專利名稱：：一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑、酸奶及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種發(fā)酵劑，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑、酸奶及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：尿石癥是長(zhǎng)期以來(lái)威脅人類健康的泌尿系統(tǒng)常見病之一，其中草酸4丐結(jié)石占70%~80%，且有較高的復(fù)發(fā)率。因此其預(yù)防顯得尤為重要。草酸對(duì)尿液中草酸釣過(guò)飽和程度的影響力比4丐大23倍，因此，高草g是草酸釣結(jié)石形成的重要危險(xiǎn)因素。新的研究發(fā)現(xiàn)，50%~80%的尿草酸來(lái)源于飲食，腸道吸收草酸的量是影響尿草酸排泄量的重要因素。若能P爭(zhēng)低腸道草酸的吸收量，其方法不失為預(yù)防草酸鉀尿結(jié)石形成和復(fù)發(fā)的良策。近來(lái)發(fā)現(xiàn)，脊推動(dòng)物(包括人)的腸道中常駐有一些能分解草酸的細(xì)菌，如嗜草酸桿菌、乳酸菌、雷氏普羅威登斯菌、糞腸球菌和遲緩真桿菌等，這些細(xì)菌能不同程度地降解腸道中的草酸，使腸道的草酸吸收量降低，尿草酸排泄量減少，具有預(yù)防草酸鉤腎結(jié)石發(fā)生和復(fù)發(fā)的功效。但這些草酸分解菌除了乳酸菌外，都無(wú)商品化供應(yīng)。酸奶中含有大量乳酸菌，通過(guò)口服酸奶來(lái)補(bǔ)充腸道乳酸菌，降低尿草酸排泄量，具有獲取方便、患者依從度高的優(yōu)點(diǎn)，是臨床預(yù)防草酸輛結(jié)石的有效適用途徑。由于乳品公司在選擇酸奶發(fā)酵菌時(shí)，并不考慮乳酸菌的草酸分解能力，因此其發(fā)酵劑未必是分解草酸能力最強(qiáng)的發(fā)酵菌。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1010406387>開了一種具有減肥功效的綠茶酸奶^:料，其乳酸菌令牛奶中的乳糖轉(zhuǎn)化而令人體容易吸收，并且有益于腸道有益菌群的繁殖，豐富的鈣質(zhì)補(bǔ)充人體每日所需，在餐前飲用令胃部有飽腹感，既可以達(dá)到節(jié)食效果，還不會(huì)營(yíng)養(yǎng)失衡。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1350460公開了一種乳桿菌科的新微生物，特別是乳桿菌屬的微生物，它們可用于預(yù)防或治療腹渴。但是，關(guān)于酸奶在預(yù)防尿結(jié)石應(yīng)用方面未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于(1)提供一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑；(2)提供一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶；(3)提供一種預(yù)防尿結(jié)石酸奶的制備方法；(4)提供酸奶在預(yù)防泌尿系統(tǒng)結(jié)石中應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑，其中發(fā)酵劑包含乳雙歧桿菌。所述發(fā)酵劑還包含嗜酸乳桿菌。乳雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的體積比為l-3:1-3。乳雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的體積優(yōu)選比為2:2。其中發(fā)酵劑含有的乳雙歧桿菌與可食用菌組合成酸奶發(fā)酵劑在制作預(yù)防泌尿系統(tǒng)結(jié)石的酸奶中的應(yīng)用一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶，包括牛奶、蔗糖、發(fā)酵劑，其中發(fā)酵劑，由乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成，其體積比為3-5:3-5:l-3:l-3。乳雙歧^f干菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳4干菌和嗜熱鏈i^菌的體積優(yōu)選比為4:4:2:2。所述的酸奶在預(yù)防泌尿系統(tǒng)結(jié)石中應(yīng)用。一種預(yù)防尿結(jié)石酸奶的制備方法，該方法包括以下步驟(1)菌種的活化所述的菌種由乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成，其體積比為3-5:3-5:1-3:1-3;(2)母發(fā)酵劑的制備將步驟(1)得到的菌種按2-5%(v/v)接種量接種到牛奶中；(3)生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備將步驟(2)得到的母發(fā)酵劑按2-5%(v/v)接種量接種到由牛奶和蔗糖做成的溶液中；(4)制作酸奶將步驟(3)得到的生產(chǎn)發(fā)酵劑按2-5%(v/v)接種量接種到由牛奶和蔗糖做成的溶液中，分裝、發(fā)酵、冷卻、成熟，制成酸奶。其中步驟(1)中所述的菌種由乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成，其體積比為4:4:2:2。步驟(2)、步驟(3)和步驟(4)中接種量為4%(v/v)。本發(fā)明所公開一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶的發(fā)酵劑、酸奶及其制備方法和應(yīng)用，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在用具有預(yù)防尿結(jié)石功能的發(fā)酵劑制成的酸奶，表面比較光滑，呈白色略偏黃色，新鮮、細(xì)膩、潤(rùn)滑、稠厚感較強(qiáng)、爽口；有發(fā)酵乳的滋氣味，酸甜適口；凝乳均勻，無(wú)雜質(zhì)，^又有少量乳清析出，感官評(píng)分達(dá)85.5分，私變達(dá)80.6°T,乳酸菌含量為3.74xl0VmL。