或抑制感染性微生物。根據(jù)本發(fā)明有用的抗微生物劑的類型將依賴于受試者感染或有要感染風(fēng)險的微生物的類型。抗微生物劑包括但不限于抗細菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑和抗寄生生物劑。短語例如"抗感染齊U"、“抗細菌劑"、“抗病毒劑"、“抗真菌劑"、“抗寄生生物劑"和"殺寄生生物劑(parasiticide)“對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言具有已為大家接受的意思，并且在標準醫(yī)學(xué)課本中定義。簡單的說，抗細菌劑殺死或抑制細菌，并且包括抗生素以及其它具有類似功能的合成或天然化合物?？股貫榈头肿恿康姆肿?，其作為次級代謝產(chǎn)物由細胞，例如微生物產(chǎn)生。通常，抗生素干擾一種或多種對微生物而言是特異的和在宿主細胞中是不存在的細菌功能或結(jié)構(gòu)?？共《緞┛梢詮奶烊粊碓捶蛛x或合成，并且用于殺死或抑制病毒?？拐婢鷦┯糜谥委煴砻嬲婢腥疽约皺C會主義和原發(fā)性全身真菌感染?？辜纳飫⑺阑蛞种萍纳?。用于人類施用的抗寄生生物劑(也稱為殺寄生生物劑)的實例包括但不限于阿苯達唑、兩性霉素B、芐硝唑、硫雙二氯酚、氯喹HC1、氯喹磷酸鹽、氯林可霉素、去氫依米丁、乙胺嗪、呋喃二氯散、依洛尼塞、呋喃唑酮(furazolidaone)、糖皮質(zhì)激素、氯氟菲醇、雙碘喹啉、伊維菌素、甲苯達唑、甲基氟氯喹、甲葡胺銻酸鹽、美拉胂醇、美曲膦脂、甲硝噠唑、氯硝柳胺、硝呋噻氧、奧沙尼喹、巴龍霉素、羥乙磺酸戊氧苯脒、哌嗪、吡喹酮、磷酸普奈馬奎、氯胍、噻吩嘧啶、乙胺嘧啶-磺酰胺、乙胺嘧啶-磺胺多辛、奎吖因HC1、硫酸奎寧、葡糖酸奎尼定、螺旋霉素、葡萄糖酸銻鈉(斯銻黑克(sodiumantimonygluconate))、蘇拉明、四環(huán)素、強力霉素、噻苯咪唑、替硝唑、三甲氧芐胺嘧啶(trimethroprim)-磺胺甲惡唑和錐蟲胂胺，其中的一些單獨使用或與其它組合使用?？辜毦鷦⑺阑蛞种萍毦纳L或功能。一大類抗細菌劑為抗生素。將對于殺死或抑制寬范圍的細菌有效的抗生素稱為廣譜抗生素。其它類型的抗生素針對革蘭氏陽性或革蘭氏陰性類別的細菌為顯著有效的。將這些種類的抗生素稱為窄譜抗生素。針對單一有機體或疾病有效并且不針對其它類型細菌的其它抗生素，稱為受限譜抗生素(limitedspectrumantibiotics)?？辜毦鷦┯袝r基于它們作用的最初模式分類。通常，抗細菌劑為細胞壁抑制劑、細胞膜抑制劑、蛋白合成抑制劑、核酸合成或功能抑制劑，以及競爭性抑制劑?？共《緞轭A(yù)防細胞被病毒感染或病毒在細胞內(nèi)復(fù)制的化合物。存在比抗細菌藥物少得多的抗病毒劑，因為病毒復(fù)制的過程在宿主細胞內(nèi)與DNA復(fù)制如此緊密相關(guān)，以致于非特異性抗病毒劑常常對宿主是有毒的。在病毒感染的過程內(nèi)存中幾個階段，其可以被抗病毒劑阻斷或抑制。這些階段包括，病毒至宿主細胞的附著(免疫球蛋白或結(jié)合肽)、病毒的脫殼(uncoating)(例如金剛胺)、病毒mRNA的合成或翻譯(例如干擾素)、病毒RNA或DNA的復(fù)制(例如核苷酸類似物)、新病毒蛋白的突變(例如蛋白酶抑制劑)，以及病毒的出芽和釋放。核苷酸類似物為與核苷酸類似，但具有不完全或異常脫氧核糖或核糖基團的合成化合物。一旦核苷酸類似物在細胞中，它們被磷酸化，產(chǎn)生形成的三磷酸酯，其與正常核苷酸就引入病毒DNA或RNA競爭。一旦將核苷酸類似物的三磷酸酯形式引入正在生長的核酸鏈，其引起不可逆的與病毒聚合酶的連接，從而鏈終止。核苷酸類似物包括，但不限于，阿昔洛韋(用于治療單純皰疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒)、更昔洛韋(用于治療巨細胞病毒)、皰疹凈(idoxuridine)、利巴韋林(用于治療呼吸道合胞病毒(respiratorysyncitialvirus))、地達諾新、雙脫氧胞嘧啶核苷、齊多呋定(疊氮胸苷)、咪喹莫特和雷西莫特(resimiquimod)。干擾素為通過病毒感染的細胞和免疫細胞分泌的細胞因子。干擾素通過與在臨近感染細胞的細胞上的特定受體結(jié)合起作用，引起在細胞上的改變，其保護細胞免受病毒的感染。α和β干擾素還誘導(dǎo)在感染細胞表面上的I類和II類MHC分子的表達，引起對于宿主免疫細胞識別而言增加的抗原呈遞。α和β干擾素可以以重組形式獲得并且已經(jīng)用于治療慢性B和C型肝炎感染。以對于抗病毒治療有效的劑量，干擾素具有嚴重的副作用例如發(fā)燒、不適和體重減少。在本發(fā)明中有用的抗病毒劑包括但不限于免疫球蛋白、金剛胺、干擾素、核苷酸類似物和蛋白酶抑制劑?？共《緞┑奶囟▽嵗ǖ幌抻谝阴徉话⑽袈屙f；阿昔洛韋鈉；阿德福韋；阿洛夫定；阿韋舒托；鹽酸金剛烷胺；阿拉諾??；阿立酮；甲磺酸阿替韋啶(AtevirdineMesylate)；阿夫立定；西多福韋；西潘茶堿；阿糖胞嘧啶核苷鹽酸鹽；地拉韋定甲磺酸；脫氧無環(huán)鳥苷；地達諾新；二噁沙利；依度尿苷；恩韋拉登；恩韋肟；泛西洛維；抑感靈(FamotineHydrochloride)；非西他濱；非阿尿苷；膦酸利脂；膦甲酸鈉；磷乙酸鈉；更昔洛韋；甘西洛維鈉；碘脫氧尿苷(line)；凱托沙；拉米夫定；洛布卡韋；鹽酸美莫??；甲吲噻腙；奈韋拉平；噴西洛維；吡羅達韋；利巴韋林；鹽酸金剛乙胺；甲磺酸噻喹努佛；鹽酸索金剛胺；索利夫定；維司托隆；司他夫定；鹽酸梯絡(luò)龍；三氟胸苷；鹽酸伐昔洛韋；阿糖腺苷；磷酸阿糖腺苷；阿糖腺苷磷酸鈉；韋羅肟；扎西他賓；齊多呋定；和凈韋肟?？拐婢鷦┯糜谥委熀皖A(yù)防感染性真菌。抗真菌劑有時通過它們的作用機制分類。一些抗真菌劑通過抑制葡萄糖合酶起細胞壁抑制劑作用。這些包括但不限于，basiungin/ECB。其它抗真菌劑通過使膜完整性去穩(wěn)定來起作用。這些包括，但不限于，咪唑類，例如克霉唑、舍他康唑(sertaconzole)、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑和伏立康唑(voriconacole)、以及FK463、兩性霉素B、BAY38-9502、MK991、普拉米星、UK292、布替那非和特比萘芬。其它抗真菌劑通過分解幾丁質(zhì)(例如幾丁質(zhì)酶)或免疫抑制(501cream)起作用。免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還可用于治療和預(yù)防自體免疫疾病。自體免疫疾病為其中受試者自身抗體與宿主組織反應(yīng)或其中免疫效應(yīng)子T細胞對內(nèi)源性自身肽為自體反應(yīng)性并且引起組織的破壞的一類疾病。這樣免疫應(yīng)答針對受試者自己的抗體(稱為自身抗原)建立。自體免疫疾病包括但不限于斑禿、獲得性血友病、強直性脊柱炎、抗磷脂綜合癥、自體免疫相關(guān)不孕、自體免疫性腦脊髓炎、自體免疫性肝炎、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性糖尿病、自體免疫性血小板減少性紫癜、白塞氏綜合癥、大皰性類天皰瘡、心肌病、慢性疲勞免疫功能紊亂綜合癥(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根神經(jīng)病(chronicinflammatorydemyelinatingpolyneuropathy)、丘—施綜合癥(Churg-Strausssyndrome)、疤痕性類天皰瘡、CREST綜合癥、冷凝集素病、皮肌炎、圓盤紅斑、特發(fā)性混合性冷球蛋白血癥、纖維肌痛、纖維肌炎、格林-巴利綜合癥、橋本氏甲狀腺炎、血管球性腎炎(例如新月體性腎小球腎炎、增生性腎小球腎炎)、格雷夫氏病、移植物抗宿主病、古德帕斯丘綜合癥、天皰瘡(例如尋常型天皰瘡)、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜、抗胰島素性、特發(fā)性阿狄森病、IgA腎病、炎性腸病(包括克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、幼年型關(guān)節(jié)炎、扁平苔蘚、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、混合性結(jié)締組織病、多肌炎、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合癥、風(fēng)濕性多肌痛、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬、雷諾現(xiàn)象、萊特爾氏綜合癥、少年和成人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(juvenileandadultrheumatoidarthritis)、史卓根綜合征(Sjorgen'ssyndrome)、抗膠原抗體硬皮病(sclerodermawithanti-collagenantibodies)、結(jié)節(jié)病、全身肌強直綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、大動脈炎(Takayasuarthritis)、移植器官排斥、顳動脈炎/巨細胞性動脈炎、葡萄膜炎、潰瘍性結(jié)腸炎、脈管炎和白癲風(fēng)。