專利名稱：：食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法。技術(shù)背景目前，農(nóng)獸藥的廣泛應(yīng)用，在提高農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量的同時(shí)，其殘留對(duì)人類健康的影響也越來越引起人們的關(guān)注，因此世界各國(guó)都在提高食品中有關(guān)農(nóng)獸藥的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，如2006年6月日本施行的《食品中農(nóng)用化學(xué)品殘留肯定列表制度》中大多數(shù)農(nóng)獸藥殘留限量值為10p^kg。目前GC-MS(氣相色譜一質(zhì)譜)技術(shù)是國(guó)內(nèi)外最常用的分析農(nóng)獸藥殘留量的方法，但這些方法大多檢測(cè)靈敏度不足，或前處理步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)如以國(guó)標(biāo)方法、日本通知法等前處理包括多步液液分配和減壓濃縮過程的方法為例，完成整個(gè)前處理過程約需56小時(shí)；或分析成本高，不能滿足多種食品快速、準(zhǔn)確測(cè)定的要求如已知的使用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的后期數(shù)據(jù)處理方法，每分析一種基質(zhì)就必須要重新配制該種基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)于需要完成大量不同基質(zhì)中農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)任務(wù)的人員來說工作量巨大、實(shí)驗(yàn)技能要求高、數(shù)據(jù)處理繁瑣，無法滿足一線實(shí)驗(yàn)人員(如進(jìn)出口商檢部門)的快速、多殘留分析檢測(cè)要求。
發(fā)明內(nèi)容為彌補(bǔ)上述缺陷，本申請(qǐng)的目的是提供一種食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法，該方法前處理簡(jiǎn)單快速、分析成本低，分析時(shí)間短，靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)獸藥多殘留技術(shù)的要求，適用于食品中多種農(nóng)獸藥殘留的快速靈敏檢測(cè)。一種食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法，包括以下步驟(1)基質(zhì)前處理稱取10g20g的食品試樣清洗后，加入約50mL乙腈，用高速組織均質(zhì)器在約9500r/min勻漿，提取約2min后抽濾，向殘?jiān)屑尤爰s20mL乙腈再次勻漿提取、抽濾，將兩次抽濾得到的濾液合并，用乙腈定容至100mL，待凈化；取lmL提取液通過C！8(30mg)柱，用lmL80%乙腈/水溶液洗脫，收集全部流出液，向其中加入2mL水稀釋后通過Ci8(50mg)柱，向流出液中加入20。/。NaCl水溶液20mL后再次通過上面所述的C18(50mg)柱，棄去流出液；將<:18(50mg)柱抽濾干燥2min，然后連接GCS(30mg)/PSA(30mg)柱，用lmL甲苯/丙酮/正己垸(體積比1/3/6)混合溶液洗脫；(2)添加分析保護(hù)劑向上述洗脫液中添加配制好的分析保護(hù)劑溶液20pL，所述分析保護(hù)劑溶液為聚乙二醇和橄欖油的丙酮溶液，其中聚乙二醇和橄欖油的用量為進(jìn)入氣相色譜系統(tǒng)的絕對(duì)進(jìn)樣量分別為聚乙二醇200800ng、橄欖油8.5~25.5用30%丙酮/正己烷溶液定容至l.OmL;(3)進(jìn)樣上機(jī)檢測(cè)取上述定容后的溶液2550pL進(jìn)樣，通過大體積進(jìn)樣一氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀上機(jī)檢測(cè)；質(zhì)譜檢測(cè)方式為選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)，每個(gè)化合物選擇三個(gè)特征離子進(jìn)行定性及定量；(4)數(shù)據(jù)處理用添加上述分析保護(hù)劑溶液的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)待測(cè)食品基質(zhì)中的多殘留農(nóng)獸藥進(jìn)行定量。本發(fā)明的方法，其中所述步驟(1)中的食品試樣為糧食谷物類時(shí)，取10g加20ml水浸泡15min后再加入乙腈；所述食品試樣為蔬菜水果時(shí)，取20g直接加入乙腈。本發(fā)明的方法，其中所述步驟(2)中的聚乙二醇優(yōu)選為PEG300。本發(fā)明的方法，其中所述步驟(2)中聚乙二醇和橄欖油的用量為進(jìn)入氣相色譜系統(tǒng)的絕對(duì)進(jìn)樣量分別優(yōu)選為聚乙二醇400ng、橄欖油17嗎。