本發(fā)明涉及喹唑啉類化合物，具體地指一種含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥，也被稱為惡性腫瘤，通常是由于細(xì)胞增殖機(jī)制失常導(dǎo)致的。全球每年新增癌癥病例數(shù)將高達(dá)1930萬例，可見癌癥一直是威脅人類健康的一大“殺手”。

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是ErbB家族成員之一，具有酪氨酸激酶活性，是一種重要的跨膜受體。EGFR被配體激活后啟動(dòng)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，經(jīng)過細(xì)胞質(zhì)中銜接蛋白、酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子激活基因的轉(zhuǎn)錄，指導(dǎo)細(xì)胞遷移、黏附、增殖、分化、凋亡，且與腫瘤的形成和惡化密切相關(guān)。EGFR抑制劑的研發(fā)在分子靶向治療人類癌癥方向已成為熱點(diǎn)。目前已報(bào)道了大量的EGFR小分子抑制劑(如下結(jié)構(gòu)式所示)，在這些小分子抑制劑中，文獻(xiàn)(Suda.K,Murakami.I,Katayama.T,et al.Clin.Cancer.Res.16(2010)5489-5498.)報(bào)道了阿法替尼在生物細(xì)胞活性及抗腫瘤酶活性上具有高效的作用，除此之外，還有很多EGFR小分子抑制劑具有優(yōu)良的抗腫瘤活性，如吉非替尼(Fukuoka.M,Yano.S,Giaccone G,et al.J.Clin.Oncol.21(2003)2237-2246.)、達(dá)克米替你(Gonzales.A.J,Hook.K.E,Althaus.I.W,Mol,et al.Cancer.Ther.7(2008)1880-1889.)、LP-7(Lai.Y.S,Pang.J.X,Luo.M.H,C.N.Patent 201510184302,2015)以及本課題組近期設(shè)計(jì)、合成的喹唑啉類衍生物10k(Yuanbiao T,Yiqiang O.Y,Shan X,et al.Bioorg.Med.Chem.24(2016)1495-1503)等。文獻(xiàn)(Zijian Liu,Shasha Wu,Yu Wang,et al.Eur.J.Med.Chem.87(2014)782-793)報(bào)道了一系列新穎的含有酰腙結(jié)構(gòu)的噻吩并[3,2-d]嘧啶衍生物，其中化合物(Z)-36顯示出非常優(yōu)良的抗腫瘤活性。

本發(fā)明在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)合成了一系列含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物，此系列化合物保留了阿法替尼的主體結(jié)構(gòu)的同時(shí)引入了酰腙活性基團(tuán)，設(shè)計(jì)并合成了多種含有酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物。而本發(fā)明著重考察的是不同取代的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物的抗腫瘤活性，以期篩選出活性與選擇性更佳的抗腫瘤藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是提供一種含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供如通式I所示的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物、其幾何異構(gòu)體及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化物或前藥，通式I如下：

其中：

R₁選自(C₁～C₄)烷基、(C₃～C₆)環(huán)烷基、S-四氫呋喃-3-基、N-甲基哌啶-4-甲基或

Ar選自含有1～3個(gè)相同或者不同R₃取代的芳基或雜芳基；

R₂、R₃分別獨(dú)立地選自氫、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、羥基、氨基、巰基、羧基、三氟甲氧基、(C₁～C₄)烷基、(C₃～C₆)環(huán)烷基、(C₂～C₄)烯基、(C₂～C₄)炔基、(C₁～C₄)烷氧基、疊氮基、(C₁～C₄)烷氧基甲基、(C₁～C₄)烷基?；?C₁～C₄)烷硫基、烯丙基、(2-甲基)烯丙基或

R⁴、R⁵相同或不同，各自獨(dú)立地為(C₁～C₆)烷基或(C₃～C₆)環(huán)烷基，且R⁴和R⁵含有1～2個(gè)氫、羥基、氨基、鹵素、巰基或羧基取代；或者R⁴和R⁵與和它們所連接的氮原子一起形成5～10元飽和雜環(huán)基，所述飽和雜環(huán)基除了與R⁴和R⁵連接的氮原子外，任選含有1～3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子；

n為0～3。

本發(fā)明優(yōu)選涉及如上述通式I的化合物、其幾何異構(gòu)體、及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化物或前藥，其中：

R₁選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、環(huán)丙基、S-四氫呋喃-3-基、N-甲基哌啶-4-甲基或

Ar選自含有1～3個(gè)相同或者不同R₃取代的芳基或雜芳基；

R₂、R₃分別獨(dú)立地選自氫、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、羥基、氨基、巰基、羧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、環(huán)丙基、環(huán)戊基、丙烯基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、環(huán)丙氧基、叔丁氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、異丙氧基甲基、甲?；?、乙?；⒈；h(huán)丙?；⒓琢蚧?、乙硫基、烯丙基、(2-甲基)烯丙基或

選自：

本發(fā)明中，所述通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物為選自下列化合物中的一種，但這些化合物并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制：

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3-溴亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氰基苯亞甲基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-硝基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2-氯-4-氟亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2,3-二氯亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-甲氧基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2,3,4-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3,4,5-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3-溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3,5-二溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2,4-二羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3,5-二叔丁基-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-(二乙基氨基基)-2-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3-溴亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-氰基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-硝基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2-氯-4-氟亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2,3-二氯亞芐基)肼甲酰胺

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-甲氧基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2,3,4-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3,4,5-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3-溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-(3,5-二溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2,4-二羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3,5-二叔丁基-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-(二乙基氨基)-2-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-羥基亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-((5-甲基呋喃-2-基)亞甲基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-((1-(嗎啉代)-1H-吡咯-2-基)亞甲基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((4-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-((4-氰基苯基)氨基)-7-(3-(哌啶-1-基)丙基)喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-(4-(4-烯丙基苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺、

