基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種草甘膦農藥的檢測方法。
【背景技術】
[0002]農藥的快速檢測是在食品安全和環(huán)境保護背景下日益要求的技術。線蟲能夠較靈敏地感受周圍環(huán)境變化，可在短時間內對環(huán)境變化產生指示作用。線蟲由于易于保存和便于試驗操作，作為一種典型模式生物在科研領域被廣泛應用。線蟲的幼蟲分為4個時期，分別為L1、L2、L3和L4期，處于不同生長期的線蟲，會對相應的環(huán)境脅迫具有特殊的耐受度和敏感度。
[0003]現(xiàn)有草甘膦常用檢測方法包括高效液相色譜法、色譜-質譜聯(lián)用法、氣相色譜法、化學分析法、子印跡-化學發(fā)光分析法、免疫分析法等，但一般都需要復雜的分析儀器，操作過程復雜。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有草甘膦鑒定方法存在的靈敏度低、操作復雜、成本高的問題，而提供一種基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法。
[0005]本發(fā)明基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法按下列步驟實現(xiàn):
[0006]一、稱取2?3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中進行滅菌處理，冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0007]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個觀測點，在第一觀測點、第二觀測點和第三觀測點上分別滴入I μ L待測農藥，I μ L大腸桿菌菌液和I μ L純水，在第四觀測點上加入80?200只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲；
[0008]三、觀測1.5?2.5小時后，當?shù)谝挥^測點上聚有大于30%的Tretoc印halus線蟲L2期幼蟲時，表明待測農藥中含有草甘膦。
[0009]Tretocephalus線蟲為一類食細菌土壤線蟲，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)Tretocephalus線蟲L2期幼蟲，在草甘膦刺激下無回避響應，反而有趨向性反應。因此，利用此類線蟲鑒定對草甘膦進行定性判斷。本發(fā)明具有快捷、直觀、高效低價的特點，能夠檢測出濃度為0.005%的草甘膦。本發(fā)明的檢測方法對實驗條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測設備，實驗操作方便，成本低廉，易于掌握。
【附圖說明】
[0010]圖1為實施例一中所述的瓊脂皿的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0011]【具體實施方式】一:本實施方式基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法按下列步驟實施:
[0012]一、稱取2?3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中進行滅菌處理，冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0013]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個觀測點，在第一觀測點、第二觀測點和第三觀測點上分別滴入I μ L待測農藥，I μ L大腸桿菌菌液和I μ L純水，在第四觀測點上加入80?200只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲；
[0014]三、觀測1.5?2.5小時后，當?shù)谝挥^測點上聚有大于30%的Tretoc印halus線蟲L2期幼蟲時，表明待測農藥中含有草甘膦。
[0015]本實施方式草甘膦農藥檢測方法對實驗條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測設備，實驗操作方便，靈敏度高。
[0016]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是步驟一所述的滅菌處理是在120°C下滅菌20min。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一相同。
[0017]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二不同的是步驟一所述的培養(yǎng)皿的直徑尺寸為6cm。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一或二相同。
[0018]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同的是步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入18?24mL滅菌處理后的瓊脂液。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至三之一相同。
[0019]【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】四不同的是步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】四相同。
[0020]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一不同的是步驟二所述的大腸桿菌菌液中大腸桿菌的濃度為IX 19個/mL?2X 10 9個/mL。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至五之一相同。
[0021]【具體實施方式】七:本實施方式與【具體實施方式】一至六之一不同的是步驟二在第四觀測點上加入80?120只Tretoc^phalus線蟲L2期幼蟲。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至六之一相同。
[0022]【具體實施方式】八:本實施方式與【具體實施方式】七不同的是步驟二在第四觀測點上加入100只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】七相同。
