專利名稱：縮合的嘧啶衍生物的制作方法
專利說明 本發(fā)明涉及與嘧啶環(huán)稠合的雜環(huán)化合物(下文簡稱為縮合的嘧啶衍生物)，如吡咯并〔3，2-d〕嘧啶和6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶，它們用做抗腫瘤藥，本發(fā)明還涉及其制備方法。
氨甲喋呤(下文簡稱為“MTX”)是葉酸拮抗劑并已被開發(fā)為抗腫瘤藥。自從其在50年代早期出現(xiàn)以來，其一直在臨床上占有重要地位。MTX主要用于治療絨膜癌，骨肉瘤和急性淋巴細(xì)胞白血病，另外，其治療使用范圍通過與其它抗腫瘤藥合用或采用新的給藥方法而正在拓寬。MTX對二氫葉酸還原酶(DHFR)顯示出高抑制活性。但DHFR在腫瘤組織和正常組織中皆存在，因此MTX對二者都有影響。事實(shí)上，MTX會引起潛在的副作用，如骨髓抑制和腸上皮退化，這限制了其臨床應(yīng)用。另外，MTX在治療范圍和對實(shí)體腫瘤療效上也很窄。
進(jìn)一步講，MTX的治療作用隨著重復(fù)用MTX治療一段周期后發(fā)生的腫瘤細(xì)胞對其的耐藥性而大大降低了。MTX的這些缺陷限制了其治療使用范圍并降低了其臨床用途。
在近四十年，已合成了幾百種葉酸類似物并進(jìn)行了生化和藥理試驗(yàn)。即，檢測了這些化合物對賴葉酸酶和腫瘤細(xì)胞生長的抑制活性及對帶腫瘤小鼠的治療作用。由這些類似物累積得到的大量生化和藥理數(shù)據(jù)提供了有關(guān)結(jié)構(gòu)-活性和結(jié)構(gòu)-毒性關(guān)系的大量信息。這些大量結(jié)果已由許多論文和綜述所提供，例如Chemistry and Biology of Pteridines 1989，Ed. by H. Ch. Curtius，S. Ghisla，N. Blau. Walter de Gruyter，Berlin，New York 1990;Progress in Medicinal Chemistry，vol. 26，pp. 1 to 252(1989)，Elsevier Science Publishers.) 在考慮化學(xué)改性中，葉酸的分子結(jié)構(gòu)可方便地分為四部分，即，雜環(huán)，橋鍵，苯甲酸和氨基酸部分。這些葉酸類似物的基本結(jié)構(gòu)特征存在于雜環(huán)部分。事實(shí)上，目前具有雜環(huán)的大多數(shù)葉酸拮抗藥是已知的，其包括互相稠合的兩個6-員環(huán)，如喋啶環(huán)或有關(guān)的6-6稠合的雜環(huán)。
近年來，已報(bào)道了具有各種脫氮雜喋啶環(huán)的葉酸類似物，如5-脫氮雜喋啶，8-脫氮雜喋啶，10-脫氮雜喋啶，5，8-二脫氮雜喋啶，和它們的二氫和5，6，7，8-四氫脫氮雜喋啶。DHFR抑制劑，MTX和10-乙基-10-脫氮雜喋啶(10-EDAM)〔K.Y. Shum et al.，J.Clinical Oncology 6(3)446-450(1988)〕具有喋啶環(huán);胸苷酸合成酶抑制劑，N10-2-丙炔基-5，8-二脫氮雜葉酸(CB3717)〔A.H.Calvert et al.，J.Clinical Oncology，4(8)，1245-52(1986)〕和N-〔5-〔N-(3，4-二氫-2-甲基-4-氧代喹唑啉-6-基甲基)-N-甲基氨基〕-2-噻吩甲?；?L-谷氨酸(D1694)〔A.L.Jackman et al.，Cancer Research，51，5579-86(1991)〕具有5，8-二脫氮雜喋啶環(huán)，和甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲酰酶抑制劑，5，10-二脫氮雜-5，6，7，8-四氫葉酸(DDATHF)〔E.C. Taylor et al.，J.Med.Chem.，28，914-921(1985)〕具有5-脫氮雜-5，6，7，8-四氫喋啶環(huán)，其落在上述分類中(帶有縮合的6-員雜環(huán)的類似物)。
另一方面，僅有少數(shù)具有雜環(huán)且包括互相稠合的6-和5-員環(huán)的類似物是現(xiàn)在已知的，例如2，4-二氨基嘌呤為基礎(chǔ)的反葉酸，該葉酸類似物由嘌呤環(huán)代替了喋啶環(huán)，見L.T.Weinstock，Journal of Medicinal Chemistry，13.995(1970)，其對葉酸有關(guān)的酶和L1210白血病完全缺乏抑制活性。另一例是吡咯并〔2，3-d〕嘧啶為基礎(chǔ)的反葉酸，其結(jié)構(gòu)如下所示。該類化合物描述見Miwa et al.in Journal of Medicinal Chemistry，34，55 to 560(1991)。這些化合物顯示了拮抗葉酸性質(zhì)和對腫瘤細(xì)胞增殖的強(qiáng)大抑制作用。但其臨床應(yīng)用還未見報(bào)道，
其中R為氫原子或甲基;符號

代表單或雙鍵。
歐洲專利申請№.0438261-A2(July 24，1991)披露了與谷氨酸衍生物鍵合的稠合雜環(huán)，其用做抗腫瘤劑。
盡管本領(lǐng)域所做的最新科學(xué)進(jìn)展已如上所示，但由于MTX已使用，反葉酸還沒進(jìn)入臨床使用。另外，在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)反葉酸很難達(dá)到令人滿意的濃度并看來是要被限制，這是因?yàn)楫?dāng)用其治療癌癥患者時(shí)，其相對窄的抗腫瘤譜，耐藥性的發(fā)展和它們的副反應(yīng)。因此，在癌癥化療領(lǐng)域緊迫地期待創(chuàng)造并開發(fā)抗癌反葉酸，其療效進(jìn)一步提高并能通過對腫瘤組織的高選擇毒性而發(fā)揮作用。
在這些情況下，本發(fā)明目的是提供新的嘧啶衍生物，其顯示出良好的抗腫瘤活性。另外，本發(fā)明的目的也提供了制備該衍生物的方法和含該衍生物作為活性成份的藥物組合物。
本發(fā)明者已通過廣泛深入的研究解決了上述問題并已發(fā)現(xiàn)縮合的嘧啶衍生物是新的并可用作抗腫瘤藥。本發(fā)明在上述發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上已完成。
因此，本發(fā)明提供了由下面通式(Ⅰ)代表的嘧啶衍生物，即稠合了一個五員環(huán)的嘧啶或其藥用鹽
其中R1為羥基或氨基;R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基;-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同，分別為羧基或羧酸酯基;

代表


或

;A為氧原子，

(其中R3和R4相互可相同或不同，分別為氫或鹵原子或可被取代的烴基，或R3和R4合起來形成可被取代的亞烷基)或

(其中R70為氫原子或烴基);n為1-3的整數(shù)，條件是R1為氧且氫連到3-位氮上的化合物被包括在基于酮-烯醇互變異構(gòu)體如上所示的定義中。
本發(fā)明包括下面嘧啶衍生物和其藥用鹽 (1)通式(Ⅰ)中R1為氨基。
(2)通式(Ⅰ)中R1為羥基。
(3)通式(Ⅰ)中R2為亞苯基。
(4)通式(Ⅰ)中R2為亞吡啶基。
(5)通式(Ⅰ)中R2為亞噻吩基。
(6)通式(Ⅰ)中R2為亞呋喃基。
(7)通式(Ⅰ)中R2為亞噻唑基。
(8)通式(Ⅰ)中

。
(9)通式(Ⅰ)中

。
(10)通式(Ⅰ)中

。
(11)通式(Ⅰ)中A為

(其中R3和R4相互可相同或不同，分別為氫或鹵原子或低級烷基，低級鏈烯基或低級炔基，或R3和R4可合起來形成可被取代的亞烷基)。
(12)通式(Ⅰ)中A為

(其中R70為氫原子或烴基)。
(13)通式(Ⅰ)中R1為氨基，R2為亞苯基。
(14)通式(Ⅰ)中R1為氨基，R2為亞噻吩基。
(15)通式(Ⅰ)中R1為羥基，R2為亞苯基。
(16)通式(Ⅰ)中R1為羥基，R2為亞噻吩基。
(17)通式(Ⅰ)中R1為氨基，A為亞甲基，n為1。
(18)通式(Ⅰ)中R1為羥基，A為亞甲基，n為1。
(19)通式(Ⅰ)中

，R2為亞苯基。
(20)通式(Ⅰ)中

，R2為亞苯基。
(21)通式(Ⅰ)中，

，R1為氨基和R2為亞苯基。
(22)通式(Ⅰ)中，

，R2為亞苯基，A為

。
(23)通式(Ⅰ)中，

，R2為亞苯基，A為-NH-。
(24)通式(Ⅰ)中，

，R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6分別為氫原子，n為1且A為

。
(25)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6分別為氫原子，

為


，A為

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基，或R3和R4合起來為可被取代的亞烷基)。
(26)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6分別為氫原子，

為


，A為

(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基或R3和R4合起來形成可被取代的亞烷基)，R1為氨基。
(27)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6分別為氫原子，


，A為

(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基或R3和R4合起來形成可被取代的亞烷基)，R1為羥基。
(28)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，R5和R6分別為氫原子，

(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基，或R3和R4合起來形成可被取代的亞烷基)。
(29)通式(Ⅰ)中，R2為亞噻吩基，R5和R6分別為氫原子，

(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基，或R3和R4合起來形成可被取代的亞烷基)。
(30)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6分別為氫原子，


(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或低級烷基，低級鏈烯基或低級炔基)。
(31)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6分別為氫原子，



(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基，或R3和R4可合起來形成可被取代的亞烷基)，n為1。
(32)通式(Ⅰ)中，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6分別為氫原子，


，A為

(其中R3和R4相互相同或不同，每個為氫或鹵原子或烴基，或R3和R4可合起來形成可被取代的亞烷基)，n為2。
(33)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基。
(34)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基，R2為亞苯基。
(35)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基，R2為亞噻吩基。
(36)通式(Ⅰ)中，


，R2為亞苯基，A為-NH-。
(37)通式(Ⅰ)中，


，R2為亞苯基，A為

。
(38)通式(Ⅰ)中，


，R5和R6分別為氫原子，A為

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基)。
(39)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6分別為氫原子，A為亞甲基，n為2。
(40)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基，R2為亞噻吩基，R5和R6分別為氫原子，A為亞甲基，n為2。
(41)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6分別為氫原子，A為

，n為2。
(42)通式(Ⅰ)中，


，R1為氨基，R2為亞苯基;R5和R6分別為氫原子，A為

，n為2。
(43)由下面通式(1)代表的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥用鹽
其中R1為羥基或氨基，優(yōu)選氨基;R2為亞苯基或下式代表的基團(tuán)
(其中X代表硫或氧原子)，優(yōu)選亞苯基或亞噻吩基;R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫原子或烴基團(tuán)，或它們合起來形成亞烷基，每個優(yōu)選為氫原子，低級烷基，低級鏈烯基或低級炔基;n為1-3的整數(shù)，優(yōu)選1或2，更優(yōu)選為2。
(44)由下面通式(101)代表的6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其藥用鹽
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫原子或可被取代的烴基，n為1-3的整數(shù)。
本發(fā)明還提供了由下面通式(Ⅱ)代表的化合物或其鹽
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，-CO2R10代表羧基或羧酸酯基，

代表

，

或

，A代表氧原子，下式代表的基團(tuán)

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，或R3和R4合起來形成可被取代的亞烷基)或下式代表的基團(tuán)

(其中R70代表氫原子或烴基)，n為1-3的整數(shù)，條件是R1代表氧，氫原子連到3-位氮上的化合物被包括在上述定義中。
本發(fā)明化合物包括下面的化合物和其鹽 (1)通式(Ⅱ)中，
(2)通式(Ⅱ)中，

，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，A為

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或烴基，或R3和R4合起來形成亞烷基)。
(3)通式(Ⅱ)中，
(4)通式(Ⅱ)中，

，A為

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基)。
(5)由下面通式(4)代表的化合物或其鹽
其中R1為羥基或氨基，R2為亞苯基或由下式代表的基團(tuán)

(其中X為硫或氧原子)，R3和R4相互可相同或不同，且每個代表氫原子或烴基，或它們合起來形成亞烷基，n是1-3的整數(shù)，-COOR10代表羧基或羧酸酯基。
(6)由下面通式(105)代表的化合物或其鹽
其中R1為羥基或氨基，R2為亞苯基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫原子或可被取代的烴基，n為1-3的整數(shù)，-COOR10為羧基或羧酸酯基。
本發(fā)明提供了制備上述通式(Ⅰ)的嘧啶衍生物或其藥用鹽的方法，其包括將下面通式(Ⅲ)代表的化合物或羧基被改性為活性形式的其反應(yīng)活性衍生物，
其中R1為羥基或氨基，R2為亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，


或

，A代表氧原子，下式代表的基團(tuán)

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，或R3和R4可合起來形成可被取代的亞烷基)或下式代表的基團(tuán)

(其中R70代表氫原子或烴基)，n為1-3的整數(shù)，條件是R1為氧，氫連到3-位氮上的化合物被包括在上述定義中，與下面通式(Ⅳ)代表的化合物反應(yīng)
其中-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同，每個代表羧基或羧酸酯基。
本發(fā)明包括下面的方法 (1)在上述方法中，通式(Ⅲ)代表的化合物是選自通式(Ⅲ)代表的化合物，條件是

。
(2)在上述方法中，通式(Ⅲ)代表的化合物選自通式(Ⅲ)化合物，條件為R2代表亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基或亞呋喃基，

(其中R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或烴基，或R3和R4合起來形成亞烷基)。
(3)在上述方法中，通式(Ⅲ)代表的化合物選自通式(Ⅲ)化合物，條件是

。
(4)制備嘧啶衍生物或其藥用鹽的方法，其包括將下面通式(Ⅴ)代表的化合物或羧基被改性為活性形式的其反應(yīng)活性衍生物
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，n為1-3的整數(shù)，條件為R1是氧且氫連到3-位氮上的化合物被包括在上述定義中，與下式通式(Ⅳ)化合物反應(yīng)
其中-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同，每個代表羧基或羧酸酯基，條件為-CO2R5和-CO2R6中一個或二個代表酯化的羧基，形成下式通式(Ⅵ)代表的羧酸酯
其中R1為羥基或氨基，R2代表亞苯基，亞吡啶基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同，每個為羧基或羧酸酯基，條件是-CO2R5和-CO2R6中之一或二個為羧酸酯基，n為1-3的整數(shù)，條件為R1為氧且氫連到3-位氮上的化合物被包括在上述定義中，將所得酯通過酸或堿水解或包括催化還原的氫解轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x羧酸衍生物。
(5)制備通式(1)吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥用鹽的方法，其包括將通式(2)化合物或羧基被修飾成反應(yīng)活性形式的其反應(yīng)活性衍生物
其中R1為羥基或氨基，R2為亞苯基或下式基團(tuán)

(其中X為硫或氧)，R3和R4相互可相同或不同，每個代表氫原子或烴基，或它們合起來形成亞烷基，n為1-3的整數(shù)，與通式(3)化合物反應(yīng)
其中R5和R6相互可相同或不同，每個代表羧基保護(hù)基。
(6)制備通式(101)的6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其藥用鹽的方法，其包括將通式(102)化合物或羧基被改性成活性形式的其反應(yīng)活性衍生物
其中R1為羥基或氨基，R2為亞苯基，亞噻吩基，亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4相互可相同或不同，每個為氫原子或可被取代的烴基，n為1-3，與通式(103)化合物縮合
其中R5和R6相互可相同或不同，每個代表羧基保護(hù)基，形成通式(104)的羧酸酯
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6和n分別如上述通式102和103所定義，然后通過酸或堿水解或包括催化還原的氫解將該酯轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的游離羧酸。
進(jìn)一步講，本發(fā)明提供了含通式(Ⅰ)的嘧啶衍生物或其藥用鹽作為活性成份的抗腫瘤藥，優(yōu)選含上述通式(1)吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥用鹽作活性成份，或含上述通式(101)6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其藥用鹽作活性成份的抗腫瘤藥。
更具體講，本發(fā)明提供了含有效量上述通式(Ⅰ)嘧啶衍生物或其藥用鹽和填充劑的藥物組合物，上述通式(Ⅰ)嘧啶衍生物或其藥用鹽用于藥物的制備，該藥物在需服用抗腫瘤藥治療的疾病中是有效的，及治療患有需服用抗腫瘤疾病的患者的方法，該方法包括將有效量的上述通式(Ⅰ)嘧啶衍生物或其藥用鹽給藥于患者。
R1為羥基的上述通式(1)，(2)，(4)，(101)，(102)，(104)和(105)的化合物分別是以酮和烯醇互變異構(gòu)體以平衡共存狀態(tài)存在的。雖然這些化合物一般是以它們的烯醇互變異構(gòu)體(即羥基化合物)表示，在本發(fā)明書中也是這樣標(biāo)示的，但本發(fā)明包括任何情況下的酮互變異構(gòu)體(即氧代或酰氨化合物)及烯醇互變異構(gòu)體。
進(jìn)一步講，雖然本發(fā)明通式(Ⅰ)代表的化合物除了L-谷氨酸部分的不對稱碳原子外，可在雜環(huán)的5-位碳原子或在與R3和R4鍵合的碳原子上(在該情況中，A為

，其中R3和R4相互可相同或不同且每個代表氫或鹵原子或可被取代的烴基)可有不對稱碳原子，且每個不對稱中心可是S-或R-構(gòu)型或它們的混合物，但條件是谷氨酸部分的不對稱碳原子必是S-(L-)絕對構(gòu)型。在這種情況中，通式(Ⅰ)化合物被制成非對映體或非對映體混合物，其可通過常規(guī)方法很易分離或純化，如根據(jù)需要分級結(jié)晶或色譜。由此分離的非對映體都在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物通常制成粉末，結(jié)晶固體或結(jié)晶。
本發(fā)明如下詳細(xì)描述。
在上述定義中，由R2定義的亞苯基可為1，4-或1，3-亞苯基，由R2定義的亞噻吩基和亞呋喃基分別在2，5(或5，2)-或3，5(或5，3)位有游離價(jià)鍵。由R2定義的亞吡啶基可在2，5或5，2位有游離價(jià)鍵。用R2定義的亞噻唑基可在1，3-或1，4-位有游離價(jià)鍵。
在上述定義中，由R3，R4和R70定義的烴基包括低級烷基，低級鏈烯基和低級炔基。低級烷基可是含1-6個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基，如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，異戊基，1-甲基丁基，1，2-二甲基丙基，正己基，異己基，1-甲基戊基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，2，3-二甲基丁基，1-乙基丁基，1，1，2-三甲基丙基，1-乙基-1-甲基丙基和1-乙基-2-甲基丙基。在這些基團(tuán)中，優(yōu)選甲基，乙基，丙基和異丙基，最優(yōu)選甲基和乙基。
低級鏈烯基可為含2-6個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基，如乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，2-甲基丙烯基，3，3-二甲基-1-丁烯基和4-甲基-2-戊烯基，其中優(yōu)選1-丙烯基和2-丙烯基。
另外，低級炔基包括乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，丁炔基，己炔基和戊炔基，其中優(yōu)選2-丙炔基。
在上面定義中，R3和R4定義的可被取代烴基包括鹵代烴基，如鹵代的低級烷基，鏈烯基和炔基。
由R3和R4合起來形成的亞烷基包括亞甲基，亞乙基和亞丙基。
由R3和R4定義的鹵原子包括氯原子，溴原子，碘原子和氟原子。
由R5，R6和R10定義的羧基保護(hù)基包括含1-5個碳原子的烷基，可被取代的芐基，可被取代的苯基和三取代的甲硅烷基。如烷基包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基和戊基;可被取代芐基包括芐基，硝基芐基和甲氧芐基;可被取代的苯基包括苯基，甲氧苯基和硝基苯基;三取代甲硅烷基包括叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基。
雖然上述目的化合物和在其制備中得到的中間體由于存在不對稱碳原子和/或雙鍵而分別以光學(xué)異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體存在，但這些異構(gòu)體也在本發(fā)明范圍之內(nèi)。雖然在采用一些制備方法時(shí)，目的化合物或中間體分別是以異構(gòu)體混合物制得的，但在使用前，該混合物可通過常規(guī)方法，如分級結(jié)晶和色譜法分離并純化。
本發(fā)明化合物與有機(jī)酸或無機(jī)酸可共同形成藥理可接受的鹽。酸的優(yōu)選例子包括鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、檸檬酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、抗壞血酸以及甲磺酸。通過按通常方法向以游離堿形式存在的本發(fā)明化合物中加入必要量的這樣一種有機(jī)或無機(jī)酸，可制得藥理可接受的鹽。這樣制得的鹽可用一種堿處理而再次轉(zhuǎn)化成游離堿。用于這個目的的優(yōu)選堿包括氫氧化鈉、碳酸鉀、氨水和碳酸氫鈉的水溶液。
此外，本發(fā)明化合物可用一種適宜的堿與該化合物上的游離羧基反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成藥理可接受的羧酸鹽。這種堿的優(yōu)選例子包括堿金屬和堿土金屬的氫氧化物和碳酸鹽，例如氫氧化鈉和氫氧化鉀以及它們的相應(yīng)碳酸鹽，還有含氮堿如氨和以三乙胺為代表的烷基胺。
本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物的制備將敘述如下。
通式(Ⅰ)化合物可如下面反應(yīng)流程1制備，即，通過使式(Ⅲ)羧酸或其反應(yīng)性衍生物與式(Ⅳ)谷氨酸衍生物縮合，形成式(Ⅰ′)中間體，再由水解或氫解來對該中間體的羧基保護(hù)基團(tuán)去保護(hù)。
反應(yīng)流程1
其中，R1、R2、R5、R6、A、