由于6預(yù)防尿結(jié)石的酸奶兼具多種明顯的保健功能和藥食同源的特性，服食方便，價(jià)廉而無(wú)副作用，患者依從度高。本發(fā)明為臨床提供一種非常適合患者長(zhǎng)期"l食的結(jié)石預(yù)防良品。圖1:發(fā)酵劑接種量對(duì)酸奶感官品質(zhì)的影響。圖2:儲(chǔ)存期防石酸奶與市售酸奶的乳酸菌數(shù)變化。圖3:儲(chǔ)存期防石酸奶與市售酸奶的g^變變化。圖4:儲(chǔ)存期防石酸奶的乳酸菌數(shù)和M的變化。圖5:儲(chǔ)存期市售酸奶的乳酸菌數(shù)和M的變化。圖6:各組在培養(yǎng)前后草酸濃度的變化。圖7:四個(gè)酸奶組4交正后的草酸分解率的比4^。圖8:兩個(gè)活菌酸奶組在培養(yǎng)前后的細(xì)菌數(shù)量變化。圖9:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組情況。圖10:各組大鼠在灌喂酸奶期間24h尿草酸排泄量的變化。圖11:大鼠體重的變化。圖12:大鼠體重變化與24h尿草酸排泄量變化的關(guān)系。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。實(shí)施例110種可食用乳酸菌體外分解草酸能力實(shí)驗(yàn)和在牛奶培養(yǎng)液中的繁殖能力實(shí)驗(yàn)一、材料(一)實(shí)驗(yàn)器材l.儀器5%0)2培養(yǎng)箱(Forma,3111型)，高壓滅菌鍋(上海博訊實(shí)業(yè)有P艮公司)，稱量天平，電爐，SmartSpecPlus分光光度計(jì)。2.Helber細(xì)菌計(jì)數(shù)板(上海易擴(kuò)儀器有限公司)3.比濁度測(cè)量?jī)x(DENSIMAT,梅立艾公司)4.器皿錐形瓶，量筒，吸管，試管(20ml),移液管，滴管。5.其他光學(xué)顯微鏡，擦鏡紙，吸水紙。(二)實(shí)驗(yàn)試劑1.嗜酸乳桿菌(L.acidophiluKLDS1.8701s)、副干酪乳斥干菌(L.paracaseiKLDS1.0201)、尿腸球菌(EnterococcaceaefaeciumKLDS6.0302)、乳雙歧桿菌(B.lactisKLDS2.0501)、青春雙歧桿菌(B.adolescentisKLDS2.0003)、嬰兒雙歧桿菌(B.infantisKLDS2.0002)、長(zhǎng)雙歧桿菌(B.longumKLDS2.0001)、乳酸乳球菌乳脂亞種(Lactococcuslactissubsp.CremoriKLDS4.0315)、j呆力口利亞享L4干菌(L.bulgaricusKLDS1.0204)、嗜熱鏈球菌(S.thermophilusKLDS3.0207)的干燥冷凍純菌種(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)。2.草酸銨、葡萄糖、己糖(分析純上海化學(xué)試劑公司)3.J^出培養(yǎng)液(MRS肉湯)(上?；瘜W(xué)試劑公司提供原材料，自行配置)4.含草酸的MRS培養(yǎng)液(上?；瘜W(xué)試劑公司提供原材料，自行配置)5.—水草酸鉀(分析純上?；瘜W(xué)試劑公司)6.麝香溴酚蘭(上海化學(xué)試劑公司提供原材料，自行配置)7.曱基紅指示劑(上?；瘜W(xué)試劑公司提供原材料，自行配置)8.鉻酸鉀(分析純上?；瘜W(xué)試劑公司)9.美藍(lán)染色液(上?；瘜W(xué)試劑公司提供原材料，自行配置)二、方法(一)菌種選擇可從國(guó)內(nèi)各個(gè)菌種保藏中心和實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買到的、可用于酸奶制作的乳酸菌。(二)主要試劑配置1.含5腿ol/L草酸的MRS培養(yǎng)液基礎(chǔ)培養(yǎng)液與相應(yīng)的草酸糖溶液按1:1的體積配置混勻。各菌種相應(yīng)的含草酸MRS培養(yǎng)液的配方為保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌、嬰兒雙歧桿菌、副干酪乳桿菌、屎腸球菌、乳雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、乳酸乳球菌乳脂亞種A組草酸糖溶液+MRS肉湯；嗜熱鏈球菌B組草酸糖溶液+MRS肉湯。配置基礎(chǔ)培養(yǎng)液(MRS肉湯)將下列成分混合，調(diào)節(jié)pH至6.2~6.4，121。C高溫下滅菌15min，待冷卻后置于4。C冰箱中保存。酪蛋白胨io克牛肉膏io克酵母膏浸出液5克Tween80l克磷酸二氫鉀2克己酸鈉5克檸檬酸三氨2克7水硫酸鎂0.5克疏酸猛0.5克500ml草酸糖溶液按照下列的配比溶解各成分，配置好的草酸糖溶液在超凈臺(tái)中用0.46um的濾器過(guò)濾滅菌。A組草酸銨10mmol/L+葡萄糖40g/L;B組草酸銨10咖01/1>+葡萄糖4(^幾+己糖20g/L;2.配置草酸測(cè)定試劑草酸標(biāo)準(zhǔn)液一7jc草酸鉀1.0231克溶于蒸餾水至100ml(含無(wú)水草酸5mg/mL)，將儲(chǔ)備液稀釋100倍作為應(yīng)用液，置于4。C水箱中保存。麝香溴酚蘭指示劑0.lg麝香溴酚蘭+0.05mmol/LNaOH3.2ml+去離子2001111;或者0.lg麝香溴酚蘭溶于20.0ml100°/。乙醇中，徐徐加入蒸餾水80ml，不斷振蕩。曱基紅指示劑0.lg曱基紅+0.05mmol/LNaOH7.4ml+去離子水200ml。(三)實(shí)驗(yàn)步驟l.復(fù)蘇干燥冷凍的純菌種操作流程如下l)安瓿管開封用70%酒精棉球擦凈安瓿管，用火焰將安瓿管頂端加熱，滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂，用銼刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。