[0023]【具體實施方式】九:本實施方式與【具體實施方式】一至八之一不同的是步驟三觀測2小時后，當?shù)谝挥^測點上聚有大于30%的Tretocephalus線蟲L2期幼蟲時，表明待測農藥中含有草甘膦。其它步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至八之一相同。
[0024]實施例一:本實施例基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法按下列步驟實現(xiàn):
[0025]—、稱取3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中在120°C下滅菌20min，冷卻至50°C后在直徑為6cm培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0026]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個觀測點，在第一觀測點A、第二觀測點B和第三觀測點C上分別滴入I μ L待測農藥，I μ L濃度為2Χ 19個/mL的大腸桿菌菌液和I μ L純水，在剩余的第四觀測點O上加入100只Tretoaphalus線蟲L2期幼蟲；
[0027]三、觀測2小時后，第一觀測點A上聚有35%的Tretoc^phalus線蟲L2期幼蟲，表明待測農藥中含有草甘膦。
[0028]本實施例表明Tretocephalus線蟲對草甘膦具有趨向性反應。本實施例4個觀測點分別在6點鐘、9點鐘、12點鐘和3點鐘方向。
[0029]本實施例基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法的靈敏度高，能達到0.005%。
[0030]實施例二:本實施例基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法按下列步驟實現(xiàn):
[0031]—、稱取3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中在120°C下滅菌20min，冷卻至50°C后在6cm培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0032]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個觀測點，在第一觀測點A、第二觀測點B和第三觀測點C上分別滴入I μ L純水，I μ L濃度為2Χ 19個/mL的大腸桿菌菌液和I μ L純水，在剩余的第四觀測點O上加入100只Tretoaphalus線蟲L2期幼蟲；
[0033]三、觀測2小時后，第二觀測點B上聚有90%的Tretocephalus線蟲L2期幼蟲，聚于A點的線蟲小于5%，表明在沒有草甘膦農藥的吸引下，Tretocephalus線蟲只對作為食物的大腸桿菌具有趨向性反應。
【主權項】
1.基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于是按下列步驟實現(xiàn): 一、稱取2?3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中進行滅菌處理，冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿； 二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個觀測點，在第一觀測點、第二觀測點和第三觀測點上分別滴入I μ L待測農藥，I μ L大腸桿菌菌液和I μ L純水，在第四觀測點上加入80?200只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲； 三、觀測1.5?2.5小時后，當?shù)谝挥^測點上聚有大于30%的Tretocephalus線蟲L2期幼蟲時，表明待測農藥中含有草甘膦。2.根據(jù)權利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟一所述的滅菌處理是在120°C下滅菌20min。3.根據(jù)權利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟一培養(yǎng)皿的直徑尺寸為6cm。4.根據(jù)權利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入18?24mL滅菌處理后的瓊脂液。5.根據(jù)權利要求4所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液。6.根據(jù)權利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟二所述的大腸桿菌菌液中大腸桿菌的濃度為I X 19個/mL?2X 10 9個/mL。7.根據(jù)權利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟二在第四觀測點上加入80?120只Tretoc^phalus線蟲L2期幼蟲。8.根據(jù)權利要求7所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟二在第四觀測點上加入100只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲。9.根據(jù)權利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，其特征在于步驟三觀測2小時后，當?shù)谝挥^測點上聚有大于30%的Tretoaphalus線蟲L2期幼蟲時，表明待測農藥中含有草甘膦。
【專利摘要】基于線蟲趨避行為的草甘膦農藥檢測方法，本發(fā)明涉及一種草甘膦農藥的檢測方法，它為了解決現(xiàn)有草甘膦鑒定方法存在的靈敏度低、操作復雜、成本高的問題。檢測方法：瓊脂置于錐形瓶中，用封口膜密封后進行滅菌處理，滅菌處理后置于培養(yǎng)皿中，凝固得到瓊脂皿；二、在瓊脂皿表面取4個觀測點，分別加入待測農藥，大腸桿菌菌液，純水和Tretocephalus線蟲L2期幼蟲；三、當待測農藥聚有大于30％的幼蟲時，表明農藥中含有草甘膦。本發(fā)明的檢測方法對實驗條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測設備，操作方便，檢測靈敏度高。
【IPC分類】G01N33/00
【公開號】CN104977389
【申請?zhí)枴緾N201510367475
【發(fā)明人】王云彪, 阿娜莎, 陳展彥, 武海濤
【申請人】中國科學院東北地理與農業(yè)生態(tài)研究所
【公開日】2015年10月14日
【申請日】2015年6月29日