和n如式(Ⅰ)、(Ⅲ)和(Ⅳ)所定義。
雖然這樣一種從式(Ⅲ)化合物與式(Ⅳ)化合物的縮合開始、以多種官能團(tuán)的去保護(hù)而結(jié)束的反應(yīng)序列是熟知的，因而是本專業(yè)技術(shù)人員易于進(jìn)行的，現(xiàn)仍給出式(Ⅰ)化合物制備方法的一個具體例子，雖然它僅是一個過程示例，本發(fā)明并不限于它。
現(xiàn)在敘述式(101)化合物，即6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物的制備方法的一個具體例子。
式(101)化合物可按反應(yīng)流程2來制備，即，使式(102)羧酸或它的反應(yīng)性衍生物與式(103)谷氨酸衍生物縮合以生成式(104)中間體，并通過水解或氫解來游離該中間體的羧基保護(hù)基， 反應(yīng)流程2
其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6和n分別如式(101)、(102)、(103)和(104)所定義。
任何肽合成的常規(guī)方法可用于上述縮合。例如，中間體(104)可通過使化合物(102)與一種羧酸活化試劑在有或沒有堿存在下反應(yīng)，并使所得化合物與化合物(103)反應(yīng)而制備，所說羧酸活化劑例如有氯代碳酸酯、有機(jī)酸酐、二苯基磷酰疊氮化物、二乙基偶磷氰化物羰基二咪唑(diethyl phosphorocyanidate carbonyldiimidazole)、氯代磷酸酯或碳化二亞胺。
以化合物(102)為基準(zhǔn)，活化試劑的用量為1-25摩爾當(dāng)量，最好為1-5摩爾當(dāng)量。作為活化劑使用的氯代碳酸酯包括氯代碳酸甲酯和氯代碳酸乙酯;有機(jī)酸酐包括乙酸酐、氯代乙酸酐和混合酸酐;氯代磷酸酯包括氯代磷酸二苯酯和氯代磷酸二乙酯。從實(shí)用的角度看，碳化二亞胺最好是二環(huán)己基碳化二亞胺，但可以適宜地選自二苯基碳化二亞胺、1，3-二對甲苯基碳化二亞胺、1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)碳化二亞胺等。
上述反應(yīng)最好在一種溶劑中進(jìn)行，溶劑可選自水、醇類(如甲醇、乙醇和丙醇)、醚類(如二乙醚、四氫呋喃和二噁烷)、腈類(如乙腈)、芳烴(如苯和甲苯)、鹵代烴(如二氯甲烷、氯仿和四氯化碳)、酮、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亞砜等。此外，選自上述兩種或多種溶劑的混合物可用作溶劑。
該反應(yīng)在有或沒有堿的存在下進(jìn)行。所用堿宜于選自無機(jī)堿如甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀和碳酸氫鈉;還有有機(jī)堿如三乙胺、三甲胺、吡啶和三乙醇胺。
然后，上述縮合步驟制備的酯(104)經(jīng)水解或氫解可轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離羧酸，這樣得到了化合物(101)。
水解可在水中進(jìn)行或，若有必需，在親水有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、四氫呋喃、二噁烷、二甲基甲酰胺或二甲亞砜中，通過使用一種含水無機(jī)酸如鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸，一種有機(jī)酸如三氟乙酸、三氯乙酸、對甲苯磺酸、苯磺酸或甲磺酸，一種含有苛性堿如氫氧化鈉或氫氧化鉀，一種堿金屬碳酸鹽如碳酸鈉或碳酸鉀，一種金屬醇鹽如甲醇鈉或乙醇鈉或一種胺如三乙胺或吡啶而進(jìn)行。反應(yīng)溫度可從在冰冷卻下達(dá)到的溫度至所用溶劑沸點(diǎn)之間變化，最好從10-70℃，反應(yīng)時(shí)間從約一小時(shí)至約兩天。當(dāng)使用堿金屬堿或有機(jī)堿時(shí)，產(chǎn)物中谷氨酸部分為酸式鹽形式或其中性鹽形式。
當(dāng)R5和R6分別為可被取代的芐基或苯基時(shí)，氫解是一種適宜的方式。這樣一種化合物的氫解如下進(jìn)行，即，在一種適合溶劑中，在-20℃至溶劑沸點(diǎn)，最好在0-50℃的溫度下，在一種還原催化劑存在下，用常壓或加壓，用氫催化還原化合物(104)。
反應(yīng)所用溶劑包括水、甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、二乙醚、四氫呋喃、二噁烷、苯、甲苯、二甲基甲酰胺、吡啶等，而鈀、鉑或銠用作催化劑，它們即可單獨(dú)地、也可載于載體上使用，阮內(nèi)鎳也可用作催化劑。
下面敘述原料(102)的制備。
式中R1是一個氨基的式(102)化合物可通過例如下面反應(yīng)路線(反應(yīng)流程3)制備

其中，R1為氨基;R2、R3、R4和n分別如式(102)和(105)中所定義;Y為一個鹵原子如氯、溴或碘原子;R7為一羧基保護(hù)基;R8為一通常的烯醇保護(hù)基如甲基、乙基、芐基或四氫吡喃基。
下面敘述上面的反應(yīng)步驟。
2-氰基-2-環(huán)戊烯-1-酮(107)可如下高產(chǎn)率地順利制備使環(huán)戊烯酮與一種三(低級烷基)鋁和一種芳香硫醇如硫酚或一種大體位脂肪族硫醇如異丙基硫醇反應(yīng)，然后與甲苯磺酰氰化物反應(yīng)，并使由此制得的產(chǎn)物與一種路易斯酸如硅膠或三氟化硼-醚反應(yīng)。此時(shí)，通過作為中間體的3-烷硫基-2-氰基環(huán)戊烷而生成2-氰基-2-環(huán)戊烯-1-酮(107)。
通過使具有ω-鹵代烷基的環(huán)式羧酸酯(106)與2-氰基-2-環(huán)戊烯-1-酮(107)反應(yīng)，可制得化合物(108)。該反應(yīng)是在一種氫化钖如氫化三烷基钖或氫化三苯基钖物、或氫化三烷基鍺物和一種自由基引發(fā)劑如偶氮雙異丁腈的存在下進(jìn)行。
另外，化合物(108)也可通過使一種由碘代烷基化合物(106)制得的有機(jī)銅化合物與2-氰基-2-環(huán)戊烯-1-酮(107)反應(yīng)而制得。該反應(yīng)中所用有機(jī)銅化合物可通過將一種銅鹽加到自碘代烷基化合物(106)衍生的一種有機(jī)鋅化合物中而制得。
3-取代的烷基-2-氰基環(huán)戊-1-酮(108)向一種低級烷基烯醇醚(109)的轉(zhuǎn)化可通過使化合物(108)與一種常規(guī)羥基保護(hù)劑如重氮甲烷或其類似物、2，2-二甲氧基丙烷/對甲苯磺酸或原甲酸酯反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)。
1-烷氧基-2-氰基-3-取代的烷基-1-環(huán)戊烯化合物(109)可轉(zhuǎn)化成式(105)所示的2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶化合物(其中R1為氨基)，這是一個目的化合物，其方法是，使化合物(109)與胍或其一種鹽常壓下或在一封閉管中加熱來反應(yīng)。在該反應(yīng)中，胍相對于烯醇醚(109)過量〔例如2-20倍、最好為5-10倍于醚(109)的摩爾量〕，而所用溶劑最好為非質(zhì)子傳遞溶劑如甲醇、乙醇、甲氧基乙醇、丙醇或2-甲基-2-丙醇，反應(yīng)溫度為50-200℃，最好為120-185℃，反應(yīng)時(shí)間最好為8-70小時(shí)。當(dāng)該反應(yīng)在高溫下長時(shí)間進(jìn)行時(shí)，式(102)所示羧酸有時(shí)直接生成。
一般而言，具有一個6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶環(huán)(102)的羧酸可如下制備，即，使一種相應(yīng)的式(105)羧酸酯進(jìn)行酸性或堿性水解或包括催化還原在內(nèi)的氫解，其過程于化合物(104)轉(zhuǎn)化為化合物(101)的過程相同。
式中R1為羥基的式(105)化合物可按反應(yīng)流程4所示的反應(yīng)路線制備 反應(yīng)流程4

其中，R1為羥基;R2、R3、R4、R7、R8、n和y分別如反應(yīng)流程3所定義;R9為一個具有1-4個碳原子的低級烷基。
用已知方法可制備2-羰基烷氧基-2-環(huán)戊烯-1-酮(101)。即，它可按M.A.Guaciaro et al在Tetrahedron，47，4661(1978)中公開的方法從2-環(huán)戊二烯-1-酮制備，或按H.J.Reich et al在J.Am.Chem.Soc.，97，5434(1975)中公開的方法從2-羰基乙氧基-環(huán)戊酮制備，同時(shí)，由這兩方法之一制得的產(chǎn)物可用于獲得本發(fā)明的目的化合物。
在氫化錫和偶氮雙異丁腈的存在下，使具有一種ω-鹵代烷基的環(huán)式羧酸酯(106)與2-羰基烷氧基-2-環(huán)戊烯-1-酮(110)反應(yīng)，可制得酮化合物(111)。
此外，使從碘烷基化合物(106)制備的一種有機(jī)銅化合物與2-羰基烷氧基-2-環(huán)戊烯-1-酮(110)反應(yīng)，也可制得該酮化合物(111)。該反應(yīng)中所用的有機(jī)銅化合物可通過向一種自碘烷基化合物(106)衍生得到的有機(jī)鋅化合物中加入一種銅鹽而制得。
酮化合物，即含環(huán)戊酮環(huán)的羧酸酯(111)向烯醇醚(112)的轉(zhuǎn)化可如下順利實(shí)現(xiàn)使酯(111)與一種常規(guī)羥基保護(hù)劑如重氮甲烷或其類似物、2、2-二甲氧丙烷/對甲苯磺酸或原甲酸酯反應(yīng)。
3-取代的烷基-2-羰基烷氧基-1-環(huán)戊酮化合物(111)或1-烷氧基-3-取代的烷基-2-羰基烷氧基-1-環(huán)戊烯化合物(112)可轉(zhuǎn)化成式(105)的含2-氨基-4-羥基嘧啶環(huán)的鏈烷羧酸酯(其中R1為羥基)，其方法是使化合物(111)或化合物(112)與胍或其一種鹽在溶劑中反應(yīng)。所用溶劑、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間可幾乎與上述R1為氨基時(shí)的情況相同。
在上述方法中用作中間體的具有鹵代烷基的環(huán)式羧酸酯(106)將由反應(yīng)流程5和6中敘及的方法制備。
制備環(huán)酯(106)的第一個方法如下 反應(yīng)流程5 第一個方法
其中，R2、R3、R4、R7、n和y已分別在反應(yīng)流程3中定義。
式(114)所示α，β-不飽和羧酸酯(其中R4為氫原子或羥基、R2和R7分別如上定義)可如下制備將一種膦酰基乙酸三烷基酯(如膦酰基乙酸三甲酯或膦?；宜崛阴?加到一種含有一種堿(如叔丁醇鉀/四氫呋喃、氫化鈉、氫化鋰或1，5-二氮雜環(huán)〔4.3.0〕壬-5-烯(DBN))的有機(jī)溶劑(即一種非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺、醚、四氫呋喃、烴如己烷或它們的二種或多種混合物)中，制得一個混合物，向該混合物中逐步加入一種具有被保護(hù)羧基的5-或6-員環(huán)醛〔由式(113)所示，其中R4為氫原子，R2和R7分別如上定義，它的例子包括 叔丁氧基羰基-取代的苯甲醛， 叔丁氧基羰基-取代的噻吩基醛，以及 叔丁氧基羰基-取代的呋喃基醛， 每一取代基可在2，3，4和5位的任一位置〕或一種具有被保護(hù)羧基的5-或6-員環(huán)酮〔如式(113)所示，其中R4為烴基如烷基、炔丙基或丙烯基，它的例子包括 烷基 叔丁氧基羰基苯基酮， 烷基 叔丁氧基羰基噻吩基酮， 烷基 叔丁氧基羰基呋喃基酮，以及 炔丙基叔丁氧基羰基苯基酮〕 然后使得到的混合物在室溫或加熱下反應(yīng)。由此制得的不飽和酯，(114)在常壓或加壓下催化還原為一種相應(yīng)的飽和酯(115)，然后再進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為一種具有一個羧基的5-或6-員環(huán)的化合物〔如式(116)所示，其中R4為氫原子或烴基，R2和R4分別如上定義，它的例子包括 ω-(4-(叔丁氧羰基)苯基)丙酸， ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-噻吩基)丙酸，和 ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-呋喃基)丙酸， 它可在其芐基位置被一個烷基取代〕。由此制得的化合物(116)可通過將羧基還原成羥基而轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的醇(117)。在該還原中所用的還原劑包括甲硼烷和甲硼烷類似物(如甲硼烷-二甲硫，甲硼烷-四氫呋喃和9-硼烷環(huán)〔3.3.1〕壬烷)，而所用溶劑包括四氫呋喃和醚。然后，在一種堿存在下，醇(117)用磺酸酯化(如甲磺?；蚣妆交酋；?，所得酯在一種非質(zhì)子傳遞溶劑中在加熱下用一種堿金屬鹵化物進(jìn)一步鹵化，得到具有一個ω-鹵代烷基的環(huán)式羧酸酯(106a)〔相應(yīng)于式(106)化合物，其中R3為鹵素原子;R4為氫原子或甲基或乙基;n為2;R2、R7和y分別如式(106)中所定義〕。例如，通過該方法可制得 ω-(4-(叔丁氧羰基)苯基)丙基鹵化物 ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-噻吩基)丙基鹵化物，和 ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-呋喃基)丙基鹵化物。
式(106)所示環(huán)式羧酸酯(其中R3為氫原子，R4為氫原子或低級烷基，n為1，R2和R7分別如式(106)所定義)可由第二個方法制備，它敘述于反應(yīng)流程6中。
反應(yīng)流程6 第二個方法
式(113)化合物(其中R2和R7分別如式(106)所定義，R4為氫原子或低級烷基)中的羰基可通過Wittig反應(yīng)轉(zhuǎn)化成一個外式亞甲基，該外式亞甲基可通過氫硼化作用進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為羥甲基。由此制得的羥甲基化合物可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為鹵化物(106b)。更確切地說，通過在冷卻下將化合物(113)加入到一種溶液中而可制得外式亞甲基化合物(118)，所說溶液可通過在冷卻下將丁基鋰加入到溴化甲基三苯基鏻溶于四氫呋喃的溶液中而預(yù)先制備?；衔?118)用一種氫硼化物如9-硼烷雙環(huán)〔3.3.1〕壬烷、甲硼烷、二環(huán)己基硼烷、disiamytborane或thexyl borane進(jìn)行氫硼烷化，然后與過氧化氫的堿性溶液反應(yīng)，得到一種伯醇(119)，它又可轉(zhuǎn)化為一種ω-鹵代烷基化合物(106b)〔相對應(yīng)于式(106)化合物，其中R3為氫原子，R4為氫原子或甲基或乙基，n為1，R2、R7和y分別如式(106)中所定義〕，其過程與上述從(117)至(106a)的轉(zhuǎn)化相同。
由此制得的化合物(106)用于化合物(108)和(111)的制備中，后者是本發(fā)明中重要的中間體。
在上述方法中所用的化合物(113)中，式(113)所示的一種化合物(其中R2為亞噻吩基，R4為氫原子)可如下制備首先，由市售的2-噻吩酰氯與一種醇鹽在冷卻下或在室溫下反應(yīng)，制得2-噻吩羧酸酯，然后，通過使2-噻吩羧酸酯與丁基鋰在N，N，N′，N′-四甲基乙二胺存在和冷卻下反應(yīng)，并把無水二甲基甲酰胺加入所得反應(yīng)混合物中以進(jìn)行反應(yīng)，可將該2-噻吩羧酸酯轉(zhuǎn)化為2-甲酰-5-噻吩羧酸酯(113)。此外，式(113)化合物(其中R2為亞噻吩基，R4為甲基或乙基)也可按上述類似方法制備。亦即，相應(yīng)的甲基噻吩基酮和乙基噻吩酮可按上述方法同樣制備，不同之處在于，二甲基甲酰胺被二甲基乙酰胺或二甲基丙酰胺所替代。除此之外，式中R2為亞苯基和R4為氫原子的式(113)化合物可通過將對甲酰苯甲酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰氯并使該酰氯酯化而制得，而式中R2為亞苯基和R4為甲基或乙基的式(113)化合物可按R.Joyeau et al的方法制備(見J.Chem.Soc.，Perkin Trans.I，1899-1907(1987))。
本發(fā)明式(101)化合物的一些具體例子包括 N-｛4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸; N-｛5-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸; N-｛4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸; N-｛5-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨基; N-｛5-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰｝-L-谷氨酸; N-｛5-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲酰｝-L-谷氨酸; N-｛5-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸; N-｛4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛4-〔3-(2.4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5基-1-甲基丙基〕-2-苯甲酰-2-谷氨酸 N-｛4-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛4-〔3-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔3-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔3-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛4-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛5-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸， N-｛4-〔2-(2-氨基-4-羥基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸。
現(xiàn)在將敘述通式(1)化合物，即吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物。
通式(1)吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物和其藥理可接受鹽(以下簡稱“化合物(1)”，它們是本發(fā)明的目的化合物)和其制備用的中間體可通過下敘反應(yīng)流程所示方法制備。在這些反應(yīng)流程中，Me為甲基，Et為乙基，Bu為丁基，Ac為乙?；琍h為苯基，dioxane為二噁烷，acetophenonc為乙酰苯，Ordinary temperature為常溫。
反應(yīng)流程7 方法1
其中R1、R2、R3、R4和n分別如式(1)中所定義;R5、R6和R7可相同或不同，各自為一羧基保護(hù)基，而該羧基保護(hù)基包括叔丁基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、烷基(C1-4)、芐基、取代的芐基和苯基。
本發(fā)明的化合物(1)或其鹽可通過化合物(5)的水解或氫解而制備。水解可采用含水無機(jī)酸、有機(jī)酸如三氟乙酸、含水堿金屬氫氧化物或堿金屬碳酸鹽或一種有機(jī)堿在含水溶液，或若有必要，在一種親水性有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、四氫呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺存在下常溫實(shí)現(xiàn)。當(dāng)采用一種堿金屬的或有機(jī)的堿時(shí)，產(chǎn)物中的谷氨酸部分為酸式鹽的形式或其中性鹽的形式。當(dāng)R5和R6均為芐基、取代的芐基或苯基時(shí)，氫解是一種適宜的方法?；衔?5)的氫解可在一種適宜的催化劑如鈀(既可單獨(dú)使用，也可載于一種載體上)的存在下在常壓或加壓下進(jìn)行。上述方法制得的化合物(1)為粉末、晶狀固體或結(jié)晶。
用于制備化合物(1)的中間體酯化合物(5)可用常規(guī)肽合成方法制備，即，使具有一個吡咯并〔3，2-d〕嘧啶環(huán)的化合物(2)與一羧酸活化劑如氯代碳酸酯、有機(jī)酸酐、DPPA、CDI、氯代磷酸酯或DCC在有或沒有堿存在下反應(yīng)，將化合物(2)轉(zhuǎn)化成一種活性衍生物如混合酸酐或活性酯，然后使該活性衍生物與其羧基被保護(hù)的谷氨酸衍生物(3)反應(yīng)。
化合物(2)可由化合物(6)通過酸性或堿性水解或通過包括催化還原在內(nèi)的氫解而制備。
方法1中所用化合物(6)可通過例如反應(yīng)流程8中所示的方法2制備 反應(yīng)流程8 方法2
其中，R1、R2、R3、R4、R7和n分別如反應(yīng)流程7所定義;R8為羧基保護(hù)基;R9為烷基或苯基。
當(dāng)目的化合物是式(6)中R1為氨基的化合物相應(yīng)的2，4-二氨基嘧啶化合物時(shí)，它可如下制得通過使化合物(7)與一個N-?；虼惽杷狨?AcylNcs，其中相應(yīng)于R9CO基的?；且粋€脂族或芳香?；?，如乙酰基或苯甲?；?在一種非質(zhì)子傳遞溶劑中反應(yīng)，從而將化合物(7)順利地轉(zhuǎn)化為化合物(8)，再用常規(guī)方法使化合物(8)進(jìn)行S-低級烷基化(如甲基化)，并使得到的S-烷基化物與NH，在常壓下或在封閉管中加熱進(jìn)行反應(yīng)。
當(dāng)目的化合物是式(6)中R1為羥基的化合物相應(yīng)的2-氨基-4-羥基嘧啶化合物時(shí)，它可如下制得通過使化合物(9)與一個N-酰基硫代異氰酸酯(AcylNCS)在一種溶劑中和在室溫或冷卻下反應(yīng)，從而將化合物(9)轉(zhuǎn)化為化合物(10)，再使化合物(10)進(jìn)行S-低級烷基化，并在加熱下使制得的烷基化物與NH3反應(yīng)，通過環(huán)閉合將烷基化物轉(zhuǎn)化為目的化合物。
方法(2)中所用的化合物(7)可通過反應(yīng)流程9所示的方法3制備 反應(yīng)流程9 方法3

其中R2、R3、R4、R7和n分別如反應(yīng)流程7所定義;y為鹵素原子。
化合物(11)通過使3-二甲基氨基丙烯腈與氨基乙腈反應(yīng)而制得。
在一種堿〔如堿金屬鹵化物或有機(jī)堿如DBU(1，8-二氮雜雙環(huán)〔5.4.0〕十一-7-烯)、DBN(1，5-二氮雜雙環(huán)〔4.3.0〕壬-5-烯)或DMAP(4-二甲基氨基吡啶)〕存在下、在室溫或加熱下使化合物(11)與化合物(12)反應(yīng)，可將(11)轉(zhuǎn)化為化合物(13)。在一種光敏劑(如甲基萘基酮或乙酰苯)存在下，在一種適宜的溶劑中，用紫外光輻射化合物(13)，使它發(fā)生異構(gòu)化而可轉(zhuǎn)化為化合物(14)。在一種質(zhì)子吸收劑如醇鈉、LDA(二異丙酰胺鋰)或己二硅氮烷鋰存在下，化合物(14)可通過環(huán)閉合而容易地轉(zhuǎn)化為化合物(7)。
在制備式(6)中R1為羥基的化合物中用作方法(2)的原料的化合物(9)可通過如下面反應(yīng)流程10所示的方法4來制備 反應(yīng)流程10 方法4
其中，R2、R3、R4、R7、R8、n和y分別如反應(yīng)流程7-9中所定義。
使3-二甲基氨基丙烯腈與氨基乙酸反應(yīng)，可制得化合物(15)。按類似于方法3的方式可將化合物(15)經(jīng)化合物(16)和(17)轉(zhuǎn)化為化合物(9)。
在化合物(7)和(9)的制備中用作另一種原料的化合物(12)中，式(12)中R3為氫原子和n為2的化合物(12a)可通過示于反應(yīng)流程11中的下列方法5制備 反應(yīng)流程11 方法5

其中，R2、R4、R7和y分別如反應(yīng)流程7-9所定義。
化合物(19)可如下制備將一種膦?；宜崛榛?如膦酰基乙酸三甲酯或膦酰乙酸三乙酯)滴加到一種含有一種堿(如叔丁醇鉀/四氫呋喃、氫化鈉或DBN)的有機(jī)溶劑中(非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺、醚、四氫呋喃、其它們的混合物)，向所得混合物中加入一種具有被保護(hù)羧基的化合物(18) 〔包括叔丁氧羰基取代的苯甲醛， 叔丁氧羰基取代的噻吩基醛，和 叔丁氧羰基取代的呋喃基醛，和 它們相應(yīng)于式(18)中R4為氫原子的化合物，且后兩個化合物分別可在2、3、4和5位的任意一處具有所說取代基; 還包括烷基叔丁氧羰基苯基酮， 烷基叔丁氧羰基噻吩基酮， 烷基叔丁氧羰基呋喃基酮，和 炔丙基叔丁氧羰基苯基酮， 它們相對應(yīng)于式(18)中R4為烴基的化合物〕，使所得混合物在室溫或加熱下反應(yīng)。由此制得的化合物(19)在常壓或加壓下催化還原成相應(yīng)的飽和酯，它再通過堿性水解進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為同時(shí)具有一個羧酸基和一個被保護(hù)的羧基(即一個酯醛)的化合物(20) 〔例如 ω-(4-叔丁氧羰基苯基)鏈烷酸， ω-(5-(叔丁氧羰基噻吩-2-基)鏈烷酸，或 ω-(5-(叔丁氧羰基呋喃-2-基)鏈烷酸， 其中，鏈烷酸部分既可為直鏈的，也可為支鏈的〕。然后，通過羧基還原，化合物(20)被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的化合物(21)。還原中所用的還原劑包括甲硼烷和甲硼烷類似物(如甲硼烷-二甲硫、甲硼烷四氫呋喃和9-甲硼烷基環(huán)〔3，3，1〕壬烷)，而其中所用溶劑包括四氫呋喃和醚。式(21)化合物在一種堿存在下進(jìn)行磺化(如甲磺?；没撬狨ビ脡A金屬鹵化物進(jìn)一步鹵化(在非質(zhì)子傳遞溶劑中，加熱)，得到式(12a)中y為氯，溴或碘的化合物〔例如 ω-(4-(叔丁氧羰基苯基)-丙基鹵， ω-(5-(叔丁氧羰基噻吩基)-丙基鹵，或 ω-(5-(叔丁氧羰基呋喃基)-丙基鹵〕。
此外，式(18)中R4為甲基的化合物，亦即化合物(18a)可用如下方法轉(zhuǎn)化為一種異丙烯鹵化物12(b)用溴化甲基三乙基鏻使化合物18(a)進(jìn)行Wittig反應(yīng)，生成一種異丙烯基化合物(22)，然后用NBS或NCS鹵化化合物(22)。
此外，化合物(22)可用如下方法轉(zhuǎn)化為一種ω-鹵代烷基化合物(12c)使化合物(22)與一種氫硼化合物如9-硼烷基雙環(huán)〔3，3，1〕壬烷、甲硼烷、二環(huán)己基甲硼烷、disiamyl borane或Hexyeborane反應(yīng)以進(jìn)行氫硼化，用一種過氧化氫的堿性溶液處理產(chǎn)物，以形成一種伯醇，再按上述(21)轉(zhuǎn)化為(12a)的類似方式處理該伯醇。
式(26)化合物按反應(yīng)流程12中所示方法6制備。
反應(yīng)流程12 方法6

