夏枯草指紋圖譜的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法，采用超高效液相色譜進行檢測，包括以下步驟：供試品溶液的制備：將夏枯草粉碎，精密稱量，加60%-100%的甲醇溶液，超聲溶解，放涼，定容，搖勻，過濾，得濾液，作為供試品溶液；對照品溶液的制備：精密稱量迷迭香酸對照品，加60%-100%的甲醇溶液溶解，作為對照品溶液；分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入超高效液相色譜儀中進行測定，得由15個峰構成的夏枯草指紋圖譜。本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人的大量實驗和研究，得出夏枯草指紋圖譜的檢測方法，并確定了制備供試品溶液和對照品溶液，及超高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)；所述檢測方法結果準確，精密度高，且節(jié)約試劑。
【專利說明】夏枯草指紋圖譜的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及藥材檢測領域，特別是涉及夏枯草指紋圖譜的檢測方法。
【背景技術】
[0002]夏枯草為唇形目唇形科植物，其性寒，味甘、辛、微苦，具有清泄肝火、散結消腫、清熱解毒、祛痰止咳、涼血止血的功效，適用于淋巴結核、甲狀腺腫、乳癰、頭目眩暈、口眼歪斜、筋骨疼痛、肺結核、血崩、帶下、急性傳染性黃疸型肝炎及細菌性痢疾等?，F(xiàn)代藥理研究表明，夏枯草還具有降低血壓的作用。
[0003]目前，市場中存在一些已經(jīng)喪失夏枯草原本形態(tài)的夏枯草粉末和種類繁多的含有夏枯草的復方藥，而現(xiàn)有技術中對于檢測這些物質是否為夏枯草或是否含有夏枯草的方法較為復雜，且結果誤差較大；另外，雖然夏枯草可全草使用，但果穗的藥效優(yōu)于其他部位，而目前對于區(qū)分果穗和其他部位的檢測方法卻相對較少。
【發(fā)明內容】

[0004]基于此，本發(fā)明的目的在于提供一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法。
[0005]解決上述技術問題的具體技術方案如下:
[0006]一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法，采用超高效液相色譜進行檢測，包括以下步驟:
[0007](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎，精密稱量，加體積分數(shù)為60%_100%的甲醇水溶液，超聲溶解，放涼，定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，所述供試品溶液中夏枯草的濃度為0.005-0.2g/mL ；
[0008](2)對照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對照品，加體積分數(shù)為60%_100%的甲醇水溶液溶解，作為對照品溶液，所述對照品溶液中迷迭香酸的濃度為14-16 μ g/mL;
[0009](3)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入超高效液相色譜儀中進行測定，得由15個峰構成的夏枯草指紋圖譜；
[0010]色譜條件為:色譜柱=C18柱，檢測器:紫外檢測器，流速0.2-0.6mL.mirT1，檢測波長250-380nm，柱溫20_40°C，進樣量1_10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min，(5-6)%乙腈一(5-6)%乙腈，5 — 15min，(5-6)%乙腈—(14-16)% 乙臆，15 — 30min, (14-16)% 乙臆一(44-46)% 乙臆。
[0011]在其中一些實施例中，步驟⑶所述色譜條件中:流速0.25-0.6mL ?mirT1,檢測波長250-260nm，柱溫20_40°C，進樣量1_3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈,5 — 15min, 5%乙腈一15%乙腈，15 — 30min,15%乙腈一45%乙腈。
[0012]在其中一些實施例中，步驟(1)中所述甲醇水溶液中甲醇的體積分數(shù)為74-76%。
[0013]在其中一些實施例中，步驟(1)中所述超聲處理的功率為240-260W，頻率30-35kHz，時間為 25-35min。[0014]在其中一些實施例中，步驟(I)中所述供試品溶液中夏枯草的濃度為
0.005-0.01g/mL。
[0015]在其中一些實施例中，步驟(2)中所述對照品溶液中迷迭香酸的濃度為15 μ g/
mLo
[0016]在其中一個實施例中，步驟⑴中所述粉碎的粒度為55-65目。
[0017]本發(fā)明所述夏枯草指紋圖譜的檢測方法具有以下優(yōu)點和有益效果:
[0018]本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人的大量實驗和研究，以迷迭香酸為主要指標得出夏枯草指紋圖譜的檢測方法，并確定了制備供試品溶液和對照品溶液，及超高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)；所述檢測方法可快速準確地鑒定出夏枯草，還可區(qū)分夏枯草果穗和其他部位，有效的防止了用夏枯草其他部位冒充果穗入藥；該方法結果準確，精密度高，且節(jié)約試劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為實施例4中共有模式指紋圖譜；
[0020]圖2為實施例4中不同產(chǎn)地夏枯草的指紋圖譜；
[0021]圖3為實施例4中對照品溶液的色譜圖。
【具體實施方式】
[0022]以下將結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0023]實施例1
[0024]一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法，包括以下步驟:
[0025](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎過60目篩，精密稱量0.5g，置于IOOmL三角瓶中，加體積分數(shù)為75%的甲醇水溶液，超聲溶解(功率250W，頻率33kHz)，30min，放涼，定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0026](2)對照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對照品，加體積分數(shù)為75%的甲醇溶液溶解，制成每ImL中含迷迭香酸15 μ g的溶液，作為對照品溶液；
[0027](3)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入超高效液相色譜儀中，測定，得夏枯草的指紋圖譜，(其15個共有峰，經(jīng)指認7號峰為迷迭香酸)；
[0028]色譜條件為:色譜柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，檢測器:紫外檢測器，流速0.4mL.min—1，檢測波長254nm,柱溫30°C，進樣量I μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5 — 15min, 5%乙腈—15% 乙臆，15 — 30min, 15% 乙臆一45% 乙臆。