本文所用的"自體抗原"是指正常宿主組織的抗原。正常宿主組織不包括癌細胞。這樣在自體免疫疾病的上下文中針對自體抗原建立的免疫應(yīng)答，為不期望的免疫應(yīng)答，并且有助于破壞和損害正常組織，而針對癌癥抗原建立的免疫應(yīng)答為期望的免疫應(yīng)答，并且有助于破壞腫瘤或癌癥。這樣，在以治療自體免疫障礙為目的的本發(fā)明的某些方面，免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸與自體抗原，特別是為自體免疫障礙的目標的那些一起施用是不推薦的。在其它情況下，免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以與低劑量的自體抗原一齊遞送。許多動物研究已經(jīng)證明低劑量抗原的粘膜施用能夠?qū)е旅庖叩头磻?yīng)性或"耐受性"的狀態(tài)。活性機制似乎為細胞因子介導(dǎo)的免疫從Thl向顯著的Th2和Th3(即，TGF-β支配的)反應(yīng)偏移。使用低劑量抗原遞送的活性抑制還可以抑制不相關(guān)的免疫應(yīng)答(旁觀者抑制)，其在自體免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和SLE的治療上具有相當意義。旁觀者抑制包括在局部環(huán)境中Thl-抵抗(counter)-調(diào)節(jié)性、抑制性細胞因子，其中促炎癥性和Thl細胞因子以抗原特異性或抗原非特異性方式釋放。本文所用的“耐受性”用于指該現(xiàn)象。實際上，口服耐受性在治療動物中的許多自體免疫疾病中已經(jīng)有效，包括實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)、實驗性自體免疫性重癥肌無力、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)和胰島素依賴性糖尿病。在這些模型中，自體免疫疾病的預(yù)防和抑制與抗原特異性體液和細胞應(yīng)答從Thl向Th2/Th3應(yīng)答的轉(zhuǎn)變有關(guān)。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸在某些方面用于治療炎癥疾病。如本文所用，術(shù)語“炎癥疾病"是指與先天免疫系統(tǒng)的抗原非特異性反應(yīng)有關(guān)的狀況，其包括在感染、毒性暴露或細胞傷害的位置處淋巴細胞和血漿蛋白的累積和激活。炎癥的特征性細胞因子包括腫瘤壞死因子(TNF-a)、白介素l(IL-l)、IL-6、IL_12、干擾素α(IFN-α)、干擾素β(IFN-β)和趨化因子。這樣，特定類型的哮喘、過敏和自體免疫障礙可以具有炎癥疾病的特征。炎癥疾病還包括例如，心血管病、慢性肺阻塞性疾病(COPD)、支氣管擴張癥、慢性膽囊炎、結(jié)核病、橋本氏甲狀腺炎、膿毒癥、結(jié)節(jié)病、硅肺病和其它塵肺病(pneumoconioses)、和在傷口中植入的外來物體，但不限于此。如本文所用，術(shù)語"膿毒癥"是指與針對微生物入侵的宿主全身性炎癥應(yīng)答有關(guān)的良好識別的臨床綜合癥。如本文所用術(shù)語"膿毒癥"是指這樣的狀況，其信號通常為發(fā)燒或體溫過低、心動過速和呼吸急促，并且在嚴重情況下，可以發(fā)展成血壓過低、器官障礙和甚至死亡?！笆茉囌?將指人類或脊椎動物，包括但不限于狗、貓、馬、牛、豬、羊、山羊、火雞、小雞、靈長類例如猴子，以及魚(水產(chǎn)物種)，例如鮭魚。這樣，本發(fā)明還可用于治療在非人受試者中的癌癥和腫瘤、感染、以及過敏/哮喘。例如，癌癥為在伴生動物(即，貓和狗)中的主要死因之一。如本文所用，當關(guān)于障礙例如感染性疾病、癌癥、過敏或哮喘使用時術(shù)語治療是指增加受試者對疾病發(fā)展(例如被病原體感染)的抗性(或換句話說，降低受試者發(fā)展該疾病(例如被病原體感染)的可能性)的預(yù)防性治療以及在受試者已經(jīng)發(fā)展該疾病后的治療以與疾病戰(zhàn)斗(例如降低或消除該感染)或防止該疾病變得惡化。在當該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸與抗原一起施用的情況下，受試者可以暴露至該抗原。如本文所用，術(shù)語“暴露至”是指使受試者與抗原接觸的主動步驟或在體內(nèi)使受試者被動地暴露至抗原。將受試者主動暴露至抗原的方法在本領(lǐng)域是眾所周知的。通常，將抗原通過任何手段例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、口服、透皮、粘膜、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或皮下的施用直接施用至受試者。該抗原可以全身地或局部地施用。施用該抗原和所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的方法以下更詳細地描述。如果在體內(nèi)抗原對于暴露至免疫細胞變得有效，將受試者被動地暴露至抗原。受試者可以通過例如以下被動地暴露至抗原使外源病原體進入身體或通過發(fā)展在其表面表達外源抗原的腫瘤細胞。在一些實施方式中的抗原或過敏原綴合至寡核苷酸。其中受試者為被動暴露至抗原的方法可以特定地依賴于施用免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的時機。例如，在有發(fā)展癌癥或感染性疾病或過敏性或哮喘性應(yīng)答的風(fēng)險的受試者中，當該風(fēng)險為最大時，即在過敏季節(jié)或在暴露至致癌物質(zhì)后，受試者可以基于常規(guī)施用免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸。此外，所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以在旅行者旅行至其中他們有風(fēng)險暴露至感染原的外地之前施用給旅行者。同樣地，當和如果受試者暴露至抗原時，所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以施用至有風(fēng)險暴露至生化戰(zhàn)的士兵或平民以誘導(dǎo)針對抗原的全身或粘膜性免疫應(yīng)答。本文所用抗原為能夠激起免疫應(yīng)答的分子。抗原包括但不限于細胞、細胞提取物、蛋白質(zhì)、多肽、肽、多糖、多糖綴合物、多糖的肽和非肽模擬物和其它分子、小分子、脂質(zhì)、糖月旨、碳水化合物、病毒和病毒提取物以及多細胞有機體例如寄生生物和過敏原。術(shù)語抗原廣泛地包括任何類型的被宿主免疫系統(tǒng)識別為外源的分子?？乖ǖ幌抻诎┌Y抗原、微生物抗原和過敏原。本文所用的癌癥抗原為與腫瘤或癌細胞表面相關(guān)的化合物，例如肽或蛋白質(zhì)，并且當在MHC分子的背景下在抗原呈遞細胞的表面上表達時其能夠激起免疫應(yīng)答。癌癥抗原可以從癌細胞通過以下制備通過制備癌細胞的粗提取物(例如描述于Cohen，etal.，1994，CancerResearch,54:1055)、通過部分純化抗原、通過重組技術(shù)或通過已知抗原的重新合成。癌癥抗原包括但不限于為重組表達、免疫原性部分或全腫瘤或癌癥的抗原。此類抗原可以重組地或通過任何其它本領(lǐng)域已知的手段分離或制備。本文所用的微生物抗原為微生物的抗原并且包括但不限于病毒、細菌、寄生生物和真菌。此類抗原包括完整微生物以及天然分離物和其片段或衍生物，以及與天然微生物抗原相同或類似并且誘導(dǎo)對該微生物特異的免疫應(yīng)答的合成化合物。如果其誘導(dǎo)針對天然微生物抗原的免疫應(yīng)答(體液和/或細胞)，化合物與天然微生物抗原相同或類似。此類抗原在本領(lǐng)域例行地使用并且對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是眾所周知的。過敏原是指在易感受試者中能夠誘導(dǎo)過敏性或哮喘性應(yīng)答的物質(zhì)(抗原)。過敏原的列表是巨大的，并且可以包括花粉、昆蟲毒液、動物皮屑(danderdust)、真菌孢子和藥物(例如青霉素)。