其中，R2、R7和y分別如反應(yīng)流程7-9中所定義。
式(18)中R4為氫原子的式(18)化合物、亦即化合物(18b)如叔丁氧羰基苯甲醛、叔丁氧羰基呋喃醛或叔丁氧羰基噻吩醛與一種乙烯基鎂鹵化物反應(yīng)，得到一種烯丙醇(23)，用例如甲硅烷基醚保護(hù)該醇(23)，然后氫硼化，得到伯醇(25)，它可按上述類似方式轉(zhuǎn)化為一種鹵化物(26)。
由化合物(11)與該鹵化物(26)反應(yīng)而制得的化合物相應(yīng)于式(13)化合物(其中，一個仲羥基鍵合到相對于構(gòu)成叔胺的氮原子而言的γ-碳原子上)。該羥基可用已知方法還原為氫原子，形成一個式(13)中R3和R4為氫原子且n為2的化合物。此外，通過使該羥基氧化成一個羰基并使該羰基進(jìn)行Wittig反應(yīng)，該羥基也可被轉(zhuǎn)化為一個外式亞甲基。
式(32)化合物按反應(yīng)流程13所示方法7制備。
反應(yīng)流程13 方法7
其中R2、R7和y分別如反應(yīng)流程7-9所定義。
伯醇(25)可用如下方法轉(zhuǎn)化為酮(29)使醇(25)與2，3-二氫呋喃或3，4-二氫-2H-吡喃反應(yīng)，借此用四氫呋喃-2-基或四氫吡喃-2-基保護(hù)該羥基，使得到的被保護(hù)的醇與溴化四丁基銨反應(yīng)，以便解封仲醇基，并使該仲醇進(jìn)行Swern氧化。該酮(29)可用如下方法進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為化合物(32)使酮(29)進(jìn)行Wittig反應(yīng)(與Ph3P+MeBr-、Buli和THF)，以將它轉(zhuǎn)化為一種外式亞甲基化合物(30)，再使化合物(30)的伯醇基去保護(hù)，再按上述類似方式處理得到的醇(31)。
用于制備式(13)中R3為氫原子且n為1的化合物(它被稱為化合物(13a)的第二種方法將在示于反應(yīng)流程14中的方法8中敘述 反應(yīng)流程14 方法8

其中，R2、R4、R7和y分別如反應(yīng)流程7-9中定義。
化合物(36)可如下制備使具有鹵代烷基、低級烷基和保護(hù)了的羧基的化合物(33)氰化(用DMSO中的KCN)，把得到的腈(34)還原為一種伯胺(35)(用THF中的BH3)，并使胺(35)用二甲基氨基丙烯腈進(jìn)行置換(在有或沒有AcONa存在下在醇溶劑中)?；衔?36)可通過氰甲基化轉(zhuǎn)化為化合物(13a)。化合物(33)可通過相應(yīng)烷基化物用NBS溴化或相應(yīng)羥甲基取代的衍生物的鹵化而制備?；衔?36)的氰甲基化可通過將它與一種堿金屬氰化物和在乙酸中仲甲醛反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)。
制備式(13)中R3和R4共同形成一個外式亞甲基且n為1的化合物(以下稱為化合物(13c))的第三種方法下述于反應(yīng)流程15所示的方法9中 反應(yīng)流程15 方法9
其中R2和R7分別如反應(yīng)流程7-9所定義;R11為氫原子或低級烷基。
該方法的特征在于，采用一種環(huán)氧化物來代替烷基鹵(12)。式(18b)化合物(其中R2和R7分別如上定義)中的羰基可通過Wittig反應(yīng)轉(zhuǎn)化為一個外式亞甲基;該外式亞甲基又可通過前述的氫硼化轉(zhuǎn)化為一個羥基;所得化合物可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為鹵化物(12d)。更具體地說，該外式亞甲基化合物(37)可通過Wittig反應(yīng)制得，該反應(yīng)中，先將丁基鋰?yán)鋮s下加入到溴化甲基三苯基鏻于四氫呋喃中形成的懸浮液中而制得一個溶液，再將化合物(18b)加到該溶液中。由此制得的外式亞甲基化合物(37)可按類似于上述的方式轉(zhuǎn)化為一種ω-鹵代烷基化合物(12d)，亦即，用氫硼化合物如甲硼烷使化合物(37)氫硼化，再用過氧化氫的堿性溶液與所得產(chǎn)物反應(yīng)，形成一種伯醇(41)，再按上述將(21)轉(zhuǎn)化為(12a)的類似方式處理該醇(41)。這樣制得的二腈中間體(13b)具有一個仲羥基，它鍵合到相對于形成該叔胺的氮原子為ω-碳的碳原子上。該仲羥基可按已知方法轉(zhuǎn)化為氫原子。此外，中間體(13b)可用如下方法轉(zhuǎn)化為具有一個亞烷基側(cè)鏈的化合物(13c)把化合物(13b)氧化為一種化合物(39)，再使該化合物(39)進(jìn)行Wittig反應(yīng)。
本發(fā)明的式(1)化合物的具體例子包括 N-〔4-(3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-(3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基)丙基-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-亞甲基丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基丙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基丙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕噻吩甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸， N-〔4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基乙基〕-2-噻吩甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基乙基〕-2-呋喃甲酰， N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-亞甲基乙基〕-苯甲?！?L-谷氨酸， N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-亞甲基乙基-噻吩甲?！?L-谷氨酸，以及 N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-亞甲基乙基〕-2-呋喃甲?！?L-谷氨酸。
為了說明本發(fā)明的作用，現(xiàn)在將敘述藥理試驗(yàn)例。
試驗(yàn)例1 對二氫葉酸還原酶(DHFR)的抑制活性。
基本上按D.K.Misra等人的方法進(jìn)行測量〔見Nature 189，39至42(1961)〕。
按J.M.Whiteley等人的方法用小鼠白血病細(xì)胞P388制備DHFR〔見ArCh.Biochem.Biophys.，150，15至22(1972)〕。
將提純的DHFR的溶液加入含磷酸鉀緩沖溶液(pH7.5，75mM)，巰基乙醇(7.5mM)和NA DPH(0.25mM)的溶液中，使總量達(dá)0.57ml。以0.015ml的用量將各個本發(fā)明化合物的系列稀釋液加入到上面制備的混合物中，在37℃預(yù)先加熱由此制得的混合物5分鐘，接著加入0.015ml 25μm的二氫葉酸溶液，在37℃保持獲得的混合物5分鐘以進(jìn)行反應(yīng)。檢測得到的混合物每分鐘在339nm處吸收的降低。基于上述降低程度確定形成的四氫葉酸的量并與對照溶液(不含本發(fā)明的化合物)比較，以計(jì)算50%DHFR抑制濃度(IC50)。結(jié)果列于表1-A和1-B中。
表1-A 化合物 IC50×108M 實(shí)施例2 9.7 實(shí)施例4 9.0 實(shí)施例6 100 實(shí)施例9 3.0 表1-B 化合物 DHFR抑制活性IC50×109 實(shí)施例103 72 實(shí)施例105 4.0 實(shí)施例108 7.6 試驗(yàn)例2 對瘤細(xì)胞增生的抑制作用 用小鼠白血病細(xì)胞P388、小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞結(jié)腸38、人鼻咽癌細(xì)胞KB和人肺癌細(xì)胞A549作為瘤細(xì)胞。將用RPM1-1640介質(zhì)(10%胎牛血清)制得的上述癌細(xì)胞的懸浮液以預(yù)定的量各吸入96孔的微板。將微板放置在含5%CO2的二氧化碳保溫箱中并在37℃溫育1天。用培養(yǎng)介質(zhì)稀釋本發(fā)明化合物的DMSO溶液以制備化合物的系列稀釋液。以預(yù)定的量將這些稀釋液加入上述孔中。在37℃培養(yǎng)得到的微板3天，用MTT法測定細(xì)胞的存活數(shù)目，以測得50%細(xì)胞增生抑制濃度(IC50)，按M.C.Alley等人的方法測定細(xì)胞的存活數(shù)目〔見Cancer Research，48，589至601(1988)〕，結(jié)果列于表2-A和2-B中。按類似的方法對作為對照化合物的MTX進(jìn)行測試。
表2-A 化合物 MTX 實(shí)施例2 實(shí)施例4 實(shí)施例6 實(shí)施例9 P388 1.6 1.2 1.6 1.2 1.7 A549 8 1.9 6.3 94 10 KB 2 0.98 3.1 3.0 3.2 細(xì)胞38 6 4.0 12.9 34 3.9 (IC50×108M) 表2-B 增生抑制活性 IC50×109M 化合物 MTX 實(shí)施例103 實(shí)施例105 實(shí)施例108 P388 22 7.7 1.8 2.7 A549 88 9.8 2.4 9.3 LX-1 - - 0.67 - KB 11 3.8 0.92 1.6 結(jié)腸38 28 8.9 0.87 4.1 試驗(yàn)例3 對移植到小鼠上的試驗(yàn)瘤的活性作用的試驗(yàn) 小鼠P388白血病 將P388細(xì)胞(1×106)接種到7周齡的雌性CDF1小鼠的腹腔中。第二天起每天給予小鼠試驗(yàn)藥物一次，共四天。
以溶于懸浮于在生理鹽水中的NaHCO34%溶液中的形式腹腔內(nèi)給予各個試驗(yàn)藥物，而對于對照組僅給予在生理鹽水中的NaHCO3的4%溶液。每個對照組有10只小鼠，而每個治療組有6只小鼠?；诎聪铝蟹绞接?jì)算的T/C值估測抗腫瘤活性 T/C(%)＝治療小鼠的平均存活時(shí)間(天)/對照小鼠的平均存活時(shí)間(天) 按R.I.Geran等人的方法進(jìn)行測量(見Cancer Chemotherapy Reports(Part 3)，31(1972)。按類似方法對作為對照化合物的MTX進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果列于表3-A和3-B中。