2)菌林恢復(fù)培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上用無(wú)菌吸管吸取0.3~0.5mlMRS滅菌培養(yǎng)液，滴入各純菌種安瓿中，輕輕震蕩使冷凍干菌溶解呈懸浮狀。吸取全部細(xì)菌懸浮液，移入含MRS培養(yǎng)液的無(wú)菌試管中，37°C5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。如此反復(fù)培養(yǎng)23次，使細(xì)菌充分活化。2.調(diào)整細(xì)菌濃度取充分活化的10種菌液各lml，適當(dāng)稀釋后，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法分別進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，換算出各菌種活化后的濃度，然后加入適量的無(wú)菌生理鹽水，使各菌種的細(xì)菌濃度調(diào)整到3.0x1(T個(gè)/mL左右。顯微鏡細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法的具體操作如下l)配制美藍(lán)染色液:美藍(lán)0.025g，NaCl0.9g,KC10.042g,CaCl2.6H200.048g，NaHC030.02g,葡萄糖lg，蒸餾水100ml。2)制備細(xì)菌稀釋液取一管在液體培養(yǎng)液中培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)液，充分振蕩混勻后，取lml菌液，用無(wú)菌生理鹽水將其稀釋100倍(稀釋倍數(shù)視待測(cè)菌懸液濃度，一般稀釋到每1中格平均有15~20個(gè)細(xì)菌為宜)。3)活體染色取配置的美藍(lán)溶液O.9ml于試管中，再取上述稀釋后的菌液0.lml相混勻，染色lOmin后進(jìn)4亍計(jì)凄史。4)清洗計(jì)數(shù)板先用自來(lái)水沖洗，再用95%乙醇棉球輕輕擦洗，最后用吸水紙吸干(切勿在酒精燈上烘烤)，經(jīng)鏡檢確證計(jì)數(shù)板上無(wú)污物或粘附的微生物后才可使用。蓋玻片也應(yīng)用擦鏡紙擦亮。5)加菌液將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)室上。將染色后的菌懸液搖勻，用細(xì)口滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴，讓菌懸液充滿計(jì)數(shù)區(qū)，注意計(jì)數(shù)室內(nèi)不能有氣泡產(chǎn)生，再用鑷子輕壓蓋玻片，以免菌液太多將蓋玻片頂起而改變計(jì)凄t室的容積。并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。靜置片刻，待菌體自然沉降并穩(wěn)定后，開始計(jì)數(shù)。6)計(jì)數(shù)將血球計(jì)數(shù)板置載物臺(tái)上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到大方格網(wǎng)的位置(視野宜調(diào)暗些)，找到計(jì)數(shù)室后，將它移至視野中央，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。Helber細(xì)菌計(jì)數(shù)板由25個(gè)中格組成的，為了減少誤差，所選的中^f立置應(yīng)布點(diǎn)均勻，通常選取除四個(gè)角上4個(gè)中格及中央的1個(gè)中格(即80個(gè)小格)。分別計(jì)各中格中沒(méi)有染色的細(xì)菌。7)每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2~3次，求出每一個(gè)小格中細(xì)胞平均數(shù)(N)，按公式計(jì)算出每ml菌懸液中含有細(xì)胞數(shù)-每個(gè)小格中細(xì)胞平均數(shù)(N)x系數(shù)(K)x菌液稀釋倍數(shù)(d)3.接種細(xì)菌準(zhǔn)備90支寫上標(biāo)記的20ml無(wú)菌試管。將滅菌后的各菌種草酸培養(yǎng)液各取9份，每份9ml，分別加入各自的試管中。將細(xì)菌濃度為3.0xi07個(gè)/mL的各菌種菌液各取9份，每份lml，分別接種在各自相應(yīng)的培養(yǎng)液中。4.設(shè)空白對(duì)照組準(zhǔn)備9支寫上標(biāo)記的20ml無(wú)菌試管。取A組草酸培養(yǎng)液9份，每份9ml，分別加入試管中，每管再各加lml滅菌去離子水，作為空白對(duì)照組。5.培養(yǎng)前的細(xì)菌濃度測(cè)定從剛接種完細(xì)菌并充分振蕩混合后的各試管菌液中各取lml，適當(dāng)稀釋后，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法分別進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。6.培養(yǎng)前的草酸濃度測(cè)定從空白對(duì)照組各試管中分別取草酸培育液2ml，3000r/min離心10min后，每份取上清液lml，用鉻酸鉀氧化曱基紅催化光度法測(cè)量培養(yǎng)液中草酸的濃度，作為培養(yǎng)前的草酸濃度。具體操作如下鉻酸鉀氧化曱基紅催化光度法測(cè)定尿草酸取三支20.Oml試管，分別作樣品管C4w)、標(biāo)準(zhǔn)管(h)和空白管C^)。樣品管中加入用蒸餾水稀釋IO倍的混勻草酸培育液0.5ml，標(biāo)準(zhǔn)管中加入草酸標(biāo)準(zhǔn)工作液0.5ml，再各加蒸餾水1.0ml，空白管中加蒸餾水1.5ml，各管加溴麝香草酚藍(lán)指示劑1滴，滴加0.25隱ol/L氫氧化鈉或0.lmmol/L鹽酸使試管液成藍(lán)綠色，總量不超過(guò)0.5ml。加飽和硫酸釣2.0ml及95%乙醇至20.Oml,混勻，加蓋。