天然、動物和植物過敏原的實例包括但不限于對以下屬特異的蛋白質(zhì)犬屬(Canine)(家犬(Canisfamiliaris))；塵螨屬(Dermatophagoides)(例如粉塵螨(Dermatophagoidesfarinae))；貓屬(Felis)(家貓(Felisdomesticus))；豚草屬(Ambrosia)(豚草(Ambrosiaartemiisfolia；黑麥草屬(Lolium)(例如黑麥草(Loliumperenne)或多花黑麥草(Loliummultiflorum))；柳杉屬(Cryptomeria)(臼^^(Cryptomeriajaponica))；IjIH-M(Alternaria)(IjlH·包胃(Alternariaalternata))；棺木屬(Alder),棺木屬Alnus(Alnusgultinoasa)；樺木屬(Betula)(瘤樺(Betulaverrucosa))；櫟屬(Quercus)(白櫟(Quercusalba))；木犀欖屬(Olea)(油橄攬(Oleaeuropa))；蒿屬(Artemisia)(艾(Artemisiavulgaris))；車前草屬(Plantago)(例如茅尖狀車前草(PlantagoIanceolata))；墻草屬(Parietaria)(例如藥用墻草(Parietariaofficinalis)或歐蓍草(Parietariajudaica))；小蠊屬(Blattella)(例如德國小蠊(Blattellagermanica))；蜜蜂屬(Apis)(例如(Apismultiflorum))；柏木屬(Cupressus)(例如地中海柏木(Cupressussempervirens),亞禾丨J桑那柏木(Cupressusarizonica)禾口大果柏木(Cupressusmacrocarpa)；檜屬(Juniperus)(例如(Juniperussabinoides),鉛筆柏(Juniperusvirginiana),歐洲刺柏(Juniperuscommunis)和德克薩斯柏木(Juniperusashei))；金鐘柏屬(Thuya)(例如加拿大側(cè)柏(Thuyaorientalis))；扁柏屬(Chamaecyparis)(例如日本扁柏(Chamaecyparisobtusa)；大爐屬(Periplaneta)(例如美洲大纏(Periplanetaamericana))；冰草屬(Agropyron)(例如伏生冰草(Agropyronrepens))；黑麥屬(Secale)(例如黑麥(Secalecereale))；小麥屬(Triticum)(例如小麥(Triticumaestivum))；鴨茅屬(Dactylis)(例如鴨茅(Dactylisglomerata))；羊茅屬(Festuca)(例如高羊茅(Festucaelatior))；早熟禾屬(Poa)(例如早熟禾(Poapratensis)或扁桿早熟禾(Poacompressa))；燕麥屬(Avena)(例如燕麥(Avenasativa))；絨毛草屬(Holcus)(例如絨毛草(HolcusIanatus))；黃花茅屬(Anthoxanthum)(例如如黃花茅(Anthoxanthumodoratum))；燕麥草屬(Arrhenatherum)(例如花葉燕麥草(Arrhenatherumelatius))；剪股穎屬(Agrostis)(例如白剪股穎(Agrostisalba))；牧梯草屬(Phleum)(例如梯牧草(Phleumpratense))；薦草屬(Phalaris)(例如薦草(Phalarisarundinacea))；雀稗屬(Paspalum)(例如巴哈雀稗(Paspalumnotatum))；蜀黍?qū)?Sorghum)(例如假高粱(Sorghumhalepensis))；和雀麥屬(Bromus)(例如無芒雀麥(Bromusinermis))。本文所用的術(shù)語基本上純或?qū)嵸|(zhì)上純是指基本上不含其它蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、碳水化合物或其它天然相關(guān)的材料的多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用標準技術(shù)純化病毒或細菌多肽以用于蛋白質(zhì)純化?；旧霞兊亩嚯耐ǔＴ诜沁€原性聚丙烯酰胺凝膠(non-reducingpolyacrylamidegel)上產(chǎn)生單一的主帶。在部分糖基化多肽或具有幾個起始密碼子的多肽的情況下，可以在非還原性聚丙烯酰胺凝膠上存在幾條帶，但是對于該多肽這些將形成獨特的模式。病毒或細菌多肽的純化還可以通過氨基-末端氨基酸序列分析來確定。未被核酸載體編碼的其它類型的抗原例如多糖、小分子、模擬物等也包括在本發(fā)明內(nèi)。所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以與其它治療劑例如佐劑組合來增強免疫應(yīng)答。所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸和其它治療劑可以同時或順序地施用。當其它治療劑同時地施用時，它們可以在相同或分開的制劑中施用，但是同時施用。當其它治療劑和免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的施用時間上分開時，其它治療劑相互地和與免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸一起順序使用。在這些化合物施用之間及時地間隔可以大約以分鐘計或其可以更長。其它治療劑包括但不限于佐劑、細胞因子、抗體、抗原等。本發(fā)明的組合物還可以與非核酸佐劑一起施用。非核酸佐劑為本文所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸之外的任何分子或化合物，其可以刺激體液和/或細胞免疫應(yīng)答。非核酸佐劑包括例如，形成沉淀效應(yīng)的佐劑、免疫刺激佐劑和形成沉淀效應(yīng)和刺激免疫系統(tǒng)的佐劑。在一些實施方式中所述調(diào)節(jié)寡核苷酸還用作粘膜佐劑。之前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)全身或粘液免疫性通過CpG寡核苷酸的粘膜遞送誘導(dǎo)。這樣，所述寡核苷酸可以與其它粘膜佐劑組合施用。免疫應(yīng)答還通過細胞因子(Bueler&Mulligan，1996；Chowetal.，1997；Geissleretal.，1997；Iwasakietal.，1997；Kimetal.，1997)或B—7共刺激分子(Iwasakietal.，1997；Tsujietal.,1997)與所述寡核苷酸的共施用或共線性表達來誘導(dǎo)或增強。術(shù)語細胞因子用作各種組的可溶蛋白和肽的總名稱，其以納摩爾至皮摩爾濃度起體液調(diào)節(jié)劑作用并且在正?；虿±項l件下其調(diào)節(jié)個體細胞和組織的功能活性。這些蛋白質(zhì)還直接介導(dǎo)細胞之間的相互作用，并且調(diào)節(jié)在細胞外環(huán)境中發(fā)生的過程。細胞因子的實例包括但不限于IL-1,IL-2,IL-4,IL-5，IL-6，IL-7，IL-10，IL-12，IL-15，IL-18、粒細胞-巨噬細胞克隆刺激因子(GM-CSF)、粒細胞克隆刺激因子(G-CSF)、干擾素-Y(Y-IFN)，IFN-α，腫瘤壞死因子(TNF)，TGF-β，F(xiàn)LT-3配體，和CD40配體。所述寡核苷酸還用于將免疫應(yīng)答從Th2免疫應(yīng)答重定向(redirecting)至Thl免疫應(yīng)答。這導(dǎo)致相對平衡的Thl/Th2環(huán)境的產(chǎn)生。免疫應(yīng)答從Th2免疫應(yīng)答重定向至Thl免疫應(yīng)答可以測定應(yīng)答于所述寡核苷酸(例如通過誘導(dǎo)單核細胞和其它細胞以產(chǎn)生Thl細胞因子，包括IL-12，IFN-Y和GM-CSF)產(chǎn)生的細胞因子水平來評估。免疫應(yīng)答從Th2至Thl應(yīng)答的重定向或再平衡對于治療或預(yù)防哮喘特別有用。例如，對于治療哮喘的有效量可以為用于將與哮喘有關(guān)的Th2類型的免疫應(yīng)答重定向為Thl型應(yīng)答或平衡的Thl/Th2環(huán)境的量。Th2細胞因子，特別是IL-4和IL-5在哮喘受試者的氣道中升高。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸在Thl細胞因子上引起增加，其有助于再平衡免疫系統(tǒng)，預(yù)防或降低與主要Th2免疫應(yīng)答相關(guān)的副作用。本發(fā)明的寡核苷酸還用于治療氣道重塑。氣道重塑由在氣道中的平滑肌細胞增殖和/或膜下加厚導(dǎo)致，并且最后引起導(dǎo)致限制氣流的氣道狹窄。本發(fā)明的寡核苷酸可以進一步預(yù)防重塑和可能地甚至降低由重塑過程導(dǎo)致的組織累積(tissuebuild-up)。所述寡核苷酸還用于提高樹突細胞的存活、分化、激活和成熟。所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸具有促進樹突細胞的細胞存活、分化、激活和成熟的獨特能力。免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸還增加天然殺傷細胞裂解能力和抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。ADCC可以使用免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸與對細胞靶特異的抗體，例如癌細胞組合來進行。