本發(fā)明的方法，其中所述步驟(3)中的氣相色譜柱為毛細(xì)管色譜柱DB—5MSGOmX0.25mmi.d.X0.25ntn);載氣為氦氣，柱流速為lmL/min;色譜柱升溫程序?yàn)槌跏紲囟?CTC,保持4min,以10'C/min速率升溫至150°C，保持2min，再以1.5°C/min升溫至225°C，保持2min，再以20°C/min升溫至280°C，保持9min。本發(fā)明的方法，其中所述步驟(3)中的色譜一質(zhì)譜接口溫度為280'C，離子源溫度200°C，EM電壓1.15kV。本發(fā)明食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法，在GC/MS儀器檢測(cè)靈敏度不變的情況下，采用大體積進(jìn)樣法，進(jìn)樣體積由原來的l^增加到25pL甚至更高。因此在達(dá)到與常規(guī)方法相同檢測(cè)靈敏度、保持絕對(duì)進(jìn)樣量相同的條件下，大體積進(jìn)樣法可以大大減少前處理時(shí)的樣品處理量。前處理樣品的減少，原來的一些試驗(yàn)步驟可以省略，本方法省略了液液分配、減壓濃縮等步驟，從而大大縮短前處理時(shí)間、提高分析檢測(cè)效率、降低實(shí)驗(yàn)成本。常規(guī)方法如國(guó)標(biāo)方法、日本通知法等包括多步液液分配和減壓濃縮過程，完成整個(gè)前處理過程約需56小時(shí)；大體積進(jìn)樣法由于使用微型固相萃取柱，因此完成整個(gè)前處理過程只需5060分鐘。同時(shí)該方法分析成本低，分析時(shí)間短，用添加分析保護(hù)劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)多種蔬菜水果谷物基質(zhì)中的多殘留農(nóng)獸藥進(jìn)行定量。此方法好處在于可以用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)各種基質(zhì)中農(nóng)獸藥的殘留量進(jìn)行定量、適用性強(qiáng)，而不必每分析一種基質(zhì)就必須要重新配制該種基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)獸藥多殘留技術(shù)的要求，適用于食品中多種農(nóng)獸藥殘留的快速靈敏檢測(cè)。圖1為實(shí)施例2的檢測(cè)結(jié)果圖。具體實(shí)施方式為進(jìn)一步說明本發(fā)明，結(jié)合以下實(shí)施例進(jìn)行具體闡述實(shí)施例l:本發(fā)明的方法對(duì)蘋果基質(zhì)的檢測(cè)方法及結(jié)果(1)方法步驟稱取蘋果20g，再加入50mL乙腈，用高速組織均質(zhì)器在9500r/min勻漿，提取2min后抽濾，向殘?jiān)屑尤?0mL乙腈再次勻漿提取、抽濾。將兩次得到的溶液合并，用乙腈定容至100mL，待凈化。取lmL提取液通過d8(30mg)柱，用lmL80。/。乙腈/水溶液洗脫，收集全部流出液，向其中加入2mL水稀釋后通過ds(50mg)柱。向流出液中加入20%NaCl水溶液20mL后再次通過上面的ds(50mg)柱，棄去流出液。將C18(50mg)柱抽濾千燥2min，然后連接GCS(30mg)/PSA(30mg)柱，用lmL甲苯/丙酮/正己烷(1/3/6)混合溶液洗脫，向洗脫液中添加配制好的分析保護(hù)劑溶液2(^L，所述分析保護(hù)劑溶液為聚乙二醇和橄欖油的丙酮溶液，其中聚乙二醇和橄欖油的用量為進(jìn)入氣相色譜系統(tǒng)的絕對(duì)進(jìn)樣量分別為聚乙二醇400ng、橄欖油17嗎；用30%丙酮/正己烷溶液定容至l.OmL;供大體積進(jìn)樣一氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀上機(jī)檢測(cè)。(2)檢測(cè)條件進(jìn)樣量2550pL。毛細(xì)管色譜柱DB—5MSG0mX0.25mmi.d.X0.25pm)。載氣(氦氣)柱流速lmL/min。色譜柱升溫程序?yàn)槌跏紲囟?(TC，保持4min，以10°C/min升溫至150°C，保持2min，以1.5。C/min升溫至225。C，保持2min，再以20°C/min升溫至280°C，保持9min。色譜—質(zhì)譜接口溫度28(TC，離子源溫度20(TC，EM電壓1.15kV。質(zhì)譜檢測(cè)方式為選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)，每個(gè)化合物選擇三個(gè)特征離子進(jìn)行定性及定量。(3)使用設(shè)備-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電子轟擊(EI)電離源；大體積進(jìn)樣器；MS2渦旋混和器(德國(guó)IKA);PT-1300D高速組織勻漿器(瑞士KINEMATICA);12管防交叉污染固相萃取裝置(美國(guó)SUPELCO);N-1000VW旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本EYELA)。