從上述試驗(yàn)例的結(jié)果可看出，本發(fā)明的化合物對二氫葉酸還原酶(DHFR)顯示出抑制活性，從而顯著地抑制小鼠白血病細(xì)胞P388、小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞結(jié)腸38、人的非小細(xì)胞性的肺癌細(xì)胞A549和人的表皮癌細(xì)胞KB的增生。
另外，還可看出，本發(fā)明的化合物對已移植白血病細(xì)胞或某些固體腫瘤細(xì)胞的小鼠的腫瘤組織的增生有抑制作用，從而延長生命或起治療作用，因此，本發(fā)明的化合物有望有效地用于治療或維持治療人類腫瘤。具體地說，本發(fā)明的化合物可單獨(dú)或與其它抗癌藥一起治療或維持治療各種腫瘤，例如已用MTX進(jìn)行治療的絨膜癌、白血病、雌性乳腺癌、頭或頸的表面癌、鱗狀細(xì)胞或小細(xì)胞性肺癌或各種淋巴肉瘤。
本發(fā)明化合物的一個特征在于其毒性比MTX低，在抗腫瘤活性試驗(yàn)中作為藥物顯示出顯著作用，且其有效劑量較寬。另外，本發(fā)明的化合物的毒性通常也比Miwa等人報(bào)道的上述吡咯并〔3，2-d〕嘧啶化合物低，本發(fā)明化合物對MTX感受的腫瘤的最小有效劑量與MTX的幾乎處于相同級數(shù)。但是，本發(fā)明化合物應(yīng)用于患腫瘤小鼠(CDF1)時(shí)最大有效劑量與最小有效劑量之比要比MTX應(yīng)用時(shí)大。確切地說，實(shí)施例2和9的化合物的劑量之比均為數(shù)十倍(約60)。而MTX的劑量之比很小，低于10， 當(dāng)本發(fā)明的化合物用作藥物時(shí)，他們可就這樣或以藥用羧酸鹽或酸加成鹽的形式經(jīng)口腔或腸胃外給藥。其劑量根據(jù)癥狀;病人的體重年齡、性別和敏感性;給藥方式(途徑)和間隔(時(shí)間表);活性組分的種類;制劑的種類和性質(zhì)等而變化，沒有特殊的限制，每個實(shí)驗(yàn)對象(60Kg，1.62平方米/人)的日劑量通常為1至2000mg，較好的為10至1000mg或1至300mg，最好為10至150mg，可每天一次連續(xù)給藥或每周1至3次間歇給藥。
通過往活性組分中加入填充劑，若需要，再加入粘合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑和/或矯正劑并將獲得的混合物配制成片劑、頰劑、錠劑、顆粒劑、粉劑、膠囊劑、懸浮液或糖漿的方式，將本發(fā)明的化合物制成口服制劑，各個給藥單元內(nèi)活性組分與填充白劑之比(%)在約0.5至50%(重量)范圍內(nèi)較為合適，當(dāng)上述比處于該范圍內(nèi)時(shí)，可獲得較好的劑量。
填充劑的例子有乳糖、玉米淀粉、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、結(jié)晶纖維素和二氧化硅;粘合劑的例子有聚乙烯醇、聚乙烯醚、乙基纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、片膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、檸檬酸鈣、糊精和果膠;潤滑劑的例子有硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、硅石和硬化植物油;著色劑的例子有認(rèn)可用作藥用添加劑的那些著色劑;矯正劑的例子有可可粉、薄荷草、芳香粉、薄荷油、冰片和粉狀肉桂皮。若需要，片劑和顆粒劑當(dāng)然宜用糖、乳糖等包覆。
非腸胃給藥的制劑包括注射劑、分散劑和乳劑。本發(fā)明注射劑的制備方法包括根據(jù)需要將pH調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、懸浮劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、增強(qiáng)劑和/或防腐劑加到有效成分中，然后按常規(guī)方法將混合物配制成靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射劑。
注射劑包括無菌水溶液和分散液以及注射制劑使用前的無菌粉末。載體可以是含水、乙醇、甘油、多醇、上述二種或多種載體的混合物或植物油，可通過將化合物分散在含甘油、液態(tài)聚乙二醇或其混合物的水性或油性介質(zhì)中的方法制備分散劑。注射制劑使用前的無菌粉末宜采用將含化合物的無菌濾液進(jìn)行真空濃縮/干燥或冷凍干燥的方法制備。
懸浮劑的例子包括甲基纖維素、多乙氧基醚、羥乙基纖維素、金合歡、黃蓍膠粉末，羧甲基纖維素鈉和聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸酯。
增溶劑的例子包括聚乙烯硬化蓖麻油，多乙氧基醚、煙酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸酯、Macrogol和蓖麻油脂肪酸的乙酯。
穩(wěn)定劑的例子包括亞硫酸鈉、焦硫酸鈉和醚;防腐劑的例子有對羥基苯甲酸甲酯，對羥基苯甲酸乙酯、山梨酸、酚、甲酚和氯甲酚。
現(xiàn)在將參照下列制備例和實(shí)施例對本發(fā)明作更詳細(xì)的描述，但本發(fā)明不限于此。
在下列制備例和實(shí)施例的光譜數(shù)據(jù)中，isomer表示“異構(gòu)體”;Olefinic Proton表示“烯屬質(zhì)子”;Pyrrole表示“吡咯”;ethylidene表示“亞乙基”;Mass表示“質(zhì)譜”;neat表示“凈”。
制備例1 3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈〔化合物(11)〕 將氨基丙烯腈氫氯化物(26.5g，0.28mol)，乙酸鈉(34.8g，0.42mol)和3-二甲基氨基丙烯腈(13.8g，0.1mol)加入含甲醇(300ml)和水(20ml)的混合物中。在室溫下攪拌獲得的混合物24小時(shí)，接著加入水。用乙酸乙酯萃取得到的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理獲得的殘余物并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶1)洗脫，得到9.3
(1H× isomer) 制備例2 4-(3-碘丙基)-苯甲酸叔丁酯 〔通式(12)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為H，R7為叔丁基，Y為I〕 將叔丁醇鉀(8.4g，0.075mol)加入二乙基膦?；宜嵋阴?19ml，0.075ml)的THF(200ml)溶液中，在室溫下攪拌獲得的混合物30分鐘，接著加入對甲酰基苯甲酸叔丁酯(10.3g 50mmol)的THF(20ml)溶液。在室溫下攪拌獲得的混合物30分鐘并倒入氯化銨的飽和水溶液中。用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶10)洗脫，得到4-(叔丁氧羧基)苯基丙烯酸乙酯。在甲醇(200ml)中用10%鈀-碳(0.5g)催化還原該產(chǎn)物，然后加入到含1N氫氧化鈉水溶液(100ml)和甲醇(100ml)的混合物中。在室溫下攪拌獲得的混合物2小時(shí)。反應(yīng)完全后，用1N鹽酸水溶液使反應(yīng)混合物呈弱酸性，用乙酸乙酯萃取。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用短硅膠柱色譜法提純殘余物，得到4-(叔丁氧羰基)苯基丙酸。將該酸溶于THF(100ml)中，接著在冰冷卻下滴加BH3于THF(100ml)中的1M溶液。在室溫下攪拌獲得的混合物1小時(shí)。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙酸乙酯萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶1)洗脫，得到4-(叔丁氧羧基)苯基丙醇。將該產(chǎn)物溶于乙醚(300ml)，接著在冰冷卻下加入三乙胺(21ml)和甲磺酰氯(5.8ml)。攪拌獲得的混合物30分鐘。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，得到甲磺酸4-(叔丁氧羰基)苯基丙酯，將該產(chǎn)物溶于丙酮(300ml)中，接著加入碘化鈉(30g)。加熱回流獲得的混合物1小時(shí)。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶10)洗脫，得到14.5g無色油狀的標(biāo)題化合物(84%) ·NMR(CDCl3)δ(ppm) 2.06-2.15(2H，m，I-CH2-CH2-CH2-Ar)，2.76(2H，t，J＝7.2Hz，I-CH2-CH2-CH2-Ar)，3.14(2H，t，J＝7.2Hz，I-CH2-CH2-CH2-Ar)，7.24(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.92(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 制備例3 4-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(7)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為H，R7為叔丁基〕 將制備例1制得的3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈(1g，9.3mmol)溶于含THF(20ml)和DMF(4ml)的混合物中，接著在冰冷卻下加入60%氫化鈉(0.45g)。攪拌獲得的混合物，接著滴加制備例2制得的4-(3-碘丙基)苯甲酸叔丁酯(3.2g)于THF(10ml)中的溶液。在室溫下攪拌獲得的混合物1小時(shí)以完全反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中。用乙酸乙酯萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑。用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶2)洗脫，得到2.5g(E)-4-(3-(N-氰甲基-N-對-氰乙烯氨基)丙基〕苯甲酸-叔丁酯。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(9H，s，t-Bu)，1.87-1.97(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，2.64(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，3.17(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，3.94(2H，s，N-CH2-CN)，4.0(1H，d，J＝18Hz，NC-CH＝CH-N)，6.85(1H，d，J＝18Hz，NC-CH＝CH-N)，7.21(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.92(2H，d，J＝8Hz，ArH) 然后將E型異構(gòu)體溶于乙醚。在乙酰苯存在下用光(來自高壓汞燈)輻射獲得的溶液4小時(shí)。蒸餾反應(yīng)混合物以除去溶劑。用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝2∶1)洗脫，從而分離(Z)-4-〔3-(N-氰甲基-N-對-氰乙烯氨基)丙基)苯甲酸叔丁基(1.0g)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.57(9H，s，t-Bu)，1.97-2.05(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，2.71(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2CH2-CH2-Ar)，3.39(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，3.93(1H，d，J＝10Hz，NC-CH＝CH-N)，4.25(2H，s，N-CH2-CN)，6.23(1H，d，J＝10Hz，NC-CH＝CH-N)，7.24(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.91(2H，d，J＝8Hz，ArH) 將該Z型異構(gòu)體(1.0g)溶于THF(50ml)中，接著在-78℃滴加LDA(3.75mmol)的THF溶液。攪拌獲得的混合物以完成反應(yīng)。往反應(yīng)混合物中加氯化銨的飽和水溶液。用乙醚萃取獲得的混合物，蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(1g，33%)。
NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.6(9H，s，t-Bu)，2.08-2.17(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，2.64(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2CH2-CH2-Ar)，3.86(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，5.64(1H，d，J＝3Hz，pyrrole 4-H)，6.51(1H，d，J＝3Hz，pyrrole 5-H)，7.21(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.91(2H，d，J＝8Hz，ArH) ·MSFAB-MS m/z325(M+) 實(shí)施例1 4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯
〔通式(6)表示的化合物，式中n為2，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為H，R4為H，R7為叔丁基〕 將制備例3制得的4-〔3-(3-氨基-2-氰基吡咯-1-基)-丙基〕苯甲酸叔丁酯(2.35g，7.2mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，接著在冰冷卻下滴加苯甲酰異硫氰酸酯(1.14ml，8.6mmol)。在冰冷卻下攪拌獲得的混合物1小時(shí)，并蒸餾以除去溶劑。用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶1)洗脫溶劑，得到硫脲。將該硫脲溶于二氯甲烷(70ml)中，接著加入DBN(1.07ml，8.6mmol)和甲基碘(1.34ml，21.6mmol)。在室溫下攪拌獲得的混合物1小時(shí)以完成反應(yīng)，將反應(yīng)混合物倒入水中，用二氯甲烷萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶1)洗脫，得到S-甲基硫脲化合物，將該化合物溶于50ml氨的甲醇溶液(在冰冷卻下用氨飽和甲醇制得)中，在高壓釜中于90℃下加熱獲得的溶液24小時(shí)。反應(yīng)完全后，濃縮反應(yīng)混合物，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶1)洗脫，得到4-〔3-(4-氨基-2-甲基硫代吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯。再用另一種溶劑(乙酸乙酯/甲醇/乙酸＝8∶1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(1.32g，50%) ·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm) 1.58(9H，s，t-Bu)，2.07-2.17(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，2.62(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2CH2-CH2-Ar)，4.25(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，6.08(1H，d，J＝3Hz，7-H)，7.18(1H，d，J＝3Hz，6-H)，7.23(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.88(2H，d，J＝8Hz，ArH) ·MSFAB-MS m/z368(M+H+) 實(shí)施例2 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕〕苯甲?！?L-谷氨酸
〔通式(1)表示的化合物，式中n為2，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為H，R4為H〕 將實(shí)施例1制得的4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基〕丙基〕苯甲酸叔丁酯(1g，2.7mmol)加入含二噁烷(50ml)和1N鹽酸水溶劑(50ml)的混合物中。在90℃攪拌獲得的混合物1小時(shí)。反應(yīng)完全后，濃縮反應(yīng)混合物，用硅膠柱色譜法處理，用溶劑(乙酸乙酯/甲醇/乙酸＝7∶1∶1)洗脫，得到0.81g4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸。將該酸、L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽(1.61g)和二苯基磷酰基疊氮化物(DPPA)(1.65ml)加入DMF(35ml)中，接著在冰冷卻下滴加三乙胺(2.2ml)。在冰冷卻下攪拌獲得的混合物，然后在室溫下再攪拌4小時(shí)。反應(yīng)完全后，濃縮反應(yīng)混合物，用硅膠柱色譜法處理，用溶劑(乙酸乙酯/甲醇/乙酸＝8∶1∶1)洗脫，得到酰胺化合物。將該酰胺化合物溶于甲醇(15ml)，接著滴加1N氫氧化鈉水溶液(30ml)。在室溫下攪拌獲得的混合物5小時(shí)，用1N鹽酸水溶液中和。濃縮得到的反應(yīng)混合物，用硅膠柱色譜法處理，用溶劑(乙酸乙酯/甲醇/乙酸＝5∶1∶1)洗脫。用乙醇和少量甲醇洗滌獲得的固體，得到淺黃色結(jié)晶產(chǎn)物(0.72g)，對該產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到0.35g標(biāo)題化合物(28%)。
·m.p.189-193℃ ·分子式C21H24N6O5·5/4H2O 元素分析 計(jì)算值(%) 實(shí)測值(%) C 54.48 C 54.64 H 5.77 H 5.55 N 18.15 N 17.87 ·MSFAB-MS m/z441(M+H+) ·NMR(DMSO-d6+CDCl3)δ(ppm) 1.9-2.07(4H，m，9-CH2，21-CH2)，2.25(2H，t，J＝7.2Hz，22-CH2)，4.2-4.4(3H，m，8-CH2，19-CH)，6.01(1H，d，J＝3Hz，7-CH)，7.20(2H，d，J＝8Hz，12-CH，16-CH)，7.32(1H，d，J＝3Hz，6-H)，7.78(2H，d，J＝8Hz，13-CH，15-CH) 制備例4 4-(3-碘-1-甲基丙基)苯甲酸叔丁酯 〔通式(12)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為甲基，R7為叔丁基，Y為I〕 除了用對-乙酰基苯甲酸叔丁酯作原料外，重復(fù)與制備例2相同的步驟，獲得8.5g標(biāo)題化合物(49%)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.28(3H，d，J＝7.2Hz，-Me)，1.58(9H，s，t-Bu)，2.06-2.13(2H，m，I-CH2-CH2-CH-Ar)，2.87-2.98(2H，m，I-CH2-CH2-CH-Ar)，3.05-3.12(1H，m，I-CH2-CH2-CH-Ar)，7.25(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.93(2H，d，J＝8Hz，ArH) 制備例5 (E)-4-〔4-(N-氰甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丁-2-基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(13)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為甲基，R7為叔丁基〕 按類似制備例3的方法，使3-(N-氰甲基)氨基-丙烯腈(2.57g，24mmol)與制備例4制備的4-(3-碘-1-甲基丙基)苯甲酸叔丁酯進(jìn)行N-烷基化反應(yīng)，獲得6.5g標(biāo)題化合物(81%)。
NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.31(3H，d，J＝7.2Hz，Me)，1.60(9H，s t-Bu)，1.87-2.04(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.73-2.82(1H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.01-3.14(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.87(2H，s，N-CH2-CN)，3.95(1H，d，J＝14Hz，N-CH＝CH-CN)，6.73(1H，d，J＝14Hz，N-CH＝CH-CN)，7.22(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.97(2H，d，J＝8Hz，ArH) 制備例6 4-〔3-(3-氨基-2-氰基吡咯-1-基)-1-甲基-丙基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(7)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為甲基，R7為叔丁基〕 按與制備例3相同的步驟，通過光化異構(gòu)作用使制備例5制得的(E)-4-(4-N-氰甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丁-2-基〕苯甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成(Z)-4-〔4-(N-氰甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丁-2-基〕苯甲酸叔丁酯。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.31(3H，d，J＝7.2Hz，Me)，1.58(9H，s，t-Bu)，1.92-2.09(2H，m N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.81-3.37(3H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.94(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)，4.19(2H，q，N-CH2CN)，6.07(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)，7.24(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.94(2H，d，J＝8Hz，ArH) 按類似于制備例3的方法處理獲得的Z型異構(gòu)體，通過閉環(huán)作用得到1.5g標(biāo)題化合物(33%) ·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.26(3H，d，J＝7.2Hz，Me)，1.58(9H，s t-Bu)，2.01-2.19(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.64-2.74(1H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.57-3.78(4H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar，NH2)，5.58(1H，d，J＝3Hz，pyrrole 4-H)，6.37(1H，d，J＝3Hz，pyrrole 5-H)，7.21(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.94(2H，d，J＝8Hz，ArH) 實(shí)施例3 4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯
〔通式(6)表示的化合物，式中n為2，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為H，R4為甲基，R7為叔丁基〕 按與實(shí)施例1相同的步驟，處理制備例6制得的4-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯(1.5g，4.4mmol)。通過閉環(huán)作用獲得標(biāo)題化合物(52%)。
·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm) 1.33(3H，d，J＝7.2Hz，Me)，1.64(9H，s，t-Bu)，2.13-2.27(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.73-2.82(1H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，4.21-4.32(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，6.17(1H，d，J＝3Hz，7-H)，7.25(1H，d，J＝3Hz，6-H)，7.32(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.93(2H，d，J＝8Hz，ArH) 實(shí)施例4 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸
〔通式(1)表示的化合物，式中n為2，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為H，R4為甲基〕 按與實(shí)施例2相同的步驟，即用酸水解酯，L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽縮合獲得的游離酸以形成酰胺化合物，再水解酰胺化合物的乙酯部分，使實(shí)施例3制得的4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基〕-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯(0.85g，2.3mmol)轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物。
·分子式;C22H26N6O5·5/2H2O ·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm)
·MSFAB-MS m/z455(M+H)+ 制備例7 4-(3-碘-1-乙基丙基)苯甲酸叔丁酯 〔通式(12)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為乙基，R7為叔丁基，Y為I〕 將對甲酰苯甲酸叔丁酯(20g，97mmol)溶于乙醚(300ml)中，接著在冰冷卻下滴加溴化乙基鎂(3M乙醚溶液，33ml)，攪拌獲得的混合物，反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物，蒸餾有機(jī)層以除去乙醇。用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶4)洗脫，得到22.3g4-(1-羥丙基)苯甲酸叔丁酯。將該產(chǎn)物溶于石油醚(500ml)，接著加入活性二氧化錳(165mg)。加熱回流獲得的混合物30小時(shí)。反應(yīng)完全后，過濾反應(yīng)混合物，濃縮濾液，得到21.1g苯基-乙基酮化合物(相應(yīng)于通式(18)中R4為乙基和R7為叔丁基表示的化合物)。然后對該化合物進(jìn)行Horner-Emmons反應(yīng)，也就是將叔丁醇鉀(19g)加入二乙基膦?；宜嵋阴?36ml)的THF(400ml)溶液中。在室溫下攪拌獲得的混合物30分鐘，接著加入苯基乙基酮化合物(21.1g)的THF(40ml)溶液。在55至65℃攪拌獲得的混合物1.5小時(shí)。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，得到22.7gα，β-不飽和酯化合物(相應(yīng)于通式(19)中R4為乙基和R7為叔丁基的化合物)。用于甲醇(300ml)中的10%鈀-碳(0.5g)催化還原該酯化合物，并加入到含1N氫氧化鈉水溶液(150ml)和甲醇(150ml)的混合物中，在室溫下攪拌獲得的混合物2小時(shí)。反應(yīng)完全后，用1N鹽酸水溶液使反應(yīng)混合物呈弱酸性，用乙酸乙酯萃取。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用短硅膠柱色譜法提純殘余物，得到17.7g3-〔對-(叔丁氧羧基)苯基〕-3-乙基丙酸。將該酸溶于THF(200ml)中，接著在冰冷卻下滴加BH3在THF(80ml)中的1M溶液。在室溫下攪拌獲得的混合物1小時(shí)。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙酸乙酯萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶1)洗脫，得到16.7g4-(3-羥基-1-乙基丙基)-苯甲酸叔丁酯。將該產(chǎn)物溶于乙醚(400ml)，接著在冰冷卻下加入三乙胺(44ml)和甲磺酰氯(9.8ml)。攪拌獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，獲得甲磺酸酯化合物，將該甲磺酸酯溶于丙酮(400ml)，接著加入碘化鈉(40g)，加熱回流獲得的混合物，反應(yīng)完全后，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶15)洗脫，得到20g無色油狀的標(biāo)題化合物(55%) ·NMR(CDCl3)δ(ppm) 0.77(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.58(9H，s，t-Bu)，1.57-1.76(2H，m，N-CH2CH3);2.01-2.24(2H，m，I-CH2-CH2-CH-Ar)，2.63-3.09(3H，m，I-CH2-CH2-CH-Ar)，7.22(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.94(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 制備例8 (E)-4-〔5-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕-戊-3-基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(13)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為乙基，R7為叔丁基〕 按與制備例3相同的方法用制備例7制得的4-(3-碘-1-乙基丙基)苯甲酸叔丁酯對3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈(7.2g進(jìn)行N-烷基化反應(yīng)，得到17g標(biāo)題化合物(74%)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 0.78(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.52-1.77(2H，m，-CH2CH3)，1.59(9H，s，t-Bu)，1.82-2.09(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.42-2.54(1H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.91-3.08(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.83(2H，s，N-CH2-CN)，3.93(1H，d，J＝14Hz，N-CH＝CH-CN)，6.7(1H，d，J＝14Hz，N-CH＝CH-CN)，7.18(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.97(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 制備例9 4-〔3-(3-氨基-2-氰基吡咯-1-基)-1-乙基丙基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(7)表示的化合物，式中n為2，R2為亞苯基，R3為H，R4為乙基，R7為叔丁基〕 按與制備例3相同的方法，通過光致異構(gòu)化作用使制備例8制得的(E)-4-〔5-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕戊-3-基〕苯甲酸叔丁酯(10g)轉(zhuǎn)化成(Z)-4-〔5-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕-戊-5-基)苯甲酸叔丁酯。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 0.78(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.58(9H，s，t-Bu)，1.51-1.68(2H，m，-CH2CH3)，1.86-2.19(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，2.53-2.62(1H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.01-3.33(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.94(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)，4.19(2H，q，18Hz，N-CH2-CN)，6.06(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)，7.21(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.94(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 通過閉環(huán)作用將獲得的Z型異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物(4.8g，48%)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 0.74(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.59(9H，s，t-Bu)，1.56-1.77(2H，m，-CH2CH3)，1.98-2.47(3H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，3.56-3.74(4H，m，NH2，N-CH2-CH2-CH-Ar)，5.58(1H，d，J＝3Hz，pyrrole 4-H)，6.34(1H，d，J＝3Hz，pyrrole 5-H)，7.19(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.95(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) ·MSFAB-MS m/z325(M+) 實(shí)施例5 4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕苯甲酸 〔通式(2)表示的化合物，式中n為2，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為H，R4為乙基〕 按與實(shí)施例1相同的步驟，通過閉環(huán)作用使制備例9制得的4-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基-1-乙基丙基〕苯甲酸叔丁酯(3.4g，9.6mmol)轉(zhuǎn)化成4-〔2-(2，4-二氨吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-乙基丙基〕苯甲酸叔丁酯。按類似實(shí)施例2的方法用酸水解該產(chǎn)物，得到1.53g標(biāo)題化合物(47%)。
·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm) 0.76(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.58-1.77(2H，m，-CH2CH3)，2.09-2.48(3H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，4.14(2H，d，J＝7Hz，N-CH2-CH2-CH-Ar)，6.09(1H，d，J＝2Hz，7-H)，7.04(1H，d，J＝2Hz，6-H)，7.21-7.28(2H，m，ArH)，7.95-7.99(2H，m，ArH) 實(shí)施例6 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基-1-乙基丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸
〔通式(1)表示的化合物，式中n為2，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為H，R4為乙基〕 按類似于實(shí)施例2的方法用L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽縮合實(shí)施例5制得的4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基乙基丙基〕苯甲酸(1.53g，4.5mmol)，得到酰胺化合物。將酰胺化合物的乙酯部分水解，得到1.02g標(biāo)題化合物(48%)。
·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm) 0.71(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.48-1.72(2H，m，-CH2CH3)，2.08-2.52(7H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar，-CH2-CH2-CO2H)，4.11-4.28(2H，m，N-CH2-CH2-CH-Ar)，4.51-4.56(1H，m，-CONH-CH-)，6.01-6.03(1H，m，7-H)，7.11-7.16(3H，m，6-H，12-CH，16-CH)，7.68-7.73(2H，m，13-CH，15-CH) ·分子式;C23H27N6O5Na·H2O ·元素分析; 計(jì)算值(%) 實(shí)測值(%) C 54.33 C 54.88 H 5.75 H 6.24 N 16.52 N 16.00 ·MSFAB-MS m/z469(M+H)+ 制備例10 4-〔1-亞甲基-3-碘丙基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(32所示的化合物，式中R2為亞苯基，R7為叔丁基，Y為I〕 將對-甲酰基苯甲酸叔丁酯(20g，97mmol)溶于乙醚(300ml)中，接著在冰冷卻下滴加溴化乙烯基鎂(1MTHF溶液，100ml)。攪拌獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶4)洗脫，得到22.4g烯丙醇(相應(yīng)于通式(23)中R2為亞苯基和R7為叔丁基所示的化合物〕。將該醇溶于DMF(150ml)中，得到一種溶液。將咪唑(16.3g)和叔丁基二甲基甲硅氯(18g)完全溶于溶液中，在室溫下靜置獲得的溶液以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶5)洗脫，得到32g0-甲硅烷基化物(相應(yīng)于通式(24)中R2為亞苯基和R7為叔丁基表示的化合物)。將該甲硅烷基化物溶于THF(150ml)，接著在冰冷卻下滴加BH3在THF中的1M溶液。往上面制得的混合物中滴加甲醇(100ml)，同時(shí)在冰冷卻下攪拌混合物。往獲得的混合物中再加入1N氫氧化鈉水溶液(100ml)和30%過氧化氫(150ml)。在室溫下攪拌制得的混合物以進(jìn)行反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙酸乙酯萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶4)洗脫，得到25g4-〔1-(丁基二甲基甲硅氧基)-3-羥丙基苯甲酸叔丁酯。將該產(chǎn)物溶于3，4-二氫-2H-吡喃(150ml)，接著加入催化量的對甲苯磺酸吡啶鎓。在室溫下靜置獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶10)洗脫，得到30g受保護(hù)的二醇化合物(相應(yīng)于通式(27)中R2為亞苯基和R7為叔丁基表示的化合物)。將該二醇溶于THF(150ml)中，接著加入氟化四丁基銨(1M THF溶液)，在室溫下攪拌獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶5)洗脫，得到21g4-〔(1-羥基-3-四氫呋喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯。
然后對該產(chǎn)物進(jìn)行Swern氧化反應(yīng)，即在-78℃將DMSO(36ml)滴入草酰二氯(22ml)的二氯甲烷(400ml)溶液中，接著在-78℃滴加4-〔(1-羥基-3-四氫吡喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯(21g)于二氯甲烷(40ml)中的溶液。攪拌獲得的混合物30分鐘，接著在-78℃滴加三乙胺(104ml)。在冰冷卻下攪拌獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用二氯甲烷萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶5)洗脫，得到20g4-〔(1-氧代-3-四氫吡喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯。對該產(chǎn)物再進(jìn)行Wittig反應(yīng)，即在-78℃將正丁基鋰(2.5M己烷溶液，96ml)滴入溴化甲基三苯基鏻(86g)于THF(500ml)中的懸浮液。在冰冷卻下攪拌獲得的混合物，接著滴加4-〔(1-氧代-3-四氫吡喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯(20g)于TFH(40ml)中的溶液，在室溫下攪拌獲得的混合物，將反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶5)洗脫，得到外亞甲基化合物(相應(yīng)于通式(30)中R2為亞苯基和R7為叔丁基表示的化合物)。在甲醇(200ml)中用對甲苯磺酸(催化量)處理該化合物，以除去THP基。獲得8.5g伯醇(相應(yīng)于通式(31)中R2為亞苯基和R7為叔丁基表示的化合物)。將該醇溶于乙醚(200ml)中，接著在冰冷卻下加入三乙胺(24ml)和甲磺酰氯(5.37ml)。攪拌獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑。殘余物就這樣用于后續(xù)反應(yīng)，即將獲得的甲磺酸酯溶于丙酮(350ml)，接著加入碘化鈉(16.9g)，加熱回流獲得的混合物以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶10)洗脫，得到11g無色油狀的標(biāo)題化合物(31%)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.58(9H，s，t-Bu)，3.08(2H，t，J＝7.2Hz，I-CH2CH2-)，3.19(2H，t，J＝7.2Hz，I-CH2-CH2-)，5.22(1H，brs，olefinic proton)，5.47(1H，brs，olefinic proton)，7.41(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.96(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 制備例11 4-〔4-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕-2-丁烯-3-基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(13)表示的化合物，式中n為1，R2為亞苯基，R3和R4形成亞乙基，R7為叔丁基〕 將N-氰甲基氨基丙烯腈(5g，47mmol)溶于含THF(150ml)和DMF(30ml)的混合物中，接著在冰冷卻下加入60%氫化鈉(1.9g，47mmol)。在冰冷卻下將制備例10制得的4-〔1-亞甲基-3-碘丙基〕苯甲酸叔丁酯于THF(20ml)中的溶液滴入上面制得的混合物中。在室溫下攪拌獲得的混合物1小時(shí)，將獲得的反應(yīng)混合物倒入氯化銨的飽和水溶液中，用乙酸乙酯萃取獲得的混合物。蒸餾有機(jī)層以除去溶劑，用硅膠柱色譜法處理殘余物，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶3)洗脫，得到4g標(biāo)題化合物，它包含二種異構(gòu)體，即Z和E型異構(gòu)體。這兩種異構(gòu)體的光譜數(shù)據(jù)如下所示。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.6(9H，s，t-Bu)，1.67(3H，d，J＝8Hz，ethylidene-Me)，3.83(2H，s，-N-CH2-)，4.01(1H，d，J＝15Hz，-N-CH＝CH-CN)，4.06(2H，s，-N-CH2-)，5.9(1H，q，J＝8Hz，ethylidene-H)，6.75(1H，d，J＝15Hz，-N-CH＝CH-CN)，7.18(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，8.01(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 1.59(9H，s，t-Bu)，1.99(3H，d，J＝9Hz，ethylidene-Me)，3.75(2H，s，-N-CH2-)，4.12(1H，d，J＝15Hz，N-CH＝CH-CN)，4.28(2H，s，N-CH2-)，6.29(1H，q，J＝9Hz，ethylidene-H)，6.86(1H，d，J＝15Hz，-N-CH＝CH-CN)，7.28(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.96(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) ·MSFAB-MS m/z338(M+H)+ 制備例12 4-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-亞乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯 〔通式(7)表示的化合物，其中n為1，R2為亞苯基，R3和R4形成亞乙基，R7是叔丁基〕 將制備例11制得的4-〔4-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基-氨基〕-2-丁烯-3-基苯甲酸叔丁酯(4g)溶于500ml乙醚，得到的溶液室溫下在2ml乙酰苯存在下用高壓水銀燈照射，反應(yīng)混合物經(jīng)蒸餾除去溶劑。殘留物用硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙醚/乙烷＝2∶1)洗脫，分離出Z異構(gòu)體，該異構(gòu)體用與制備例3相同的方法經(jīng)LDA處理，經(jīng)閉環(huán)作用得到1.2g標(biāo)題化合物(30%)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.58(9H，s，t-Bu)，1.58(3H×2/3，d，J＝9Hz，ethylidene-Me)，1.99(3H×1/3，d，J＝9Hz，ethylidene-Me)，4.63(2H×2/3，s，＞N-CH2-)，4.91(2H×1/3，s，＞N-CH2-)，5.49(1H×1/3，d，J＝3Hz，pyrrole 4-H)，5.53(1H×2/3，d，J＝3Hz，pyrrole 4-H)，5.78(1H×2/3，q，J＝9Hz，ethylidene-H)，6.19(1H×1/3，q，J＝9Hz，ethylidene-H)，6.35(1H×2/3，d，J＝3Hz，pyrrole 5-H)，6.38(1H×1/3，d，J＝3Hz，pyrrole 5-H)，7.08(2H×2/3，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.87(2H×1/3，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.92(2H×2/3，d，J＝8.4Hz，ArH) 實(shí)施例7 4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)〕-1-亞乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯
〔通式(6)表示的化合物，其中n為1，R1為NH2，R2是亞苯基，R3和R4形成亞乙基，R7為叔丁基〕 將制備例12中制得的1.2g，3.6mmol4-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-亞乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯，按照與實(shí)施例1中相同的步驟進(jìn)行處理，經(jīng)閉環(huán)作用得到0.71g標(biāo)題化合物(52%)。
實(shí)施例8 4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基〕-乙基〕苯甲酸
〔通式(2)表示的化合物，其中n為1，R1為NH2，R2為亞苯基，R3為氫，R4為乙基〕 將實(shí)施例7中制得的4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基)-1-亞乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯，在含有15ml乙酸和150ml甲醇的混合物中用10%鈀-碳(0.2)催化還原，將還原產(chǎn)物加入含有50ml1N鹽酸和50ml1，4-二噁烷的混合物中。所得的混合物在90℃攪拌1小時(shí)以完成反應(yīng)。反應(yīng)混合物濃縮，用硅膠柱色譜處理，然后用溶劑(乙酸/甲醇/乙酸乙酯＝1∶1∶5)洗脫，得到0.5g標(biāo)題化合物(83%)。
·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm) 0.78(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.64-2.18(2H，m，-CH2-CH3)，2.96-3.02(1H，m，-N-CH2CH-Ar)，4.31-4.72(2H，m，-N-CH2-CH-Ar)，5.98(1H，d，J＝3Hz，7-H)，6.96(1H，d，J＝3Hz，6-H)，7.02-7.18(2H，m，ArH)，7.82-7.94(2H，m，ArH) 實(shí)施例9 N-〔4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲?！场?L-谷氨酸酯
〔通式(1)表示的化合物，其中n為1，R1為NH2，R2為亞苯基，R3是H，R4是乙基〕 將實(shí)施例8制得的4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酸0.5g，1.6mmol，采用與實(shí)施例2相同的方法，與L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽縮合?？s合產(chǎn)物的乙酯部分經(jīng)水解得到目標(biāo)產(chǎn)物。該產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化，所得的固體用乙醇和少量甲醇洗滌，得到170mg淡黃粉末狀純產(chǎn)物(24%)。
分子式C22H26N6O5·2H2O ·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm) 0.71(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)，1.62-2.22(6H，m，CH2-CH3，-CH2CH2CO2H)，2.91-2.98(1H，m，N-CH2-CH-Ar)，4.19-4.45(2H，m，N-CH2-CH-Ar)，4.58-4.63(1H，m，-CONHCH-)，5.91(1H，d，J＝3Hz，7H)，6.96(1H，d，J＝3Hz，6H)，7.23-7.27(2H，m，ArH)，7.76-7.81(2H，m，ArH) ·MSFAB-MS m/z499(C22H24N6O5Na2+H)+ 制備例13 5-甲基-2-噻吩羧酸叔丁酯 〔通式(18)表示的化合物，其中R2是亞噻吩基，R4為H，R7是叔丁基〕 將1.7M溶于戊烷(8.0ml，13.6mmol)的叔丁基鋰在氮?dú)夥障?，滴入溶于無水四氫呋喃的2-噻吩羧酸叔丁酯(1.84g，10mmol)和N，N，N′，N′-四甲基亞乙基二胺溶液，用干冰-丙酮冷卻并攪拌。所得的混合物攪拌約50分鐘，然后將15ml無水二甲基甲酰胺逐漸滴加進(jìn)該混合物進(jìn)行反應(yīng)。所得的液態(tài)混合物升溫至室溫，攪拌40分鐘，傾入300ml乙醚/0.3N鹽酸(2∶1)混合物。攪拌該混合物，回收有機(jī)層，用磷酸鹽緩沖液(PH7)和食鹽溶液清洗，脫水，蒸餾以去除溶劑。殘留物用硅膠柱色譜提純(采用正-戊烷/乙酸乙酯(8∶1)混合物作展開劑)，得到1.7g標(biāo)題化合物。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(9H，s)，7.70(1H，d，J＝4.0Hz)，7.75(1H，d，J＝4.0Hz)，9.95(1H，s) ·IR(neat)ν 2981，1713，1682cm-1 制備例14 5-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-2-噻吩-羧酸叔丁酯 〔通式(19)表示的化合物，其中R2為亞噻吩基，R4為H，R7是叔丁基〕 氫化鋰(最少60%石蠟分散液，1.88g，約47mmol)在氮流下用無水己烷洗滌，并分散在無水四氫呋喃中，得到的分散液用冰冷卻并攪拌，隨后逐滴加入溶于無水四氫呋喃中的二乙基磷?；宜嵋阴ト芤?10.53g，47mmol)，所得混合物在室溫下攪拌15分鐘。將溶于無水四氫呋喃的用制備例13制得的5-甲基-2-噻吩-羧酸叔丁酯溶液，逐滴加入該混合物，在室溫?cái)嚢?0分鐘，用乙醚稀釋，用稀堿、稀鹽酸和食鹽水溶液洗滌、脫水、真空干燥。殘留物用硅膠柱色譜法提純(用正-己烷/乙酸乙酯(8∶1)混合物作發(fā)展劑)，得到7.5g標(biāo)題化合物。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.33(3H，t，J＝7.2Hz)，1.57(9H，s)，4.25(2H，q，J＝7.2Hz)，6.33(1H，d，J＝15.6Hz)，7.18(1H，d，J＝4.0Hz)，7.61(1H，d，J＝4.0Hz)，7.70(1H，d，J＝15.6Hz) ·IR(neat)ν 2980，1713，1706，1630，969cm-1 制備例15 5-(2-乙氧羰基乙基)-2-噻吩-羧酸叔丁酯 將制備例14中制得的5-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-2-噻吩羧酸叔丁酯(7.58g，26.8mmol)，在室溫下于乙醇中用10%鈀-碳(1.05g)混合物催化還原。反應(yīng)完成后，濾出催化劑，濃縮濾液，并真空干燥，得7.6g標(biāo)題化合物。
·NMR(neat)δ(ppm) 1.26(3H，t，J＝7.2Hz)，1.56(9H，s)，2.68(2H，t，J＝7.6Hz)，3.15(2H，t，d，J＝7Hz，0.8Hz)，4.15(2H，q，J＝7.2Hz)，6.79(1H，dt，J＝3.6Hz，0.8Hz)，7.54(1H，d，J＝3.6Hz) 制備例16 5-(3-羥丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯。
〔通式(21)表示的化合物，其中R2為亞噻吩基，R4為H，R7是叔丁基〕 將制備例15中得到的5-(2-乙氧羰基乙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯(7.6g，26.8mmol)室溫下在乙醇/1N氫氧化鈉混合物中部分水解，得6.1g3-(5-叔-丁氧羰基-噻吩-2-基)丙酸。將該酸溶于無水四氫呋喃，在冰冷卻下在約30分鐘內(nèi)將所得溶液滴入溶于四氫呋喃的硼烷溶液中(硼烷由硼氫化鈉(3.37g，89ml)和三氟硼烷-乙醚絡(luò)合物(16.9g，119mmol)預(yù)先制得)。所得的混合物攪拌30分鐘，然后逐滴加入甲醇。在不再產(chǎn)生氫氣后，將混合物過濾、蒸發(fā)至濾液干燥。將甲醇加入殘留物，由共沸蒸餾除去硼化合物。將殘留物溶于乙醚，所得溶液用稀鹽酸和食鹽水溶液清洗，脫水，蒸餾去除溶劑。殘留物在真空中蒸發(fā)至干，得6.0g標(biāo)題化合物。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(9H，s)，1.94(2H，tt，J＝7.6Hz，6.4Hz)，2.93(2H，td，J＝7.6Hz，0.8Hz)，3.70(2H，t，J＝6.4Hz)，6.78(1H，dt，J＝3.6Hz，0.8Hz)，7.54(1H，d，J＝3.6Hz) ·IR(neat)ν 3200～3700，2978，2935，1703cm-1 制備例17 5-(3-溴丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯 〔通式(12a)表示的化合物，其中R2為亞噻吩基，R4為H，R7是叔丁基，Y為Br〕 將制備例16中制得的5-(3-羥丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯(6.0g，23.9mmol)，用與制備例2相同的方法處理，得到6.2g標(biāo)題化合物。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(9H，s)，2.21(2H，tt，J＝7.2Hz，6.4Hz)，3.00(2H，td，J＝7.2Hz，0.8Hz)，3.42(2H，t，J＝6.4Hz)，6.81(1H，dt，J＝3.6Hz，0.8Hz)，7.55(1H，d，J＝3.6Hz) 制備例18 5-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯 〔化合物(7)n＝2，R2為亞噻吩基，R3＝R4＝H，R7＝叔丁基〕 重復(fù)與制備例3相同的步驟，只是將3-N-氰甲基)-氨基丙烯腈(2.8g)和5-(3-溴丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(12)n＝2，R2為亞噻吩基，R3＝R4＝H，R7＝叔丁基〕作原料，得到6g(70%)的目的產(chǎn)物(E)-5-〔3-N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基)-丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.57(9H，s，t-Bu)，1.98-2.07(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.88(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.27(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，3.96(2H，s，N-CH2-CN)， 4.06(1H，d，J＝18Hz，N-CH＝CH-CN)，6.79(1H，d，J＝3.6Hz，ArH)， 6.83(1H，d，J＝18Hz，N-CH＝CH-CN)，7.56(1H，d，J＝3.6Hz，ArH) 上面制得的E型異構(gòu)體，用類似制備例3的方式進(jìn)行光輻射，得到2.8g(47%)Z-5-〔3-(N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(14)〕。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(9H，s，t-Bu)，2.04-2.13(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.92(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.44(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，4.01(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)， 4.28(2H，s，N-CH2-CN)，6.22(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)， 6.79(1H，d，J＝3.6Hz，ArH)，7.54(1H，d，J＝3.6Hz，ArH) Z型異構(gòu)體(41)(2.8g)用LDA進(jìn)行相同的閉環(huán)作用(與制備例3類似)，得到2.4g(86%)目的標(biāo)題產(chǎn)物5-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(7)n＝2，R2為亞噻吩基，R3＝R4＝H，R7＝叔丁基〕。
NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(9H，s，t-Bu)，2.16(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.79(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.9(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，5.64(1H，d，J＝2.8Hz，ピロ-ル4-H)， 6.52(1H，d，J＝2.8Hz，ピロ-ル5-H)，6.77(2H，d，J＝3.6Hz，ArH)， 7.55(1H，d，J＝3.6Hz，ArH) 實(shí)施例10 5-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯
〔化合物(6)n＝2，R1＝NH2，R2＝亞噻吩基，R3＝R4＝H，R7＝叔丁基〕 將制備例18中制得的5-〔3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯(7)(2.4g)，進(jìn)行與實(shí)施例1相同的閉環(huán)作用，通過形成吡咯并嘧啶環(huán)，得到2.1g(78%)目的標(biāo)題化合物。
NMR(CD3OD)δ(ppm) 1.54(9H，s，t-Bu)，2.13-2.21(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.81(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 4.37(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，6.18(1H，d，J＝3Hz，7-H)， 6.81(1H，d，J＝3.8Hz，ArH)，7.34(1H，d，J＝3Hz，6-H)， 7.5(1H，d，J＝3.8Hz，ArH) 實(shí)施例11 N-〔5-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-丙基〕噻吩甲?！?L-谷氨酸酯 〔化合物(7)n＝2，R2＝亞噻吩基，R3＝R4＝H〕 與實(shí)施例2類似，實(shí)施例10制得的5-〔3-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(6)〕經(jīng)水解，采用DPPA與谷氨酸二乙酯縮合，并用堿液水解，得0.95g(38%)呈淡黃色晶體狀的標(biāo)題化合物。
·mol.form.C19H22N6O5S ·MSFAB-MS m/z447(M+H+) NMR(DMSO)δ(ppm) 1.84-2.03(4H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar，NHCH-CH2-CH2-CO2H)， 2.24-2.28(2H，m，NHCH-CH2-CH2-CO2H)， 2.68(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 4.21-4.33(3H，m，-CONHCH-，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，5.98(1H，d，J＝3.2Hz，7-H)， 6.67-6.83(2H，brd，NH2)，6.81(1H，d，J＝3.8Hz，ArH)， 7.07-7.15(2H，brd，NH2)，7.32(1H，dd，J＝3.2Hz，1，2Hz，6-H)， 7.61(1H，d，J＝3.8Hz，ArH)，8.27(1H，d，J＝8Hz，-CONH-) 制備例19 1-叔-丁氧羰基-3-氨基-2-氰基-△2-吡咯啉
將N-氰甲基-β-丙氨酸乙酯(36g，0.23mol)溶解在CH2Cl2(200ml)中，隨后加入三乙胺(48ml)和碳酸氫二-叔丁酯(55g)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔镆酝瓿煞磻?yīng)。將該反應(yīng)混合物傾入水中，然后用乙酸乙酯萃取。對有機(jī)層蒸餾以去除溶劑。殘留物用硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙酸乙酯/乙烷＝1∶3)洗脫，得到22.7gN-叔-丁氧羰基-N-氰甲基-β-丙氨酸乙酯。然后，該酯經(jīng)閉環(huán)作用。將溶于甲苯(100ml)的N-叔-丁氧羰基-N-氰甲基-β-丙氨酸乙酯(22.7g)在冰浴下滴入叔丁醇鉀(9.9g)/甲苯(400ml)混合物。在冰浴下攪拌以完成反應(yīng)。將該反應(yīng)混合物傾入PH7.1的磷酸鹽緩沖液，調(diào)節(jié)所得的混合物呈弱酸性，然后用氯仿萃取。將有機(jī)層蒸餾以去除溶劑。殘留物供隨后步驟使用。將殘留物溶于乙醇(300ml)，隨后加入HCO2NH4(11.3g)，所得混合物回流加熱以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物濃縮，隨后加入飽和氯化銨水溶液。所得的混合物用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)層蒸餾以去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙酸乙酯/乙烷＝1∶2)洗脫，得到4.5g(9.6%)目的標(biāo)題化合物。
參考文獻(xiàn)Henry Rapoport et al.，J.Am.Chem.Soc.，86，5293(1964) ·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.51(9H，s，t-Bu)，2.73(2H，t，J＝7.4Hz，pyrroline 4-H)，3.77(2H，t，J＝7.4Hz，pyrroline 5-H)，4.28(2H，brs，NH2). 制備例20 5-叔-丁氧羰基-2，4-二氨基-6，7'-二氫吡咯并〔3，2-d〕嘧啶 〔5-叔-丁氧羰基-2，4-二氨基-△2-吡咯啉并-〔3，2-d〕-嘧啶〕
然后，進(jìn)行閉環(huán)作用，將制備例19中制得的1-叔-丁氧羰基-3-氨基-2-氰基-△2-吡咯啉(2g)溶于叔丁醇(30ml)，隨后加入碳酸胍(5.2g)。將所得的混合物置于不銹鋼園筒內(nèi)，在密封狀態(tài)下加熱至145℃24小時(shí)。反應(yīng)產(chǎn)物濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜純化，用溶劑(乙酸乙酯/甲醇/乙酸＝20∶1∶1)洗脫，得到1.2g(50%)的晶體狀目的標(biāo)題化合物。
·NMR(CD3OD)δ(ppm) 1.53(9H，s，t-Bu)，2.91(2H，t，J＝8.4Hz，7-H)，3.94(2H，t，J＝8.4Hz，6-H) 實(shí)施例12 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯 〔N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-△2-吡咯啉并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯〕 將制備例20中制得的5-叔-丁氧羰基-2，4-二氨基-6，7-二氫吡咯并〔3，2-d〕嘧啶(0.7g)用1N HCl/AcOH(20ml)處理，所得混合物蒸餾去除溶劑。將殘留物充分干燥，并溶于DMF(15ml)，隨后加入乙酸鈉(0.69g)和制備例2中制得的4-(3-碘丙基)-苯甲酸叔丁酯(0.96g)。將該混合物在室溫下攪拌24小時(shí)以完成反應(yīng)。反應(yīng)混合物蒸餾以去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化，用溶劑(乙酸乙酯/甲醇/乙酸＝10∶1∶1)洗脫，得到0.83g(79%)目的標(biāo)題化合物。
·NMR(DMSO)δ(ppm) 1.47(9H，s，t-Bu)，1.81-1.93(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.62(2H，t，J＝7.6Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，2.67(2H，t，J＝8.4Hz，7-H)， 2.77(2H，t，J＝7.6Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)，3.17(2H，t，J＝8.4Hz，6-H)， 7.27(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.76(1H，d，J＝8Hz，ArH) 實(shí)施例13 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫吡咯并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基)丙基〕-L-谷氨酸酯 〔N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-△2-吡咯啉并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基)丙基〕-L-谷氨酸酯〕
用類似實(shí)施例2的方法，將實(shí)施例12中制得的N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基〕苯甲酸叔丁酯水解，采用DPPA與L-谷氨酸二丁酯縮合，然后在堿中水解，得到50mg(22%)的結(jié)晶狀的標(biāo)題化合物。
·mol.form.C21H26N6O5 ·MSFAB-MS m/z443(M+H+) ·NMR(D2O)δ(ppm) 1.74-1.88(2H，m)，2.62-2.68(2H，m)，2.78-2.93(4H，m)，3.31-3.47(2H，m)，4.24-4.29(1H，m)，7.26(2H，d，J＝8Hz)，7.67(2H，d，J＝8Hz) 制備例21 4-〔2-溴-1-亞甲基乙基〕苯甲酸叔丁酯
將1.6M的溶于己烷中的正丁基鋰溶液在-78℃下加入在THF(400ml)中的溴化甲基三苯基鏻(78g)的懸浮液，所得的混合物在冰浴下攪拌，然后滴加了溶于THF(100ml)中的對-甲基苯甲酸叔丁酯溶液。所得混合物在冰浴下攪拌，并傾入飽和氯化銨水溶液。將該混合物用乙醚萃取，并對有機(jī)層蒸餾去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶15)洗脫，得到苯乙烯化合物(23g)。將該化合物溶于丙酮(300ml)，然后在室溫?cái)嚢柘录尤肴苡谑宥〈己?-甲基嗎啉N-氧化物(50%水溶液，75ml)的OsO4溶液(5mg/ml，30ml)。將該混合物在室溫下攪拌以完成反應(yīng)，將反應(yīng)混合物傾入水，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層蒸餾以去除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶2)洗脫，得25g二醇化合物。將該二醇化合物溶于二氯甲烷(500ml)，隨后加入三苯甲基氯(88g)，4-二甲氨基吡啶(12.8g)和三乙胺(44g)。室溫?cái)嚢杷没旌衔镆酝瓿煞磻?yīng)。將反應(yīng)混合物傾入飽和氯化銨溶液，并用乙醚對其萃取。將有機(jī)層蒸餾以去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶10)洗脫，得35g目的化合物，其中僅伯醇基得到保護(hù)。對該化合物進(jìn)行斯韋恩(Swern)氧化。在-78℃下在溶于二氯甲烷(500ml)的草酰氯(20ml)溶液中滴加入DMSO(40ml)，然后在-78℃下滴入溶于二氯甲烷(50ml)的4-〔(1-羥基-2-三苯甲氧基)乙基〕苯甲酸叔丁酯(35g)。所得混合物攪拌30分鐘，隨后在-78℃下滴加入三乙胺(94ml)。將所得混合物在冰浴中攪拌以完成反應(yīng)。往該混合物中加入水，并用二氯甲烷萃取。將有機(jī)層蒸餾以去除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶12)洗脫，得氧代化合物(34g)。該化合物經(jīng)魏蒂格(Wittig)反應(yīng)，在-78℃下將溶于己烷的2.5M正丁基鋰的溶液(57ml)滴入于THF(300ml)中的溴化甲基三苯基鏻(51g)的懸浮液中。所得的混合物在冰浴下攪拌，隨后滴加入溶于THF(100ml)的4-〔(1-氧代-2-三苯甲氧基)乙基〕苯甲酸叔丁酯(34g)的溶液。對該混合物于室溫下攪拌，將反應(yīng)產(chǎn)物傾入飽和氯化銨水溶液中。所得反應(yīng)混合物用乙醚萃取，并對有機(jī)層蒸餾以去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶15)洗脫，得一種外-亞甲基化合物。該化合物在甲醇(120ml)/乙酸乙酯(80ml)混合物中用對-甲苯磺酸(催化量)處理，以脫去三苯甲基，并由此得4-〔(2-羥基-1-亞甲基)乙基〕苯甲酸酯(7.5g)。將該產(chǎn)物溶于乙醚(200ml)，隨后在冰浴下加入三乙胺(23ml)和甲磺酰氯(5.6ml)。攪拌得到的混合物以完成反應(yīng)。將該混合物傾入水中，并用乙醚萃取。蒸餾有機(jī)層以去除溶劑，殘留物在隨后反應(yīng)中如下應(yīng)用。將得到的甲磺酸酯化合物溶于丙酮(300ml)，隨后加入LiBr(14g)，對該混合物回流加熱以完成反應(yīng)。將產(chǎn)物傾入水中，并用乙醚萃取，蒸餾有機(jī)層以去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜處理，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶10)洗脫，得8.8g(20%)淡黃油狀目的標(biāo)題化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(9H，s，t-Bu)，4.19(2H，s，