當免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸與抗體一起施用至受試者時，誘導(dǎo)受試者免疫系統(tǒng)殺死腫瘤細胞。在ADCC過程中有用的抗體包括與體內(nèi)的細胞相互作用的抗體。對細胞靶特異的許多此類抗體已經(jīng)在本領(lǐng)域描述，并且許多可以商業(yè)上獲得。本發(fā)明還包括使用免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，誘導(dǎo)抗原非特異性先天免疫激活和針對感染挑戰(zhàn)的廣譜抗性。本文所用的術(shù)語抗原非特異性先天免疫激活是指除了B細胞的免疫細胞的激活，并且例如包括NK細胞、T細胞或可以以抗原非依賴性方式應(yīng)答的其它免疫細胞或這些細胞的某些組合的激活。誘導(dǎo)針對感染挑戰(zhàn)的廣譜抗性，這是因為免疫細胞為活性形式并且被觸發(fā)以對任何入侵化合物或微生物應(yīng)答。這些細胞不必為針對特定抗原特異性的觸發(fā)。這在生物戰(zhàn)中和上述的其它情況例如旅行者特別有用。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)ODN可以與陽離子脂質(zhì)組合。在一種實施方式中，所述陽離子脂質(zhì)為D0TAP(N-[l-(2，3-二油氧基)丙基_1]_N，N,N-三甲基銨甲基-硫酸鹽(酯))。認為DOTAP將聚合物運載入細胞并且特異地運到內(nèi)體腔(endosomalcompartment)，其中其可以以PH依賴性方式釋放該聚合物。一旦在內(nèi)體腔，該聚合物可以與特定的細胞內(nèi)TLR反應(yīng)，觸發(fā)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的TLR-介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。運至內(nèi)體腔的具有類似性質(zhì)的其它試劑可以代替DOTAP或除DOTAP之外使用。其它脂質(zhì)制劑包括，例如EFFECTENE(具有特定DNA濃縮增強子的非脂質(zhì)體脂質(zhì))和SUPERFECT(新的作用樹枝大分子技術(shù))，SMARTICLES,(當它們穿過細胞膜時變成帶正電的電荷可逆顆粒)和使用脂雙層的StableNucleicAcidLipidParticles(SNALPs)。脂質(zhì)體商業(yè)上獲自GibcoBRL，例如，商標為LIPOFECTIN和LIP0FECTACE，其由陽離子脂質(zhì)例如N-[l-(2，3二油氧基)-丙基]-N，N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)和二甲基雙十八烷基溴化銨(DDAB)形成。形成脂質(zhì)體的方法在本領(lǐng)域是眾所周知的，并且已經(jīng)描述于許多出版物。脂質(zhì)體還被GregoriadisG(1985)TrendsBiotechnol3:235_241綜述。在其它實施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物與微米顆粒、環(huán)糊精、納米顆粒、類脂囊泡(niosomes)、樹枝狀大分子(dendrimers)、多聚陽離子肽、病毒體和病毒樣顆粒、或ISC0MS組合。免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸可以直接施用至受試者或可以與寡核苷酸遞送復(fù)合物一起施用。寡核苷酸遞送復(fù)合物是指與靶向手段(targetingmeans)(例如導(dǎo)致與靶細胞的更高親和性結(jié)合的分子)有關(guān)(例如離子地或共價地結(jié)合至；或封裝在其內(nèi))的寡核苷酸。寡核苷酸遞送復(fù)合物的實例包括與留醇(例如膽固醇)、脂質(zhì)(例如陽離子脂質(zhì)，病毒體或脂質(zhì)體)，或靶細胞特異性結(jié)合劑(例如被靶細胞特異性受體識別的配體)。優(yōu)選的復(fù)合物可以為在體內(nèi)充分穩(wěn)定的以防止在被靶細胞內(nèi)在化之前顯著地解偶聯(lián)(uncoupling)。然而，該復(fù)合物可以在合適條件下在細胞內(nèi)變得可裂解以使該寡核苷酸以功能形式釋放。用于遞送抗原和寡核苷酸至表面的遞送載體或遞送裝置已經(jīng)描述。該免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸和/或抗原和/或其它治療藥物(therapeutics)可以單獨施用(例如在生理鹽水或緩沖液中)或使用本領(lǐng)域已知的任何遞送載體。例如已經(jīng)描述以下遞送載體蝸形體(cochleates)；Emulsomes;特定的陽離子脂質(zhì)例如上述那些例如ISC0Ms;活細菌載體(例如沙門氏菌屬(Salmonella)，大腸桿菌(Escherichiacoli)，卡介菌(BacillusCalmette-Guerin)，志賀氏菌屬(Shigella)，乳桿菌屬(Lactobacillus))；活病毒載體(例如牛痘(Vaccinia)，腺病毒，單純皰疹(HerpesSimplex))；微球；核酸疫苗；聚合物(例如羧甲基纖維素，幾丁質(zhì))；聚合物環(huán)；蛋白體；氟化鈉；轉(zhuǎn)基因植物。在本發(fā)明的某些實施方式中所述遞送載體為脂質(zhì)體、類脂囊泡(niosomes)、陽離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物(lipoplexe)、陽離子多聚物(polyplexe)、磷脂復(fù)合物(lipopolyplexe)、油包水(ff/Ο)乳液、水包油(0/W)乳液、水包油包水(W/0/W)復(fù)合乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀大分子(dendrimers)、病毒體、病毒樣顆粒、聚合納米顆粒、作為納米微球或納米膠囊、聚合微米顆粒，例如微球或微膠囊。其它遞送載體在本領(lǐng)域是已知的。術(shù)語免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的"有效量"是指實現(xiàn)所期望生物效應(yīng)必須或充分的量。例如，用于誘導(dǎo)粘膜免疫性的與抗原一起施用的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的有效量為，當暴露至抗原時，應(yīng)答于抗原引起IgA的發(fā)生所需的量，而誘導(dǎo)全身免疫性所需的量為當暴露至抗原時，應(yīng)答于抗原引起IgG的發(fā)生所需的量。結(jié)合本文提供的教導(dǎo)，通過在各種活性化合物和權(quán)衡因子例如潛能、相對生物利用度、患者體重、不利的副作用的嚴重性和優(yōu)選的施用模式之間選擇，可以安排有效預(yù)防性或治療性的治療方案，其不引起實質(zhì)上的毒性，并且對于治療特定受試者完全有效。對于任何特定施用的有效量可以依賴于此類因子例如以下而變化要治療的疾病或狀況、要施用的特定免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸、受試者的尺寸、或疾病或狀況的嚴重性。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以經(jīng)驗地確定特定的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸和/或抗原和/或其它治療試劑的有效量而不必需過度的試驗。用于粘膜或局部遞送的本文所述的受試者劑量典型地范圍從每次施用約0.1μg至IOmg而變化，其依賴于施用可以每天、每周或每月以及之間的時間的任何其它量進行。更典型地，粘膜或局部劑量范圍從約10μg至5mg/每次施用，并且最典型地從約100μg至Img,并且數(shù)天或數(shù)周施用2-4次(with2_4administrationsbeingspaceddaysorweeksapart)。更典型地，免疫刺激劑量范圍從每次施用1μg至IOmg而變化，并且最典型地10μg至lmg，每天或每周施用。用于胃腸外遞送以旨在誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答的本文所述的化合物的受試者劑量(其中所述化合物與抗原一起但無另一治療試劑)比用于疫苗佐劑或免疫刺激使用的有效粘膜劑量典型地高50至10000倍，更典型地高10至1，000，并且最典型地高20至100倍。當所述免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸與其它治療試劑一起組合或在專門的遞送載體中施用時，用于胃腸外遞送以旨在誘導(dǎo)先天免疫應(yīng)答或用于增加ADCC或用于誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答的本文所述的化合物的劑量典型地范圍從每次施用約0.1μg至IOmg而變化，其依賴于施用可以每天、每周或每月，以及其間時間的任何其它時間進行。