(E)-N-4-((3-甲硫基)苯基)氨基)-(7-((1-甲基哌啶-4-基)甲氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺、

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-2-((5-溴吡啶-2-基)亞甲基)肼甲酰胺、

(E)-N-(7-(環(huán)丙基甲氧基)-4-((4-嗎啉代苯基)氨基)喹啉-6-基)-2-((5-甲基呋喃-2-基)亞甲基)肼甲酰胺、

(S,E)-2-((1-(3-嗎啉代丙基)-1H-吡咯-2-基)甲基)-N-(4-((4-丙?；交?氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺、

(E)-2-((1-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1H-吡咯-2-基)亞甲基)-N-(7-(3-(哌啶-1-基)丙氧基基)-4-((4-(三氟甲氧基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺、

(E)-2-((1-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)亞甲基)-N-(4-((4-(2-氧代丙基)苯基)氨基)-7-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺、

(E)-2-((5-甲基噻吩-2-基)亞甲基)-N-(7-甲氧基-4-((4-嗎啉代苯基)氨基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺。

下面的合成路線描述了本發(fā)明通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物的制備，所有的原料都是通過合成路線中描述的方式、通過有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法制備的或者可商購。本發(fā)明的全部最終喹唑啉類化合物都是通過合成路線中描述的方法或通過與其類似的方法制備的，這些方法是有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。合成路線中應(yīng)用的全部可變因數(shù)如下文的定義或如權(quán)利要求中的定義。

以(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-((5-甲基呋喃-2-基)亞甲基)肼甲酰胺為例，合成方法如下所示，所有原料均為市售分析純。

路線1目標(biāo)化合物的合成路線

本發(fā)明首先合成中間體IX，再經(jīng)與不同取代的芳基醛反應(yīng)得到目標(biāo)化合物I。

按照本發(fā)明所屬領(lǐng)域的一些通常方法，本發(fā)明中上述通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物可以與酸生成藥學(xué)上可接受的鹽?？伤幱眉映甥}包括無機(jī)酸和有機(jī)酸加成鹽，與下列酸加成的鹽是特別優(yōu)選的：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。

此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明衍生物的前藥。本發(fā)明衍生物的前藥是上述通式I的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理?xiàng)l件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的生物活性形式。

本發(fā)明中“鹵素”是指氟、氯、溴或碘代；“烷基”是指直鏈或支鏈的烷基；“亞烷基”是指直鏈或支鏈的亞烷基；“環(huán)烷基”是指取代或未取代的環(huán)烷基；“飽和或部分飽和的雜環(huán)基”是指含有一個(gè)或多個(gè)選自N、O、S的雜原子的單環(huán)或多環(huán)的環(huán)狀體系，如吡咯烷基、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、咪唑烷基和噻唑啉基等。

本發(fā)明可以含有上述通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成份，與藥學(xué)上可接受的載體或賦型劑混合制備成組合物，并制備成臨床上可接受的劑型，上述藥學(xué)上可接受的賦型劑是指任何可用于藥學(xué)領(lǐng)域的稀釋劑、輔助劑和/或載體。本發(fā)明的衍生物可以與其他活性成份組合使用，只要它們不產(chǎn)生其他不利的作用，例如過敏反應(yīng)。

本發(fā)明上述通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物用于患者的臨床劑量可以根據(jù)：活性成分在體內(nèi)的治療功效和生物利用度、它們的代謝和排泄速率和患者的年齡、性別、疾病期來進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，不過成人的每日劑量一般應(yīng)當(dāng)為10～500mg，優(yōu)選為50～300mg。因此，當(dāng)本發(fā)明的藥物組合物被制成單位劑型時(shí)，考慮到上述有效劑量，每單位制劑應(yīng)當(dāng)含有10～500mg上述通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物，優(yōu)選為50～300mg。按照醫(yī)生或藥師的指導(dǎo)，這些制劑可以以一定間隔分若干次給藥(優(yōu)選為一至六次)。

本發(fā)明的藥用組合物可配制成若干種劑型，其中含有藥物領(lǐng)域中一些常用的賦形劑。如上所述的若干種劑型可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。

用于本發(fā)明藥物組合物的載體是藥物領(lǐng)域中可得到的常見類型，包括：粘合劑、潤滑劑、崩解劑、助溶劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、無色素、矯味劑、防腐劑、加溶劑和基質(zhì)等。藥物制劑可以經(jīng)口服或胃腸外方式(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或局部)給藥，如果某些藥物在胃部條件下不穩(wěn)定的，可將其配制成腸衣片劑。

本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)上述含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物在制備治療和/或預(yù)防增生性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的活性化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可作為唯一的抗增生性藥物單獨(dú)使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗增生性藥物聯(lián)合使用，用于治療和/或預(yù)防增生性疾病，如牛皮癬、良性前列腺肥大、動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄。

本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)上述含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物在制備治療和/或預(yù)防癌癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明化合物體外具有抑制腫瘤細(xì)胞生長活性，因此，它可以用作制備治療和/或預(yù)防癌癥的藥物，如乳腺、肺、肝臟、腎臟、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、子宮、胰腺、骨髓、睪丸、卵巢、淋巴、軟組織、頭頸、甲狀腺、食道的癌和白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤等。

本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)上述含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物在制備治療和/或預(yù)防前列腺癌、肺癌和宮頸癌、乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。

通過體外抑制肺癌細(xì)胞A549、人前列腺癌細(xì)胞PC-3、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和宮頸癌細(xì)胞Hela活性試驗(yàn)，本發(fā)明化合物對(duì)肺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞以及宮頸癌細(xì)胞具有顯著抑制作用，特別用于制備治療和/或預(yù)防前列腺癌、肺癌和宮頸癌的藥物。