[0029]實施例2
[0030]一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0031](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎過55目篩，精密稱量lg，置于IOOmL三角瓶中，加體積分數(shù)為60%的甲醇水溶液，超聲溶解(功率240W，頻率30kHz)，25min,放涼，定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0032](2)對照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對照品，加體積分數(shù)為60%的甲醇溶液溶解，制成每ImL中含迷迭香酸14 μ g的溶液，作為對照品溶液；
[0033](3)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入超高效液相色譜儀中，測定，得夏枯草的指紋圖譜(其15個共有峰，經(jīng)指認7號峰為迷迭香酸)；
[0034]色譜條件為:色譜柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，檢測器:紫外檢測器，流速0.2mL.min—1，檢測波長250nm,柱溫20°C，進樣量3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5 — 15min, 5%乙腈—14% 乙臆，15 — 30min, 14% 乙臆一44% 乙臆。
[0035]實施例3
[0036]一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0037](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎過65目篩，精密稱量2g，置于IOmL三角瓶中，加甲醇，超聲溶解(功率240W，頻率30kHz)，35min,放涼，定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0038](2)對照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對照品，加甲醇溶解，制成每ImL中含迷迭香酸16 μ g的溶液，作為對照品溶液；
[0039](3)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入超高效液相色譜儀中，測定，得夏枯草的指紋圖譜(其15個共有峰，經(jīng)指認7號峰為迷迭香酸)；
[0040]色譜條件為:色譜柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，檢測器:紫外檢測器，流速0.6mL.mirT1,檢測波長380nm，柱溫40°C，進樣量10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 6%乙腈一6%乙腈，5 — 15min, 6%乙腈—16% 乙臆，15 — 30min, 16% 乙臆一46% 乙臆。
[0041]實施例4夏枯草指紋圖譜的構建方法
[0042]一、實驗目的
[0043]夏枯草指紋圖譜的構建方法。
[0044]二、實驗方法
[0045]1、實驗試劑盒藥材
[0046]甲醇(色譜純，TEDIA公司)，乙腈(色譜純，TEDIA公司)，水為哇哈哈純凈水，磷酸(色譜純，北京化工廠)。
[0047]對照品迷迭香酸(中國食品藥品檢定研究院，批號:111871-201102)；
[0048]不同產(chǎn)地的夏枯草藥材13批，均由湖南中醫(yī)藥大學生藥學教研室潘清平教授鑒定夏枯草為唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。
[0049]表I夏枯草藥材來源
[0050]
【權利要求】
1.一種夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，采用超高效液相色譜進行檢測，包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎，精密稱量，加體積分數(shù)為60%-100%的甲醇水溶液溶解，超聲處理，放涼，定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，所述供試品溶液中夏枯草的濃度為0.005-0.2g/mL ； (2)對照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對照品，加體積分數(shù)為60%-100%的甲醇水溶液溶解，作為對照品溶液，所述對照品溶液中迷迭香酸的濃度為14-16 μ g/mL ； (3)分別精密吸取步驟(I)所述供試品溶液和步驟(2)所述對照品溶液，注入超高效液相色譜儀中進行測定； 色譜條件為:色譜柱=C18柱，檢測器:紫外檢測器，流速0.2-0.6mL.mirT1，檢測波長250-380nm，柱溫20_40°C，進樣量1_10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min，(5-6)%乙腈一(5-6)%乙腈，5 — 15min，(5-6)%乙腈—(14-16)% 乙臆，15 — 30min, (14-16)% 乙臆一(44-46)% 乙臆。
2.根據(jù)權利要求1所述的夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟(3)所述色譜條件中:流速0.25-0.6mL.min—1，檢測波長250_260nm，柱溫20-40°C，進樣量1-3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5— 15min, 5% 乙臆一15% 乙臆，15 — 30min, 15% 乙臆一45% 乙臆。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述甲醇水溶液中甲醇的體積分數(shù)為74-76%。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述供試品溶液中夏枯草的濃度為0.005-0.01g/mL。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中所述對照品溶液中迷迭香酸的濃度為15μ g/mL。
6.根據(jù)權利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述超聲處理的功率為240-260W，頻率30-35kHz，時間為25_35min。
7.根據(jù)權利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述粉碎的粒度為55-65目。
【文檔編號】G01N30/02GK103926344SQ201410158067
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月18日 優(yōu)先權日:2014年4月18日
【發(fā)明者】蔣莉娟, 姚江雄, 許招懂, 方鐵錚, 林麗美, 黎志堅 申請人:廣州白云山星群(藥業(yè))股份有限公司