專(zhuān)利名稱(chēng)：一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫活性多糖，具體涉及一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
錦燈籠學(xué)名為酸漿，別名紅姑娘、紅娘子、掛金燈、苦姑娘、燈籠果。果為漿果，球形，成熟時(shí)呈橙黃色；宿存花萼隨果實(shí)長(zhǎng)大而增大，橘紅色，膨松的包在漿果外面，形似燈籠而得名。錦燈籠為茄科、酸漿屬(Physalis alkekengi L.)多年生草本植物，全國(guó)各地均有分布，是常用的藥食兩用植物。錦燈籠全草均可入藥；其果實(shí)味甘、酸、寒，可食用。具有清熱解毒、利咽化痰、利尿等功效，用于咽痛、音 、痰熱咳嗽、小便不禾I』，外治天皰瘡、濕疹等。近年來(lái)，隨著以錦燈籠為原料開(kāi)發(fā)的醫(yī)藥和食品的迅速發(fā)展，野生的錦燈籠供應(yīng)已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求，因此大量種植的錦燈籠應(yīng)運(yùn)而生。目前，被廣泛利用的錦燈籠的有效部位仍然是錦燈籠果實(shí)，而其莖因得不到有效利用而廢棄。因此錦燈籠莖多糖的研究，對(duì)全面、有效的開(kāi)發(fā)和利用錦燈籠具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有免疫活性的錦燈籠多糖、制備方法和用途。本發(fā)明的具體步驟(1)將錦燈籠的干燥莖剪成2cm長(zhǎng)的寸斷，浸泡過(guò)夜，料液比為Ig 20ml至 Ig 50ml ；(2)水浸法提取1-4小時(shí)，三次浸提，溫度50_100°C ；(3)用乙醇對(duì)水浸液提取物進(jìn)行沉淀，乙醇的終濃度為65-85% ；(4)反復(fù)凍融至無(wú)沉淀后，用酶法和kvage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；(5)粗多糖用QAE SephadexA-25,以生理鹽水進(jìn)行洗脫，冷凍干燥后得多糖 Q-WSP ； (6) Q-WSP 經(jīng) HPLC 進(jìn)一步純化得到 WSP。上述方法獲得的WSP經(jīng)HPLC測(cè)定其分子量大約為7000Da，其組分均一。經(jīng)氣相色譜分析得單糖組分為他3、4『3、631、61(；和63認(rèn)，其摩爾比為2.6 1. 0 6. 5 3. 5 2. 4。本發(fā)明所得錦燈籠莖多糖具有免疫增強(qiáng)作用，可用于提高機(jī)體免疫功能的食品和保健品。制備方法簡(jiǎn)單、可靠。錦燈籠莖來(lái)源廣泛，錦燈籠莖多糖的開(kāi)發(fā)利用將使錦燈籠莖變廢為寶。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一、錦燈籠莖多糖的制備
1將錦燈籠的干燥莖500g用剪子剪成2cm長(zhǎng)的寸斷，3000ml水浸泡過(guò)夜；2水浸法提取2小時(shí)，三次浸提，溫度100°C ；3用乙醇對(duì)水浸液提取物進(jìn)行沉淀，乙醇的終濃度為85% ；4反復(fù)凍融至無(wú)沉淀后，用酶法和kvage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；5粗多糖用QAE Sephadex A_25柱層析，以生理鹽水進(jìn)行洗脫，冷凍干燥后得多糖 Q-WSP ； 6Q-WSP經(jīng)HPLC進(jìn)一步純化得到WSP ；WSP經(jīng)HPLC測(cè)定其分子量大約為7000Da，為多糖均一組份。經(jīng)氣相色譜分析得單糖組分為 Rha、Ara、Gal、Glc 和 GalA，其摩爾比為 2. 6 1. 0 6. 5 3. 5 2. 4。二、錦燈籠莖多糖免疫增強(qiáng)活性實(shí)驗(yàn)(一 )動(dòng)物分組及其免疫方法五周齡雄性ICR小鼠用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，每組5只；以雞卵清蛋白(OVA)為抗原，皮下注射。實(shí)驗(yàn)分組如下第一組(Saline)注射生理鹽水，作為空白對(duì)照第二組(OVA)注射0VA100 μ g/只，作為陰性對(duì)照第三組(QuilA)注射0VA100 μ g/只+QuiIAlO μ g/只，QuiIA (南美皂樹(shù)皂苷)為陽(yáng)性對(duì)照第四組(WSP)注射0VA100 μ g/只+錦燈籠莖多糖200 μ g/只以上各組均免疫兩次，間隔14天。