通過對(duì)EGFR和VEGFR2/KDR激酶活性測(cè)試發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物具有顯著的抑制EGFR和VEGFR2/KDR激酶活性，對(duì)EGFR高表達(dá)的肺癌細(xì)胞、人前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞以及宮頸癌細(xì)胞等有較強(qiáng)的抑制作用，特別用于制備治療和/或預(yù)防肺癌的藥物。

本發(fā)明的活性化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可作為唯一的抗腫瘤藥物單獨(dú)使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物(如鉑類藥物順鉑、喜樹堿類藥物伊立替康、長春花堿類藥物諾維本、脫氧胞昔類藥物吉西他濱、足葉乙甙、紫杉醇等)聯(lián)合使用。聯(lián)合治療通過將各個(gè)治療組分同時(shí)、順序或隔開給藥來實(shí)現(xiàn)。

本發(fā)明經(jīng)體外對(duì)多種EGFR抑制劑高表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果表明具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性和選擇性，許多化合物還進(jìn)行了EGFR和VEGFR2/KDR激酶的體內(nèi)活性測(cè)試。實(shí)驗(yàn)表明某些化合物具有高效的抗腫瘤活性。

具體實(shí)施方式

為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但它們不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限定。

實(shí)施例旨在闡述而不是限制本發(fā)明的范圍。衍生物的核磁共振氫譜用Bruker ARX-400測(cè)定，質(zhì)譜用Agilent 1100LC/MSD測(cè)定；所用試劑均為分析純或化學(xué)純。

通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物：

本發(fā)明實(shí)施例1～42的結(jié)構(gòu)式如下表1所示。

表1實(shí)施例1～42的結(jié)構(gòu)式

步驟A 7-氟喹唑啉-4-酮(II)的合成

依次向裝有300mL無水乙醇的三頸瓶中加入50.0g的4-氟-2-氨基苯甲酸和67.0g醋酸甲脒，混合物加熱回流反應(yīng)24h。反應(yīng)完畢，減壓蒸干大部分溶劑，將反應(yīng)液倒入1000mL氯化鈉水溶液中攪拌30min，抽濾，濾餅用60％的乙醇水溶液洗滌，干燥，得51.0g白色固體，即7-氟喹唑啉-4-酮(II)，收率：96.4％。

mp 260.1-261.0，¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.35(s,1H),8.17(d,J＝6.8Hz,1H),8.14(d,J＝7.2Hz,1H),7.43(d,J＝9.8Hz,1H),7.37(t,J＝8.8Hz,1H).

步驟B 7-氟-6-硝基喹唑啉-4-酮(III)的合成

將50.0g7-氟喹唑啉-4-酮在冰浴下緩慢加入到103mL濃硫酸和105mL發(fā)煙硝酸配成的混酸中，室溫?cái)嚢?h后加熱至110℃反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，將反應(yīng)液倒入1000mL冰水混合物中強(qiáng)烈攪拌，抽濾，濾餅用500mL的水洗滌，干燥后的濾餅用300mL的乙醇加熱回流30min，趁熱抽濾，干燥，得淡黃色固體48.5g，即7-氟-6-硝基喹唑啉-4-酮(III)，收率：76.1％。

mp 277.3-278.5，ESI-MS[M-H]m/z:208,¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.77(s,1H),8.68(dd,J＝8.2,2.7Hz,1H),8.28(s,1H),7.73(dd,J＝12.2,2.8Hz,1H).

步驟C 7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉(IV)的合成

將48.0g的7-氟-6-硝基喹唑啉-4-酮加入到407.0mL氯化亞砜和75.0mL三氯氧磷混合液中，向混合液滴加2.4mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，80℃加熱回流3h，反應(yīng)液變黃色澄清后再110℃加熱回流6h。反應(yīng)完畢，減壓蒸干多余溶劑，用甲苯帶走少量的溶劑，固體粉末緩慢倒入冰的碳酸氫鈉水溶液中攪拌1h，抽濾，水洗，干燥，得50.7g黃色固體，即7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉，收率：97.0％。

mp 118.2-119.3℃，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.66(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),8.41(s,1H),7.75(d,J＝12.2Hz,1H).

步驟D 4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-氟喹唑啉(V)的合成

依次向400mL的異丙醇中加入50.0g的7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉和32.3g的4-氟-3-氯苯胺，向反應(yīng)液中滴加34.0mL三乙胺，常溫?cái)嚢?.5h。反應(yīng)完畢，抽濾，濾餅用異丙醇和水洗滌，干燥，濾液加大量水?dāng)嚢栉龀龉腆w，抽濾，水洗，干燥，合并，得65.0g深黃色固體，即4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-氟喹唑啉，收率：87.8％。

mp 261.4-262.5，ESI-MS[M+H]m/z:337.1,¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.43(s,1H),9.51(d,J＝7.8Hz,1H),8.68(s,1H),8.08(d,J＝6.4Hz,1H),7.79(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.45(t,J＝9.0Hz,1H).

步驟E 4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉(VIa)的合成

將60％氫化鈉4.7g加入到400mL四氫呋喃(THF)中攪拌，緩慢滴加12.0mL的(S)-3-羥基四氫呋喃，冰浴攪拌45min。20.0g的4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-氟喹唑啉(溶于200mL的THF中)緩慢滴入，常溫反應(yīng)5h。反應(yīng)完畢，減壓蒸干溶劑，加500mL碳酸氫鈉水溶液攪拌30min，抽濾，濾餅用40％的乙醇水溶液洗滌，干燥，得23.9g深黃色固體，即4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉，收率：99.5％。

mp 210.1-211.0，[M+H]m/z:405.1,¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.10(d,J＝11.8Hz,1H),9.16(d,J＝13.2Hz,1H),8.62(d,J＝13.4Hz,1H),8.13(d,J＝6.8Hz,1H),7.75(s,1H),7.45–7.35(m,2H),5.40(s,1H),3.99–3.79(m,4H),2.34(dd,J＝13.8,6.2Hz,1H),2.04(d,J＝5.6Hz,1H).