(4)數(shù)據(jù)處理結(jié)果用添加上述分析保護(hù)劑溶液的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)蘋果基質(zhì)中的多殘留農(nóng)獸藥進(jìn)行定量。結(jié)果見表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>氯氰菊酯一30.993106.771.1217.71.50E-025.00E-02氯氰菊酯一40.99390.2101.86.35.91.00E-023.00E-02芐螨醚0.99292.886.95.85.45.00E-042.50E-03氟氰戊菊酯-10.99395.81032.16.32.00E-037.00E-03氟氰戊菊酯-20.99487104.811.66.92.00E-037.00E-03嘧螨醚0.99793.596.91.62.41.00E-033.50E-03丙炔氟草胺0.99699.899.41.54.32.00E-037.50E-03氰戊菊酯一l0.994112.699.64.13.71.00E-023.50E-02氰戊菊酯—20.99695.7104.42.57.31.00E-023.50E-02氟胺氰菊酯-10.985100.1139.34.413.51.50E-025.00E-02氟胺氰菊酯-20.99591.1138.514.510.21.50E-025.00E-02苯醚甲環(huán)唑-10.99292.993.54.55.52.00E-037.50E-03苯醚甲環(huán)唑-20.99887.797.65.94.22.00E-037.50E-03惡二唑蟲0.98798.2107.29.89.51.00E-023.00E-02溴氰菊酯0.98180.596.17.91.81.00E-035.00E-03氟烯草酸0細(xì)92.697.13.46.11.00E-035.00E-03腈嘧菌酯0.99989.297.95.13.51.00E-035.00E-03注其中異構(gòu)體按一種計(jì)算。實(shí)施例2:本發(fā)明的方法與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正方法的比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用本方法和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正方法對(duì)蘑燕和圓白菜空白基質(zhì)中40種農(nóng)藥進(jìn)行定量測(cè)定，其中本發(fā)明的方法同實(shí)施例1，農(nóng)藥添加濃度為50ng/kg。圖1為部分農(nóng)藥的定量結(jié)果。由圖1表明，用添加分析保護(hù)劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液做工作曲線基本可以準(zhǔn)確定量基質(zhì)中的殘留農(nóng)藥，補(bǔ)償了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量結(jié)果的影響，可以代替原有的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正方法，這樣在對(duì)不同的農(nóng)作物進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，不再需要對(duì)每一種農(nóng)作物作出基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液以校正，而只需配置一種標(biāo)準(zhǔn)溶液即可對(duì)多種農(nóng)作物進(jìn)行檢測(cè)校正，大大減少了工作量。本發(fā)明的方法，在GC/MS儀器檢測(cè)靈敏度不變的情況下，不但可以大大減少前處理時(shí)的樣品處理量以及大大縮短前處理時(shí)間、提高分析檢測(cè)效率、降低實(shí)驗(yàn)成本；同時(shí)該方法分析成本低，分析時(shí)間短，用添加分析保護(hù)劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)多種蔬菜水果谷物基質(zhì)中的多殘留農(nóng)藥進(jìn)行定量。此方法可以用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)各種基質(zhì)中農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行定量、適用性強(qiáng)，而不必每分析一種基質(zhì)就必須要重新配制該種基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥多殘留技術(shù)的要求，適用于食品中多種農(nóng)藥殘留的快速靈敏檢測(cè)。以上所述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。10權(quán)利要求1.