于室溫;改置3小時(shí)，以2500r/min離心10min,傾去上清液，倒置于濾紙上吸凈殘液，加0.4mol/L鹽酸2.0ml〗吏沉淀溶解，分別轉(zhuǎn)移至三支10ml的比色管中，各加曱基紅2.Oml、1.0mmol/L4各酸鉀4.0ml，用水稀釋至刻度，搖勻，計(jì)時(shí)，15min時(shí)加1.0隱ol/L氧氯化鋯溶液1.0ml，搖勻，倒入lcm比色杯，以7jc作參比，SmartSpecPlus分光光度計(jì)在515nm處測(cè)吸光度。按下列公式計(jì)算草酸培育液中草酸含量C(騰l/L)=(Ui/)/dA)x0.017.培養(yǎng)將上述培養(yǎng)管置于5%0)2培養(yǎng)箱中，37。C培養(yǎng)72h。8.培養(yǎng)后的細(xì)菌濃度測(cè)定培養(yǎng)后的菌液每種取lml,適當(dāng)稀釋后，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法分別直接計(jì)數(shù)。9.培養(yǎng)后的草酸含量測(cè)定13將培養(yǎng)72h后的含菌培養(yǎng)液置于沸水中30min滅菌，3000r/min離心10min后，每份取上清液lml,用鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法測(cè)量培養(yǎng)液中草酸的濃度。具體操作同上。10.IO種乳酸菌在牛奶中繁殖能力的測(cè)定將10種乳酸菌分別等量接種于12%的脫脂乳中，42。C培養(yǎng)3h，然后置于室溫自然冷卻O.5h，再置入2。C冷藏箱內(nèi)培養(yǎng)10h。然后測(cè)定牛奶中乳酸菌的數(shù)量，計(jì)算10種乳酸菌在牛奶中單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的增殖倍數(shù)。將4種雙歧桿菌分別與嗜酸乳桿菌按照1:1的比例混合，接種于12%的脫脂乳中，同樣條件下培養(yǎng)后，測(cè)定牛奶中雙歧桿菌的數(shù)量，計(jì)算嗜酸乳桿菌對(duì)4種雙歧桿菌在牛奶中增殖能力的影響。11.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SAS軟件進(jìn)行分析，草酸農(nóng)度均值用3f土s表示，乳酸菌均數(shù)用G土s表示，草酸分解率用百分?jǐn)?shù)表示。組間均數(shù)比較用單因素方差分析。三、結(jié)果1.這10種乳酸菌都具有體外分解草酸能力，但差異明顯，72h草酸降解率從29.03%~0.23%不等，其中最強(qiáng)為乳雙歧桿菌，最弱為屎腸J求菌。這10種乳酸菌在含草酸的MRS培養(yǎng)液中培養(yǎng)72h，都有不同程度的增殖，而它們的增殖能力與其草酸降解能力無(wú)相關(guān)性。2.這10種乳酸菌在脫脂乳中單獨(dú)培養(yǎng)72h，都有明顯的增殖，從37.11倍~13.90倍不等，其中最強(qiáng)為乳雙歧桿菌，最差為青春雙歧桿菌；雙歧桿菌與嗜酸乳桿菌混合培養(yǎng)于脫脂乳時(shí)，嗜酸乳桿菌可促進(jìn)雙歧桿菌的生長(zhǎng)，其促生長(zhǎng)效果由高到低依次為長(zhǎng)雙歧桿菌>青春雙歧桿菌>乳雙歧桿菌〉嬰兒雙歧桿菌；篩選出的草酸降解能力和在脫脂乳中生長(zhǎng)能力俱佳的最優(yōu)菌種為乳雙歧桿菌。實(shí)施例2一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑制備(一)從裝菌種的試管中吸取乳雙歧桿菌0.3ml、嗜酸乳桿菌0.5ml、保加利亞乳桿菌0.lml和嗜熱鏈球菌0.3ml，混合裝入滅菌試管中。實(shí)施例3一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑制備(二)從裝菌種的試管中吸取乳雙歧桿菌0.4ml、嗜酸乳桿菌O.4ml、保加利亞乳桿菌0.2ml和嗜熱鏈3求菌0.2ml，混合裝入滅菌試管中。實(shí)施例4一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑制備(三)從裝菌種的試管中吸取乳雙歧桿菌0.5ml、嗜酸乳4干菌0.5ml、保加利亞乳桿菌0.lml和嗜熱鏈3求菌0.3ml，混合裝入滅菌試管中。'實(shí)施例5一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑制備(四)從裝菌種的試管中p及取乳雙歧桿菌0.3ml和嗜酸乳桿菌0.lml，混合裝入滅菌試管中。實(shí)施例6一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑制備(五)從裝菌種的試管中吸取乳雙歧桿菌0.5ml和嗜酸乳桿菌0.5ml，混合裝入滅菌試管中。實(shí)施例7一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑制備(六)從裝菌種的試管中吸取乳雙歧桿菌lml裝入含滅菌脫脂乳培養(yǎng)液的試管中。實(shí)施例8一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶制作及測(cè)試一、材料(一)實(shí)驗(yàn)器材1.儀器水浴鍋、冰箱、5%0)2培養(yǎng)箱、稱量天平、高壓滅菌鍋、攪拌器、電爐。2.器皿錐形瓶，量筒，吸管，試管，移液管，滴管。3.Helber細(xì)菌計(jì)數(shù)才反上海易擴(kuò)儀器有P艮公司提供。4.其他光學(xué)顯孩史鏡，擦鏡紙，吸水紙、150目紗布等。(二)實(shí)驗(yàn)試劑嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和乳雙歧桿菌的干燥冷凍純菌種(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)1.脫脂乳(光明牌脫脂奶粉，超市購(gòu)買)2.綿白糖(超市購(gòu)買，符合GB317《白砂糖》)3.酚酞、NaOH等(分析純上?；瘜W(xué)試劑公司)二、方法1.酸奶的制作和理化指標(biāo)測(cè)定1)菌種的活化先將實(shí)施例3獲得裝菌種試管口用火焰徹底殺菌，然后打開棉塞，用滅菌吸管從試管底部吸取1~2ml菌液，立即移入預(yù)先準(zhǔn)備好的滅菌脫脂乳培養(yǎng)液中，于42。