步驟F 4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-甲氧基]-喹唑啉(VIb)的合成

將11.37g的4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-氟喹唑啉加入到227mL甲醇和15mL的50％氫氧化鈉水溶液中，加熱回流1.5h，反應(yīng)完畢后冷卻至室溫，倒入200mL冰水中強(qiáng)烈攪拌30min，抽濾，水洗，干燥，得11.2g黃色固體，即，4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-甲氧基]-喹唑啉，收率：94.9％。

m.p.292.3-293.0℃.ESI-MS m/z:[M+H]349.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.13(s,1H),9.20(s,1H),8.66(s,1H),8.20–8.10(m,1H),7.84–7.73(m,1H),7.51–7.41(m,2H),4.05(s,3H).

步驟G 4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-氨基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉(VIIa)的合成

將21.4g的4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉加入到700mL乙醇中，加熱至60℃時(shí)加入15.0g活性炭，4.2g三氯化鐵，升至80℃時(shí)緩慢滴加24.5mL的80％水合肼，繼續(xù)加熱回流1.5h。反應(yīng)完畢，趁熱抽濾，濾渣用乙酸乙酯沖洗，減壓旋蒸濾液，旋至10％溶劑時(shí)加入500mL水，強(qiáng)烈攪拌，抽濾，干燥，得17.3g灰白色固體，即4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-氨基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉，收率：87.3％。

mp 139.3-140.1，[M+H]m/z:375.2,¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.41(s,1H),8.38(s,1H),8.17(t,J＝12.6Hz,1H),7.88–7.73(m,1H),7.38(dd,J＝17.2,8.2Hz,2H),7.05(s,1H),5.41(s,2H),5.20(s,1H),4.00–3.87(m,3H),3.77(dd,J＝12.6,7.8Hz,1H),2.29(td,J＝14.2,7.2Hz,1H),2.19–2.06(m,1H).

按照步驟G，由VIb可合成VIIb。

步驟H(S)-苯基-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)氨基甲酸(VIIIa)的合成

將5.5mL的N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)加入到102.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，4.2mL氯甲酸苯酯加入到混合液中，5.07g的4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-氨基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉加入到30.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，冰浴下緩慢滴入混合液中，反應(yīng)完畢后加入200.0mL的水淬滅反應(yīng)，抽濾，濾餅水洗，干燥，得到5.36g黃色固體，即(S)-苯基-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)氨基甲酸，收率：80％。[M+H]m/z:494.2。

按照步驟H，由VIIb可合成VIIIb。

步驟I(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺(IXa)的合成

2.0g的(S)-苯基-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)氨基甲酸加入到10.0mL的1,4-二氧六環(huán)和2.0mL的80％水合肼混合液中80℃加熱反應(yīng)30min，反應(yīng)完畢，趁熱抽濾，干燥，得1.49g白色固體，即(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺，收率：85％。

[M+H]m/z:433.2，1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.78(s,1H),9.28(s,1H),8.92(s,1H),8.43(d,J＝12.7Hz,1H),8.07(d,J＝6.6Hz,1H),7.92(s,1H),7.76(d,J＝8.6Hz,1H),7.40(t,J＝9.1Hz,1H),7.24(s,1H),5.36(s,1H),4.68(s,2H),4.01(dd,J＝10.2,4.0Hz,1H),3.98-3.86(m,2H),3.82(dd,J＝12.4,7.9Hz,1H),2.37(td,J＝14.2,7.5Hz,1H),2.15–1.84(m,1H).

按照步驟I，由VIIIb可合成IXb。

步驟J(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺

將0.1g的(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺和對(duì)氟苯甲醛加入到8.0mL乙醇中，加入2滴冰醋酸，加熱回流3小時(shí)，反應(yīng)完成后，趁熱抽濾，干燥，得到白色固體0.11g，即(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺，收率：85.2％。

實(shí)施例1

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺

先按照步驟A～D合成4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-氟喹唑啉(V)，再由中間體V通過步驟E合成4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-硝基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉(VIa)，再通過步驟G合成4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-氨基-7-[(S)-(四氫呋喃-3-基)-氧基]-喹唑啉(VIIa)；

通過步驟H合成(S)-苯基-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)氨基甲酸(VIIIa)，再通過步驟I合成(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺(IXa)；最后通過步驟J得到(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺。

mp 299.8-304.0，[M+H]m/z:540.2，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.21(s,1H),9.86(s,1H),9.13(s,1H),9.00(s,1H),8.51(s,1H),8.09(d,J＝6.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.85–7.75(m,3H),7.42(s,1H),7.33(s,1H),7.28(t,J＝8.5Hz,2H),5.45(s,1H),4.04(s,2H),3.95(s,1H),3.87(d,J＝4.9Hz,1H),2.42(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H),2.19–2.10(m,1H).

按照實(shí)施例1的方法，先按照步驟A～D合成中間體V，再由中間體V通過步驟E或F合成中間體VIa或VIb，再通過步驟G合成VIIa或VIIb；按照步驟H分別合成VIIIa或VIIIb，再通過步驟I合成IXa或IXb；最后，通過步驟J分別以相應(yīng)的取代醛制得實(shí)施例2～42化合物。

實(shí)施例2

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3-溴亞芐基)肼甲酰胺

mp 297.3-300.2，ESI-MS m/z:[M+H]601.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.31(s,1H),9.86(s,1H),9.02(d,J＝14.6Hz,2H),8.51(s,1H),8.10(s,1H),8.01(s,1H),7.93(s,1H),7.83–7.71(m,2H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.1Hz,2H),7.32(s,1H),5.44(s,1H),4.03(d,J＝9.5Hz,2H),3.96(d,J＝7.9Hz,1H),3.86(s,1H),2.20(s,1H),1.99(s,1H).

