外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取Img熒光探針吲哚-5.5-菁-N-羥基琥珀酰亞胺溶解于ImL的二甲基亞砜中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)24h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.5mL復(fù)溶，得以金納米星為載體具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液； (4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液經(jīng)冷凍干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:2依次加到24mL的二甲基亞砜中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在25 °C下480r/min避光攪拌反應(yīng)24h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，用冷凍干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)制備氨基化的金納米星:在20°C，600r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50μ g/mL的金納米星溶液15mL，然后加入濃度為5mg/mL的PE1-SH 3mL，進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)8h，再10000 rpm高速離心30min，然后用超純水復(fù)溶得到氨基化金納米星溶液； (2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸18mg、N，N’- 二環(huán)己基碳酰亞胺12mg、N-羥基琥珀酰亞胺9mg，然后依次加入4mL磷酸鹽緩沖液中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在45°C、500r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)16h，然后將所得溶液10000 rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行酰化反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星溶液； (3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取1.5mg熒光探針吲哚-5-菁溶解于0.8mL的磷酸鹽緩沖液中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.8mL復(fù)溶，得到以金納米星為載體具有靶向性和近紅外熒光成像的抗腫瘤藥物傳遞系統(tǒng)； (4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像的靶向金納米星溶液經(jīng)真空干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:2.5依次加到35mL的磷酸鹽緩沖液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在20°C下600r/min避光攪拌反應(yīng)30h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，真空干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)粉末。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (I)制備氨基化的金納米星:在21°C，510r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50 μ g/mL的金納米星溶液15mL，然后加入濃度為5.0mg/mL的氨基化合物3mL，進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)9h，再10000 rpm高速離心30min，然后用超純水復(fù)溶得到氨基化金納米星溶液； (2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸17.5mg、N，N’ - 二環(huán)己基碳酰亞胺12.5mg、N-羥基琥珀酰亞胺9mg，然后依次加入3.5mL反應(yīng)溶液中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在45°C、510r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)16h，然后將所得溶液10000 rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行酰化反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)18h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星溶液； (3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取Img熒光探針溶解于0.5mL的反應(yīng)溶劑中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)18h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.5mL復(fù)溶，得到以金納米星為載體具有靶向性和近紅外熒光成像的抗腫瘤藥物傳遞系統(tǒng)； (4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像的靶向金納米星溶液經(jīng)干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:1.7依次加到25mL的反應(yīng)溶劑中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在21°C下510r/min避光攪拌反應(yīng)36h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)粉末。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): Cl)制備氨基化的金納米星:在20-22°C，500-600r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50 μ g/mL的金納米星溶液13-17mL，然后加入濃度為6_8mg/mL的氨基化合物2_3mL，進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)8-10 h，再10000 rpm高速離心30min，然后用超純水復(fù)溶得到氨基化金納米星溶液； (2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸17-18mg、N，N’- 二環(huán)己基碳酰亞胺12-13mg、N-羥基琥珀酰亞胺8-9.5mg，然后依次加入3_4mL反應(yīng)溶液中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在43-47°C、500-600r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)12_20h，然后將所得溶液10000 rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行酰化反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16-20h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星溶液； (3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取0.8-1.2mg熒光探針溶解于0.4-0.6mL的反應(yīng)溶劑中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16-20h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.4-0.6mL復(fù)溶，得到以金納米星為載體具有靶向性和近紅外熒光成像的抗腫瘤藥物傳遞系統(tǒng)； (4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像的靶向金納米星溶液經(jīng)干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:1.8-2.2依次加到20-30mL的反應(yīng)溶劑中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在20-22°C下500-600r/min避光攪拌反應(yīng)30_40h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)粉末。
6.權(quán)利要求1或2-5任一項(xiàng)所述方法制備的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)在制備主動(dòng)靶向抗腫瘤藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1或2-5任一項(xiàng)所述方法制備的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)在制備抗腫瘤光動(dòng)力或光熱治療的熱敏劑中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1或2-5任一項(xiàng)所述方法制備的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)在制備近紅外激光照射下，觸發(fā)化學(xué)藥物靶向快速釋放于腫瘤組織藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1或2-5任一項(xiàng)所述方法制備的光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)在制備用于光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的藥物傳遞系統(tǒng)在制備生物體內(nèi)活體熒光成像藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)的制備方法及應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有抗腫瘤藥物毒副作用大，生物相容性差，靶向性差的問題，方法是，將金納米星表面通過共價(jià)鍵連接上具有反應(yīng)活性的氨基和羧基后，再通過酰胺反應(yīng)連接靶向分子，得到主動(dòng)靶向的金納米星溶液；再通過靶向化合物末端的氨基和近紅外熒光探針進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，得到具有葉酸靶向和近紅外熒光成像的金納米星溶液；然后再直接通過靜電吸附作用負(fù)載抗腫瘤藥物阿霉素于金納米星表面，即得，本發(fā)明體物理化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備工藝簡單且原料來源豐富，成本低，毒副作用小，能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
【IPC分類】A61K49-00, A61K31-704, A61P35-00, A61K41-00, A61K47-48
【公開號】CN104826127
【申請?zhí)枴緾N201510204171
【發(fā)明人】王蕾, 孟德輝, 郝永偉, 張兵詳, 張潘潘, 史進(jìn)進(jìn), 趙亞林, 李懂, 張振中, 張?jiān)?
【申請人】鄭州大學(xué)
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月25日