)，5.57(1H，brs，olefinic proton)，5.63(1H，brs，olefinic proton) 制備例22 4-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-亞甲基-乙基〕苯甲酸叔丁基 〔化合物(7)n＝1，R2＝亞苯基，R3-R4＝亞甲基，R7＝叔丁基〕 重復(fù)與制備例3相同的步驟，只是將制備例21中制得的N-氰甲氨基-丙烯腈(3.2g，30mmol)和4-〔2-溴-1-亞甲基乙基〕苯甲酸叔丁酯作原料外，得7.5g(77%)目的化合物，即，(E)-4-〔3-〔N-氰甲基〕-N-β-氰乙烯氨基〕-1-丙烯-2-基〕苯甲酸叔丁酯〔化合物(13)n＝1，R2＝亞苯基，R3-R4＝亞甲基，R7＝叔丁基〕。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(9H，s，t-Bu)，3.99(2H，s，N-CH2-CN)，4.15(1H，d，J＝15Hz，-N-CH＝CH-CN)，4.24(2H，brs，

)，5.41(1H，brs，olefinic proton)，5.71(1H，brs，olefinic proton)，6.92(1H，d，J＝15Hz，-N-CH＝CH-CN)，7.38(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.99(2H，d，J＝8Hz，ArH). 將上面制得的E異構(gòu)體按照制備例3相似的方式用光輻射，得3g(40%)Z-4-〔3-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯氨基〕-1-丙烯-2-基〕-苯甲酸叔丁酯〔化合物(14)〕。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(9H，s，t-Bu)，4.06(1H，d，J＝10Hz，-N-CH＝CH-CN)，4.27(2H，s，N-CH2-CN)，4.46(2H，brs，

)，5.43(1H，brs，olefinic proton)，5.7(1H，brs，olefinic proton)，6.29(1H，d，J＝10Hz，-N-CH＝CH-CN)，7.41(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.8(2H，d，J＝8Hz，ArH). 將上面制得的Z異構(gòu)體〔化合物(14)〕(3g)按照制備例3類似的方式用LDA進(jìn)行閉環(huán)作用，得0.8g(27%)目的標(biāo)題化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(9H，s，t-Bu)，3.63(2H，brs，NH2)，4.83(2H，brs，

)，5.11(1H，brs，olefinic proton)，5.57(1H，brs，olefinic proton)，5.61(1H，d，J＝2.8Hz，pyrrole 4-H)，6.52(1H，d，J＝2.8Hz，pyrrole 5-H)，7.38(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.96(2H，d，J＝8.4Hz，ArH). 實(shí)施例14

2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基乙基〕苯甲酸叔丁酯 〔化合物(6)n＝1，R2＝亞苯基，R3-R4＝亞甲基，R7＝叔丁基〕 將制備例22中制得的化合物(7)(0.8g)按實(shí)施例1類似的方式進(jìn)行閉環(huán)作用，通過形成吡咯并嘧啶環(huán)，得0.8g(59%)目的標(biāo)題化合物， ·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm) 1.57(9H，s，t-Bu)，5.42(2H，brs，

)，5.47(1H，brs，olefinic proton)，5.62(1H，brs，olefinic proton)，6.18(1H，d，J＝2.8Hz，7-H)，7.39(1H，d，J＝2.8Hz，6-H)，7.53(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.91(2H，d，J＝8.4Hz，ArH). 實(shí)施例15 N-〔4-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-1-亞甲基乙基〕苯甲?！?L-谷氨酸酯
〔化合物(1)n＝1，R2＝亞苯基，R3-R4＝亞甲基〕 和實(shí)施例2的方法類似，將實(shí)施例14中制得的化合物(6)(0.8g)水解，用DPPA和L-谷氨酸二乙酯縮合，并用堿液水解，得晶體狀的0.23g(23%)標(biāo)題化合物。
·mol.form.C21H22N6O5 ·MSFAB-MS m/z439(M+H+) ·1H-NMR(DMSO-D2O)δ(ppm) 1.86-2.23(4H，m，-CONHCHCH2CH2-CO2H)， 4.17-4.22(1H，m，-CONHCH-)，5.33(2H，brs，

)，5.43-5.51(2H，m，olefinic proton)，5.96(1H，d，J＝2.8Hz，7-H)，7.25(1H，d，J＝2.8Hz，6-H)，7.56(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.81(2H，d，J＝8.4Hz，ArH). 制備例23 4-N-(2-溴乙基)甲氨基苯甲酸乙酯
將4-氨基苯甲酸乙酯(20g)溶于DMF(200ml)，隨后加入二異丙基乙胺(32ml)和溴代乙酸乙酯(16ml)。將所得產(chǎn)物在70℃下攪拌以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合物傾入飽和氯化銨水溶液。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，將有機(jī)相蒸餾以去除溶劑，所得產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜處理，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶3)洗脫，得25g酯。將該酯溶于THF(200ml)/DMF(40ml)混合物。在冰浴中伴隨攪拌下往該溶液中加入60%氫化鈉(4.56g)，隨后加入甲基碘(8.8ml)，室溫?cái)嚢柚酝瓿煞磻?yīng)。將混合物傾入飽和氯化銨溶液，所得產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。蒸餾有機(jī)相去除溶劑。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜提純，并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶3)洗脫，得15gN-甲基化合物。將該化合物溶于THF(85ml)，隨后加入1N的氫氧化鈉。所得混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)以完成反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物用1N鹽酸中和并用乙酸乙酯萃取，得單羧酸。將該酸完全干燥并溶于THF(100ml)。在冰浴伴隨攪拌下，將溶于THF的1M BH3溶液(85ml)加入所得的溶液。所得溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)以完成反應(yīng)。將該反應(yīng)混合物傾入飽和氯化銨，并用乙酸乙酯進(jìn)行萃取。蒸餾有機(jī)相以去除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜提純，并用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶1)洗脫，得11g伯醇。用與制備例2類似的方式，將該醇轉(zhuǎn)換成甲磺酰衍生物，產(chǎn)品進(jìn)一步用LiBr處理，得9g標(biāo)題化合物(28%)。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.36(3H，t，-CO2-CH2-CH3)，3.07(3H，s，-N-Me)， 3.46(2H，t，J＝7.6Hz，Br-CH2-CH2-N)，3.79(2H，t，J＝7.6Hz，Br-CH2-CH2-N)， 4.32(2H，q，-CO2-CH2-CH3)，6.65(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)， 7.92(2H，d，J＝9.2Hz，ArH) 制備例24 4-N-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)乙基〕-甲氨基苯甲酸乙酯
采用制備例3類似的方法由3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈(0.8g)和由制備例23制得的4-N-(2-溴乙基)甲氨基苯甲酸乙酯(2g)制得下式所示的E-4-N-〔2-〔3-N-氰甲基-N-β-氰乙烯基-氨基)〕乙基〕甲氨基苯甲酸乙酯(1g)(46%)，
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.37(3H，t，CO2-CH2-CH3)，3.06(3H，s，N-Me)， 3.47(2H，t，J＝6Hz，N-CH2-CH2-N-Ar)，3.66(2H，t，J＝6Hz，N-CH2-CH2-N-Ar)， 3.94(2H，s，N-CH2-CN)，4.07(1H，d，J＝13.8Hz，N-CH＝CH-CN)， 6.64(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)，6.79(1H，d，J＝13.8Hz，N-CH＝CH-CN)， 7.95(2H，d，J＝9.2Hz，ArH) 采用與制備例3相似的方式，用光照射上面制得E異構(gòu)體(3.5g)，得0.7gZ-4-N-〔2-〔3-(N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基)〕乙基〕-甲氨基苯甲酸乙酯(20%)，如下式所示。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.37(3H，t，CO2-CH2-CH3)，3.09(3H，s，N-Me)， 3.66(2H，t，J＝6Hz，N-CH2-CH2-N-Ar)，3.76(2H，t，J＝6Hz，N-CH2-CH2-N-Ar)， 4.02(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)，4.25(2H，s，N-CH2-CN)， 4.32(2H，q，-CO2-CH2-CH3)，6.16(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)， 6.67(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)，7.93(2H，d，J＝9.2Hz，ArH) 采用類似制備例3的方法通過閉環(huán)作用，應(yīng)用LDA使上述制得的Z異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物(0.2g，29%)。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.36(3H，t，CO2CH2CH3)，2.83(3H，s，N-Me)，3.65(2H，br，NH2)，3.71(2H，t，J＝6Hz，