實(shí)施例3

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-氰基亞芐基)肼甲酰胺

mp 303.9-305.0，ESI-MS m/z:[M+H]547.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.47(s,1H),9.86(s,1H),9.12(s,1H),8.98(s,1H),8.49(d,J＝17.5Hz,1H),8.08(d,J＝10.4Hz,2H),7.91(d,J＝6.4Hz,4H),7.77(s,1H),7.41(t,J＝9.0Hz,1H),7.33(s,1H),5.45(s,1H),4.04(s,2H),3.95(t,J＝7.7Hz,1H),3.87(d,J＝4.3Hz,1H),2.41(dt,J＝14.2,7.2Hz,1H),2.19–2.10(m,1H).

實(shí)施例4

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-硝基亞芐基)肼甲酰胺

mp 304.3-305.6，ESI-MS m/z:[M+H]567.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),9.87(s,1H),9.16(s,1H),8.99(s,1H),8.51(s,1H),8.27(d,J＝8.3Hz,2H),8.12(s,1H),8.09(d,J＝6.1Hz,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(s,1H),7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.36(s,1H),5.46(s,1H),4.07(d,J＝6.2,8.1Hz,2H),3.99–3.93(m,1H),3.88(d,J＝4.3Hz,1H),2.47–2.37(m,1H),2.18–2.10(m,1H).

實(shí)施例5

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2-氯-4-氟亞芐基)肼甲酰胺

mp 280.4-282.7，ESI-MS m/z:[M+H]574.1.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.41(s,1H),9.86(s,1H),9.10(s,1H),8.98(s,1H),8.51(s,1H),8.36(s,1H),8.09(s,2H),7.77(s,1H),7.57(d,J＝8.3Hz,1H),7.42(t,J＝8.9Hz,1H),7.36–7.25(m,2H),5.44(s,1H),4.02(s,2H),3.97–3.89(m,1H),3.86(s,1H),2.40(dd,J＝13.3,6.7Hz,1H),2.12(d,J＝13.6Hz,1H).

實(shí)施例6

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2,3-二氯亞芐基)肼甲酰胺

mp 305.4-306.2，ESI-MS m/z:[M+H]592.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),9.85(d,J＝15.4Hz,1H),9.12(s,1H),8.99(s,1H),8.51(s,1H),8.42(s,1H),8.07(t,J＝10.1Hz,1H),8.05(s,1H),7.75(d,J＝11.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.43(dd,J＝12.8,8.7Hz,2H),7.33(s,1H),5.44(s,1H),4.02(s,2H),3.99–3.88(m,1H),3.84(d,J＝4.5Hz,1H),2.46–2.34(m,1H),2.13(d,J＝6.9Hz,1H).

實(shí)施例7

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-甲氧基亞芐基)肼甲酰胺

mp 289.2-290.5，ESI-MS m/z:[M+H]552.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.06(s,1H),9.85(s,1H),9.13(s,1H),9.00(s,1H),8.50(s,1H),8.06(t,J＝11.6Hz,1H),7.93(d,J＝6.4Hz,1H),7.78(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,2H),7.40(dd,J＝12.7,12.5Hz,1H),7.32(s,1H),7.01(s,2H),5.45(s,1H),4.04(s,2H),3.96(t,J＝7.6Hz,1H),3.86(dd,J＝12.9,4.9Hz,1H),3.81(s,3H),2.47–2.35(m,1H),2.19–2.08(m,1H).

實(shí)施例8

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2,3,4-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺

mp 285.4-286.9，ESI-MS m/z:[M+H]612.2，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.04(d,J＝12.4Hz,1H),9.86(s,1H),9.10(s,1H),9.01(s,1H),8.50(s,1H),8.22(s,1H),8.09(d,J＝6.6Hz,1H),7.78(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.42(t,J＝9.2Hz,1H),7.37–7.23(m,1H),6.88(d,J＝9.0Hz,1H),5.45(s,1H),4.02(d,J＝9.9Hz,2H),3.96(t,J＝6.9Hz,1H),3.91(d,J＝12.8Hz,1H),3.86(s,3H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),2.42(dd,J＝13.8,6.1Hz,1H),2.19–2.09(m,1H).

實(shí)施例9

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3,4,5-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺

mp 287.2-289.9，ESI-MS m/z:[M+H]612.2，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.11(s,1H),9.84(s,1H),8.97(s,1H),8.77(s,1H),8.45(d,J＝8.3Hz,1H),8.11(d,J＝4.5Hz,1H),7.98(s,1H),7.73(d,J＝13.9Hz,1H),7.42(t,J＝9.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.02(s,2H),5.35(d,J＝12.6Hz,1H),4.02(s,2H),3.96(d,J＝10.5Hz,2H),3.86(s,9H),2.40(d,J＝7.1Hz,1H),2.07(d,J＝8.2Hz,1H).

實(shí)施例10

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3-溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 295.7-299.0，ESI-MS m/z:[M+H]617.0，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.08(s,1H),10.77(s,1H),9.85(s,1H),9.08–8.95(m,2H),8.50(s,1H),8.09(d,J＝6.4Hz,1H),7.90(d,J＝10.6Hz,1H),7.89(s,1H),7.76(s,1H),7.57(d,J＝8.2Hz,1H),7.40(dd,J＝10.0,11.0Hz,1H),7.36(s,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),5.44(s,1H),4.03(t,J＝9.5Hz,2H),3.94(dd,J＝12.6,11.4Hz,1H),3.86(d,J＝4.6Hz,1H),2.46–2.38(m,1H),2.24–2.12(m,1H).