C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待凝固后，再取出1~2ml,再照上述方法反復(fù)2~3移植活化后，用于調(diào)制母發(fā)酵劑。2)母發(fā)酵劑的制備將脫脂乳粉與水混合做成12%復(fù)原奶，分裝至250m1的三角瓶中，每并瓦100ml，105。C滅菌15min，冷卻至45。C左右，以無(wú)菌方式將充分活4匕的乳酸菌按4%(v/v)接種量分別接種,含有脫脂乳的三角瓶中，混勻后，于42。C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)發(fā)酵至凝固，凝固后，再反復(fù)接種23次，使乳酸菌保持一定的活力。置于6。C冰箱保存。3)生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備將脫脂乳粉與水混合做成12%復(fù)原奶，向其中添加8%蔗糖，攪拌溶解后，分裝至250ml的三角瓶中，每并瓦100ml。90。C5min滅菌，冷卻至45°C左右，按4%接種量(v/v)接種上述母發(fā)酵劑，于42。C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至凝乳。置于6。C冰箱保存。4)制作酸奶將脫脂乳粉與水混^^故成2L復(fù)原奶后，150目紗布過(guò)濾。然后加入8%的蔗糖，攪拌溶解后，150目紗布過(guò)濾，等量分裝在4個(gè)1L的滅菌平底燒瓶中，90。C滅菌5min，冷卻到42。C后，按2%、3%、4%和5%接種量(v/v)分別接種上述生產(chǎn)發(fā)酵劑。在接種的過(guò)程中，原料乳始終保持?jǐn)嚢锠顟B(tài)。每種接種濃度的牛奶經(jīng)過(guò)充分?jǐn)嚢韬?，迅速連續(xù)地灌入10只容量為100ml的清潔滅菌葡萄糖液體瓶中，每瓶裝50ml，于42°C發(fā)酵3h。冷卻，置于4。C儲(chǔ)存。5)酸度的測(cè)定酸石威滴定法吸取樣品10ml置于100ml三角燒并瓦中，加入20ml的蒸餾水，再加入0.5%酚酞指示劑2~3滴，搖勻，用0.lmol/L的NaOH溶液進(jìn)^f亍滴定，至孩i紅色，在2min內(nèi)不消失為終點(diǎn)。記錄所消4毛的NaOH溶液的體積(以ml為單位)。用以下公式計(jì)算滴定H:縫(。T)-消耗O.lmol/L的NaOH溶液毫升數(shù)x100x堿絲爾濃度6)感官評(píng)定取適量自制防石酸奶于50ml燒杯中，在自然光下觀察色澤和組織狀態(tài)，再聞氣味，然后用溫開水漱口，品嘗滋味。由10人分別對(duì)口感、滋味氣味及組織狀態(tài)進(jìn)行評(píng)定。表l酸奶感官評(píng)定評(píng)分表指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)々口感(30分)具有酸乳特有的細(xì)力鼠、潤(rùn)滑及稠厚感、爽口25~30較細(xì)膩、潤(rùn)滑，稠厚感不強(qiáng)或較為稀薄15-24較為粗糙，有沙粒狀或沙狀口感，或如飲水狀<15有發(fā)酵乳特有的滋氣味，酸甜適口，分為風(fēng)味調(diào)35~40風(fēng)味較淡，酸甜適口，勉強(qiáng)接受20-34風(fēng)味淡薄，氣味不協(xié)調(diào)，不能接受<20凝乳均勻，無(wú)雜質(zhì)，無(wú)或有少量乳清析出25-30凝乳較均勻，有乳清析出15~24凝乳不均勻，乳清嚴(yán)重析出<15滋p未和氣口未(40分)組織狀態(tài)(30分)7)最佳發(fā)酵劑接種量的確定將感官評(píng)定得分最高的酸奶的發(fā)酵劑接種量定為最佳發(fā)酵劑接種量《8)乳酸菌總量的測(cè)定用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。2.貯藏期酸奶的乳酸菌和晚復(fù)變化的測(cè)定將最佳發(fā)酵劑接種量制成的酸奶，貯藏于4。CM氐溫，分別在貯藏期的第0、3、6、9、12、15、18和21天測(cè)酸奶中乳酸菌和酸奶的酸度，同時(shí)以同一天生產(chǎn)的市售味全牌酸奶估文對(duì)照。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SAS軟件進(jìn)行分析，細(xì)菌數(shù)量均值用G士s表示。三、結(jié)果1.發(fā)酵劑不同接種量制成的4種酸奶的感官品質(zhì)評(píng)分值見表2和圖l。表2發(fā)酵劑接種量對(duì)酸奶感官品質(zhì)的影響接種量感官品質(zhì)評(píng)分2%較細(xì)膩、潤(rùn)滑，稀?。伙L(fēng)味較淡，甜味較強(qiáng)；凝乳較均勻，63.7±7.1較多乳清析出3%較細(xì)膩、潤(rùn)滑，、稠厚感尚可；風(fēng)味較淡，酸度不強(qiáng)；凝乳74.3±9.2**較均勻，有乳清析出4%細(xì)膩、潤(rùn)滑、稠厚感較強(qiáng)、爽口；有發(fā)酵乳的滋氣味，酸85.5±5.1**甜適口；凝乳均勻，無(wú)雜質(zhì)，僅有少量乳清析出5%較為粗糙，輕微沙粒狀口感；風(fēng)味較淡，偏酸；凝乳較均72.1±7.0*勻，有較多乳清析出'*:P<0.01，4%vs2%、3%、5%;3%vs2%*:P<0.05,5%vs2%當(dāng)接種量為4%時(shí)，感官評(píng)分最高，且與其他接種量時(shí)的感官評(píng)分的差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，接種量大于或小于4%都會(huì)使酸奶的感官品質(zhì)下降。因此，防石酸奶發(fā)酵劑的最佳接種量為4%。2.4%接種量制成的酸奶感官品質(zhì)的評(píng)價(jià)表面比較光滑，呈白色略偏黃色，新鮮，感官評(píng)分達(dá)85.5分，詳見表3。