一種食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟(1)基質(zhì)前處理稱取10g～20g的食品試樣清洗后，加入約50mL乙腈，用高速組織均質(zhì)器在約9500r/min勻漿，提取約2min后抽濾，向殘?jiān)屑尤爰s20mL乙腈再次勻漿提取、抽濾，將兩次抽濾得到的濾液合并，用乙腈定容至100mL，待凈化；取1mL提取液通過C18(30mg)柱，用1mL80％乙腈/水溶液洗脫，收集全部流出液，向其中加入2mL水稀釋后通過C18(50mg)柱，向流出液中加入20％NaCl水溶液20mL后再次通過上面所述的C18(50mg)柱，棄去流出液；將C18(50mg)柱抽濾干燥2min，然后連接GCS(30mg)/PSA(30mg)柱，用體積比為1∶3∶6的甲苯/丙酮/正己烷的混合溶液1mL洗脫；(2)添加分析保護(hù)劑向上述洗脫液中添加配制好的分析保護(hù)劑溶液20μL，所述分析保護(hù)劑溶液為聚乙二醇和橄欖油的丙酮溶液，其中聚乙二醇和橄欖油的用量為進(jìn)入氣相色譜系統(tǒng)的絕對(duì)進(jìn)樣量分別為聚乙二醇200～800ng、橄欖油8.5～25.5μg；用30％丙酮/正己烷溶液定容至1.0mL；(3)進(jìn)樣上機(jī)檢測(cè)取上述定容后的溶液25～50μL進(jìn)樣，通過大體積進(jìn)樣—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜聯(lián)用儀上機(jī)檢測(cè)；質(zhì)譜檢測(cè)方式為選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)，每個(gè)化合物選擇三個(gè)特征離子進(jìn)行定性及定量。(4)數(shù)據(jù)處理用添加上述分析保護(hù)劑溶液的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)待測(cè)食品基質(zhì)中的多殘留農(nóng)獸藥進(jìn)行定量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中的食品試樣為糧食谷物類時(shí)，取10g加20ml水浸泡15min后再加入乙腈；所述食品試樣為蔬菜水果時(shí)，取20g直接加入乙腈。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中的聚乙二醇為PEG300。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中聚乙二醇和橄欖油的用量為進(jìn)入氣相色譜系統(tǒng)的絕對(duì)進(jìn)樣量分別為聚乙二醇400ng、橄欖油17pg。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中的氣相色譜柱為毛細(xì)管色譜柱DB—5MS(30mX0.25mmi.d.X0.25pm);載氣為氦氣，柱流速為lmL/min;色譜柱升溫程序?yàn)槌跏紲囟?(TC，保持4min，以10°C/min速率升溫至150°C，保持2min，再以1.5°C/min升溫至225。C，保持2min，再以20°C/min升溫至280°C，保持9min。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述步驟G)中的色譜一質(zhì)譜接口溫度為280。C，離子源溫度200。C，EM電壓1.15kV。全文摘要一種食品中農(nóng)獸藥殘留的快速高精度檢測(cè)方法，包括以下四個(gè)步驟(1)基質(zhì)前處理；(2)添加分析保護(hù)劑；(3)進(jìn)樣上機(jī)檢測(cè)；(4)數(shù)據(jù)處理。本發(fā)明的檢測(cè)方法，在GC/MS儀器檢測(cè)靈敏度不變的情況下，采用大體積進(jìn)樣法，可以大大減少前處理時(shí)的樣品處理量。同時(shí)該方法分析成本低，分析時(shí)間短，用添加分析保護(hù)劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)多種蔬菜水果谷物基質(zhì)中的多殘留農(nóng)獸藥進(jìn)行定量，可以用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)各種基質(zhì)中農(nóng)獸藥的殘留量進(jìn)行定量、適用性強(qiáng)，靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)獸藥多殘留技術(shù)的要求，適用于食品中多種農(nóng)獸藥殘留的快速靈敏檢測(cè)。文檔編號(hào)G01N30/06GK101246149SQ20081010269公開日2008年8月20日申請(qǐng)日期2008年3月25日優(yōu)先權(quán)日2008年3月25日發(fā)明者仲維科,劉漢霞,孫毅之,垚張,禮李,翔李,許秀麗,陳彥長(zhǎng)申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院