實(shí)施例11

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3,5-二溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 290.7-293.8，ESI-MS m/z:[M+H]696.0，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.18(s,1H),9.86(s,1H),8.99(s,1H),8.92(s,1H),8.51(s,1H),8.10(s,1H),7.90(s,3H),7.78(s,1H),7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.29(s,1H),5.42(s,1H),4.12–3.96(m,2H),3.98–3.91(m,1H),3.87(s,1H),2.43(dd,J＝13.2,7.0Hz,1H),2.23(s,1H).

實(shí)施例12

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(2,4-二羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 215.3-216.7，ESI-MS m/z:[M+H]554.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.89(s,1H),9.89(s,1H),9.76(s,1H),9.00(s,1H),8.51(s,1H),8.22(s,1H),8.08(d,J＝6.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(t,J＝8.7Hz,1H),7.31(s,1H),6.34(s,2H),5.40(d,J＝12.5Hz,1H),4.03(s,2H),3.95(dd,J＝15.4,7.7Hz,1H),3.85(d,J＝4.8Hz,1H),2.42(dd,J＝13.7,7.0Hz,1H),2.20–2.08(m,1H).

實(shí)施例13

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(3,5-二叔丁基-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 211.9-214.3，ESI-MS m/z:[M+H]650.3，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.88(s,1H),9.89(s,1H),8.98(s,1H),8.61(s,1H),8.52(s,1H),8.11(d,J＝6.2Hz,1H),7.99(s,1H),7.79(s,1H),7.41(d,J＝4.9Hz,4H),7.30(s,1H),5.37(s,1H),4.04(d,J＝5.7Hz,1H),3.88(dd,J＝12.3,9.1Hz,2H),3.76(d,J＝5.2Hz,1H),2.40(dd,J＝13.3,6.9Hz,1H),2.09(d,J＝6.6Hz,1H),1.33(d,J＝12.1Hz,18H)..

實(shí)施例14

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-(二乙基氨基)-2-羥基亞芐基)肼甲酰胺。

mp 285.2-287.2，ESI-MS m/z:[M+H]609.2.

實(shí)施例15

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-羥基亞芐基)肼甲酰胺。

mp 316.8-318.2，ESI-MS m/z:[M+H]538.1.

實(shí)施例16

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-氟亞芐基)肼甲酰胺

mp 298.6-299.2，ESI-MS m/z:[M+H]484.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.15(s,1H),9.83(s,1H),9.05(s,1H),8.90(s,1H),8.52(s,1H),8.11(d,J＝6.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.84–7.71(m,3H),7.42(t,J＝9.0Hz,1H),7.33(t,J＝8.3Hz,3H),4.11(s,3H).

實(shí)施例17

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3-溴亞芐基)肼甲酰胺

mp 288.8-289.0，ESI-MS m/z:[M+H]542.0，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.26(s,1H),9.84(s,1H),9.13(s,1H),8.89(s,1H),8.53(s,1H),8.11(d,J＝6.6Hz,1H),8.00(d,J＝11.6Hz,2H),7.78(s,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(d,J＝7.9Hz,1H),7.49–7.38(m,2H),7.33(s,1H),4.12(s,3H).

實(shí)施例18

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-氰基亞芐基)肼甲酰胺

mp287.6-290.4，ESI-MS m/z:[M+H]491.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.38(s,1H),9.83(s,1H),9.07(s,1H),8.87(s,1H),8.53(s,1H),8.15–8.08(m,1H),8.07(d,J＝6.9Hz,1H),7.93(s,4H),7.79(d,J＝7.4Hz,1H),7.42(t,J＝9.0Hz,1H),7.33(s,1H),4.10(s,3H).

實(shí)施例19

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-硝基亞芐基)肼甲酰胺

mp 290.2-291.0，ESI-MS m/z:[M+H]511.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.46(s,1H),9.84(s,1H),9.10(s,1H),8.89(s,1H),8.53(s,1H),8.34(d,J＝8.3Hz,2H),8.12(s,2H),8.00(d,J＝8.1Hz,2H),7.78(s,1H),7.42(t,J＝9.0Hz,1H),7.33(s,1H),4.13(s,3H).

實(shí)施例20

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2-氯-4-氟亞芐基)肼甲酰胺

mp 291.8-293.5，ESI-MS m/z:[M+H]518.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.32(s,1H),9.83(s,1H),9.03(s,1H),8.88(s,1H),8.52(s,1H),8.34(s,1H),8.09(d,J＝13.8Hz,2H),7.75(d,J＝12.6Hz,1H),7.56(d,J＝8.7Hz,1H),7.41(t,J＝8.9Hz,2H),7.32(s,1H),4.09(s,3H).

實(shí)施例21

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2,3-二氯亞芐基)肼甲酰胺

mp 306.9-309.4，ESI-MS m/z:[M+H]534.0，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.42(s,1H),9.83(s,1H),9.04(s,1H),8.88(s,1H),8.52(s,1H),8.40(s,1H),8.09(t,J＝14.0Hz,1H),8.05(s,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,1H),7.74(s,1H),7.50(dd,J＝11.6,10.0Hz,1H),7.46(s,1H),7.32(s,1H),4.09(s,3H).

實(shí)施例22

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-甲氧基亞芐基)肼甲酰胺

mp 275.3-278.0，ESI-MS m/z:[M+H]496.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.84(s,1H),9.06(s,1H),8.92(s,1H),8.52(s,1H),8.10(d,J＝6.5Hz,1H),7.95(d,J＝11.7Hz,1H),7.77(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.06(d,J＝8.1Hz,2H),4.12(s,3H),3.82(s,3H).

