專利名稱：辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食品添加劑中有毒物的檢測方法，尤其是一種辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法。
背景技術(shù)：
辣椒紅是從辣椒中提取出來的天然色素，其主要成分為類胡蘿卜素，是一種具有營養(yǎng)強化功效的著色劑。隨著生活水平的提高，人 們越來越關(guān)注健康，作為天然色素的辣椒紅越來越受到人們的青睞。辣椒作為辣椒紅生產(chǎn)的原料，在生長和儲藏過程中經(jīng)常會出現(xiàn)病蟲害，由于不少農(nóng)戶忽視農(nóng)藥的正確、合理使用，致使辣椒中普遍存在農(nóng)藥殘留。這些農(nóng)藥殘留在辣椒的提取加工過程中不斷濃縮富集，雖有部分降解，但在辣椒紅等提取物產(chǎn)品中仍會有少許殘留?，F(xiàn)今，辣椒及辣椒提取物中的殘留農(nóng)藥主要是有機磷農(nóng)藥。有機磷農(nóng)藥是30年代末問世的第2代人工合成農(nóng)藥，由于高效、品種多、易降解等優(yōu)點得到迅速的發(fā)展，我國有機磷農(nóng)藥的生產(chǎn)量占農(nóng)藥生產(chǎn)總量的80%。有機磷農(nóng)藥雖然屬于低殘留或中等殘留農(nóng)藥，但其中有不少品種具有高毒性，如甲胺磷、甲基對硫磷、久效磷等，這些高毒農(nóng)藥的大量使用和殘留污染，嚴重危害人畜安全和生態(tài)環(huán)境，已成為一個非常嚴重的問題。因此，各國均對農(nóng)產(chǎn)品及其制品中的有機磷農(nóng)藥殘留制定了嚴格的限量標準。為了保證食品添加劑辣椒紅的食用安全，提高我國食品安全監(jiān)管水平，保障公民身體健康，促進辣椒紅產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，研究一種準確、快速、靈敏的辣椒紅中有機磷農(nóng)殘的檢測方法對于監(jiān)測和檢驗辣椒紅的安全生產(chǎn)具有十分重要的意義。目前，有關(guān)有機磷農(nóng)藥殘留的檢測方法已有許多，包括高效液相色譜一質(zhì)譜法、氣相色譜一質(zhì)譜法、氣相色譜法和氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法等。其中對煙草、茶葉、水果和蔬菜等食品中有機磷農(nóng)藥殘留的研究報道較多，而對于食品添加劑辣椒紅中有機磷農(nóng)藥殘留檢測的研究尚未見報道。因為辣椒紅中含有大量的色素類成分，基質(zhì)復(fù)雜，所以直接使用上述食品中有機磷的檢測方法，基質(zhì)干擾很大，無法實現(xiàn)有效檢測。因此，針對辣椒紅特性，專門開發(fā)適用于辣椒紅中多種有機磷農(nóng)殘檢測的方法非常關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種抗干擾能力強的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是其先將辣椒紅用萃取溶劑進行超聲萃取，然后將萃取液分離得到上層清液；所述的上層清液采用凝膠滲透色譜凈化，收集目標洗脫液濃縮至干，再用有機溶劑定容，得到樣品溶液；所述的樣品溶液采用氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜在多反應(yīng)監(jiān)測模式下進行測定，外標法定量。本發(fā)明所述的萃取溶劑為體積比50:50的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑；所述的有機溶劑為二氯甲烷、環(huán)己烷、異丙醚、正己烷或丙酮。
本發(fā)明所述凝膠滲透色譜凈化的流動相為體積比為50:50的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑；所述流動相的流速為5. OmL/min,收集時間為13. O 21. Omin。本發(fā)明所述氣相色譜條件為色譜柱為弱極性石英毛細管柱，進樣口溫度250 300°C，傳輸線溫度250 300°C，載氣流速為O. 5 I. OmL/min。所述氣相色譜的升溫條件為:初始溫度60°C，保持Imin ;以20°C /min速率升溫至220°C，保持Imin ;再以5°C /min速率升溫至280°C，保持3min。所述弱極性石英毛細管柱選用HP_5 MS石英毛細管柱、HP-17MS石英毛細管柱或者HP-5 DS石英毛細管柱；規(guī)格為長度為15 30m，內(nèi)徑為O. 25mm,膜厚 O.25Mm。本發(fā)明所述質(zhì)譜檢測條件為離子源溫度為230°C，溶劑延遲時間為3 Sminji撞能量為10 40eV。