_表3感官評(píng)定評(píng)分結(jié)果_ii^感官評(píng)定i1^口感(30分)較細(xì)膩、潤(rùn)滑，稠厚感較強(qiáng)、爽口25.4土1.8分~滋味和氣味(40分)有發(fā)酵乳的滋氣味，酸甜適口35.4±1.9分組織狀態(tài)(30分)凝乳均勻，無(wú)雜質(zhì)，僅有少量乳清析24.7±2.5分_^_3.4%接種量制成的酸奶的^檢測(cè)結(jié)果酸度80.6°T,基本與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB2746)的要求相符合。4.4%接種量制成的酸奶的微生物指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果乳酸菌總量約為3.7x1(T個(gè)/mL，完全達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求。5.貯藏期內(nèi)乳酸菌和酸度的變化4%接種量制成的酸奶的乳酸菌數(shù)先逐日增加，第9天時(shí)達(dá)峰，為6.4xl(T個(gè)/mL,以后逐漸減少，到第21天貯藏期結(jié)束日，菌數(shù)為最低，但仍比貯藏期開始日多了0.4xio7個(gè)/mL。對(duì)照組味全牌酸奶的乳酸菌數(shù)也是先增后減，第6天達(dá)峰，為6.7xl(^個(gè)/mL,到第21天貯藏期結(jié)束日，菌數(shù)最低，比貯藏期開始日還少0.3x1(T個(gè)/mL。貯藏期內(nèi)兩組酸奶的酸度都隨著貯藏時(shí)間的增加而增加，自制防石酸奶在貯藏期0~6天酸度增加幅度明顯大于6~21天，在4°C下貯藏21天，酸度增加了17.2°T;對(duì)照組也有相同現(xiàn)象，但增幅更大，達(dá)26.8。T,比前者多增加9.6°T(表4，圖2，圖3，圖4,圖5)。_表4貯藏期酸奶中乳酸菌數(shù)的變化_儲(chǔ)存時(shí)自制防石酸奶^市售味全牌酸奶間-;--/、活菌數(shù)(x107縫(°T)活菌數(shù)(xl07酸度(°T)(J個(gè)/mL)_個(gè)/mL)_53.7±1.080.6±13.94.1±1.176.8±11.2~20<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注酸奶貯藏溫度為4。C:貯藏期為21天。實(shí)施例9自制防石酸奶與市售酸奶體外分解草酸能力的比較一、材料(一)實(shí)驗(yàn)器材1.滅菌平板，5%0)2培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋，稱量天平，電爐，錐形瓶，吸管。2.721分光光度計(jì)(廈門分析儀器廠)3.Helber細(xì)菌計(jì)數(shù)板上海易擴(kuò)儀器有限公司(二)實(shí)驗(yàn)試劑1.市售酸奶出廠第二天的180g裝的塑罐裝味全牌酸奶，超市購(gòu)買，4'C水箱中儲(chǔ)存，在7天儲(chǔ)存期內(nèi)使用。2.自制防石酸奶3.草酸銨、葡萄糖、已糖:4.一水草酸鉀5.麝香溴酚蘭自行配置)(實(shí)施例7按4%接種量制成的酸奶)(分析純上?；瘜W(xué)試劑公司)(分析純上海化學(xué)試劑公司)(上?；瘜W(xué)試劑公司提供原材料，6.曱基紅指示劑(上?；瘜W(xué)試劑公司提供原材料，自行配置)7.鉻酸鉀(分析純上?；瘜W(xué)試劑公司)二、方法1.滅菌奶的滅菌方法出廠第二天的塑罐裝味全牌酸奶和制成第二天的防石酸奶，105。C滅菌15min，4。C冰箱中儲(chǔ)存，在7天儲(chǔ)存期內(nèi)使用。2.配置1O隨ol/L的草酸糖溶液草酸銨1Ommol/L+葡萄糖40g/L。配制好的草酸糖溶液在超凈臺(tái)用0.46um的濾器過(guò)濾滅菌。3.取45支20ml的滅菌試管，分成5組，分別為活菌防石酸奶組、活菌味全牌酸奶組、滅菌防石酸奶組、滅菌味全牌酸奶組和空白對(duì)照組，每組9支，在無(wú)菌操作臺(tái)中，分別向各組的試管中加入相應(yīng)的活菌防石酸奶、活菌味全牌酸奶、滅菌防石酸奶、滅菌味全牌酸奶和無(wú)菌生理鹽水，每支試管5ml。4.在無(wú)菌操作臺(tái)上，向上述試管中各加無(wú)菌10mmol/L的草酸糖溶液5ml，混勻，再向各試管中滴加2-3ml的滅菌石蠟油，加蓋無(wú)菌膠塞。5.培養(yǎng)前細(xì)菌計(jì)數(shù)從活菌味全牌酸奶組和活菌防石酸奶組的各試管中分別取液體lml，適當(dāng)稀釋后，用顯樣L鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)細(xì)菌，作為培養(yǎng)前的細(xì)菌濃度。6.培養(yǎng)前草酸含量測(cè)定從空白對(duì)照組各試管中分別取液體2ml，3000r/min離心10min后，每份取上清液lml，用鉻酸鉀氧化曱基紅催化光度法測(cè)量培養(yǎng)液中草酸的濃度，作為培養(yǎng)前的草酸濃度。7.培養(yǎng)將上述各試管置于5%0)2培養(yǎng)箱中，37。C培養(yǎng)3天。8.培養(yǎng)后細(xì)菌計(jì)數(shù)從培養(yǎng)72h后的活菌市售酸奶組和活菌防石酸奶組各試管中，分別取液體lml，適當(dāng)稀釋后，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)細(xì)菌，作為培養(yǎng)后的細(xì)菌濃度。9.培養(yǎng)后草酸含量測(cè)定將培養(yǎng)72h后的各試管置于沸水中30min滅菌，3000r/min離心10min后，每份取上清液lml,用4各酸鉀氧化曱基紅催化光度法測(cè)量培養(yǎng)液中草酸的濃度。10.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SAS軟件分析，草酸濃度均值用3f土s表示，乳酸菌均數(shù)用G士s表示，草酸分解率用百分?jǐn)?shù)表示。組間均數(shù)比較用單因素方差分析。三、結(jié)果1.