實(shí)施例23

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2,3,4-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺

mp 300.3-302.9，ESI-MS m/z:[M+H]556.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),9.84(s,1H),9.04(s,1H),8.93(s,1H),8.52(s,1H),8.20(s,1H),8.10(d,J＝6.2Hz,1H),7.78(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.32(d,J＝8.1Hz,1H),6.99(t,J＝12.2Hz,1H),4.11(s,3H),3.85(d,J＝8.2Hz,6H),3.78(s,3H).

實(shí)施例24

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3,4,5-三甲氧基亞芐基)肼甲酰胺

mp 284.3-287.6，ESI-MS m/z:[M+H]556.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.17(s,1H),9.85(s,1H),9.04(s,1H),8.95(s,1H),8.52(s,1H),8.08(t,J＝12.2Hz,1H),7.95(s,1H),7.78(s,1H),7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.33(s,1H),7.06(s,2H),4.06(s,3H),3.88(s,6H),3.71(s,3H).

實(shí)施例25

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3-溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 292.1-292.7，ESI-MS m/z:[M+H]558.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.04(s,1H),10.76(s,1H),9.84(s,1H),9.10(s,1H),8.90(s,1H),8.52(s,1H),8.10(d,J＝6.1Hz,1H),7.91(d,J＝12.7Hz,2H),7.79(s,1H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.42(t,J＝9.0Hz,1H),7.33(s,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,1H),4.13(s,3H).

實(shí)施例26

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-(3,5-二溴-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 301.2-302.4，ESI-MS m/z:[M+H]639.9，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.17(s,1H),9.85(s,1H),9.15(s,1H),8.87(s,1H),8.52(s,1H),8.10(d,J＝5.0Hz,1H),7.95(s,2H),7.87(s,1H),7.78(s,1H),7.41(t,J＝9.0Hz,1H),7.33(s,1H),4.12(s,3H).

實(shí)施例27

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(2,4-二羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 302.1-303.8，ESI-MS m/z:[M+H]498.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.83(s,1H),9.80(d,J＝13.2Hz,2H),8.92(s,2H),8.51(s,1H),8.18(d,J＝15.3Hz,1H),8.10(d,J＝6.5Hz,1H),7.77(s,1H),7.52(d,J＝5.1Hz,1H),7.41(t,J＝8.9Hz,1H),7.31(s,1H),6.35(s,2H),4.09(s,3H).

實(shí)施例28

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(3,5-二叔丁基-4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 296.4-298.2，ESI-MS m/z:[M+H]594.2，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.84(s,1H),9.01(s,2H),8.51(s,1H),8.09(d,J＝6.6Hz,1H),7.94(s,1H),7.77(d,J＝8.5Hz,1H),7.49(s,2H),7.41(s,2H),7.33(s,1H),4.08(s,3H),1.44(s,18H).

實(shí)施例29

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-(二乙基氨基)-2-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp 273.3-275.2，ESI-MS m/z:[M+H]553.2

實(shí)施例30

(E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹啉-6-基)-2-(4-羥基亞芐基)肼甲酰胺

mp288.4-289.2，ESI-MS m/z:[M+H]482.1

實(shí)施例31

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-((5-甲基呋喃-2-基)亞甲基)肼甲酰胺。

ESI-MS m/z:[M+H]526.1

實(shí)施例32

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-((1-(嗎啉代)-1H-吡咯-2-基)亞甲基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]610.2

實(shí)施例33

(S,E)-N-(4-((4-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]640.2

實(shí)施例34

(E)-N-(4-((4-氰基苯基)氨基)-7-(3-(哌啶-1-基)丙基)喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]634.3

實(shí)施例35

(E)-N-(4-(4-烯丙基苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]552.3

實(shí)施例36

(E)-N-4-((3-甲硫基)苯基)氨基)-(7-((1-甲基哌啶-4-基)甲氧基)喹唑啉-6-基)-2-(4-嗎啉代亞芐基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]641.3.

實(shí)施例37

(S,E)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-((四氫呋喃-3-基氧基)喹唑啉-6-基)-2-((5-溴吡啶-2-基)亞甲基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]602.0.

實(shí)施例38

(E)-N-(7-(環(huán)丙基甲氧基)-4-((4-嗎啉代苯基)氨基)喹啉-6-基)-2-((5-甲基呋喃-2-基)亞甲基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]542.2.

實(shí)施例39

(S,E)-2-((1-(3-嗎啉代丙基)-1H-吡咯-2-基)甲基)-N-(4-((4-丙?；交?氨基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]641.3.

實(shí)施例40

(E)-2-((1-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1H-吡咯-2-基)亞甲基)-N-(7-(3-(哌啶-1-基)丙氧基基)-4-((4-(三氟甲氧基)苯基)氨基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]722.4.

實(shí)施例41

(E)-2-((1-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)亞甲基)-N-(4-((4-(2-氧代丙基)苯基)氨基)-7-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]696.4.

實(shí)施例42

(E)-2-((5-甲基噻吩-2-基)亞甲基)-N-(7-甲氧基-4-((4-嗎啉代苯基)氨基)喹唑啉-6-基)肼甲酰胺

ESI-MS m/z:[M+H]532.2.