本發(fā)明所述多反應(yīng)監(jiān)測模式為內(nèi)吸磷-O監(jiān)測離子為171/170. 5，碰撞能量為20eV ;久效磷監(jiān)測離子為192/191. 5，碰撞能量為20eV ;內(nèi)吸磷-S監(jiān)測離子為170/169. 5， 碰撞能量為20eV ;二嗪農(nóng)監(jiān)測離子為304/303. 6，碰撞能量為20eV ；乙拌磷監(jiān)測離子為274/273. 5，碰撞能量為20eV ;甲基對硫磷監(jiān)測離子為263/261. 2，碰撞能量為20eV ;殺螟硫磷監(jiān)測離子為277/276. 5，碰撞能量為20eV ;馬拉硫磷監(jiān)測離子為256/255. 4，碰撞能量為20eV ;毒死蜱監(jiān)測離子為314/313. 4，碰撞能量為20eV ;丙溴磷監(jiān)測離子為374/373. 2，碰撞能量為20eV ;乙硫磷監(jiān)測離子為384/383. 5，碰撞能量為20eV ;三唑磷監(jiān)測離子為285/284. 5，碰撞能量為20eV ;伏殺硫磷監(jiān)測離子為367/366. 4，碰撞能量為20eV。本發(fā)明所述超聲萃取時間為10 30min，次數(shù)為I 3次；所述萃取液采用高速冷凍離心機進行離心分離；所述高速冷凍離心機轉(zhuǎn)速為4000 10000r/min，離心時間為5 IOmin ;所述目標洗脫液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或自動氮吹儀進行濃縮。本發(fā)明所述辣椒紅用量為O. 5 I. 5g，所述萃取溶劑的用量為10 25mL，所述有機溶劑的定容體積為5. OmL。采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于凝膠滲透色譜是一種根據(jù)溶質(zhì)分子大小進行分離的色譜技術(shù)，能夠去除樣品中大量的油脂及色素，具有快速高效、節(jié)省溶劑、易自動化等優(yōu)點。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜MRM監(jiān)測模式檢測技術(shù)，抗干擾能力強，檢測準確。本發(fā)明采用GPC凈化技術(shù)(凝膠滲透色譜凈化)對辣椒紅樣品進行處理，結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜MRM監(jiān)測模式檢測技術(shù)，從而建立了一種適用于辣椒紅中十三種有機磷農(nóng)殘檢測的方法。本發(fā)明采用GPC技術(shù)處理辣椒紅，去除了絕大部分大分子色素類成分，極大地降低了樣品基質(zhì)對十三種有機磷農(nóng)殘測定的干擾，檢測方法準確性高，對辣椒紅適用性強；本發(fā)明采用GPC技術(shù)結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜MRM監(jiān)測模式檢測，方法抗干擾能力強，準確度高，整個流程自動化程度高，簡便，快速，易于實現(xiàn)大批量樣品檢測；本發(fā)明GPC凈化處理過程中產(chǎn)生的廢液可以回收處理，重復(fù)使用，降低了檢測成本，減少了環(huán)境污染。
具體實施例方式本辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法采用下述設(shè)備和試驗條件7890A GC系統(tǒng)，色譜柱選擇HP-5 MS石英毛細管柱、HP-17 MS石英毛細管柱和HP_5 DS石英毛細管柱，7000 GC/MS/MS三重四級桿質(zhì)譜檢測；PREPLINC凝膠滲透色譜儀，美國J2公司，配300mm X 25 mm BIO-Beads S_X3填料的凈化柱；所用試劑均為色譜純；程序升溫條件為初始溫度60°C，保持Imin ;以20°C /min速率升溫至220°C，保持Imin ;再以5°C /min速率升溫至280°C，保持3min ;質(zhì)譜檢測，檢測模式為MRM監(jiān)測模式；進樣量為2. Ομ ，載氣流速為O. 5mL/min。計算機系統(tǒng)記錄色譜圖，以峰面積作為信號響應(yīng)值，對十三種有機磷進行定性定量分析。其中，內(nèi)吸磷-O監(jiān)測離子為171/170. 5 ;久效磷監(jiān)測離子為192/191.5 ;內(nèi)吸磷-S監(jiān)測離子為170/169. 5 ; 二嗪農(nóng)監(jiān)測離子為304/303.6 ;乙拌磷監(jiān)測離子為274/273. 5 ；甲基對硫磷監(jiān)測離子為263/261. 2 ;殺螟硫磷監(jiān)測離子為277/276. 5 ;馬拉硫磷監(jiān)測離子為256/255. 4 ;毒死蜱監(jiān)測離子為314/313. 4 ;丙溴磷監(jiān) 測離子為374/373. 2 ；乙硫磷監(jiān)測離子為384/383. 5 ;三唑磷監(jiān)測離子為285/284. 5 ;伏殺硫磷監(jiān)測離子為367/366. 4。實施例I :本辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法具體檢測步驟如下所述