)，4.04(2H，t，J＝6Hz，

)，4.31(2H，q，CO2CH2CH3)，5.6(1H，d，J＝3.2Hz，pyrrole 4-H)，6.36(1H，d，J＝3.2Hz，pyrrole 5-H)，6.56(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)，7.9(2H，d，J＝9.2Hz，ArH). 實(shí)施例16 4-N-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕甲氨基苯甲酸乙酯
采用類似實(shí)施例1的方法通過閉環(huán)作用，將3-氨基-2-氰吡咯部分轉(zhuǎn)為吡咯并嘧啶環(huán)而將上述制備例24中制得的化合物轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物(120mg，52%) ·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.33(3H，t，CO2CH2CH3)，2.73(3H，s，N-Me)，3.78(2H，t，J＝4.8Hz，

)，4.25(2H，q，CO2CH2CH3)，4.53(2H，t，J＝4.8Hz，

)，6.08(1H，d，J＝2.8Hz，7-H)，6.48(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)，7.1(1H，d，J＝2.8Hz，6-H)，7.71(2H，d，J＝9.2Hz，ArH). 實(shí)施例17 4-N-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)-乙基〕甲氨基苯甲酸
將實(shí)施例16中制得的吡咯并嘧啶衍生物(120mg)溶于乙醇(10ml)，隨后加入1N氫氧化鈉。將所得的混合物回流加熱以完成反應(yīng)。反應(yīng)混合物用1N HCl中和并蒸餾去除溶劑。所得的殘留物用硅膠柱色譜處理，并用溶劑(8∶1∶1＝乙酸乙酯/甲醇/乙酸)洗脫，得100mg(90%)標(biāo)題化合物。
·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm) 2.75(3H，s，N-Me)，3.78(2H，t，J＝4.8Hz，

)，4.56(2H，t，J＝4.8Hz，

)，6.15(1H，d，J＝2.8Hz，7-H)，6.49(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)，7.14(1H，d，J＝2.8Hz，6-H)，7.76(2H，d，J＝9.2Hz，ArH). 實(shí)施例18 N-〔4-N-〔2-(2，4-二氨基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕甲氨基苯甲酰基〕-L-谷氨酸
采用與實(shí)施例2類似的方式使用DPPA，將實(shí)施例17中制得的羧酸衍生物(100mg)，和L-谷氨酸二乙酯一起縮合，將縮合物用堿液水解，得31mg(21%)結(jié)晶狀的標(biāo)題化合物。
·mol.form.C21H25N7O5(MW455.47) ·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm) 1.98-2.37(2H，m，NHCHCH2CH2CO2H)，2.39-2.54(2H，m，NHCHCH2CH2CO2H)，2.78(3H，s，N-Me)，3.54-3.84(2H，m，

