從馬錢子中提取馬錢子堿氮氧化物的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取技術領域，具體涉及一種從馬錢子中提取馬錢子堿氮氧化物 的方法。
【背景技術】
[0002] 馬錢子堿氮氧化物是中藥馬錢子中的一種化合物，結構式如下所示：
[0004] 現(xiàn)今對馬錢子堿氮氧化物的分離提取受傳統(tǒng)中藥非機械化的操作方式所限制，步 驟繁瑣，耗時，耗力，得到的化合物量少且批次間差異大，難以進行臨床研究。
[0005] 另外對于馬錢子堿氮氧化物而言，由于植物中含量少，它的應用也很少有人研究， 因此其潛在作用有待開發(fā)。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術問題是針對以上現(xiàn)有技術問題，提供一種從中藥馬錢子中 提取馬錢子堿氮氧化物的方法，該方法采用高效液相色譜進行分離純化，分離方法穩(wěn)定，重 復性高，制備量大，操作簡單省時。
[0007] 本發(fā)明所采用的技術方案為：
[0008] -種從馬錢子中提取馬錢子堿氮氧化物的方法，該方法包括以下步驟：
[0009] (1)以馬錢子子實體為原料，磨成粉末狀后，用乙醇浸泡或者回流提取，過濾，所得 濾液進行旋轉蒸發(fā)至干，用甲醇體積分數(shù)為50-70 %的甲醇-水二元混合溶劑溶解，得到固 含量50-200mg/mL的提取液；
[0010] (2)對得到的提取液進行一維液相色譜分離:采用的色譜柱為C18色譜柱，流動相 為二元混合液相，其中A相為水、B相為甲醇；進樣量為50-200mL/針；流動相流速為100-1000mL/min;檢測器為紫外檢測器，檢測波長200-260nm;洗脫方式為B相濃度25 %等度洗脫 10min、B相濃度35%等度洗脫20min、B相濃度100%等度洗脫lOmin;根據(jù)紫外吸收光譜收集 13.5-15.5min洗脫液，旋轉蒸發(fā)至干，得到一維液相組分；
[0011] (3)用甲醇體積分數(shù)為50-70 %的甲醇-水二元混合溶劑溶解一維液相組分，溶解 至固含量為50-100mg/mL;
[0012] (4)進行二維液相色譜分離:采用的色譜柱為C18色譜柱，流動相為二元混合液相， 其中A相為水、B相為甲醇;進樣量為500-2000yL/針;流動相流速為10-30mL/min;檢測器為 紫外檢測器，檢測波長200-260nm;洗脫方式為B相濃度30 %等度洗脫20-40min;根據(jù)紫外吸 收光譜收集17.5-20min洗脫液，旋轉蒸發(fā)濃縮至干，得本發(fā)明馬錢子堿氮氧化物。
[0013] 所述步驟(1)中回流提取可重復進行1-3次，每次1-2h。
[0014] 所述步驟(1)、（3)中甲醇-水二元混合溶劑含0.1% (質量百分比）乙酸。
[0015]所述步驟(2)、（4)中二元混合液相的A相含0.1% (質量百分比）乙酸。
[0016] 所述步驟（2)中C18色譜柱具體為反相C18軸向加壓色譜柱（150 X250mm，10ym， 100 Λ)，使用時柱溫為室溫或25-40°C。
[0017] 所述步驟（4)中(：18色譜柱具體為華譜(：18色譜柱（20\250臟，5以111，丨00 4)，使用時 柱溫為室溫或25-40°C。
[0018] 本發(fā)明選用二維高效液相色譜技術從天然產(chǎn)物馬錢子子實體中提取馬錢子氮氧 化物，通過合理選擇色譜柱、溶解液、流動相等，結合對流速、洗脫方式、收集區(qū)段等工藝條 件的摸索，使得整個分離純化方法切實可行，操作簡便，制備周期短，儀器自動化程度高，試 劑耗費量小，常溫常壓下就可進行，制備量大，重復性高，得到的馬錢子氮氧化物純度可達 99%，且提取批次之間一致性高，可操作性好，可控度高，可直接運用于工業(yè)生產(chǎn)，為馬錢子 堿氮氧化物的潛在作用開發(fā)提供來源保障。