更典型地用于此目的的胃腸外劑量范圍從每次施用約10μg至5mg而變化，并且最典型地從100μg至lmg，并且數(shù)天或數(shù)周施用2-4次。然而在一些實施方式中，用于此目的的胃腸外劑量可以以比上述典型劑量高5至10，000倍范圍的使用。對于本文所述任何化合物，治療有效劑量可以最初從動物模型中確定。治療有效劑量還從用于在人類中已經(jīng)測試的寡核苷酸(已經(jīng)開始人類臨床試驗)和用于已知顯示類似藥理學(xué)活性，例如其它佐劑例如LT和用于接種目的的其它抗原的人類數(shù)據(jù)確定。對于胃腸外施用可能需要更高劑量。應(yīng)用的劑量可以基于施用化合物的相對生物利用度和潛能來調(diào)整?；谏鲜龇椒ê捅绢I(lǐng)域已知的其它方法調(diào)整劑量以實現(xiàn)最大化功效在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)。本發(fā)明的制劑以藥學(xué)上可接受的溶液施用，其可以例行地包含藥學(xué)上可接受濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、相容的載體(compatiblecarrier)、佐劑和任選地其它治療成分。為了在治療中使用，免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸的有效量可以通過遞送寡核苷酸至所期望表面的任何模式，例如粘膜地、全身地施用至受試者。施用本發(fā)明的藥用組合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何手段實現(xiàn)。施用的優(yōu)選途徑包括但不限于口服、胃腸外、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、舌下、氣管內(nèi)(intratracheal)、吸入、眼睛、陰道和直腸。為了口服施用，所述化合物(即，免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸、抗原和其它治療試劑)可以通過將活性化合物與本領(lǐng)域已知的藥學(xué)上可接受的載體一起混合來容易地配制。此類載體使本發(fā)明的化合物能夠被配制成片劑、丸劑、糖錠劑(dragees)、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿料(slurries)、懸浮液等，以用于要治療的受試者的口服消化。用于口服用途的藥物制劑可以以固體賦形劑的形式獲得，且任選地研磨所得混合物，并且在加入合適的助劑(如果需要)之后，加工粒料的混合物，以獲得片劑或糖錠劑芯。具體地，合適的賦形劑為填料例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基_纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以添加崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸(alginicacid)或其鹽例如藻酸鈉。任選地所述口服制劑還可以配制在生理鹽水或緩沖液中，即用于中和內(nèi)部酸條件的EDTA，或可以無需任何載體地施用。還特別涉及地為上述組分的口服劑型。如在以下實施例中證明，F(xiàn)ANA-改性的寡核苷酸在酸環(huán)境中具有增加的穩(wěn)定性，使它們用于口服應(yīng)用。組分可以具有另外的改性以使口服遞送更有效。通常，涉及的化學(xué)改性為將至少一個部分(moiety)連接至組分分子自身，其中所述部分(moiety)允許(a)蛋白裂解的抑制；并且(b)從胃或腸攝入血流。還需要的是在組分總體穩(wěn)定性的增加和在體內(nèi)循環(huán)時間上的增加。此類部分的實例包括聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。AbuchowskiandDavis,1981,“SolublePolymer-EnzymeAdducts“In:EnzymesasDrugs,HocenbergandRoberts,eds.,ffiley-Interscience,NewYork,NY,pp.367—383；Newmark,etal.，1982，J.Appl.Biochem.4:185_189。可以使用的其它聚合物為聚-1，3-二氧戊環(huán)(dioxolane)和聚_1，3，6_三氧八環(huán)(tioxocane)。對于如上所述的藥物使用優(yōu)選的為聚乙二醇部分。對于組分(或衍生物)，釋放位置可以為胃、小腸(十二指腸、空腸或回腸)或大腸。本領(lǐng)域技術(shù)人員具有將不在胃中溶解并且將在腸中的十二指腸中釋放所述材料的可利用的制劑。優(yōu)選地，該釋放將通過寡核苷酸(或衍生物)的保護或通過越過胃環(huán)境后例如在腸中生物活性材料的釋放來避免胃環(huán)境的不利效應(yīng)。為了確保完全的胃抗性，對至少pH5.0而言為不滲透的涂層是需要的。用作腸涂層的更多常見惰性成分的實例為苯三甲酸醋酸纖維素(CAT)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、HPMCP50、HPMCP55、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯(PVAP)、EudragitL30D、Aquateric、鄰苯二甲酸醋酸纖維素(CAP)、EudragitL,EudragitS和Shellac。這些涂層可以用作混合膜(mixedfilm)。涂層或涂層的混合物也可以在片劑上使用，其不旨在針對胃保護。這可以包括糖涂層、或使片劑更易于吞咽的涂層。膠囊可以由硬殼(例如明膠)組成以用于遞送干治療物質(zhì)即粉末；對于液體形式，可以使用軟明膠殼。扁囊劑的殼材料可以為厚淀粉或其它可食用紙。對于丸劑、錠劑、模制片劑或模印片，可以使用濕法成塊(moistmassing)技術(shù)。治療物質(zhì)(therapeutic)可以以顆粒大小約Imm的顆?；蛐∏蛐问阶鳛榧毜亩囝w粒(multi-particulates)包括在制劑中。用于膠囊施用的材料的制劑還可以作為粉末、輕度壓縮的塊(Plug)或甚至作為片劑。該治療物質(zhì)可以通過壓縮來制備。著色劑和調(diào)味劑可以都被包括。例如，寡核苷酸(或衍生物)可以被配制(例如通過脂質(zhì)體或微球膠囊)，然后進一步包含在可食用產(chǎn)品內(nèi)，例如包含著色劑和調(diào)味劑的冷凍飲料?？梢杂枚栊圆牧舷♂尰蛟黾又委熚镔|(zhì)的體積。這些稀釋劑可以包括碳水化合物，特別是甘露醇、a-乳糖、無水乳糖、纖維素、蔗糖、改性右旋糖和淀粉。某些無機鹽也可用作填料包括三磷酸鈣、碳酸鎂和氯化鈉。一些商業(yè)上可獲得的稀釋劑為Fast-Flo，Emdex,STA-Rx1500,Emcompress禾口Avicell0崩解劑可以包括在以固體劑型的治療物質(zhì)的制劑中。用作崩解劑的材料包括但不限于淀粉，包括基于淀粉、Explotab的商業(yè)的崩解劑。羥基乙酸淀粉鈉，安伯來特，羧甲基纖維素鈉，超支鏈淀粉(ultramylopectin)，藻酸鈉，明膠，橙皮，酸化羧甲基纖維素(acidcarboxymethylcellulose)，天然海綿和膨潤土都可以使用。崩解劑的另一形式為不可溶陽離子交換樹脂。粉末膠(Powderedgum)可用作崩解劑和作為粘合劑，并且這些可以包括粉末膠例如瓊脂、Karaya或黃芪膠。藻酸及其鈉鹽也用作崩解劑。粘合劑可以用于將治療試劑保持在一起以形成硬片劑和包括來自天然產(chǎn)物例如阿拉伯膠、黃芪膠、淀粉和明膠的材料。其它包括甲基纖維素(MC)、乙基纖維素(EC)和羧甲基纖維素(CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羥丙基甲基纖維素(HPMC)都可以用于醇溶液以使治療物質(zhì)成粒。減阻劑(anti-frictionalagent)也可包括在治療物質(zhì)的制劑中以防止配制過程期間的粘沖。潤滑劑可以用作在治療物質(zhì)和diewall之間的層，并且這些可以包括但不限于硬脂酸(包括其鎂和鈣鹽)、聚四氟乙烯(PTFE)、液體石蠟、植物油和蠟。也可以使用可溶的潤滑劑例如十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鎂、各種分子量的聚乙二醇、Carbowax4000和6000。可以添加在配制期間可能改進藥物的流動特性和在壓縮期間的有助于重排的助流劑。助流劑可以包括淀粉、滑石、氣相白炭黑(pyrogenicsilica)和含水硅鋁酸鹽(hydratedsilicoaluminate)0為了輔助治療物質(zhì)溶解入水性環(huán)境，表面活性劑可以作為濕潤劑添加。表面活性劑可以包括非離子洗滌劑，例如十二烷基硫酸鈉、二辛基硫化琥珀酸鈉和二辛基磺酸鈉?？