一對新的人參皂苷元混合體的拆分方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一對人參皂苷元混合體的拆分方法。這對人 參皂苷元的名稱為20 (R)-25-甲氧基-達瑪烷-3β，12β，20-三醇和20 (S)-25-甲氧 基-達瑪燒 _3β，12β，20-三醇[20 (R) -25-methoxyl-dammarane_3β，12β，20-triol (簡稱 20 (R) -25-0CH3-PPD)和 20 (S) -25-methoxyl-dammarane-3β，12β，20-triol(簡稱 20 (S) -25-0CH3-PPD)]。
【背景技術(shù)】
[0002] 許多學者的研究表明，20 (R) -25-0CH3-Pro或20 (S) -25-0CH3-Pro具有多種抗腫瘤 的活性，且基本無毒副作用。且因為差向異構(gòu)體混合物中的差向異構(gòu)體通常具有不同的藥 理，藥物動力學活性，以及治療性，毒性等其他的生物學性質(zhì)；以及無論是在臨床實踐，科研 以及藥物法規(guī)中，單一的差向異構(gòu)體作為治療藥物都有增加的趨勢。所以，混合體的分離尤 為重要。
[0003] 目前的拆分方法有1.結(jié)晶法：自身結(jié)晶誘導法、非對映體結(jié)晶誘導不對稱轉(zhuǎn)化、 優(yōu)先結(jié)晶法、逆向結(jié)晶法、手性溶劑結(jié)晶法。其優(yōu)勢是簡單高效，在工業(yè)應用中比較廣泛，不 需要外加光學活性拆分劑，但其需要特殊的手性溶劑，且適于拆分的外消旋混合物的范圍 狹窄。目前已有利用誘導結(jié)晶法制備高光學純度的右旋反式二氯菊酸的報道[邵昌平.誘 導結(jié)晶法制備高光學純度右旋反式二氯菊酸的方法：中國，CN1480445A，2004, 3, 10]，結(jié)晶 法拆分2, 3-二巰基丙醇外消旋體[彭平.一種拆分2, 3-二巰基丙醇外消旋體的方法：中 國，CN103387525A，2013, 11，13]以及托吡卡胺外消旋體的應用[彭平.一種拆分托吡卡 胺外消旋體的方法：中國，CN103387534A，2013, 11，13]。2.化學拆分法：經(jīng)典拆分、組合 拆分、復合拆分、包合拆分、包結(jié)拆分、動態(tài)動力學拆分。與經(jīng)典的手性拆分方法相比，其結(jié) 晶速度快、百分比好、操作簡單、成本低廉、收率高、有效、易于規(guī)模生產(chǎn)。結(jié)晶誘導的不對稱 轉(zhuǎn)化方法即為化學拆分法中的一種，目前有利用結(jié)晶誘導不對稱轉(zhuǎn)化法與生物酶組合法制 備2'-脫氧尿苷的報道[應國清.一種化學-生物酶法組合制備2'-脫氧尿苷的方法： 中國，CN102827902A，2012, 12, 19]。3.生物化學拆分法：其優(yōu)勢是選擇性強、專一性好、 反應條件溫和、催化反應類型多、操作簡便、效率高、無污染、但也有菌種篩選困難、酶制劑 不易保存、產(chǎn)物后處理工作量大以及通常只能得到一種對映體等缺點，目前已有（R)-3_羥 基烷酸酯的生物合成制備等應用的報道[曾方.（R)-3-羥基烷酸酯的生物合成制備方法： 中國，CN103146771A，2013, 06, 12]。4.分子印跡技術(shù)：該技術(shù)具有專一性識別作用、有 效、操作簡單、易于產(chǎn)業(yè)化的特點。目前應用于手性天冬氨酸的拆分等[郭建峰.一種手 性天冬氨酸拆分方法：中國，CN102358719A，2012, 02, 22]。5.萃取拆分：親和萃取拆分 法、配位萃取拆分法、形成非對映異構(gòu)體的萃取拆分法。6.膜拆分：手性液膜拆分、手性固 膜拆分。其特點是能耗低、操作簡單、批處理量大、可連續(xù)操作、室溫操作。目前已有利用纖 維素手性膜拆分扁桃酸外消旋體的應用[袁黎明.纖維素手性膜在扁桃酸外消旋體拆分中 的應用：中國，CN101768072A，2010, 07, 07]。7.毛細管電泳拆分：主要用于分離帶電離 子和易電離的物質(zhì)，或蛋白質(zhì)和多肽的分離。如2, 4-滴丙酸對映體的拆分[趙美蓉.一種毛細管電泳拆分2, 4-滴丙酸對映體的新方法：中國，CN101782548A，2010, 07, 21]以 及2-(3-氯苯氧基）丙酸對映體的拆分[劉維屏.一種毛細管電泳拆分2-(3-氯苯氧基） 丙酸對映體的新方法：中國，CN101736358A，2010, 06, 16]。8.色譜拆分：模擬移動床、 薄層色譜法分離、超臨界流體色譜拆分、毛細管電色譜、膠束電動色譜、高效液相色譜、氣相 色譜法。其特點是分離條件簡單、高效、高選擇性、高靈敏度和速度快。本方法應用廣泛， 目前已經(jīng)報道的應用有用手性色譜拆分一種鹽酸曲舍林的中間體（±)-Tetral〇ne[安德 魯.