(I)標準曲線分別精密量取十三種有機磷農(nóng)殘標準儲備液適量，用Fisher色譜純正己烷逐級稀釋成質(zhì)量濃度分別為O. 01,0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、I. O mg/L的系列標準溶液，按上述試驗條件進樣測定，分別以十三種有機磷農(nóng)殘的峰面積Y對其質(zhì)量濃度X作圖。(2)樣品提取準確稱取I. 0g、精確至O. OOOlg的E200辣椒紅樣品于IOmL容量瓶中，加入IOmL體積比為I: I的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑，超聲15min，冷卻至室溫，加入體積比為1:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑定容。萃取液轉(zhuǎn)移至離心管中，5°C下以IOOOOr/min的轉(zhuǎn)速離心5min，取上層清液用O. 45Mm濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至GPC上樣瓶中。(3)GPC凈化處理GPC檢測波長為254nm，流動相為體積比為I: I的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑，流速為5. OmL/min。上樣2. OmL進GPC凈化處理，收集13. O 21. Omin的流出液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40°C濃縮至干，加5. OmL丙酮超聲溶解，溶液用O. 22Mm濾膜過濾后進樣測定。(4)氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測選取HP-5 MS石英毛細管柱，程序升溫，進樣口溫度260°C，傳輸線溫度260°C，載氣流速為O. 5mL/min，進樣量2. Ομ , MRM監(jiān)測模式，離子源溫度為230°C，溶劑延遲7min，碰撞能量為20eV。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時檢測十三種有機磷農(nóng)殘色譜圖如圖I所示。(5)采用外標法定量，對E200辣椒紅樣品做3個平行樣，試驗編號為A、B、C，分別計算十三種有機磷農(nóng)殘的平行性相對標準偏差，分析結(jié)果見表1，對其中一個樣品重復(fù)測定五次，分別計算十三種有機磷農(nóng)殘的精密度，分析結(jié)果見表2。表I :E200辣椒紅中十三種有機磷農(nóng)殘檢測的平行性I_十宵徵鐵__HSD ( )_
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權(quán)利要求
1.一種辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于其先將辣椒紅用萃取溶劑進行超聲萃取，然后將萃取液分離得到上層清液；所述的上層清液采用凝膠滲透色譜凈化，收集目標洗脫液濃縮至干，再用有機溶劑定容，得到樣品溶液；所述的樣品溶液采用氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜在多反應(yīng)監(jiān)測模式下進行測定，外標法定量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于所述的萃取溶劑為體積比50:50的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑；所述的有機溶劑為二氯甲烷、環(huán)己烷、異丙醚、正己烷或丙酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于所述凝膠滲透色譜凈化的流動相為體積比為50:50的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑；所述流動相的流速為5. OmL/min,收集時間為13. O 21. Omin。