)，4.46-4.61(3H，m，

，-NHCH-)，6.48(2H，d，J＝9.2Hz，ArH)，7.16(1H，d，J＝2.8Hz，6-H)，7.61(2H，d，J＝9.2Hz，ArH). 制備例25 3-(N-羰乙氧基甲基)氨基丙烯腈
將氨基乙酸乙酯鹽酸鹽(36g)，乙酸鈉(32g)和3-二甲氨基丙烯腈(12.5g)加入乙醇(300ml)和水(20ml)的混合物。所得的混合物室溫?cái)嚢枰酝瓿煞磻?yīng)，然后加入水。對該混合物用乙酸乙酯萃取，蒸餾有機(jī)相去除有機(jī)溶劑。得到的殘留物用硅膠柱色譜處理，并用溶劑(1∶3乙酸乙酯/己烷)洗脫，得27.8g(69%)目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.29(3H，t，CO2CH2CH2)，3.71(2H，d，J＝3Hz，N-CH2-CO2Et)，3.88(1H，d，J＝16Hz，olefinic proton)，4.29(2H，q，CO2CH2CH3)，5.29(br，NH)，7.07(1H，dd，J＝8Hz，J＝16Hz，olefinic proton). 制備例26 4-〔3-(3-氨基-2-羰乙氧酰吡咯-1-基)-丙基〕苯甲酸叔丁酯
采用與制備例3類似的方式，由3-(N-羰乙氧基甲基)氨基丙烯腈(4.5g)和由制備例2制得的4-(3-碘丙基)-苯甲酸叔丁酯(10.1g)制得如下所示的E-4-〔3-〔3-(N-羰乙氧基甲基)-N-β-氰乙烯氨基〕丙基〕苯甲酸叔丁酯(4.8g)(44%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.28(3H，t，CO2-CH2-CH3)，1.59(9H，s，t-Bu)， 1.86-1.96(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.68(2H，t，J＝7.6Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.18(2H，t，J＝7.6Hz，-N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.76(1H，d，J＝13.6Hz，-N-CH＝CH-CN)，3.77(2H，s，N-CH2-CO2Et)， 4.21(2H，q，CO2-CH2-CH3)，6.89(1H，d，J＝13.6Hz，N-CH＝CH-CN)， 7.21(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.93(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 采用與制備例3類似的方式，通過光照射上面制得的E異構(gòu)體(4.8g)制得下式所示的Z-4-〔3-〔3-(N-羰乙氧基甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丙基〕苯甲酸叔丁酯(1.48g)(31%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.29(3H，t，CO2-CH2-CH3)，1.59(9H，s，t-Bu)， 1.89-1.97(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.72(2H，t，J＝7.6Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.34(2H，t，J＝7.6Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 3.75(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)，4.08(2H，s，N-CH2-CO2Et)， 4.24(2H，q，CO2-CH2-CH3)，6.24(1H，d，J＝10Hz，N-CH＝CH-CN)， 7.22(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.9(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 往溶于甲苯(5ml)中的上面制得的Z異構(gòu)體(1.48g)中，在冰浴下加入叔丁醇鉀(0.3g)/甲苯(20ml)混合物。將得到的混合物在冰浴下攪拌以完成反應(yīng)，將反應(yīng)混合物倒入飽和氯化銨水溶液，然后用甲苯萃取，蒸餾有機(jī)相以去除溶劑，殘留物采用硅膠柱色譜處理，并用溶劑(1∶3乙酸乙酯/己烷)洗脫，得到0.6g(67%)標(biāo)題化合物。
·NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.35(3H，t，CO2-CH2-CH3)，1.58(9H，s，t-Bu)， 1.99-2.07(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.61(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 4.13(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 4.3(2H，q，CO2-CH2-CH3)，5.6(1H，d，J＝2.8Hz，吡咯-4H)， 6.53(1H，d，J＝2.8Hz，吡咯-5H)，7.19(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)， 7.89(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)-168- 實(shí)施例19 4-〔3-(2-氨基-4-羥基吡咯并〔3，2-d〕-嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯
用和實(shí)施例1中類似的方法，通過閉環(huán)作用將3-氨基-2-羰乙氧基吡咯部分轉(zhuǎn)為吡咯并嘧啶環(huán)而使制備例26中制得的化合物轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物，可得0.5g(85%)產(chǎn)物。
分子式 C20H24N4O3(MW368.43) ·MSFAB-MS m/z369(M+H)+ ·NMR(CD3OD)δ(ppm) 1.57(9H，s，t-Bu)，2.11-2.19(2H，m，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 2.65(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 4.33(2H，t，J＝7.2Hz，N-CH2-CH2-CH2-Ar)， 6.02(1H，d，J＝2.8Hz，7H)，7.17(1H，d，J＝2.8Hz，6H)， 7.24(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.83(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 制備例20 N-〔4-〔3-(2-氨基-4-羥基吡咯并〔3，2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸
采用與實(shí)施例2類似的方法，使用DPPA將實(shí)施例19中制得的化合物和L-谷氨酸一起縮合，得標(biāo)題化合物。
分子式C21H23N5O6(MW441.44) 制備例101 2-氰基-2-環(huán)戊烯-1-酮的制備 在冰浴下氮?dú)饬髦袛嚢枞苡跓o水二氯甲烷的對-甲苯硫醇溶液(13.7g，0.11mol)，然后加入溶于己烷中的三甲基鋁(7.9g，0.11mol)溶液。制得的混合物攪拌約20分鐘，并在干冰-丙酮浴中冷卻，然后滴加入溶于二氯甲烷中的2-環(huán)戊烯酮(8.41g，0.10mol)溶液。制得的混合物進(jìn)一步攪拌30分鐘，并用無水四氫呋喃稀釋，然后在-50℃或更低的溫度下加入溶于四氫呋喃中的對-甲苯磺酰氰(22.9g，0.12mol)。該混合物攪拌約30分鐘，并進(jìn)而置于冰浴中約60分鐘。將約40ml甲醇滴入該混合物，隨后加入乙醚。所得到的混合物用鹽酸，碳酸氫鈉溶液和食鹽溶液洗滌，脫水，濃縮。該濃縮液通過靜置或者加入少量的正-己烷/乙酸乙酯混合液，將結(jié)晶粉狀2-氰基-3-(4-甲苯基)硫代-1-環(huán)戊烷酮(產(chǎn)量22g)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.82～2.00(m，1H)，2.37(s，3H)，2.30～2.60(m，3H)，3.04(d，J＝9.6Hz，1H)，3.68～3.78(m，1H)，7.20(d，J＝8.4Hz，2H)，7.42(d，J＝8.4Hz，2H). 將上述產(chǎn)物(10g，43mmol)溶于四氫呋喃，用硅膠柱吸附，然后用正-己烷/乙酸乙酯混合液作展開劑進(jìn)行色譜提純。對含目的化合物的餾分濃縮，得無色至黃色油狀的目的化合物。
產(chǎn)量2.9g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 2.55～2.58(m，2H)，2.90～2.94(m，2H)，8.32(t，J＝2.8Hz，1H)， ·IR(neat)ν(cm-1)2238，1728，1607 制備例102 4-乙烯基苯甲酸叔丁酯的制備 在干冰/丙酮冷卻下于氮?dú)饬髦袑⑷苡诩和橹械?.6M正-丁基鋰溶液(49.7mmol)加入溶于無水四氫呋喃的溴化甲基三苯基鏻(18.2g，50.9mmol)懸浮液中。制得的混合物攪拌一會兒，其后在冰浴中再攪拌約30分鐘，隨后加入溶于無水四氫呋喃的叔丁基對苯二醛(10g，48.5mmol)。攪拌所得的混合物約40分鐘。反應(yīng)混合物經(jīng)過濾去除沉淀，將濾液濃縮至干。殘留物經(jīng)硅膠柱色譜法純化(展開劑正-己烷/乙酸乙酯＝20∶1)，得目的化合物，產(chǎn)量8.47g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，5.36(d-d，J＝0.8Hz，10.8Hz，1H)，5.84(d-d，J＝0.8Hz，17.6Hz，1H)，6.74(d-d，J＝10.8Hz，17.6Hz，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，2H)，7.94(d，J＝8.0Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1)2978，1710，1292，1166，816. 制備例103 4-(2-羥乙基)苯甲酸叔丁酯的制備 在氮?dú)饬飨聦⑷苡跓o水四氫呋喃的9-硼聯(lián)環(huán)〔3.3.1〕壬烷(9-BBN，5.65g，46.3mmol)溶液加入制備例102中制得的4-乙烯基苯甲酸叔丁酯(8.47g，42.1mmol)的無水四氫呋喃溶液。所得的混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)，依次加入15ml水和17ml3N NaOH溶液，隨后在50℃或更低滴加30%過氧化氫。攪拌該混合物1小時(shí)，并傾入水中。然后用乙酸乙酯萃取。對有機(jī)相用食鹽水溶液清洗，脫水，蒸餾以去除溶劑。殘留物用硅膠柱色譜法純化(展開劑正己烷/乙酸乙酯＝1∶1)，得目的化合物，產(chǎn)量8.71g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.41(t，J＝6.6Hz)，1.59(s，9H)，2.92(t，J＝6.6Hz，2H)，3.88(q，J＝6.6Hz，2H)，7.28(d，J＝8.0Hz，2H)，7.93(d，J＝8.0Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1) 3150～3700，2978，1713，1294，1167. 制備例104 4-(2-溴乙基)苯甲酸叔丁酯的制備 在干冰/丙酮冷卻下將溶于二氯甲烷的甲磺酰氯溶液(5.8g，50.8mmol)滴加到制備例103制得的4-(2-羥乙基)苯甲酸叔丁酯(87g，39.1mmol)和三乙胺(5.9g，58.7mmol)溶于二氯甲烷的溶液中。在冰浴下攪拌該混合物30分鐘，然后加入0.5N的亞硫酸氫鈉溶液。攪拌該混合物，回收有機(jī)相，用食鹽水溶液洗滌，干燥，蒸餾去除溶劑，得11.7g甲磺酸酯。將該酯溶于2-丁烷酮，隨后加入溴化鋰(5.1g，58.4mmol)。所得混合物在65℃通氮下攪拌12小時(shí)，然后室溫靜置，濾去沉淀，對濾液濃縮干燥。殘留物用硅膠柱色譜法純化(展開劑正己烷/乙酸乙酯＝4∶1)得無色或淺棕色晶狀目的化合物(9.8g)。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，3.21(t，J＝7.2Hz，2H)，3.58(t，J＝7.2Hz，2H)，7.26(d，J＝8.0Hz，2H)，7.94(d，J＝8.0Hz，2H) 制備例105 4-〔2-(2-氰基-1-環(huán)戊烷酮-3-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯的制備 在回流加熱情況下將制備例101制得的溶于無水苯的2-氰基-2-環(huán)戊烯-1-酮(2.41g，22.5mmol)的溶液，偶氮聯(lián)異丁腈(AIBN)(0.05g，催化量)和氫化三-正丁基錫(3.62g，12.4mmol)的無水苯溶液，逐滴加入溶于無水苯的制備例104中制得的4-(2-溴乙基)苯甲酸叔丁酯溶液(3.21g，11.3mmol)中，所得混合物回流加熱約20分鐘，蒸餾除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜法純化，得0.43g目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，1.78～1.96(m，1H)，2.02～2.22(m，1H)，2.24～2.58(m，4H)，2.76～2.94(m，3H)，7.26(d，J＝8.2Hz，2H)，7.93(d，J＝8.2Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1)2977，2933，2246，1760，1713 ·Mass(FAB)M+H+＝314. 制備例106 4-〔2-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)乙基〕苯甲酸叔丁酯的制備 將制備例105中制得的4-〔2-(2-氰基-1-環(huán)戊烯酮-3-基)-乙基〕苯甲酸叔丁酯(0.43g，1.37mmol)和N，N-二異丙乙基胺(0.21g，1.64mmol)溶于甲醇/乙腈(1∶5)混合液，隨后加入溶于己烷的3.2g10%(重量)三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷。室溫?cái)嚢柙摶旌弦?小時(shí)，然后加入少量的醋酸，攪拌，蒸餾以除去溶劑。殘留物溶于二乙酯，用稀鹽酸、稀堿和食鹽溶液清洗，脫水，濃縮至干。殘留物用硅膠柱色譜法純化，得0.23g目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.52～1.72(m，2H)，1.59(s，9H)，2.02～2.18(m，2H)，2.46～2.52(m，2H)，2.62～2.82(m，2H)，2.82～2.94(m，1H)，4.05(s，3H)，7.24(d，J＝8.2Hz，2H)，7.90(d，J＝8.2Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1)2977，2933，2203，1710，1632 ·Mass(FAB)M+H+＝328. 實(shí)施例101 4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯的制備 將制備例106制得的化合物(0.23g，0.7mmol)和碳酸胍(0.63g，3.5mmol)與2-甲基-2-丙醇混合。將混合物置于壓力反應(yīng)器內(nèi)并在氮?dú)夥蘸蛿嚢柘略?55±30℃加熱8小時(shí)，隨后加入另外一些碳酸胍(0.25g，1.4mmol)，在185±30℃下攪拌17小時(shí)。反應(yīng)混合物靜置冷卻并濾去沉淀，濃縮濾液。殘留物用硅膠柱色譜純化(展開劑氯仿/甲醇＝10∶1)得0.25g白色粉末狀目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，1.64～1.78(m，1H)，1.84～1.98(m，2H)，2.16～2.28(m，1H)，2.60～2.71(m，2H)，2.71～2.80(m，1H)，2.80～2.91(m，1H)，2.95～3.05(m，1H)，4.40～4.47(br，2H)，4.63～4.70(br，2H)，7.23(d，J＝8.0Hz，2H)，7.91(d，J＝8.0Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1)3330，3145，1708，1610，1584 ·Mass(FAB)M+H+＝355. 實(shí)施例102 4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸的制備 將實(shí)施例101中制得的化合物(0.19g，0.54mmol)溶于二噁烷/水/濃鹽酸(20∶5∶1)混合液。得到的溶液回流加熱4小時(shí)并濃縮。然后向殘余物加入水和1H氫氧化鈉以調(diào)節(jié)PH值至10以上。過濾此混合液，去除沉淀，向?yàn)V液中逐漸加入1N鹽酸中和并得白色沉淀。過濾然后回收沉淀，干燥得0.08g目的化合物。
·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm) 1.66～1.78(m，1H)，1.94～2.14(m，2H)，2.28～2.42(m，1H)，2.70～2.84(m，3H)，2.92～3.04(m，1H)，3.18～3.26(m，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，7.92(d，J＝8.4Hz，2H) ·Mass(FAB)M+H+＝299. 實(shí)施例103 N-｛4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二羥基-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰｝-L-谷氨酸的制備 將實(shí)施例102中制得的化合物(0.08g，0.27mmol)和鹽酸L-谷氨酸二乙酯(0.137g，0.57mmol)懸浮于無水二甲基甲酰胺中，通氮在冰浴下攪拌得到的懸浮液，隨后加入三乙胺(0.13g，1.28mmol)和二苯基磷酰酯疊氮化物(0.16g，0.57mmol)。在冰浴中攪拌約2小時(shí)，然后在室溫下攪拌1小時(shí)，并過濾去除不溶物。濃縮濾液，用硅膠柱色譜法純化(展開劑∶氯仿/甲醇＝10∶1)。得到的二乙酯化合物溶于10ml乙醇和17ml1N氫氧化鈉混合液。所得的溶液室溫?cái)嚢?2小時(shí)，再加入少量的水，過濾之，濃縮濾液，并加入1N鹽酸。過濾回收形成的白色沉淀并用硅膠柱色譜法純化(展開劑氯仿/甲醇/乙酸＝10∶1∶1)純化后的產(chǎn)物溶于稀堿液中，并加稀鹽酸以再沉淀而進(jìn)一步純化，得白色粉狀的目的化合物。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.45～1.57(m，1H)，1.76～2.00(m，3H)，2.00～2.12(m，2H)，2.33(t，J＝7.6Hz，2H)，2.42～2.52(m，1H)，2.60～2.77(m，3H)，3.01～3.10(m，1H)，4.33～4.41(m，1H)，6.00～6.16(br，2H)，6.36～6.50(br，2H)，7.30(d，J＝8.0Hz，2H)，7.78(d，J＝8.0Hz，2H)，8.43(d，J＝6.8Hz，1H) ·Mass(FAB)M+H+＝428. 制備例107 5-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-2-噻吩羧酸叔丁酯的制備 在通氮干冰/丙酮冷卻下攪拌溶于無水四氫呋喃的2-噻吩羧酸叔丁酯和N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(1.74g，15mmol)溶液，隨后滴加溶于戊烷的1.7M叔丁基鋰(13.6mmol)溶液(8.0ml)，然后攪拌約50分鐘。逐漸滴加無水二甲基甲酰胺(15ml)到反應(yīng)混合物中以進(jìn)行反應(yīng)。移去干冰/丙酮浴，升至室溫。攪拌混合液，傾入300ml二乙酯/0.3N HCl(3∶1)混合液。攪拌所得的混合液一會兒，回收有機(jī)層，用PH＝7的磷酸鹽緩沖液和食鹽溶液洗滌，脫水，蒸餾去除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(展開劑正己烷/乙酸乙酯＝8∶1)，得1.7g5-甲基-2-噻吩-羧酸叔丁酯。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，7.70(d，J＝4.0Hz，1H)，7.75(d，J＝4.0Hz，1H)，9.95(s，1H) ·IR(neat)ν(cm-1)2981，1713，1682. 氫化鈉(最小60%石蠟分散液，1.88g，約47mmol)在通氮下用無水己烷洗滌，懸浮于無水四氫呋喃中。在冰浴中攪拌之，然后逐漸滴加溶于無水四氫呋喃的二乙基膦?；宜嵋阴ト芤?10.53g，47mmol)。在室溫?cái)嚢?5分鐘。在冰浴中將溶于無水四氫呋喃的上面制得的5-甲?；?2-噻吩羧酸叔丁酯(6.65g，31.3mmol)溶液逐漸滴加入該混合液，室溫?cái)嚢杷没旌衔锛s30分鐘，用乙醚稀釋之，用稀堿、稀鹽酸和食鹽水溶液洗滌，脫水，真空蒸發(fā)至干。殘留物用硅膠柱色譜純化(展開劑正己烷/乙酸乙酯＝8∶1)，得7.58g目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.33(t，J＝7.2Hz，3H)，1.57(s，9H)，4.25(q，J＝7.2Hz，2H)，6.33(d，J＝15.6Hz，1H)，7.18(d，J＝4.0Hz，1H)，7.61(d，J＝4.0Hz，1H)，7.70(d，J＝15.6Hz，1H) ·IR(neat)ν(cm-1)2980，1713，1706，1630，969. 制備例108 5-(2-乙氧羰基乙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯的制備 在室溫下于乙醇中用10%鈀-碳催化還原在制備例107中制得的α，β-不飽和酯(7.58g，26.8mmol)，反應(yīng)完成后，濾去催化劑，濃縮濾液，濃縮并真空干燥，得7.6g目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.26(t，J＝7.2Hz，3H)，1.56(s，9H)，2.68(t，J＝7.6Hz，2H)，3.15(t-d，J＝7.6Hz，0.8Hz，2H)，4.15(q，J＝7.2Hz，2H)，6.79(dt，J＝3.6Hz，0.8Hz，1H)，7.54(d，J＝3.6Hz，1H) 制備例109 5-(3-羥丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯的制備 在室溫下于乙醇/1N氫氧化鈉混合液中部分水解制備例108中制得的二酯(7.6g，26.8mmol)，得6.1g3-(5-叔-丁氧羰基)-噻吩-2-基)丙酸。將該酸溶于無水四氫呋喃并在冰浴中在約30分鐘內(nèi)向其中滴加硼烷-四氫呋喃溶液(該化合物由硼氫化鈉(3.37g，89mmol)和三氟硼烷-乙醚絡(luò)合物(16.9g，119mmol)得到)。攪拌上述混合物30分鐘，然后滴加甲醇。當(dāng)氫氣不再產(chǎn)生后，過濾反應(yīng)混合物，將濾液蒸發(fā)至干，往殘余物加入甲醇，通過共沸蒸餾去除硼化合物。將殘留物溶于乙醚，并用稀鹽酸和食鹽溶液洗滌，脫水，蒸餾去除溶劑，將殘留物真空干燥，得6.0g目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(s，9H)，1.94(tt，J＝7.6Hz，J＝6.4Hz，2H)，2.93(td，J＝7.6Hz，0.8Hz，2H)，3.70(t，J＝6.4Hz，2H)，6.78(dt，J＝3.6Hz，0.8Hz，1H)，7.54(d，J＝3.6Hz，1H) ·IR(neat)ν(cm-1)3200～3700，2978，2935，1703. 制備例110 5-(3-溴丙基)-2-噻吩-羧酸叔丁酯的制備 按照與制備例104類似的步驟，將制備例109中制得的醇(6.0g，23.9mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的溴鹽。產(chǎn)量6.2g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.56(s，9H)，2.21(tt，J＝7.6Hz，6.4Hz，2H)，3.00(td，J＝7.2Hz，0.8Hz，2H)，3.42(t，J＝6.4Hz，2H)，6.81(dt，J＝3.6Hz，0.8Hz，1H)，7.55(d，J＝3.6Hz，1H). 制備例111 5-〔3-(2-氰基-1-環(huán)戊烷酮-3-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯的制備 按照制備例105相同的步驟，將在制備例110中制得的溴鹽(4.25g，14mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物，產(chǎn)量為0.83g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.40～1.72(m，2H)，1.56(s，9H)，1.74～1.94(m，2H)，2.24～2.56(m，4H)，2.83(d，J＝12Hz，1H)，2.82～2.94(m，2H)，6.77(dt，J＝3.6Hz，0.8Hz，1H)，7.55(d，J＝3.6Hz，1H) ·IR(neat)ν(cm-1)2979，2935，2246，1760，1704 ·Mass(FAB)M+H+＝334. 制備例112 5-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯的制備 按照與制備例106相同的步驟，將制備例111中制得的化合物(0.83g，2.5mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物，產(chǎn)量為0.82g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.40～1.84(m，5H)，1.56(s，9H)，2.02～2.14(m，1H)，2.44～2.50(m，2H)，2.78～2.92(m，3H)，4.04(s，3H)，6.76(d，J＝3.6Hz，1H)，7.54(d，J＝3.6Hz，1H) ·IR(neat)ν(cm-1)2978，2936，2204，1704，1632 ·Mass(FAB)M+H+＝348. 實(shí)施例104 5-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二羥基-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩羧酸的制備 將制備例112中制得的化合物(0.82g，2.35mmol)和碳酸胍(4.3g，23.6mmol)與2-甲基-2-丙醇混合，并將其置于在氮?dú)夥罩械膲毫Ψ磻?yīng)器內(nèi)，攪拌下在155±3℃加熱24小時(shí)，然后在180±3℃加熱40小時(shí)，靜置冷卻該混合液并過濾。真空蒸發(fā)濾液至干。殘余物用硅膠柱色譜純化(展開劑氯仿/甲醇/乙酸＝20∶2∶1至10∶2∶1)。將純化后的產(chǎn)物溶于稀堿液，并加鹽酸以產(chǎn)生再沉淀，得白色粉末狀目的化合物，產(chǎn)率0.33g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.2～1.3(m，1H)，1.5～1.7(m，4H)，1.9～2.1(m，1H)，2.35～2.5(m，1H)，2.5～2.7(m，1H)，2.7～2.8(m，2H)，2.9～3.0(m，1H)，5.9～6.0(br，2H)，6.15～6.3(br，2H)，6.84(d，J＝3.6Hz，1H)，7.45(d，J＝3.6Hz，1H) ·Mass(FAB)M+H+＝319. 實(shí)施例105 N-｛5-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二羥基-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰｝-L-谷氨酸的制備 按照實(shí)施例103相同的方法，將實(shí)施例104中制得的羧酸(0.30g，0.94mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的谷氨酸衍生物，產(chǎn)量0.15g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.20～1.32(m，1H)，1.54～1.72(m，4H)，1.82～2.08(m，3H)，2.24～2.46(m，3H)，2.56～2.68(m，1H)，2.74～2.82(m，2H)，2.92～3.01(m，1H)，4.24～4.36(m，1H)，5.80～5.90(br，2H)，6.10～6.30(br，2H)，6.85(d，J＝3.6Hz，1H)，7.65(d，J＝3.6Hz，1H)，8.39(d，J＝7.6Hz，1H) ·Mass(Fab)M+H+＝448. 制備例113 4-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-苯甲酸叔丁酯的制備 按照與制備例107相同的步驟，將對苯二醛酸叔丁酯(30g，0.146mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的α，β-不飽和酯，產(chǎn)量38.5g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.35(t，J＝7.2Hz，3H)，1.60(s，9H)，4.28(q，J＝7.2Hz，2H)，6.51(d，J＝16.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.8Hz，2H)，7.70(d，J＝16.0Hz，1H)，7.99(d，J＝8.8Hz，2H)。
制備例114 4-(2-乙氧羰乙基)-苯甲酸叔丁酯的制備 依制備例108相同的步驟，將制備例113中制得的α，β-不飽和酯(38.5g，0.139mol)轉(zhuǎn)化成目的化合物，產(chǎn)量38g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.23(t，J＝7.2Hz，3H)，1.58(s，9H)，2.63(t，J＝8.0Hz，2H)，2.99(t，J＝8.0Hz，2H)，4.12(q，J＝7.2Hz，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.91(d，J＝8.4Hz，2H). 制備例115 4-(3-羥丙基)苯甲酸叔丁酯的制備 依制備例109相同的步驟，將制備例114中制得的二酯(38g，0.137mol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的醇，產(chǎn)量25g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，1.91(tt，J＝8.0Hz，6.4Hz，2H)，2.76(t，J＝8.0Hz，2H)，3.67(t，J＝6.4Hz，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.91(d，J＝8.4Hz，2H) 制備例116 4-(3-溴丙基)苯甲酸叔丁酯的制備 依制備例104相同的步驟，將制備例115中制得的醇(25g，0.105mol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的溴鹽，產(chǎn)量25g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.59(s，9H)，2.1～2.22(m，2H)，2.83(t，J＝7.2Hz，2H)，3.38(t，J＝6.4Hz，2H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，7.92(d，J＝8.0Hz，2H) 制備例117 4-〔3-(2-氰基-1-環(huán)戊烷酮-3-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯的制備 依制備例105相同的步驟，將制備例116中制得的溴鹽(1.5g，5mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物，產(chǎn)量0.43g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.40～1.66(m，2H)，1.59(s，9H)，1.70～1.92(m，3H)，2.20～2.56(m，4H)，2.60～2.80(m，2H)，2.81(d，J＝11.6Hz，1H)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H)，7.91(d，J＝8.0Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1)2958，2932，2248，1760，1710 ·Mass(EI)M+＝327. 制備例118 4-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)丙基〕苯甲酸叔丁酯的制備 依照制備例106相同的步驟，將制備例117中制得的化合物(0.41g)轉(zhuǎn)化為目的化合物，產(chǎn)量0.31g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.30～1.41(m，1H)，1.41～1.55(m，1H)，1.59(s，9H)，1.55～1.82(m，3H)，2.02～2.12(m，1H)，2.42～2.48(m，2H)，2.61～2.76(m，2H)，2.82～2.91(m，1H)，4.03(s，3H)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H)，7.90(d，J＝8.0Hz，2H) ·IR(neat)ν(cm-1)2978，2935，2203，1712，1632 ·Mass(EI)M+＝341. 實(shí)施例106 4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二羥基-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯的制備 依實(shí)施例101相同的步驟，將制備例118中制得的化合物(1.06g，3.1mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物，產(chǎn)量0.95g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.34～1.47(m，1H)，1.56～1.82(m，4H)，1.59(s，9H)，2.10～2.23(m，1H)，2.56～2.86(m，4H)，2.95～3.02(m，1H)，4.40～4.50(br，2H)，4.60～4.70(br，2H)，7.21(d，J＝8.4Hz，2H)，7.90(d，J＝8.4Hz，2H) ·Mass(FAB)M+H+＝369. 實(shí)施例107 4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二羥基-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸的制備 依照實(shí)施例102相同的步驟，將實(shí)施例106中制得的化合物(0.73g，2.0mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的羧酸，產(chǎn)量0.5g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.16～1.32(m，1H)，1.50～1.64(m，3H)，1.64～1.74(m，1H)，1.94～2.08(m，1H)，2.40～2.52(m，1H)，2.54～2.74(m，3H)，2.92～3.02(m，1H)，6.20～6.35(br，2H)，6.60～6.76(br，2H)，7.28(d，J＝8.4Hz，2H)，7.83(d，J＝8.4Hz，2H) ·Mass(FAB)M+H+＝313. 實(shí)施例108 N-｛4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二羥基-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰-L-谷氨酸的制備 依實(shí)施例103類似的方法，將實(shí)施例107中制備的羧酸(0.1g，0.32mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的谷氨酸衍生物，產(chǎn)量0.08g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.20～1.30(br，1H)，1.50～1.72(m，4H)，1.88～2.12(m，3H)，2.30～2.37(m，2H)，2.37～2.50(m，2H)，2.55～2.70(m，3H)，2.94～3.02(m，1H)，4.30～4.42(m，1H)，5.70～5.85(br，2H)，6.05～6.20(br，2H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.78(d，J＝8.0Hz，2H)，8.36～8.42(br，1H) ·Mass(FAB)M+H+＝442. 制備例119 4-(1-乙基-3-碘丙基)苯甲酸叔丁酯的制備 將對甲酰苯甲酸叔丁酯(20g，97mmol)溶于乙醚(300ml)，隨后在冰浴中滴加溴化乙基鎂(3M醚狀液，33ml)，攪拌混合液以完成反應(yīng)然后將其傾入飽和氯化銨溶液，并用乙醚萃取，蒸餾有機(jī)相去除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜法純化，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶4)洗脫，得22.3g4-(1-羥丙基)苯甲酸叔丁酯。將產(chǎn)物溶于石油醚(500ml)，加入活性二氧化鎂(165g)，回流加熱該混合物30小時(shí)以完成反應(yīng)。過濾反應(yīng)混合物，濃縮濾液，得21.1g4-丙酰苯甲酸叔丁酯。
對制得的酮進(jìn)行豪勒-埃蒙斯(Horner-Emmons)反應(yīng)，即往溶于四氫呋喃(400ml)的二乙基膦?；宜嵋阴?36ml)中加入叔丁醇鉀(19g)，室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后加入于四氫呋喃(40ml)中的上述酮(21.1g)。所得的混合液在55～65℃攪拌1.5小時(shí)以完成反應(yīng)，將其傾入飽和氯化銨溶液，得22.7g4-(1-乙基-2-乙氧羰基-E-乙烯基)苯甲酸叔丁基。
于甲醇(300ml)中用10%鈀-碳(0.5g)催化劑還原上面得到的α，β-不飽和酯，得4-(1-乙基-2-乙氧羰基乙基)苯甲酸叔丁酯。將該產(chǎn)物加入1N的氫氧化鈉(150ml)和甲醇(150ml)溶液，室溫?cái)嚢?小時(shí)以完成反應(yīng)，將反應(yīng)混合物用1N鹽酸調(diào)至弱酸性并用乙酸乙酯萃取，蒸餾有機(jī)相去除溶劑，用硅膠柱色譜法純化殘留物，得17.7g3-(4-叔-丁氧基羰苯基)戊酸。將該酸溶于四氫呋喃(200ml)，然后在冰浴中滴加溶于四氫呋喃(80ml)的1M氫化硼溶液。在室溫下攪拌該混合液1小時(shí)以完成反應(yīng)。將反應(yīng)混合液傾入飽和氯化銨溶液，并用乙酸乙酯萃取，蒸餾有機(jī)相去除溶劑，殘留物用硅膠柱色譜法純化，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶1)洗脫，得16.7g4-(3-羥乙基丙基)-苯甲酸叔丁酯。將該醇溶于乙醚(400ml)，然后在冰浴下加入三乙胺(4.4ml)和甲磺酰氯(9.8ml)。攪拌得到的混合液以完成反應(yīng)。將得到的混合物倒入飽和氯化銨溶液，用乙醚萃取，蒸餾所得有機(jī)相以去除溶劑，得到甲磺酸酯。將其溶于丙酮(400ml)，然后加入碘化鈉(40g)，回流加熱該混合液以完成反應(yīng)。將得到的反應(yīng)混合物倒入飽和氯化銨溶液，用乙醚萃取之，蒸餾有機(jī)相去除溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜分析，用溶劑(乙醚/己烷＝1∶15)洗脫，得20g無色油狀目的化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 0.77(3H，t，J＝7.2Hz，-CH2CH3)，1.58(9H，s，t-Bu)，1.57～1.76(2H，m，-CH2CH3)，2.01～2.24(2H，m，I-CH2CH2CH-Ar)，2.63～3.09(3H，m，I-CH2CH2CH-Ar)，7.22(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.94(2H，d，J＝8.4Hz，ArH) 制備例120 4-(3-碘-1-甲基丙基)苯甲酸叔丁酯的制備 將對甲酰苯甲酸叔丁酯(20g，97mmol)溶于無水乙醚(300ml)，隨后在冰浴和攪拌下滴加溴化甲基鎂(3M醚狀液，33ml)，攪拌獲得的混合物1小時(shí)，然后傾入飽和氯化銨溶液。用乙醚萃取，醚相用水洗滌，干燥，蒸餾去除溶劑。淡黃色粘性液態(tài)殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化，用溶劑(乙酸乙酯/己烷＝1∶4)洗脫，得21.8g4-(羥乙基)苯甲酸叔丁酯。
該制得的羥基化合物經(jīng)與制備例119相同的反應(yīng)，得8.5g目的碘代化合物(49%)。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.28(3H，d，J＝7.2Hz，-Me)，1.58(9H，s，t-Bu)，2.06～2.13(2H，m，I-CH2CH2CH-Ar)，2.87～2.98(2H，m，I-CH2CH2CH-Ar)，3.05～3.12(1H，m，I-CH2CH2CH-Ar)，7.25(2H，d，J＝8Hz，ArH)，7.93(2H，d，J＝8Hz，ArH) 制備例121 4-(3-溴-1-甲丙基)苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例120的方法制備4-(3-羥基-1-甲丙基)苯甲酸叔丁酯。按類似于制備例104的方法對該化合物(15.6g，66.6mmol)進(jìn)行溴化，得到目的化合物。產(chǎn)量20.5g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.29(3H，d，J＝6.8Hz)，1.59(9H，s)，2.12(2H，dt，J＝6.8Hz，6.8Hz)， 3.03(1H，ddq，J＝6.8Hz，6.8Hz，6.8Hz)，3.15(1H，dt，J＝10.0Hz，6.8Hz)， 3.31(1H，dt，J＝10.0Hz，6.8Hz)，7.25(2H，d，J＝8.4Hz)，7.93(2H，d，J＝8.4Hz) 制備例122 4-〔3-(2-氰基-1-環(huán)戊酮-3-基)-1-甲基-丙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例105的方法將在制備例121中制得的溴化物(7.9g，25mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的目的化合物。產(chǎn)量1.6g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.20-1.85(5H，m)，1.59(9H，s)，2.16-2.53(4H，m)，2.75(1H，d，J＝12.0Hz)， 2.71-2.84(1H，m)，7.23(2H，d，J＝8.4Hz)，7.93(2H，d，J＝8.4Hz) ·Mass(EI)M+＝341 制備實(shí)例123 4-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例106的方法將在制備例122中制得的化合物(1.57g，4.6mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的目的化合物。產(chǎn)量1.6g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.00-1.76(6H，m)，1.25(1H×1/2，s)，1.27(1H×1/2，s)，1.58(9H，s)， 1.97-2.09(1H，m)，2.36-2.46(2H，m)，2.68-2.85(2H，m)，3.99(3H×1/2，s)， 4.01(3H，1/2，s)，7.22(2H×1/2，d，J＝8.4Hz)，7.22(2H×1/2，d，J＝8.4Hz) ·Mass(EI)M+＝355 實(shí)施例109 4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酸 按類似于實(shí)施例104的方法將在制備例123中制得的化合物(1.6g，4.5mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量0.39g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 0.90-1.68(5H，m)，1.18(3H×1/2，d，J＝6.8Hz)，1.20(3H×1/2，d，J＝6.8Hz)， 1.88-2.02(1H，m)，2.30-2.78(3H，m)，2.86-2.96(1H，m)，5.66-5.78(2H，br)， 5.92-6.06(2H，br)，7.28(2H×1/2，d，J＝8.4Hz)， 7.30(2H×1/2，d，J＝8.4Hz)，7.84(2H×1/2，d，J＝8.4Hz)， 7.85(2H×1/2，d，J＝8.4Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝327 實(shí)施例110 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基〕丙基苯甲?！?L-谷氨酸 按類似于實(shí)施例103的方法將在實(shí)施例109中制得的羧酸(0.38g，1.2mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的谷氨酸衍生物。產(chǎn)量0.21g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 0.90-1.70(5H，m)，1.16(3H×1/2，d，J＝7.2Hz)，1.18(3H×1/2，d，J＝7.2Hz)， 1.80-2.10(3H，m)，2.16-2.80(5H，m)，2.80-2.96(1H，m)，4.28-4.40(1H，m)， 5.78-5.90(2H，br)，6.08-6.18(2H，br)，7.20-7.30(2H，m)， 7.72-7.82(2H，m)，8.32-8.42(1H，m) ·Mass(FAB)M+H+＝456 制備例124 4-〔2-(2-甲氧羰基-1-環(huán)戊酮-3-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例105的方法，由在制備例104中制得的溴化物(5.9g，21mmol)和可用已知方法制備的2-甲氧羰基-2-環(huán)戊-1-酮(6.4g，41mmol)制備目的化合物。