梢允褂藐栯x子洗滌劑，并且其可以包括苯扎氯銨(benzalkoniumchloride)和芐索氯銨(benzethomiumchloride)?？梢园ㄔ谥苿┲凶鳛楸砻婊钚詣┑臐撛诘姆请x子洗滌劑的列表為lauromacrogol400,polyoxyl40stearate，聚氧乙烯氫化蓖麻油10，50禾口60，單硬脂酸甘油酯，聚山梨醇酯40，60，65和80，蔗糖脂肪酸酯，甲基纖維素和羧甲基纖維素。這些表面活性劑可以單獨或作為不同比的混合物存在于所述寡核苷酸或衍生物的制劑中?？梢钥诜褂玫乃幬镏苿┌ㄓ擅髂z制成的推動配合(push-fit)膠囊、以及由明膠和增塑劑(例如甘油或山梨醇)制成的軟的密封膠囊。推動配合(push-fit)膠囊可以包含與填料混合的活性成分，所述填料例如乳糖、粘合劑例如淀粉，和/或潤滑劑例如滑石或硬脂酸鎂，和任選地穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，活性化合物可以溶解或懸浮于合適的液體，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，可以添加穩(wěn)定劑。為了口服施用配制的微球也可以使用。此類微球在本領(lǐng)域已經(jīng)良好地定義。用于口服施用的所有制劑應(yīng)該為適合此類施用的劑量。為了口腔含化施用，所述組合物可以采用以傳統(tǒng)方式配制的片劑或錠劑形式。對于通過吸入施用，用于根據(jù)本發(fā)明用途的化合物可以使用合適的推進劑，從加壓容器(pressurizedpacks)或噴霧器以氣溶膠噴射表現(xiàn)的形式來傳統(tǒng)地遞送，使用合適的推進劑例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體。在加壓氣溶膠的情況下所述劑量單位可以通過提供閥門以遞送計量的量來確定?？梢耘渲茷榱嗽谖肫骰虼等肫髦惺褂玫睦缑髂z的膠囊和藥筒(cartridges)，其包含所述化合物和合適的粉末基體(powderbase)例如乳糖或淀粉的粉末混合物。本文還涉及的為所述寡核苷酸(或其衍生物)的肺遞送。當吸入并跨過肺上皮層至血流時，所述寡核苷酸(或衍生物)遞送至哺乳動物的肺。吸入分子的其它艮道包括Adjeietal.，1990，PharmaceuticalResearch,7:565_569；Adjeietal.，1990，InternationalJournalofPharmaceutics，63135-144(leuproIideacetate)；Braquetetal.,1989,JournalofCardiovascularPharmacology,13(suppl.5)143-146(endothelin-1)；Hubbardetal.，1989，AnnalsofInternalMedicine，Vol.Ill,pp.206-212(al-antitrypsin)；Smithetal.,1989,J.Clin.Invest.841145-1146(a-l-proteinase)；Osweinetal.,1990,“AerosolizationofProteins“，ProceedingsofSymposiumonRespiratoryDrugDeliveryII，Keystone,Colorado，March，(recombinanthumangrowthhormone)；Debsetal.，1988，J.Immunol.1403482-3488(interferon-gandtumornecrosisfactoralpha)andPlatzetal·，美15專利No.5，284，656(granulocytecolonystimulatingfactor)。為了全身性效應(yīng)用于肺遞送的方法和組合物描述于美國專利No.5，451，569，1995年9月19日授權(quán)給Wong等。用于本發(fā)明實踐還涉及的是為肺遞送治療產(chǎn)物設(shè)計的各種機械裝置，包括但不限于噴霧器、計量的劑量吸入器和粉末吸入器，所有這些對本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟悉的。適合本發(fā)明實踐的商業(yè)上可獲得的某些特定實例為Ultraventnebulizer，由Mallinckrodt,Inc.，St.Louis,Missouri制造；theAcornIInebulizer,由MarquestMedicalProducts，Englewood，Colorado制造；theVentolinmetereddoseinhaler，由GlaxoInc.，ResearchTrianglePark，NorthCarolina制造；禾口theSpinhalerpowderinhaler，由FisonsCorp.，Bedford，Massachusetts制造。所有此類裝置需要使用適合寡核苷酸(或衍生物)分散的制劑。典型地，各制劑對于使用的裝置的類型是特異的，并且除了用于治療的常用的稀釋劑、佐劑和/或載體之夕卜，可以包括使用合適的推進劑材料。同樣地，還涉及脂質(zhì)體、微膠囊或微球、包涵體復(fù)合物(inclusioncomplexes)或其它類型的載體的使用。化學(xué)改性的寡核苷酸還可以依賴于化學(xué)改性的類型或使用的裝置的類型在不同制劑中制備。適合與噴霧器(噴射或超聲波)一起使用的制劑，將典型地包括以約0.1至25mg生物學(xué)活性寡核苷酸每mL溶液的濃度溶解在水中的寡核苷酸(或衍生物)。所述制劑還可以包括緩沖液和簡單的糖(例如為了寡核苷酸穩(wěn)定和調(diào)節(jié)滲透壓)。噴霧器制劑還可以包含表面活性劑，以降低或防止在形成氣溶膠中由溶液的霧化引起的寡核苷酸的表面誘導(dǎo)的聚集。與計量-劑量吸入裝置一起使用的制劑將通常包括細分開粉末，其包含在表面活性劑的幫助下在推進劑中中懸浮的寡核苷酸(或衍生物)。所述推進劑可以為為此目的使用的任何傳統(tǒng)材料，例如含氯氟烴、氫氯氟烴、氫氟烴，或烴，包括三氯氟甲烷，二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1，1，1，2_四氟乙烷，或其組合。合適的表面活性劑包括失水山梨醇三油酸酯和大豆卵磷脂。油酸也可用作表面活性劑。來自粉末吸入裝置用于分散的制劑將包括寡核苷酸(或衍生物)的細分開的干粉末，并且還以促進粉末從所述裝置分散的量(例如所述制劑的50至90質(zhì)量％)包括填充劑例如乳糖、山梨醇、蔗糖或甘露糖。為了最有效地遞送至末梢肺，所述寡核苷酸(或衍生物)應(yīng)該以平均顆粒大小小于10mm(或微米)，最優(yōu)選0.5至5mm的特定形式最有利地制備。還涉及本發(fā)明藥物組合物的經(jīng)鼻遞送(Nasaldelivery)。經(jīng)鼻遞送允許在將治療產(chǎn)品施用至鼻后直接將本發(fā)明藥物組合物傳遞至血流，而沒有在肺中沉積該產(chǎn)品的必要性。用于經(jīng)鼻遞送的制劑包括使用右旋糖或環(huán)糊精的那些。對于經(jīng)鼻施用，有用的裝置為小而硬的瓶，計量劑量的噴射器與其連接。在一種實施方式中，計量劑量通過將本發(fā)明的藥物組合物溶液抽入定義體積的室來遞送，所述室具有當液體在所述室壓縮時通過形成噴霧使氣凝膠制劑氣凝膠化的孔。將所述室壓縮以施用本發(fā)明的藥物組合物。在特定實施方式中，所述室為活塞排列。此類裝置商業(yè)上可得。備選地，使用這樣的塑料擠瓶，其具有尺寸為當壓擠時通過形成噴射使氣溶膠氣溶膠化的孔或開口。所述開口通常在瓶的頂部發(fā)現(xiàn)，并且所述頂部通常逐漸縮減以部分地適合鼻道以有效的施用氣凝膠制劑。優(yōu)選地，所述鼻吸入器將提供計量量的氣凝膠制劑，以施用測量劑量的藥物。當期望全身地遞送其時，可以配制化合物以通過注射例如通過推注或連續(xù)灌輸來用于胃腸外施用。用于注射的制劑可以以單位劑型存在于，例如具有添加的防腐劑的安瓿或多劑量容器中。所述組合物可以采用例如在油性或水性載體中的懸浮液、溶液或乳液的形式，并且可以包含配制劑(formulatoryagents)例如懸浮、穩(wěn)定和/或分散劑。用于對于胃腸外施用的藥物制劑包括以水溶性形式的活性化合物的水性溶液。此夕卜，活性化合物的懸浮液可以制備成合適的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油例如芝麻油，或合成的脂肪酯例如油酸乙酯或甘油三酸酯，或脂質(zhì)體。水性注射懸浮液可以包含增加所述懸浮液粘性的物質(zhì)，例如羧甲基淀粉鈉、山梨醇或右旋糖。任選地，所述懸浮液還可以包含合適的穩(wěn)定劑或試劑，其增加化合物的溶解度以允許制備高度濃縮的溶液。備選地，所述活性化合物在使用前可以為粉末形式，以與合適的載體例如無菌無熱原的水構(gòu)造。該化合物還可以在直腸或陰道組合物例如栓劑或保留灌腸劑(retentionenemas)中配制，例如包含傳統(tǒng)的栓劑基質(zhì)例如可可脂或其它甘油脂。除了上述制劑之外，所述化合物還可以配制成長效制劑(cbpotpr印aration)。此類長作用制劑可以用合適的聚合或疏水性材料(例如作為在可接受油中的乳液)或離子交換樹脂、或作為略溶衍生物，例如作為略溶鹽配制。所述藥物組合物還可以包括合適的固體或凝膠相載體或賦形劑。