第二次免疫后14天，MTT法檢測(cè)動(dòng)物脾淋巴細(xì)胞增值反應(yīng)；用ELISA方法檢測(cè)動(dòng)物抗血清中抗OVA特異性抗體IgG的變化。(二)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)方法(1)無(wú)菌取小鼠脾臟，并制成單細(xì)胞懸液，用RPMI1640培養(yǎng)液將細(xì)胞稀釋成 2xl06/ml。(2)于96孔培養(yǎng)板中，每孔加100 μ 1脾細(xì)胞懸液，各孔分別加等體積的ConA溶液 (終濃度為5 μ g/ml)或LPS溶液(終濃度為10 μ g/ml)，并設(shè)空白對(duì)照組。(3) 37°C>5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68小時(shí)后，各孔分別加10 μ 1 MTT溶液(5mg/ml)， 繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，離心后，每孔分別吸去上清，加入200μ 1酸性二甲基亞砜(DMSO)溶液，振蕩，于室溫放置15min。(4)用酶標(biāo)儀于570/630nm處測(cè)定OD值。按下式計(jì)算刺激指數(shù)SI =加有絲分裂原培養(yǎng)物的OD值/不加有絲分裂原培養(yǎng)物的OD值。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)錦燈籠莖多糖WSP對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響見(jiàn)表1.表1錦燈籠莖多糖WSP對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響
權(quán)利要求
1.一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖的制備方法，其特征是具體步驟如下(1)將錦燈籠的干燥莖剪成2cm長(zhǎng)的寸斷，浸泡過(guò)夜，料液比為Ig 20ml至 Ig 50ml ；(2)水浸法提取1-4小時(shí)，三次浸提，溫度50-100°C；(3)用乙醇對(duì)水浸液提取物進(jìn)行沉淀，乙醇的終濃度為65-85%；(4)反復(fù)凍融至無(wú)沉淀后，用酶法和kvage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；(5)粗多糖用QAESephadexA-25,以生理鹽水進(jìn)行洗脫，冷凍干燥后得多糖Q-WSP ；(6)Q-WSP經(jīng)HPLC進(jìn)一步純化得到WSP。
2.按照權(quán)利要求1所述的制備方法制備的具有免疫活性的錦燈籠莖多糖。
3.按照權(quán)利要求2所述的具有免疫活性的錦燈籠莖多糖在制備提高機(jī)體免疫功能的食品和保健品方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于免疫活性多糖，具體涉及一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖及其制備方法，本發(fā)明通過(guò)水浸法提取，對(duì)水浸液提取物進(jìn)行沉淀，用酶法和Sevage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；以生理鹽水進(jìn)行洗脫，冷凍干燥后得多糖Q-WSP；經(jīng)HPLC進(jìn)一步純化得到WSP。上述方法獲得的WSP經(jīng)HPLC測(cè)定其分子量大約為7000Da，其組分均一。經(jīng)氣相色譜分析得單糖組分為Rha、Ara、Gal、Glc和GalA。本發(fā)明所得錦燈籠莖多糖具有免疫增強(qiáng)作用，可用于提高機(jī)體免疫功能的食品和保健品。制備方法簡(jiǎn)單、可靠。錦燈籠莖來(lái)源廣泛，錦燈籠莖多糖的開(kāi)發(fā)利用將使錦燈籠莖變廢為寶。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102276745SQ201110165019
公開(kāi)日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月15日
發(fā)明者尚東杰, 王桂云 申請(qǐng)人:東北師范大學(xué)