本發(fā)明涉及沙門氏菌檢測用培養(yǎng)基成分配比，具體是一種沙門氏菌快速檢測方法。
背景技術(shù)：
：沙門氏菌（salmonellaenterica）是一種全球性的人畜共患的食源性致病菌。全球每年有2億人到13億人感染非傷寒沙門氏菌，其中估計有300萬人死亡。沙門氏菌菌型繁多，全球已經(jīng)發(fā)現(xiàn)2500多個菌型以上，其中鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌對人類健康威脅最大。目前國內(nèi)外的大多數(shù)研究一般使用人工接種法制備樣品，其中的沙門氏菌往往較多，檢出較容易。但在實際生產(chǎn)和產(chǎn)品中，沙門氏菌感染食品時數(shù)量往往是很低的，一般認(rèn)為的極低數(shù)量為1～10cfu/50g（每50g樣品中1～10個沙門氏菌)。雖然目前開發(fā)了很多快速檢測方法，但是食品中的沙門氏菌常常數(shù)量極低且受亞致死性損傷，造成了漏檢的情況發(fā)生，因此增菌步驟是不可缺少的。但現(xiàn)有的增菌步驟采用多種增菌液培養(yǎng)，檢測周期長，造成增菌步驟長達(dá)四至五天。如國家知識產(chǎn)權(quán)局于2008.5.28公開了一件申請?zhí)枮?00710032778.0，名稱為“沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、檢測試劑盒及檢測方法”的發(fā)明專利，通過加入0.1～0.5g細(xì)菌特異性酶的混合顯色底物m-galactoside的顯色培養(yǎng)基與增菌液a緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、b四硫磺酸鈉煌綠增菌液組成；檢測時，對食品樣品進行前處理，先后利用增菌液a、b進行增菌培養(yǎng)，最后將二次增菌液接種至顯色培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若出現(xiàn)光滑、略凸起、直徑1～3mm、邊緣整齊的品紅色菌落，說明樣品存在沙門氏菌。因為使用了兩種標(biāo)準(zhǔn)的增菌液，因而檢測時間長，不利于快速出檢測結(jié)果。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種沙門氏菌快速檢測方法，以解決上述
背景技術(shù)：
中提出的問題。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供以下步驟：（1）配制bpw培養(yǎng)基；（2）培養(yǎng)基冷卻至室溫后，對培養(yǎng)基和整個房間進行紫外滅菌15分鐘,關(guān)燈60min后使用；（3）預(yù)增菌；（4）配制ttb增菌液；（5）增菌；（6）配制沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板。作為本發(fā)明進一步的方案：所述bpw培養(yǎng)基采用如下方法配備：稱取bpw培養(yǎng)基20.1g，加入蒸餾水1l，攪拌加熱煮沸至完全溶解，以90ml/瓶分裝到各錐形瓶，并于121℃滅菌15min，冷至常溫。作為本發(fā)明進一步的方案：所述預(yù)增菌操作步驟的方法為：稱量樣品10g至含bpw培養(yǎng)基的錐形瓶，并及時蓋上蓋子，150rpm下振蕩10min，于36℃±1℃培養(yǎng)18h左右。作為本發(fā)明進一步的方案：所述ttb增菌液采用如下方法配備：取ttb增菌液基礎(chǔ)93.6g，加入蒸餾水1l，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝于錐形瓶中，每瓶100ml。將錐形瓶放入滅菌鍋中，121℃滅菌20min；冷至30℃，每100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入ttb配套試劑碘液和煌綠各一支（開啟前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均勻。作為本發(fā)明進一步的方案：所述增菌步驟操作方法為：輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1ml，轉(zhuǎn)種于9mlttb增菌液內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。作為本發(fā)明進一步的方案：所述沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板采用如下方法配備：取瓶內(nèi)干粉4.75g，用100ml蒸餾水溶解，可按比例擴大或者縮小，隨后混合加熱至100℃，攪拌加熱至完全溶解，冷卻至50℃倒平板，最后，樣品用畫線或者涂布法接種，37℃培養(yǎng)24小時。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明利用沙門氏菌特征酶的酶解特性，開發(fā)出沙門氏菌特征顯色液體培養(yǎng)基，將選擇性增菌與顯色鑒定合二為一，利用ttb增菌液作為單一的增菌液配方，配合預(yù)增菌步驟，使增菌培養(yǎng)時間大大縮短，以此為基礎(chǔ)建立了沙門氏菌快速檢測方法，具有：不需特殊儀器設(shè)備，僅憑肉眼判斷結(jié)果，可操作性強，適合于大通量樣品的檢測等優(yōu)點。本發(fā)明操作方便、特異性強、準(zhǔn)確度高，檢測周期由傳統(tǒng)檢測方法的4～7d縮短為2～3d，減少了大量人力、物力消耗，檢測效率大大提高，可廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。具體實施方式下面本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。本發(fā)明實施例中，一種沙門氏菌快速檢測方法，包括以下步驟：（1）配制bpw培養(yǎng)基；稱取bpw培養(yǎng)基20.1g，加入蒸餾水1l，攪拌加熱煮沸至完全溶解，以90ml/瓶分裝到各錐形瓶，并于121℃滅菌15min，冷至常溫；（2）培養(yǎng)基冷卻至室溫后，對培養(yǎng)基和整個房間進行紫外滅菌15分鐘,關(guān)燈60min后使用；（3）預(yù)增菌；稱量樣品10g至含bpw培養(yǎng)基的錐形瓶，并及時蓋上蓋子，150rpm下振蕩10min，于36℃±1℃培養(yǎng)18h左右。（4）配制ttb增菌液；取ttb增菌液基礎(chǔ)93.6g，加入蒸餾水1l，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝于錐形瓶中，每瓶100ml。將錐形瓶放入滅菌鍋中，121℃滅菌20min；冷至30℃，每100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入ttb配套試劑碘液和煌綠各一支（開啟前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均勻。（5）增菌輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1ml，轉(zhuǎn)種于9mlttb增菌液內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。表1：培養(yǎng)現(xiàn)象（6）配制沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板取瓶內(nèi)干粉4.75g，用100ml蒸餾水溶解，可按比例擴大或者縮小，隨后混合加熱至100℃，攪拌加熱至完全溶解，冷卻至50℃倒平板，最后，樣品用畫線或者涂布法接種，37℃培養(yǎng)24小時。菌名菌號生長狀況培養(yǎng)特征傷寒沙門氏菌cmcc(b)50071良好品紅色或者紫紅色菌落大腸埃希氏菌atcc25922生長藍(lán)-綠色菌落其他革蘭氏陰性菌生長/不生長無色對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。當(dāng)前第1頁12