此類載體或賦形劑的實例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物例如聚乙二醇。合適的液體或固體藥物制劑形式為例如水性或生理鹽水溶液以用于吸入、微膠囊、蝸形體(encochleate)、涂布到顯微金顆粒上、包含在在脂質(zhì)體中，霧化、氣凝膠、用于植入皮膚的微丸劑(pellets)，干燥至銳器(sharpobject)上以刮擦皮膚。所述藥物組合物還包括粒劑、粉末、片劑、包衣片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿、乳液、懸浮液、霜劑(creams)、滴劑或具有緩釋活性化合物的制劑，在所述制劑中賦形劑和添加劑和/或助劑例如崩解劑、粘合劑、涂布劑、膨脹劑、潤滑劑、調(diào)味劑、甜味劑或增溶劑通常如上文所述。藥物組合物適合在各種藥物遞送系統(tǒng)中使用。對于藥物遞送方法的簡短綜述，參見Langer，Science2491527-1533，1990，將其在此引入以作參考。免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸和任選的其它治療藥物和/或抗原可以自身(neat)或以藥學(xué)上可接受的鹽的形式施用。當在醫(yī)學(xué)中使用時所述鹽應(yīng)該為藥學(xué)上可接受的，但是非藥學(xué)上可接受的鹽可以方便地用于制備其藥學(xué)上可接受的鹽。此類鹽包括，但不限于從以下酸制備的那些鹽酸、溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、對甲苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、2-萘磺酸和苯璜酸。同樣地，此類鹽可以制備成堿金屬或堿土金屬鹽，例如羧酸基團的鈉、鉀或鈣鹽。合適的緩沖試劑包括乙酸和鹽(1-2%w/v)；檸檬酸和鹽(1-3%w/v)；硼酸和鹽(0.5-2.5%w/v)；和磷酸和鹽(0.8-2%w/v)合適的防腐劑包括苯扎氯銨(0.003-0.03%w/v)；氯代丁醇(0.3-0.9%w/v)；對羥苯甲酸酯(parabens)(0.01-0.25%w/v)和水楊乙汞(thimerosal)(0.004-0.02%w/v)。本發(fā)明的藥物組合物包含有效量的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸和任選的抗原和/或其它治療劑，其任選地包括在藥學(xué)上可接受的載體中。術(shù)語藥學(xué)上可接受的載體是指一種或多種相容的固體或液體填料、稀釋劑或包封物質(zhì)，其適合施用至人類或其它脊椎動物。術(shù)語載體表示天然或合成的有機或無機成分，所述活性成分與其組合以促進應(yīng)用。藥物組合物的成分還能夠以相互以不存在會實質(zhì)上影響所期望的藥物功效的相互作用的方式與本發(fā)明的化合物混合。本發(fā)明通過以下實施例進一步描述，其絕不應(yīng)該解釋為進一步的限制。將本申請全文引用的所有參考文獻(包括文獻參考、授權(quán)專利、公開專利申請和共同未決的的專利申請)在此明白地引入以作參考。實施例材料和方法寡脫氧核苷酸(ODN)和試劑FANA-改性的寡核苷酸(ODN)的固相合成寡核苷酸使用標準β_氰乙基亞磷酸酰胺(cyanoethylphosphoramidite)化學(xué)法以1μ摩爾規(guī)模在AKTAOligopilot10DNA/RNAsynthesizer(GE-Healthcare)上合成。PrimersupportPS200購自GE-Healthcare(力口載40μmol/g)。5'-DMT-保護的β-氛乙基亞磷酸酰胺用于合成寡-2'_脫氧核苷酸。DMT-基團在合成的5'-末端除去。去保護和純化ODNs(表1)通過用濃縮的氨水處理(40°C，4h)從固相載體上去保護和分離(cleavedfrom)。純化在SOURCE15Q陰離子交換樹脂(CV:6ml，GEHealthcare)上使用以下梯度系統(tǒng)實現(xiàn)緩沖液A=IOmM氫氧化鈉，pH12；緩沖液B2.5M氯化鈉，IOmM氫氧化鈉，PH12。使用的梯度液依賴于使用的寡核苷酸序列。色譜系統(tǒng)為具有Frac950級分收集器的AKTAPurifier10(GEHealthcare)。包含產(chǎn)物的級分在BiogelP4柱上脫鹽并且凍干。分析ODNs在具有以下模塊的Agilent1100HPLC系統(tǒng)上分析微真空脫氣器(G1379A)，二元泵(G1312A)，孔-板取樣器(G1367A)，柱式加熱爐(columnoven)(G1316A)andMWD(G1365B)，其耦合至BrukerEsquire3000+離子阱質(zhì)譜儀(負離子模式)柱WatersX-BridgeC182.5μm2.1x50mm；柱溫60°C；在260nm下UV-檢測；流速0.2mL/min；溶劑A385mMHFIP+14.4mMTEA；溶劑B甲醇；注射體積:10μL；梯度=Omin:5%B,15min17.5%B，50min24%B，65min45%B。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>零時間點樣品。使包含HCl的樣品在RT孵育10，240和1440min。孵育后，添加約5.3μ1NH4OH(1%)以溶解沉淀的0DN。樣品通過在WatersAtlantisC183μmcolumn2.Ix150mm上的HPLC使用梯度分離液(溶劑AIOOmMTEAAc，溶劑B=ACN；0%B(Omin),9%B(9min),40%B(25min),95%B(30min),95%B(35min),0%B(36min),0%B(50min))在30°C柱溫下分析。鳥嘌呤在274nmUV下監(jiān)視。標準曲線通過分析已知鳥嘌呤濃度的標準樣品來制備。在ODN樣品中的實際鳥嘌呤濃度使用從標準樣品獲得的校正曲線反算。TLR檢驗HEK293細胞通過電穿孔使用分別表達人TLR和6XNF-KB-螢光素酶報道子質(zhì)粒的載體來轉(zhuǎn)染。穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染物(3X104細胞/孔)在加濕孵育器中在37°C下孵育指示量的ODN16h。各數(shù)據(jù)點一式三份地完成。將細胞裂解并就熒光素酶基因活性檢驗(使用theBriteLitekit，來自Perkin-Elmer，Zaventem,Belgium)。刺激指數(shù)參考不添加ODN的培養(yǎng)基的報道子活性計算。細胞純化來自健康供者的外周血血沉棕黃層制劑(Peripheralbloodbuffycoatpreparations)/ABloodBankoftheUniversityofDusseldorf(H)Mf^^PBMC通過在FicolI-Hypaque(Sigma)上離心來純化。細胞在加濕孵育器中在37°C下在補充有以下的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)5%(ν/ν)熱滅活人類AB血清(BioWhittaker)或10%(ν/ν)熱滅活FCS，2mML-谷氨酰胺，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素(都來自Sigma)細胞因子檢測和細胞計數(shù)分析將PBMC以5XIO6細胞/ml的濃度再懸浮并且添加至96孔圓底板(250μ1/孔)。將PBMC用ODN孵育并且培養(yǎng)上清液(SN)在指示時間點后收集。如果不立即使用，將SN在-20°C貯存直到需要。在SN中細胞因子的量使用in-houseELISA使用商購得到的抗體(PBL，NewBrunswick,NJ,USA)就產(chǎn)生的IFN-α來進行評估。包含未甲基化CpG基序的寡核苷酸(ODN)能夠通過Toll-樣受體9(TLR9)途徑刺激免疫應(yīng)答。具有非天然糖殘基的ODNs與天然核苷酸相比通常為核酸酶的較差的底物。已經(jīng)報道在CpG二核苷酸處的2'-脫氧核糖或CpG基序的5'的某些類型取代導(dǎo)致降低的hTLR9刺激[Zhaoetal.(1999)Biorg.Med.Chem.Lett.9,3453]；例如在GTCpGTT中5‘-G被2'-0-甲基改性導(dǎo)致通過hTLR9途徑的強烈降低的活性。令人驚奇地是，F(xiàn)ANA-改性的ODN不顯示在hTLR9活性上相同的降低。2‘-脫氧_2‘-氟-β-D-阿拉伯糖基(FANA)核苷對CpGODN生物活性的影響描述于以下實施例。圖1顯示FANA-改性的糖的結(jié)構(gòu)有利于優(yōu)選的2'-內(nèi)(endo)構(gòu)象，與有例如2'-外(exo)構(gòu)象的2'_0_甲基改性的糖不同。實施例1具有FANA-改性的G殘基的寡核苷酸在低pH下穩(wěn)定。脫嘌呤的機制如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>研究SEQIDNO1(一個G被faG取代，參見表2)和SEQIDNO5(兩個G取代)的穩(wěn)定性。