產(chǎn)量0.41g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.46-1.60(1H，m)，1.59(9H，s)，1.70-1.82(1H，m)，1.86-1.98(1H，m)， 2.22～2.52(3H，m)，2.54-2.82(3H，m)，2.90(1H，d，J＝10.8Hz)，3.76(3H，s)， 7.22(2H，d，J＝8.4Hz)，7.91(2H，d，J＝8.4Hz) 實(shí)施例111 4-〔2-(2-氨基-3，4，6，7-四氫-4-氧代-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于實(shí)施例101的方法將在制備例124中制得的化合物(0.4g，1.2mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物，產(chǎn)量0.27g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.58(9H，s)，1.62-1.84(2H，m)，2.12-2.28(2H，m)，2.56-2.85(4H，m)， 3.07-3.17(1H，m)，5.38-5.60(2H，br)，7.22(2H，d，J＝8.4Hz)， 7.87(2H，d，J＝8.4Hz)，11.70-12.10(1H，br) ·Mass(FAB)M+H+＝356 分子式 C20H25N3O3 元素分析 計(jì)算值(%) 實(shí)測值(%) C67.58 C67.48 H7.09 H7.12 N11.82 N11.81 實(shí)施例112 4-〔2-(2-氨基-3，4，6，7-四氫-4-氧代-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸 按類似于實(shí)施例102的方法將在實(shí)施例111中制得的化合物(0.25g，0.7mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的羧酸。產(chǎn)量0.16g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.45-1.67(2H，m)，2.00-2.18(2H，m)，2.38-2.50(1H，m)， 2.52-2.72(3H，m)，2.86-2.96(1H，m)，6.24-6.42(2H，br)， 7.30(2H，d，J＝8.4Hz)，7.82(2H，d，J＝8.4Hz)，10.40-10.60(1H，br) ·Mass(FAB)M+H+＝300 分子式 C16H17N3O3·0.5H2O 元素分析 計(jì)算值(%) 實(shí)測值(%) C62.33 C62.28 H5.88 H5.82 N13.63 N13.63 實(shí)施例113 N-〔4-〔2-(2-氨基-3，4，6，7-四氫-4-氧代-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基苯甲?！?L-谷氨酸 按類似于實(shí)施例103的方法將在實(shí)施例112中制得的羧酸(0.15g，0.5mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的谷氨酸衍生物。產(chǎn)量0.09g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.44-1.70(2H，m)，1.86-2.20(4H，m)，2.28-2.35(2H，m)，2.35-2.72(4H，m)， 2.85-2.96(1H，m)，4.30-4.42(1H，m)，6.25-6.40(2H，br)， 7.28(2H，d，J＝8.4Hz)，7.77(2H，d，J＝8.4Hz)，8.40-8.50(1H，m)， 10.40-10.60(1H，br) 制備例125 4-(乙氧羰基甲氧基)苯甲酸乙酯 在氮?dú)饬髦杏脽o水己烷洗滌氫化鈉(最低60%石蠟分散液，2.95g，約74mmol)并懸浮于無水二甲基甲酰胺中。在冰冷卻條件下攪拌所得懸浮液，接著滴加4-羥基苯甲酸乙酯(11.2g，67mmol)在二甲基甲酰胺中形成的溶液。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘并再次用冰冷卻，接著滴加溴代乙酸乙酯(12.9g，77mmol)在無水二甲基甲酰胺中形成的溶液。在室溫下攪拌所得混合物以完成反應(yīng)。過濾除去反應(yīng)混合物中的不溶物并減壓濃縮濾液。將殘余物溶于二乙醚中并用碳酸氫鈉水溶液和食鹽水溶液洗滌所得溶液，干燥并蒸餾除去溶劑。通過硅膠柱色譜純化殘余物。產(chǎn)量16.8g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.29(3H，t，J＝7.2Hz)，1.37(3H，t，J＝7.2Hz)，4.28(2H，q，J＝7.2Hz)， 4.34(2H，q，J＝7.2Hz)，4.67(2H，s)，6.92(2H，d，J＝8.8Hz)， 8.00(2H，d，J＝8.8Hz) 制備實(shí)例126 4-(2-羥基乙氧基)苯甲酸乙酯 按類似于制備例109的方法將在制備例125中制得的酯(16.8g，67mmol)轉(zhuǎn)化成目的羥基化合物。產(chǎn)量13.7g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.38(3H，t，J＝7.2Hz)，1.74-1.88(1H，br)，4.00(2H，t，J＝4.4Hz)， 4.14(2H，t，J＝4.4Hz)，4.35(2H，q，J＝7.2Hz)，6.94(2H，d，J＝9.2Hz)， 8.00(2H，d，J＝9.2Hz) 制備例127 4-(2-溴乙氧基)苯甲酸乙酯 在制備例126中制得的羥基化合物(13.7g，65mmol)進(jìn)行與制備例110相同的反應(yīng)，得到目的溴代化合物的無色固體。產(chǎn)量15.8g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.38(3H，t，J＝6.8Hz)，3.66(2H，t，J＝6.4Hz)，4.34(2H，t，J＝6.4Hz)， 4.35(2H，q，J＝6.8Hz)，6.92(2H，d，J＝8.8Hz)，8.00(2H，d，J＝8.8Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝273，275 分子式 C11H13O3Br 元素分析 計(jì)算值(%) 實(shí)測值(%) C48.37 C48.15 H4.80 H4.71 制備例128 4-〔2-(2-氰基-1-環(huán)戊酮-3-基)乙氧基〕苯甲酸乙酯 按類似于制備例105的方法將在制備例127中制得的溴化物(7.7g，28mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量1.1g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.38(3H，t，J＝7.2Hz)，1.50-1.78(1H，m)，2.00-2.80(7H，m)， 3.00(1H，d，J＝12.0Hz)，4.20(2H，t，J＝6.0Hz)，4.35(2H，q，J＝7.2Hz)， 6.92(2H，d，J＝9.2Hz)，8.00(2H，d，J＝9.2Hz) 制備例129 4-〔2-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)乙氧基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例106的方法將在制備例128中制得的化合物(1.1g，3.7mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量0.78g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.38(3H，t，J＝7.2Hz)，1.60-1.74(1H，m)，1.76-1.90(1H，m)， 2.12-2.32(2H，m)，2.46-2.54(2H，m)，3.06-4.08(1H，m)， 4.12(2H，t，J＝6.0Hz)，4.34(2H，q，J＝7.2Hz)，6.90(2H，d，J＝8.8Hz)， 7.99(2H，d，J＝8.8Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝316 實(shí)施例114 4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙氧基〕苯甲酸 按類似于實(shí)施例104的方法將在制備例129中制得的化合物(0.78g，2.5mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量0.37g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.64-1.85(2H，m)，1.94-2.08(2H，m)，2.32-2.45(1H，m)，2.58-2.72(1H，m)， 3.00-3.12(1H，m)，4.04(2H，t，J＝7.2Hz)，5.60-5.67(2H，br)， 5.97-6.05(2H，br)，6.94(2H，d，J＝8.8Hz)，7.84(2H，d，J＝8.8Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝315 實(shí)施例115 N-〔4-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙氧基〕苯甲?！?L-谷氨酸 按類似于實(shí)施例103的方法將在制備例114中制得的羧酸(0.48g，1.5mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.66-2.10(6H，m)，2.27-2.35(2H，m)，2.36-2.50(1H，m)，2.62-2.74(1H，m)， 3.02-3.13(1H，m)，4.05(2H，t，J＝6.8Hz)，4.29-4.38(1H，m)， 5.81-5.98(2H，br)，6.18-6.30(2H，br)，6.97(2H，d，J＝8.8Hz)， 7.82(2H，d，J＝8.8Hz)，8.34(1H，d，J＝7.2Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝444 制備例130 4-(1-氟-3-丁烯基)苯甲酸叔丁酯 將溴化烯丙基鎂在二乙醚中形成的1.0M溶液(200ml，200ml)滴到4-甲酰苯甲酸叔丁酯(30.9g，150mmol)在無水四氫呋喃中形成的溶液中，同時(shí)在氮?dú)饬髦杏帽鋮s條件下進(jìn)行攪拌。滴完之后，將所得混合物進(jìn)一步攪拌30分鐘，然后加入220ml用冰冷卻的1N鹽酸。強(qiáng)力攪拌所得混合物。用二乙醚進(jìn)一步萃取含水層。合并有機(jī)層，用食鹽水溶液洗滌，干燥并濃縮。通過硅膠柱色譜純化殘余物，得到4-(1-羥基-3-丁烯基)苯甲酸叔丁酯。產(chǎn)量8.2g。
將上面制得的羥基化合物(12g，48.3mmol)溶于無水二氯甲烷中，將所得溶液滴到在氮?dú)夥罩斜３衷诟杀?丙酮浴中的三氟化二乙氨基硫(9.0g，56mmol)在無水二氯甲烷中形成的溶液中。滴完之后，在室溫下攪拌所得混合物，然后加入磷酸鹽緩沖液(PH7)，回收有機(jī)層，用食鹽水溶液洗滌，干燥并蒸餾以除去溶劑。通過硅膠柱色譜純化殘余物，得到目的化合物。產(chǎn)量8.5g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.60(9H，s)，2.50-2.78(2H，m)，5.10-5.17(2H，m)， 5.53(1H，ddd，J＝5.2Hz，7.6Hz，JHF＝47.6Hz)，5.72-5.83(2H，m)， 7.37(2H，d，J＝8.0Hz)，7.99(2H，d，J＝8.0Hz) ·IR(neat)ν(cm-1)2980，1715，1291，1166，1118 制備例131 4-(1-氟-3-羥丙基)苯甲酸叔丁酯 將在制備例130中制得的氟代化合物(8.5g，34mmol)，N-甲基嗎啉N-氧化物(5.0g，44mmol)和四氧化鋨(1g/100cc，叔丁醇，8.6ml，33.7×1/100mmol)溶于丙酮/水混合物中。在室溫下攪拌所得溶液以完成反應(yīng)。濾除反應(yīng)混合物中的不溶物并蒸餾濾液以除去丙酮。將75ml1N鹽酸加到殘余物中并用乙酸乙酯提取所得混合物。合并有機(jī)層，用食鹽水溶液洗滌，干燥并減壓蒸發(fā)至干，得到4-(1-氟-3，4-二羥丁基)苯甲酸叔丁酯。
將上面制得的二醇溶于二乙醚中，接著在攪拌和冰冷卻條件下逐漸加入高碘酸鈉(71g，51mmol)水溶液。滴完之后，將所得混合物進(jìn)一步攪拌2小時(shí)。回收有機(jī)層并用二乙醚進(jìn)一步萃取含水層。合并有機(jī)層，用食鹽水溶液洗滌，干燥并減壓蒸發(fā)至干，得到4-(1-氟-3-氧丙基)苯甲酸叔丁酯。
將上面制備的醛溶于四氫呋喃中并將硼氫化鈉(1.9g，51mmol)逐漸加到所得溶液中，同時(shí)在冰冷卻條件下攪拌該溶液。在室溫下攪拌所得混合物以完成反應(yīng)，然后加入二乙醚和冰-水?；厥沼袡C(jī)層并用二乙醚進(jìn)一步萃取含水層。合并有機(jī)層，用食鹽水溶液洗滌，干燥并蒸發(fā)以除去溶劑。通過硅膠柱色譜純化殘余物，得到目的化合物。產(chǎn)量6.4g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.49-1.55(1H，m)，1.60(9H，s)，1.96-2.28(2H，m)，3.74-3.84(1H，m)， 3.84-3.95(1H，m)，5.74(1H，ddd，J＝4，0Hz，8.8Hz，JHF＝48.0Hz)， 7.39(2H，d，J＝8.0Hz)，8.00(2H，d，J＝8.0Hz) 制備例132 4-(3-溴-1-氟丙基)苯甲酸叔丁酯 在制備例131中制得的羥基化合物(6.4g，25mmol)進(jìn)行與制備例110相同的反應(yīng)，得到7.4g目的溴代化合物。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.60(9H，s)，2.19-2.39(1H，m)，2.41-2.57(1H，m)， 3.40-3.47(1H，m)，3.54-3.62(1H，m)， 5.72(1H，ddd，J＝4.0Hz，9.2Hz，JHF＝48.0Hz)，7.39(2H，d，J＝8.4Hz)， 8.01(2H，d，J＝8.4Hz) ·IR(neat)ν(cm-1);2979，1715，1291，1166，1118 制備例133 4-〔3-(2-氰基-1-環(huán)戊酮-3-基)-1-氟丙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例105的方法將在制備例132中制得的溴化物(5.2g，16mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量0.8g。
制備例134 4-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)-1-氟丙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于制備例106的方法將在制備例133中制得的化合物(0.8g，2.3mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量0.57g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.34-1.66(2H，m)，1.60(9H，s)，1.70-2.16(4H，m)，2.42-2.52(2H，m)， 2.80-2.98(1H，m)，4.03(3H×1/2，s)，4.04(3H×1/2，s)， 5.51(1H，ddd，J＝4.8Hz，7.6Hz，JHF＝47.6Hz)，7.36(2H×1/2，d，J＝8.0Hz)， 7.37(2H×1/2，d，J＝8.0Hz)，7.99(2H，d，J＝8.0Hz) ·IR(neat)ν(cm-1);2978，2947，2203，1712，1629，1294，1166，1119 實(shí)施例116 4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-氟丙基〕苯甲酸叔丁酯 按類似于實(shí)施例101的方法將在制備例134中制得的化合物(0.57g，1.6mmol)轉(zhuǎn)化成目的化合物。產(chǎn)量0.4g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.38-1.66(1H，m)，1.59(9H，s)，1.68-2.04(4H，m)，2.11-2.25(1H，m)， 2.57-2.68(1H，m)，2.73-2.85(1H，m)，3.00-3.12(1H，m)， 4.46-4.59(2H，br)，4.59-4.72(2H，br)，5.40-5.64(1H，m)， 7.34(2H，d，J＝8.4Hz)，7.99(2H，d，J＝8.4Hz) 實(shí)施例117 4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-氟丙基〕苯甲酸 按類似于實(shí)施例102的方法將在實(shí)施例116中制得的化合物(0.35g，0.91mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的羧酸。產(chǎn)量0.26g。
實(shí)施例118 N-〔4-〔3-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕-嘧啶-5-基)-1-氟丙基〕苯甲?！?L-谷氨酸 按類似于實(shí)施例103的方法將在實(shí)施例117中制得的羧酸(0.26g，0.78mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的谷氨酸衍生物。產(chǎn)量0.085g。
·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.10-2.15(8H，m)，2.20-2.70(2H，m)，2.32(2H，t，J＝7.6Hz)， 2.90-3.05(1H，m)，4.32-4.40(1H，m)，5.45-5.68(1H，m)，6.00-6.30(2H，br)， 6.30-6.60(2H，br)，7.41(2H，d，J＝8.0Hz)，7.87(2H，d，J＝8.0Hz)， 8.55(1H，d，J＝7.2Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝460 分子式 C22H26N5O5F·1H2O 元素分析 計(jì)算值(%) 實(shí)測值(%) C55.34 C55.05 H5.91 H5.80 N14.67 N14.54 制備例135 苯甲酸2-(2-氰基-1-環(huán)戊酮-3-基)乙酯
按類似于實(shí)施例105的方法將苯甲酸2-溴乙酯(7.9g，34mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的目的化合物。產(chǎn)量2.6g。
制備例136 苯甲酸2-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)乙酯
按類似于制備例106的方法將在制備例135中制得的化合物(2.6g，10mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的目的化合物。產(chǎn)量1.4g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.61～1.73(1H，m)，1.73～1.86(1H，m)，2.13～2.32(2H，m)，2.46～2.56(2H，m)，3.01～3.12(1H，m)，4.05(3H，s)，4.41(2H，t，J＝6.4Hz)，7.40～7.48(2H，m)，7.53～7.60(1H，m)，8.01～8.07(2H，m). 制備例137 1-氰基-5-(2-羥乙基)-2-甲氧基-1-環(huán)戊烯
將6ml1N氫氧化鈉加到在制備例136中制得的化合物(1.4g，5mmol)在甲醇中形成的溶液中。在室溫下攪拌所得混合物以完成反應(yīng)。蒸餾反應(yīng)混合物以除去甲醇并將殘余物溶于乙酸乙酯中。用碳酸氫鈉水溶液和食鹽水溶液洗滌所得溶液，用硫酸鎂干燥，并蒸餾以除去溶劑，從而得到目的化合物。產(chǎn)量0.82g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.50～1.70(3H，m)，1.96～2.06(1H，m)，2.10～2.20(1H，m)，2.42～2.57(2H，m)，2.98～3.07(1H，m)，3.69～3.84(2H，m)，4.05(3H，s). 制備例138 1-氰基-5-(2-碘乙基)-2-甲氧基-1-環(huán)戊烯
按與制備例104相同的方法，將在制備例137中制備的醇(0.82g，4.9mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的碘代化合物，所不同的是用碘化鈉代替溴化鋰，產(chǎn)量1.3g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.44～1.60(1H，m)，1.78～1.90(1H，m)，2.08～2.20(1H，m)，2.23～2.34(1H，m)，2.45～2.53(2H，m)，2.93～3.03(1H，m)，3.12～3.20(1H，m)，3.23～3.32(1H，m)，4.05(3H，s). 制備例139 4-〔N-苯甲酰-N-〔2-(2-氰基-3-甲氧基-2-環(huán)戊烯基)乙基〕氨基〕苯甲酸乙酯
在氮?dú)饬飨掠脽o水己烷洗滌氫化鈉(最低60%石蠟分散液，0.14g，3.5mmol)并懸浮于無水二甲基甲酰胺中，然后加入4-苯甲酰氨基苯甲酸乙酯。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后加入在制備例138中制得的碘代化合物(0.72g，3.2mmol)在無水二甲基甲酰胺中形成的溶液。將所得混合物在60℃下攪拌1小時(shí)并蒸餾除去溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯中，用食鹽水溶液洗滌所得溶液，干燥并進(jìn)行硅膠柱色譜，得到目的化合物。產(chǎn)量0.62g。
·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm) 1.36(3H，t，J＝7.2Hz)，1.60-1.75(2H，m)，2.00-2.11(1H，m)， 2.14-2.25(1H，m)，2.47-2.54(2H，m)，2.85-2.96(1H，m)，4.39-4.42(2H，m)， 4.02(3H，s)，4.33(2H，q，J＝7.2Hz)，7.08(2H，d，J＝8.8Hz)，7.28-7.60(5H，m)， 7.90(2H，d，J＝8.8Hz) ·IR(neat)ν(cm-1)2983，2946，2203，1716，1647，1604，1275，1104 實(shí)施例119 4-〔N-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-N-苯甲酰氨基〕苯甲酸
按類似于實(shí)施例104的方法將在制備例139中制得的化合物(0.61g，1.45mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的目的化合物。產(chǎn)量0.11g。
·NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.42-1.54(1H，m)，1.63-1.85(2H，m)，1.91-2.04(1H，m)，2.32-2.67(2H，m)， 2.90-3.00(1H，m)，3.80-3.96(2H，m)，5.77-5.87(2H，br)， 6.07-6.15(2H，br)，7.15-7.28(7H，m)，7.75(2H，d，J＝8.4Hz) 實(shí)施例120 4-〔N-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕〕氨基苯甲酸
將在實(shí)施例119中制得的羧酸(0.11g，0.26mmol)和氫氧化鋰-水合物(0.11g，2.6mmol)溶于蒸餾水中并在80℃加熱條件下攪拌所得溶液以完成反應(yīng)。加入1N鹽酸酸化反應(yīng)混合物，然后加入氯仿。強(qiáng)力攪拌所得混合物并過濾回收沉淀物。用氯仿洗滌沉淀物并用1N氫氧化鈉和1N鹽酸進(jìn)行重沉淀，得到目的化合物。產(chǎn)量70mg。
·NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.39-1.51(1H，m)，1.71-1.92(2H，m)，1.94-2.07(1H，m)，2.40-2.50(1H，m)， 2.63-2.74(1H，m)，2.98-3.15(3H，m)，5.88-6.03(2H，br)， 6.37(1H，t，J＝4.8Hz)，6.34-6.50(2H，br)，6.54(2H，d，J＝8.4Hz)， 7.64(2H，d，J＝8.4Hz) 實(shí)施例121 N-〔4-〔N′-〔2-(2，4-二氨基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕〕氨基〕苯甲酰-L-谷氨酸
按類似于實(shí)施例103的方法將在實(shí)施例120中制得的羧酸(65mg，0.21mmol)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的目的化合物。產(chǎn)量10mg。
·NMR(DMSO-d6)δ(ppm) 1.36-1.51(1H，m)，1.69-2.07(5H，m)，2.21-2.52(3H，m)，2.59-2.72(1H，m)， 3.00-3.16(3H，m)，4.26-4.35(1H，m)，5.75-5.90(2H，br)， 6.15(1H，t，J＝4.8Hz)，6.15-6.35(2H，br)，6.34(2H，d，J＝8.4Hz)， 7.64(2H，d，J＝8.4Hz)，8.02(1H，d，J＝7.2Hz) ·Mass(FAB)M+H+＝44權(quán)利要求
1、下列通式(Ⅰ)所示的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽
其中R1代表羥基或氨基；R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同，各自代表羧基或羧酸酯，
代表
，
或
，A代表氧原子、式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，或R3和R4可結(jié)合形成可被取代的亞烷基)或式
代表的基團(tuán)(其中R70代表氫原子或烴基)，n為1-3的整數(shù)，條件是R1代表氧，并且氫與3-位上的氮連接的化合物被包括在上述定義中。
2、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基。
3、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為羥基。
4、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基。
5、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞吡啶基。
6、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞噻吩基。
7、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞呋喃基。
8、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞噻唑基。
9、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中
為N-CH2-CH2-。
10、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中
代表
11、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中
代表
。
12、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中A為式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或低級烷基、低級鏈烯基或低級炔基，或R3和R4可結(jié)合形成可被取代的亞烷基)。
13、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中A為式
代表的基團(tuán)(其中R70代表氫原子或烴基)。
14、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基且R2為亞苯基。
15、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基且R2為亞噻吩基。
16、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為羥基且R2為亞苯基。
17、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為羥基且R2為亞噻吩基。
18、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基，A為亞甲基且n為1。
19、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為羥基，A為亞甲基且n為1。
20、權(quán)利要求9所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基。
21、權(quán)利要求10所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基。
22、權(quán)利要求10所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基且R2為亞苯基。
23、權(quán)利要求10所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基且A為
24、權(quán)利要求10所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基且A為-NH-。
25、權(quán)利要求10所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6各自為氫原子，n為1，且A為
26、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基或亞呋喃基，R5和R6各自為氫原子，
，且A為式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或烴基，或R3和R4可結(jié)合形成可被取代的亞烷基)。
27、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基。
28、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為羥基。
29、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基。
30、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞噻吩基。
31、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或低級烷基、低級鏈烯基或低級炔基。
32、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中n為1。
33、權(quán)利要求26所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中n為2。
34、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基。
35、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基且R2為亞苯基。
36、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基且R2為亞噻吩基。
37、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基且A為-NH-。
38、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基且A為
39、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R5和R6各自為氫原子且A為式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的烴基)。
40、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6各自為氫原子，A為亞甲基，且n為2。
41、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基，R2為亞噻吩基，R5和R6各自為氫原子，A為亞甲基，且n為2。
42、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6各自為氫原子，n為2，且A為
。
43、權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基，R2為亞苯基，R5和R6各自為氫原子，n為2，且A為
。
44、下列通式(1)所示的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽
其中R1代表羥基或氨基;R2代表亞苯基或式
所示的基團(tuán)(其中X代表硫或氧原子)，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫原子或烴基，或它們可結(jié)合形成亞烷基，且n為1-3的整數(shù)。
45、權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R1為氨基。
46、權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為亞苯基。
47、權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R2為噻吩基。
48、權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中R3和R4可彼此相同或不同，各自為氫原子或低級烷基、低級鏈烯基或低級炔基。
49、權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，其中n為2。
50、下列通式101所示的6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫原子或可被取代的烴基，且n為1-3的整數(shù)。
51、下列通式(Ⅱ)所示的化合物及其鹽
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，-CO2R10代表羧基或羧酸酯，
代表
，
，A代表氧原子，式
所示的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，或R3和R4可結(jié)合形成可被取代的亞烷基)或式
所示的基團(tuán)(其中R70代表氫原子或烴基)，且n為1-3的整數(shù)，條件是R1代表氧，且氫與3-位上的氮連接的化合物被包括在上述定義中。
52、權(quán)利要求51所述的化合物或其鹽，其中
為
。
53、權(quán)利要求52所述的化合物或其鹽，其中R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基或亞呋喃基，且A為式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或烴基，或R3和R4的可結(jié)合形成亞烷基)。
54、如權(quán)利要求51所述的化合物或其鹽，其中
為
。
55、如權(quán)利要求54所述的化合物或其鹽，其中A為式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的烴基)。
56、下列通式(4)所示的化合物或其鹽
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基或式
代表的基團(tuán)(其中X代表硫或氧原子)，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫原子或烴基，或它們可結(jié)合形成亞烷基，n為1-3的整數(shù)，且-COOR10代表羧基或羧酸酯。
57、下列通式(105)所示的化合物或其鹽
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫原子或可被取代的烴基，n為1-3的整數(shù)，且-COOR10代表羧基或羧酸酯。
58、一種制備權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽的方法，該方法包括使通式(Ⅲ)的化合物或其羧基被改性成反應(yīng)性形式的反應(yīng)性衍生物
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，
，
或
，A代表氧原子，或
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，或R3和R4可結(jié)合形成可被取代的亞烷基)或式
代表的基團(tuán)(其中R70代表氫原子或烴基)，且n為1-3的整數(shù)，條件是R1為氧，且氫與在3-位上的氮連接的化合物被包括在上述定義中，
與通式(Ⅳ)的化合物反應(yīng)，
其中-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同，各自代表羧基或羧酸酯。
59、權(quán)利要求58所述的方法，其中通式(Ⅲ)所示的化合物選自條件是
的通式(Ⅲ)所示的化合物。
60、權(quán)利要求58所述的方法，其中通式(Ⅲ)所示的化合物選自條件如下的通式(Ⅲ)所示的化合物R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基或亞呋喃基，
，A為式
代表的基團(tuán)(其中R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或烴基，或R3和R4可結(jié)合形成亞烷基)。
61、權(quán)利要求58所述的方法，其中通式(Ⅲ)所式的化合物選自條件是
的通式(Ⅲ)所示的化合物
62、一種制備嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽的方法，該方法包括使通式(Ⅴ)所示的化合物或其羧基被改性成反應(yīng)性形式的反應(yīng)性衍生物
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的炔基，且n為1-3的整數(shù)，條件是R1代表氧，且氫與3-位上的氮連接的化合物被包括在上述定義中，與通式(Ⅳ)所示的化合物反應(yīng)，
其中-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同，各自代表羧基或羧酸酯，條件是-CO2R5和-CO2R6之一或兩者代表羧酸酯，
形成下列通式(Ⅵ)所示的羧酸酯，
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞吡啶基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫或鹵原子或可被取代的烴基，-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同，各自代表羧基或羧酸酯，條件是-CO2R5和-CO2R6之一或兩者代表羧酸酯，且n為1-3的整數(shù)，條件是R1代表氧，且氫與3-位上的氮連接的化合物被包括在上述定義中，
和通過酸或堿水解或包括催化還原在內(nèi)的氫解將酯轉(zhuǎn)化成游離羧酸衍生物。
63、一種制備權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽的方法，該方法包括使下列通式(2)所示的化合物或其羧基被改性成反應(yīng)性形式的反應(yīng)性衍生物
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基或式
所示的基團(tuán)(其中X代表硫或氧原子)，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫原子或烴基，或它們可結(jié)合形成亞烷基，且n為1-3的整數(shù)，
與下列通式(3)所示的化合物反應(yīng)
其中R5和R6可彼此相同或不同，各自代表羧基保護(hù)基。
64、一種制備權(quán)利要求50所述的6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽的方法，該方法包括使下列通式(102)所示的化合物或其羧基被改性成反應(yīng)性形式的反應(yīng)性衍生物
其中R1代表羥基或氨基，R2代表亞苯基、亞噻吩基、亞呋喃基或亞噻唑基，R3和R4可彼此相同或不同，各自代表氫原子或可被取代的烴基，且n為1-3的整數(shù)，
與通式(103)的化合物縮合，
其中R5和R6可彼此相同或不同，各自代表羧基保護(hù)基，形成下列通式(104)所示的羧酸酯
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和n各自如在上面通式102和103中所定義的，
和通過酸或堿水解或包括催化還原在內(nèi)的氫解將酯轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離羧酸。
65、一種含有權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽作為有效成分的抗腫瘤藥物。
66、一種含有權(quán)利要求10所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽作為有效成分的抗腫瘤藥物。
67、一種含有權(quán)利要求11所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽作為有效成分的抗腫瘤藥物。
68、一種含有權(quán)利要求44所述的吡咯并〔3，2-d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽作為有效成分的抗腫瘤藥物。
69、一種含有權(quán)利要求50所述的6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽作為有效成分的抗腫瘤藥物。
70、一種包括有效量的權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽和一種填充劑的藥物組合物。
71、權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽在制備一種可有效地治療服用抗腫瘤藥后可見效的某種疾病的藥物中的應(yīng)用。
72、一種治療患有服用抗腫瘤藥后可見效的疾病的患者的方法，該方法包括給患者服用有效量的權(quán)利要求1所述的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽。
全文摘要
一種具有極好的抗腫瘤活性，以通式(Ⅰ)表示的新的嘧啶衍生物或其藥物上可接受的鹽，式(I)中各取代基的定義詳見說明書，一種制備式(Ⅰ)化合物或其鹽的方法，以及含有式(Ⅰ)化合物或其鹽的抗腫瘤藥。
文檔編號C07D239/47GK1070402SQ92109669
公開日1993年3月31日 申請日期1992年8月21日 優(yōu)先權(quán)日1991年8月21日
發(fā)明者野村容朗, 羽田融, 小竹良彥, 上田教博, 紀(jì)藤恭輔 申請人:衛(wèi)材株式會社