【附圖說明】
[0019] 圖1所示的是本發(fā)明從馬錢子中提取馬錢子堿氮氧化物的方法的一維色譜分離 圖；
[0020] 圖2所示的是本發(fā)明從馬錢子中提取馬錢子堿氮氧化物的方法的二維色譜分離 圖；
[0021 ]圖3所示的是本發(fā)明得到的目的產(chǎn)物的HPLC驗純圖；
[0022] 圖4所示的是本發(fā)明得到的目的產(chǎn)物的tfNMR核磁圖；
[0023] 圖5所示的是本發(fā)明得到的目的產(chǎn)物的C13NMR核磁圖。
【具體實施方式】
[0024]以下結合實施例對本發(fā)明作進一步具體描述。應該指出，以下具體說明都是例示 性的，旨在對本發(fā)明提供進一步的說明。除非另有說明，本發(fā)明使用的所有科學和技術術語 具有與本發(fā)明所屬技術領域人員通常理解的相同含義。
[0025] 1、原料、材料：
[0026] 原料馬錢子子實體采摘自河北并經(jīng)過鑒定。
[0027] 2、試劑：
[0028]色譜級甲醇、乙酸、乙醇購自天津市康科德科技有限公司。
[0029] 3、儀器設備：
[0030]超微粉碎機購自山東三清不銹鋼設備有限公司；臺式冷凍離心機購自Thermo公 司；旋轉蒸發(fā)儀購自上海亞容生化儀器廠；反相C18軸向加壓色譜柱（150 X 250mm，ΙΟμπι， 100 A)購自江蘇漢邦科技有限公司；華譜C18色譜柱（20 X 250mm，5μπι，100 A)購自上海華 譜技術服務中心;制備型高效液相色譜儀購自江蘇漢邦科技有限公司。
[0031] 實施例1:
[0032]以馬錢子子實體為原料，磨成粉末狀后用乙醇回流提取1.5h，過濾，取沉淀重復提 取2次，合并所得濾液，旋蒸得到干燥的馬錢子粗粉后稱取10g，溶于100mL 55%的甲醇-水 (0.1 %乙酸)溶液，制得馬錢子提取物溶液，濃度為100mg/mL，過0.45μπι微孔濾膜，進行一維 液相色譜制備。一維液相色譜采用Innovel C18 150X250mm，10ym，丨〇〇Α,流動相采用的為 二元液相的混合，其中二元液相Α相是水(含0.1 %乙酸）、Β相是甲醇，洗脫方式:Β相濃度 25%等度10min、B相濃度35%等度20min、B相濃度100%等度lOmin。采用紫外檢測器，選擇 210nm吸收波長，制備溫度為室溫，進樣量為150mL/針，流動相流速為600mL/min，收集13.5-15.5分鐘（圖1中3號峰）的餾分，進行旋轉蒸發(fā)濃縮至干，為一維制備粗品。用50%的甲醇-水(0.1 %乙酸)溶液溶解一維制備粗品，濃度為50mg/mL，經(jīng)微孔濾膜過濾，進行二維液相色 譜制備，色譜柱為華譜C18 20X250mm，5ym，丨〇〇 A,流動相采用的為二元液相的混合，其中 二元液相A相是水(0.1 %乙酸）、B相是甲醇，采用30%B相等度洗脫30分鐘。采用紫外檢測 器，選擇210nm吸收波長，制備溫度為室溫，進樣量為2000yL/針，流動相流速為16mL/min，收 集17.5-20分鐘（圖2中M-Et-3-3峰)的餾分，旋轉蒸發(fā)至干，得到目的M-Et-3-3組分。
[0033] 對得到的M-Et-3-3組分進行HPLC純度分析，經(jīng)高效液相檢測純度達到99%，為單 一化合物，HPLC譜圖見圖3。
[0034] 對得到的組分進行NMR氫譜、匪R碳譜等鑒定，結果如圖4、5所示，顯示該M-Et-3-3 組分為