本發(fā)明產(chǎn)物的藥理研究

體外細(xì)胞毒活性

對(duì)通式I的含芳基酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物進(jìn)行了體外抑制肺癌細(xì)胞A549、前列腺癌PC-3、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、宮頸癌細(xì)胞Hela活性篩選，，對(duì)照品阿法替尼按照專利文獻(xiàn)(WO2007085638A1)所述方法制備得到。

1)細(xì)胞復(fù)蘇并傳代2～3次穩(wěn)定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其從培養(yǎng)瓶底部消化下來。將細(xì)胞消化液倒入離心管中后，之后加入培養(yǎng)液以終止消化。將離心管在800r/min下離心10min，棄去上清液后加入5mL培養(yǎng)液，吹打混勻細(xì)胞，吸取10μL細(xì)胞混懸液加入細(xì)胞計(jì)數(shù)板中計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為10⁴個(gè)/孔。96孔板中除A1孔為空白孔不加細(xì)胞外，其余皆加入100μL細(xì)胞混懸液。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

2)用50μL二甲基亞砜溶解受試樣品，然后加入適量培養(yǎng)液，使樣品溶解成2mg/mL藥液，然后在24孔板中將樣品稀釋為20、4、0.8、0.16、0.032μg/mL。

每個(gè)濃度加入3孔，其中周圍兩行兩列細(xì)胞長勢(shì)受環(huán)境影響較大，只和為空白細(xì)胞孔使用。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。

3)將96孔板中帶藥培養(yǎng)液棄去，用磷酸緩沖溶液(PBS)將細(xì)胞沖洗兩遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100μL放入培養(yǎng)箱中4h后，棄去MTT溶液，加入二甲基亞砜100μL。在磁力振蕩器上振蕩使存活細(xì)胞與MTT反應(yīng)產(chǎn)物甲臜充分溶解，放入酶標(biāo)儀中測(cè)定結(jié)果。通過Bliss法可求出藥物IC₅₀值。

化合物的乳腺癌細(xì)胞MCF-7、肺癌細(xì)胞A549、前列腺癌PC-3活性結(jié)果見表2。

EGFR、VEGFR酶活性實(shí)驗(yàn)

以阿法替尼為陽性對(duì)照，利用HTRF技術(shù)，測(cè)試新合成化合物對(duì)EGFR或VEGFR激酶的抑制作用，并測(cè)試部分化合物對(duì)EGFR或VEGFR激酶抑制作用的IC₅₀值。

具體方法：配制所需濃度的ATP、TK Substrate-biotin(TK-底物生物素)、Kinase buffer(激酶緩沖液)的工作液，ATP、TK Substrate-biotin、Kinase buffer按體積比例2∶2∶2取液混勻；用Kinase buffer稀釋藥物配制為所需濃度；配制EGFR、VEGFR酶工作液。在白色384孔板中，每孔加入6μL混勻液，2μL藥物，2μL激酶，混勻，置于37℃下反應(yīng)30min。然后加入5μL鏈激酶素標(biāo)記的XL-665及5μL結(jié)合了Eu3+的穴狀化合物抗體，混勻。室溫放置30min后于酶標(biāo)儀314nm激發(fā)，檢測(cè)665、620nm波長處的熒光，計(jì)算激酶抑制率。

抑制率(％)＝(Ratio665/620對(duì)照孔－Ratio665/620給藥孔)/Ratio665/620對(duì)照孔×100％

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。表2中IC₅₀<1μM，以“+++”表示，10μM>IC₅₀>1μM，以“++”表示，50μM>IC₅₀>10μM，以“+”表示，IC₅₀>50μM，以“-”表示，“ND”表示未測(cè)試。

表2目標(biāo)化合物酶活性和體外抗腫瘤活性

從上述試驗(yàn)結(jié)果可以清楚地看出，本發(fā)明所要保護(hù)的通式Ⅰ的化合物，具有良好的體外抗腫瘤活性。

本發(fā)明中通式Ⅰ的化合物可單獨(dú)施用，但通常是和藥用載體混合物給予，所述藥用載體的選擇要根據(jù)所需用藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐，下面分別用該類化合物的各種藥物劑型，例如片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑和軟膏劑的制備方法，說明其在制藥領(lǐng)域中的新應(yīng)用。

應(yīng)用例1：片劑

以實(shí)施例5化合物5g，按照藥劑學(xué)一般壓片法加輔料10g混勻后，壓制成50片，每片重150mg。

應(yīng)用例2：膠囊劑

以實(shí)施例5化合物5g，按照藥劑學(xué)膠囊劑的要求將輔料10g混勻后，裝入空心膠囊，每個(gè)膠囊重150mg。

應(yīng)用例3：注射劑

以實(shí)施例8化合物5g，按照藥劑學(xué)常規(guī)方法，進(jìn)行活性炭吸附，經(jīng)0.65μm微孔濾膜過濾后，填入氮?dú)夤拗瞥伤樦苿?，每只裝2mL，共灌裝50瓶。

應(yīng)用例4：氣霧劑

以實(shí)施例9化合物5g，用適量丙二醇溶解后，加入蒸餾水及其他輻料后，制成250mL的澄清溶液即得。

應(yīng)用例5：栓劑

以實(shí)施例10化合物5g，將之研細(xì)加入甘油適量，研勻后加入已熔化的甘油明膠，研磨均勻，傾入已涂潤滑劑的模型中，制得栓劑25顆

應(yīng)用例6：膜劑

以實(shí)施例12化合物5g，將聚乙烯醇、藥用甘油、水等攪拌膨脹后加熱溶解，80目篩網(wǎng)過濾，再將實(shí)施例12化合物加入到濾液中攪拌溶解，涂膜機(jī)制膜50片。

應(yīng)用例7：滴丸劑

以實(shí)施例13化合物15g，與明膠等基質(zhì)50g加熱熔化混勻后，滴入低溫液體石蠟中，共制得滴丸1000丸。

應(yīng)用例8：外用搽劑

以實(shí)施例15化合物10g，按照常規(guī)藥劑學(xué)方法與乳化劑等輔料2.5g混合研磨，再加蒸餾水至200mL制得。

應(yīng)用例9：軟膏劑

以實(shí)施例18化合物5g，研細(xì)后與凡士林等油性基質(zhì)250g研勻制得。

盡管已經(jīng)通過特定實(shí)施方案描述了本發(fā)明，但修改和等價(jià)變化對(duì)于精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯見的，且它們都包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。