自制防石酸奶與市售酸奶的分解草酸能力結(jié)果見表5、圖6和圖表5酸奶中草酸濃度在培養(yǎng)前后的變化(i±smmol/L)_培養(yǎng)前培養(yǎng)72h后72h草酸總~~酸奶中細(xì)菌分解草酸奶中細(xì)組別(A)(B)#分解率(％)酸率(％)菌分解草(A-B)/A(對(duì)照組B-實(shí)驗(yàn)組酸量B)/對(duì)照組B對(duì)照組B-實(shí)驗(yàn)組B*:P<0.05培養(yǎng)后vs培養(yǎng)前#:培養(yǎng)72h后各組草酸濃度差異，P>Q.05培養(yǎng)后的草酸濃度，五個(gè)組之間雖有一定的差異，但是這種差異在4.92±0."4.78±0."4.92±0."4.76±0.414.92±0.374.71±0.444.92±0."4.50±0.45*4.92±0."4."±0.50*2.83.34.38.513.65,911.10,280.53白照菌售菌制菌售菌制空對(duì)滅、f滅自活，活自23統(tǒng)計(jì)學(xué)上尚未達(dá)到顯著意義(P〉0.05)。兩個(gè)活菌酸奶組的草酸含量降幅均超過(guò)空白對(duì)照組和相應(yīng)的滅菌對(duì)照組，其中活菌防石酸奶組的草酸含量'比空白對(duì)照組減少0.53mmol/L，比滅菌防石酸奶組減少0.46mmol/L;活菌p未全牌酸奶組的草酸含量比空白對(duì)照組減少0.28mmol/L,比滅菌p木全牌酸奶組減少0.26mmol/L,活菌防石酸奶組的草酸濃度降幅超過(guò)活菌味全牌酸奶1.9倍。2.兩個(gè)活菌酸奶組乳酸菌數(shù)量的變化經(jīng)過(guò)72h培養(yǎng)，防石酸奶和味全牌酸奶的乳酸菌數(shù)量均比培養(yǎng)前明顯減少(P<0.05),其中防石酸奶的乳酸菌從21x1()6個(gè)/mL降為11x1()6個(gè)/mL,降幅為47.6%,味全牌酸奶的乳酸菌由25x1()6個(gè)/mL降至6x10'個(gè)/mL,降幅達(dá)76.0%(表6和圖8)。培養(yǎng)72h后，防石酸奶中剩余的乳酸菌數(shù)量明顯高于味全牌酸奶(P-0.0192)。表6兩個(gè)活菌酸奶組培養(yǎng)前后的細(xì)菌數(shù)量變化(±s個(gè)/mLx106)組別培養(yǎng)前細(xì)菌濃度(A)培養(yǎng)72h細(xì)菌濃度(B)細(xì)菌數(shù)減少率(％)(x1()6個(gè)/inL)(x1()6個(gè)/mL)(A-B)/A防石酸奶21±811±5*47,6市售酸奶25±106±3*76.0*:各組培養(yǎng)前后之差異，P<0.05':防石酸奶與市售酸奶培養(yǎng)72h后的組間差異，P<0.05實(shí)施例IO自制防石酸奶與市售酸奶對(duì)大鼠尿草酸排泄量影響的比較一、材料(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康清潔級(jí)成年雄性SD大鼠(復(fù)旦大學(xué)實(shí)一驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供)50只，體重180200g/只。(二)實(shí)驗(yàn)器材1.大鼠代謝籠(蘇州實(shí)驗(yàn)器械有P艮公司)2.721分光光度計(jì)(廈門分析儀器廠)3.IVC大鼠祠養(yǎng)籠(上海紹豐實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司)(三)實(shí)驗(yàn)試劑1.活菌市售酸奶出廠第2天的180g裝的塑罐裝味全牌酸奶，超市購(gòu)買，4。C冰箱中儲(chǔ)存，卩艮7天儲(chǔ)存期內(nèi)使用。2.滅菌市售酸奶出廠第2天的180g裝塑罐裝味全牌酸奶，超市購(gòu)買，105。C高溫滅菌15分鐘，4。C冰箱中儲(chǔ)存，限7天儲(chǔ)存期內(nèi)使用。3.0.9%生理鹽水(上海市華源長(zhǎng)富藥業(yè)有限^^司)4.自制防石酸奶(實(shí)施例7按4%接種量制成的酸奶)5.滅菌自制防石酸奶自制的防石酸奶，121。C高溫滅菌15分鐘，4'C冰箱中儲(chǔ)存，限7天儲(chǔ)存期內(nèi)使用。二、實(shí)-驗(yàn)方法1.動(dòng)物分組選取健康SD雄性大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組情況見圖9。2.大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，喂正常鼠飼料，飲自來(lái)水。3.第4天開始灌喂，灌喂物見后面的實(shí)—驗(yàn)動(dòng)物分組情況。4.灌喂前1天、灌喂期內(nèi)每隔4天用代謝籠分別收集各鼠24h尿液，用濃HC1酸化至pH-l.0左右，置于冰箱保存。5.灌喂前1天、灌喂期內(nèi)每隔4天測(cè)大鼠體重的變化。6.用鉻酸鉀氧化曱基紅催化光度法測(cè)定鼠24h尿液草酸排泄量。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SAS軟件進(jìn)行分析，草酸濃度均值用i士s表示。組間均數(shù)比較用單因素方差分析。相關(guān)性檢驗(yàn)用SAS軟件中的相關(guān)性檢驗(yàn)方法。三、結(jié)果1.灌喂期間，各組大鼠的24h尿草酸排泄量都有所上升。其中，三個(gè)對(duì)照組大鼠尿草酸排泄量走勢(shì)的組間差異不大，且無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。防石酸奶灌喂組和味全牌酸奶灌喂組大鼠尿草酸排泄量的上升走勢(shì)明顯弱于三個(gè)對(duì)照組，其與各自滅菌對(duì)照組的差異分別于8天后和12天后具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；防石酸奶組尿草酸排泄量上升走勢(shì)明顯緩于味全牌酸奶組(圖10),其差異在灌胃第16天后具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，防石酸奶組大鼠24小時(shí)尿草酸排泄量比味全牌酸奶組低12.5%，其尿草酸減排效果比后者提高66.5%，是后者的1.7倍。2.各組大鼠體重變化情況五組大鼠的體重均隨時(shí)間的遞增而增加，在灌喂期間，大鼠體重的組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05)(表7，圖ll)。表7大鼠體重變化(？