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于，所述氣相色譜條件為色譜柱為弱極性石英毛細管柱，進樣口溫度250 300°C，傳輸線溫度250 300°C，載氣流速為 O. 5 I. OmL/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于，所述氣相色譜的升溫條件為初始溫度60°C，保持Imin ;以20°C /min速率升溫至220°C，保持Imin ;再以5°C /min速率升溫至280°C,保持3min。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于所述弱極性石英毛細管柱選用HP-5 MS石英毛細管柱、HP-17 MS石英毛細管柱或者HP_5 DS石英毛細管柱；規(guī)格為長度為15 30m，內(nèi)徑為O. 25mm，膜厚O. 25Mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于，所述質(zhì)譜檢測條件為離子源溫度為230°C，溶劑延遲時間為3 8min，碰撞能量為10 40eV。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于，所述多反應(yīng)監(jiān)測模式為內(nèi)吸磷-O監(jiān)測離子為171/170. 5，碰撞能量為20eV;久效磷監(jiān)測離子為192/191. 5，碰撞能量為20eV ;內(nèi)吸磷-S監(jiān)測離子為170/169. 5，碰撞能量為20eV ;二嗪農(nóng)監(jiān)測離子為304/303. 6，碰撞能量為20eV ；乙拌磷監(jiān)測離子為274/273. 5，碰撞能量為20eV ；甲基對硫磷監(jiān)測離子為263/261. 2，碰撞能量為20eV ;殺螟硫磷監(jiān)測離子為277/276. 5，碰撞能量為20eV ;馬拉硫磷監(jiān)測離子為256/255. 4，碰撞能量為20eV ;毒死蜱監(jiān)測離子為314/313. 4，碰撞能量為20eV ;丙溴磷監(jiān)測離子為374/373. 2，碰撞能量為20eV ;乙硫磷監(jiān)測離子為384/383. 5，碰撞能量為20eV ;三唑磷監(jiān)測離子為285/284. 5，碰撞能量為20eV ;伏殺硫磷監(jiān)測離子為367/366. 4，碰撞能量為20eV。
9.根據(jù)權(quán)利要求I一 8所述的任意一種辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于所述超聲萃取時間為10 30min，次數(shù)為I 3次；所述萃取液采用高速冷凍離心機進行離心分離；所述高速冷凍離心機轉(zhuǎn)速為4000 10000r/min,離心時間為5 IOmin ;所述目標洗脫液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或自動氮吹儀進行濃縮。
10.根據(jù)權(quán)利要求I一 8所述的任意一種辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其特征在于所述辣椒紅用量為0. 5 I. 5g，所述萃取溶劑的用量為10 25mL，所述有機溶劑的定容體積為5. OmL。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種辣椒紅色素中有機磷農(nóng)殘的檢測方法，其先將辣椒紅用萃取溶劑進行超聲萃取，然后將萃取液分離得到上層清液；所述的上層清液采用凝膠滲透色譜凈化，收集目標洗脫液濃縮至干，再用有機溶劑定容，得到樣品溶液；所述的樣品溶液采用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜在多反應(yīng)監(jiān)測模式下進行測定，外標法定量。本方法采用GPC技術(shù)處理辣椒紅，去除了絕大部分大分子色素類成分，極大地降低了樣品基質(zhì)對十三種有機磷農(nóng)殘測定的干擾，檢測方法準確性高，對辣椒紅適用性強；本方法抗干擾能力強，準確度高，整個流程自動化程度高，簡便，快速，易于實現(xiàn)大批量樣品檢測；本方法產(chǎn)生的廢液可以回收處理，重復(fù)使用，降低了檢測成本，減少了環(huán)境污染。
文檔編號G01N30/02GK102721762SQ20121022076
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月29日
發(fā)明者吉桂珍, 杜精精, 石文杰, 程淑君, 高偉 申請人:晨光生物科技集團股份有限公司