菲利斯.一種鹽酸曲舍林的中間體（±)-Tetral0ne及其手性色譜拆分方法：中國，CN 104122342A，2014, 10, 29]，高效液相色譜法拆分卡巴拉汀[寧美英.卡巴拉汀對映異構(gòu) 體的高效液相色譜法拆分方法：中國，CN101153865A，2008, 4, 2]，以及利用雙相識別手 性制備色譜拆分手性化合物[李乃瑄.雙相識別手性制備色譜拆分手性化合物：中國，CN 1757620A，2006, 04, 12]等。9.旋轉(zhuǎn)帶蒸餾技術(shù)：其是一種新型的蒸餾技術(shù)，可用來分離沸 點非常接近的和具有熱敏性的液體物質(zhì)，分離能力強，可分離沸點相差〇. 5°C的混合物。
[0004] 目前，至今沒有發(fā)現(xiàn)對于20 (R) -25-0CH3-PPD和20 (S) -25-0CH3-PPD混合體的拆分 的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一對新的人參皂苷元混合體的拆分方法。這對混合體的組 成為 20 (R) -25-甲氧基-達瑪燒-3β，12β，20-三醇（20 (R) -25-methoxyl-dammarane_3 β，12β，20-triol)和 20 (S) -25-甲氧基-達瑪烷-3β，12β，20-三醇（20 (S) -25-metho xyl-dammarane-3β，12β，20-triol)，簡稱 20 (R) -25-0CH3-PPD和 20 (S) -25-0CH3-PPD，所 述的混合體為20 (R) -25-0CH3-Pro和20 (S) -25-0CH3-Pro差向異構(gòu)體的混合體，混合體組 成的百分比 20 (R) -25-0CH3-PPD: 20 (S) -25-0CH3-PPD= 0· 001:99. 99 ~99. 9: 0· 001 ;其中， 20 (R) -25-0CH3-Pro和 20 (S) -25-0CH3-Pro的結(jié)構(gòu)如下所示：
[0006]
[0007] 本混合體可以采用酸或堿作為介質(zhì)，利用結(jié)晶誘導的不對稱轉(zhuǎn)化法 (Crystallization-inducedAsymmetricTransformation)[包括結(jié)晶誘導的動力學拆分 法（Crystallization-inducedDynamicResolusion)]，非手性反相高效液相色譜法[本方 法適用于連續(xù)進樣的方式與盲分的方式進行大規(guī)模的制備分離]，反相硅膠柱層析法。所用 方法收率高，純度高，產(chǎn)品穩(wěn)定。
[0008] 本發(fā)明所述的20 (R) -25-0CH3-Pro和20 (S) -25-0CH3-Pro混合體的拆分方法如 下：
[0009] Α·結(jié)晶誘導的不對稱轉(zhuǎn)化法（Crystallization-inducedAsymmetric Transformation)[包括結(jié)晶誘導的動力學拆分法（Crystallization-inducedDynamic Resolusion)]:將混合體溶解于醇溶劑中，在酸或堿以及一定反應容器，溫度，時間，震蕩反 應后得到差向異構(gòu)體單體結(jié)晶。
[0010] B.反相高效液相色譜法：混合體在有機溶劑中溶解，經(jīng)非手性反相色譜柱，一定 比例與組成的流動相，以及柱溫，流速下，得以分離，用盲分方式或者連續(xù)進樣的方式進行 大規(guī)模的分離制備，用蒸發(fā)光散射檢測器或紫外檢測器或二極管陣列檢測器進行監(jiān)測。
[0011] C:反相硅膠柱層析法：在反相硅膠柱上，用有機溶劑使得混合體分離。
[0012] D.采用HPLC-ELSD/UV/DAD方法對分離得到的化合物進行定性與定量。
[0013] 其中，本發(fā)明所述的結(jié)晶誘導的不對稱轉(zhuǎn)化法（Crystallization-induced AsymmetricTransformation)[包括結(jié)晶誘導的動力學拆分法（Crystallization-induced DynamicResolusion)]:即在一定溫度下，將混合體溶解于醇中，向溶液中逐滴加入酸或 堿，直至溶液微微渾濁，后將此溶液保持在一定反應容器，溫度，轉(zhuǎn)數(shù)下進行充分均勻的震 蕩反應，20 (R) -25-0CH3-Pro或20 (S) -25-0CH3-Pro將以結(jié)晶的形式逐漸從溶液中析出。
[0014] 所述的醇為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇之一