±sg)灌喂天數(shù)組別N~-■-048121620231±10.89.2195±229±10.311.4190±236±10.611.9248±270±14.114.32斗3±2^±10.513.2250±2G1土14.617.4292±307±12.115.4284±299±11.814.6279±304±10.817.3ooo111對(duì)市自白照菌售菌制空滅滅26196±237±248±268±288±306±13.211.112.414.312.917.010197±234±253±273±293±309±11.510.116.515.410.617.3注各組之間體重變化沒(méi)有明顯的差異，P〉0.053.大鼠體重變化與24h尿草酸排泄量變化的關(guān)系五組大鼠的體重與24h尿草酸排泄量均同步增加(表8),其相關(guān)系數(shù)r為0.97-0.99(P<0.01)，呈強(qiáng)正相關(guān)。灌喂活菌酸奶(市售酸奶和自制防石酸奶)可抑制大鼠尿草酸排泄量隨體重增加而增加的幅度，防石酸奶的這種抑制作用明顯強(qiáng)于味全牌酸奶(圖12)。表8大鼠體重與24h尿草酸排泄量的相關(guān)性空白對(duì)照滅菌市售滅菌自制活菌市售活菌自制0.990.990.980.980.97P0.00020.00010.00070.00040.0014r:相關(guān)系數(shù)菌售菌制活活權(quán)利要求1、一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑，其特征在于發(fā)酵劑包含乳雙歧桿菌。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵劑，其特征在于發(fā)酵劑還包含嗜酸乳桿菌。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的發(fā)酵劑，其特征在于乳雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的體積比為l-3:1-3。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵劑，其特征在于乳雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的體積比為2:2。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的發(fā)酵劑，其特征在于發(fā)酵劑含有的乳雙歧桿菌與可食用菌組合成酸奶發(fā)酵劑在制作預(yù)防泌尿系統(tǒng)結(jié)石的酸奶中的應(yīng)用。6、一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶，包括牛奶、蔗糖、發(fā)酵劑，其特征在于發(fā)酵劑，由乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成，其體積比為3-5:3-5:1-3:1-3。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的酸奶，其特征在于乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的體積比為4:4:2:2。8、權(quán)利要求6或7所述的酸奶在預(yù)防泌尿系統(tǒng)結(jié)石中應(yīng)用。9、一種預(yù)防尿結(jié)石酸奶的制備方法，該方法包括以下步驟(1)、菌種的活化所述的菌種由乳雙歧^T菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈j^菌組成，其體積比為3-5:3-5:1-3:l-3;(2)、母發(fā)酵劑的制備將步驟(1)得到的菌種按2-5%(v/v)接種量接種到牛奶中；(3)、生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備將步驟(2)得到的母發(fā)酵劑按2-5%(v/v)接種量接種到由牛奶和蔗糖做成的溶液中；(4)、制作酸奶將步驟(3)得到的生產(chǎn)發(fā)酵劑按2-5%(v/v)接種量接種到由牛奶和蔗糖做成的溶液中，分裝、發(fā)酵、冷卻、成熟，制成酸奶。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于步驟(l)中所述的菌種由乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成，其體積比為4:4:2:2。11、根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于步驟(2)、步驟(3)和步驟(4)中接種量為4%(v/v)。全文摘要本發(fā)明涉及一種發(fā)酵劑，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑、酸奶及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶發(fā)酵劑，其中發(fā)酵劑包含乳雙歧桿菌。一種預(yù)防尿結(jié)石的酸奶，包括牛奶、蔗糖、發(fā)酵劑，其中發(fā)酵劑，由乳雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成，其體積比為3-5∶3-5∶1-3∶1-3。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在預(yù)防尿結(jié)石的酸奶兼具多種明顯的保健功能和藥食同源的特性，服食方便，價(jià)廉而無(wú)副作用，患者依從度高。本發(fā)明為臨床提供一種非常適合患者長(zhǎng)期服食的結(jié)石預(yù)防良品。文檔編號(hào)A23C9/12GK101601424SQ20081003893公開日2009年12月16日申請(qǐng)日期2008年6月13日優(yōu)先權(quán)日2008年6月13日發(fā)明者張士青,李建濤,趙樹田,欣顧申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第三人民醫(yī)院