ODN在0.IMHC1(其模擬胃中的pH)中孵育，并且通過RP-HPLC測定隨時間的脫嘌呤。酸穩(wěn)定性通過G被FANA-改性的G(faG)取代而強烈地提高(圖2)。在24小時的調(diào)查時間框架中所有G殘基被faG取代的SEQIDNO:5針對在pHl下的酸穩(wěn)定。即使具有僅一個faG的0DN(SEQIDNO1)也比未改性的親本序列(SEQIDNO8)顯示增加的穩(wěn)定性。該結(jié)果對于制備富G的ODNs具有意義，因為脫嘌呤副產(chǎn)物的形成在酸去除ODNs的5'-末端的二甲氧基三苯甲基期間是個問題。然而，更重要的是，在PH下穩(wěn)定的ODNs對于口服施用為更好的候選物。實施例2在CpG免疫刺激基序中faG的引入導(dǎo)致在體外人類TLR9活化的增加。為了測試FANA-改性的寡核苷酸激活TLR9的能力，許多B類CpGODN用FANA改性合成，并且就激活TLR9的能力測試。將ODNs用hPBMCs孵育并且通過ELISA測定IFN-α分泌。將許多改性引入六聚體基序GTCGTT。如圖3所示，在CpG基序(SEQIDNO3)處C被faC(FANA胞嘧啶核苷衍生物)的取代導(dǎo)致在hTLR活性上的強烈降低，因為效力和功效都降低。令人驚奇地是，在CpG二核苷酸基序(SEQIDNO4)中G被faG的取代相對于faC-改性的寡核苷酸導(dǎo)致顯著增強的效力。具有在CG二核苷酸外部的六核苷酸基序中T或G被FANA核苷酸取代的ODN具有與未改性的親本SEQIDNO8)類似的功效和潛力。當在六核苷酸基序中的兩個G核苷酸交換為faG(SEQIDNO5)時，在hTLR9上的功效比親本ODN顯著地更好。具有G被faG取代的ODNs的增加的活性為令人驚奇的實例，其中脫氧核糖糖部分的改性導(dǎo)致在hTLR9檢驗中的增強活性，而不是使用其它類型的改性看到的降低。表2=FANA-改性的B類ODN<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>faN=FANA改性的核苷酸實施例3在CdG基序中faG的引入導(dǎo)致體外在IFN-α分泌的輕微增加。為了研究FANA取代對誘導(dǎo)體外IFN-α分泌的能力的影響，C類衍生的ODNs用hPBMCs孵育，并且通過ELISA測定IFN-α分泌(參見表3和圖4)。令人驚奇地是，具有在5‘-末端第一個G被faG取代的SEQIDNO9對于誘導(dǎo)IFN-α比未改性的親本SEQIDNO15更有效。此外，即使所有G殘基被交換，在C類ODN中G被faG的取代似乎通常良好地耐受。表3FANA-改性的C類ODN<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>faN=FANA改性的核苷酸這樣已經(jīng)描述了本發(fā)明至少一個實施方式的幾個方面，應(yīng)該意識到各種變化、改進和提高對本領(lǐng)域技術(shù)人員將易于發(fā)生。此類變化、改進和提高應(yīng)為本說明書的部分，并且應(yīng)在本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。因此，前述描述和附圖僅作為實例。權(quán)利要求長度上為8-200個核苷酸的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，包括至少一個免疫調(diào)節(jié)ZNYZ基序，其中Z為嘌呤核苷或FANA-改性的嘌呤核苷，N為T、A或5-取代的U，Y為嘧啶核苷，并且其中至少一個Z包括FANA-改性的嘌呤核苷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述免疫調(diào)節(jié)基序為ZNYZN1N2N3Np3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述免疫調(diào)節(jié)基序為ZNYG基序，其中YG為內(nèi)部的嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中N，N1,N2,N3和N4為T。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括免疫調(diào)節(jié)基序的5'的至少4個核苷酸。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中在所述免疫調(diào)節(jié)基序外部的至少一個核苷酸具有FANA改性。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸不是反義寡核苷酸。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括多個內(nèi)部YZ二核苷酸，并且其中每個內(nèi)部YZ核苷酸的Z包括FANA-改性。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中Z為鳥嘌呤核苷(G)、2'-脫氧鳥嘌呤核苷、2'脫氧_7脫氮鳥嘌呤核苷、2'脫氧-6-硫代鳥嘌呤核苷、2'脫氧-8-羥基鳥嘌呤核苷、阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷、2'-脫氧肌苷、2'-脫氧2'_取代的_阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷、2'-O-取代-阿拉伯糖基鳥嘌呤核苷或其它非天然嘌呤核苷。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中Y為C并且Z為G，并且其中所述CG二核苷酸的C未甲基化。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中Y為胞嘧啶、2'-脫氧胞嘧啶、2'-脫氧胸腺嘧啶核苷、阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、1_(2'-脫氧-B-D-呋喃核糖基)-2_氧-7-脫氮-8-甲基嘌呤、2'-脫氧-2'-取代的阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、2'-O-取代的阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、2'-脫氧-5-羥基胞嘧啶核苷、2'-脫氧-N4-烷基胞嘧啶核苷、2'-脫氧-硫代尿苷或其它非天然嘧啶核苷。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，進一步包括選自以下的至少一個穩(wěn)定化的核苷酸間鍵合硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、甲基硫代磷酸酯、乙酸磷酸酯、Rp-硫代磷酸酯、Sp-硫代磷酸酯、硼烷磷酸酯或3‘-硫甲縮醛。13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，進一步包括第二類型的糖改性，其中所述第二類型的糖改性選自2'-O-甲基核糖、2'-O-亞丙基核糖、2'-O-丁基核糖、2'-0-(2-甲氧基乙基)、2'-0,4'-C-亞烷基-聯(lián)核糖(亞烷基為亞甲基(LNA)或亞乙基)、2'-脫氧-2'-氟代核糖、3'-0-甲基核糖、1'，2'-二脫氧核糖；阿拉伯糖、1'-甲基阿拉伯糖、3'-羥甲基阿拉伯糖、4'_羥甲基-阿拉伯糖或1，5_脫水己糖醇。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，進一步包括至少一個3'-3'核苷酸間鍵合和/或至少一個5'-5'核苷酸間鍵合和/或至少一個2'-5'核苷酸間鍵合。15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，進一步包括至少一個回文序列。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，進一步包括至少一個(G)n序列，其中η為4至10。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括至少一個疏水性T類似物和/或至少一個5-取代的U類似物。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，進一步包括所述寡核苷酸的親水性改性。19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括連接子。20.寡核苷酸序列，其選自SEQIDNO1至SEQIDNO:16。全文摘要本發(fā)明涉及包括至少一個FANA取代的核苷酸類似物和嘧啶-嘌呤二核苷酸的寡核苷酸。本發(fā)明還涉及使用其藥物組合物和方法。文檔編號A61K39/39GK101820908SQ200880111045公開日2010年9月1日申請日期2008年9月9日優(yōu)先權(quán)日2007年10月9日發(fā)明者E·烏爾曼,H·德貝拉克,M·朱爾克,M·韋伯申請人:科利制藥公司