內(nèi)活體熒光成像藥物中的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明所述的葉酸介導(dǎo)的多功能金納米星用于光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的藥物傳遞系統(tǒng)，可以負(fù)載化療藥物。金納米星具有光熱轉(zhuǎn)換特性和產(chǎn)生活性氧能力，結(jié)合腫瘤部位對(duì)其進(jìn)行激光照射，利用金納米星作為熱敏劑，在激光照射下產(chǎn)熱可促使藥物在腫瘤部位靶向釋放，從而實(shí)現(xiàn)熱療和化療聯(lián)合抗腫瘤的作用；本發(fā)明體物理化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備工藝簡單且原料來源豐富，成本低，毒副作用小，能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，是抗腫瘤靶向治療中藥物載體上的創(chuàng)新。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0015]本發(fā)明在具體實(shí)施中，可由以下實(shí)施例給出。
[0016]實(shí)施例1
本發(fā)明在具體實(shí)施中，可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
(!)制備氨基化的金納米星溶液:在25°C，540r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50 μ g/mL的金納米星溶液20mL，然后加入濃度為lmg/mL的NH2-PEG2000_SH溶液lmL，室溫避光攪拌反應(yīng)12h，再1000rpm高速離心30min，得沉淀，沉淀用超純水21mL復(fù)溶，得氨基化的金納米星(GNSTs-PEG)溶液；
(2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸19.91mg、N,N’-二環(huán)己基碳酰亞胺13.94mg、N-輕基琥?白酰亞胺10.36mg (即重量比:葉酸:N, N，- 二環(huán)己基碳酰亞胺:N-輕基琥珀酰亞胺=1: 0.7: 0.52)，然后依次加入4mL 二甲基亞砜中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在50°C、480r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)12h，然后將所得溶液1000rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行?；磻?yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)24h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星(GNSTs-PEG-FA)溶液；
(3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取Img熒光探針吲哚-5.5-菁-N-羥基琥珀酰亞胺(cy5.5-HNS)溶解于ImL的二甲基亞砜中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)24h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.5mL復(fù)溶，得以金納米星為載體具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星(GNS-PEG-FA-cy5.5)溶液；
(4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液經(jīng)冷凍干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:2依次加到24mL的二甲基亞砜中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在25 °C下480r/min避光攪拌反應(yīng)24h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min (去掉未反應(yīng)的阿霉素和二甲基亞砜)，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，用冷凍干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)(GNSTs/DOX-PEG-FA-cy5.5)粉末。
[0017]實(shí)施例2
本發(fā)明在具體實(shí)施中，可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
(1)制備氨基化的金納米星:在20°C，600r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50μ g/mL的金納米星溶液15mL，然后加入濃度為5mg/mL的PE1-SH 3mL，進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)8h，再10000 rpm高速離心30min，然后用超純水復(fù)溶得到氨基化金納米星溶液；
(2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸18mg、N，N’- 二環(huán)己基碳酰亞胺12mg、N-羥基琥珀酰亞胺9mg，然后依次加入4mL磷酸鹽緩沖液中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在45°C、500r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)16h，然后將所得溶液10000 rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行?；磻?yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星溶液；
(3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取1.5mg熒光探針吲哚-5-菁溶解于0.8mL的磷酸鹽緩沖液中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.8mL復(fù)溶，得到以金納米星為載體具有靶向性和近紅外熒光成像的抗腫瘤藥物傳遞系統(tǒng)；
(4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像的靶向金納米星溶液經(jīng)真空干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:2.5依次加到35mL的磷酸鹽緩沖液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在20°C下600r/min避光攪拌反應(yīng)30h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min (去掉未反應(yīng)的阿霉素和磷酸鹽緩沖液)，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，真空干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)粉末。
[0018]實(shí)施例3
本發(fā)明在具體實(shí)施中，還可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
(1)制備氨基化的金納米星:在21°C，510r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50μ g/mL的金納米星溶液15mL，然后加入濃度為5.0mg/mL的氨基化合物3mL，進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)9h，再10000 rpm高速離心30min，然后用超純水復(fù)溶得到氨基化金納米星溶液；
(2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸17.5mg、N，N’ - 二環(huán)己基碳酰亞胺
12.5mg、N-羥基琥珀酰亞胺9mg，然后依次加入3.5mL反應(yīng)溶液中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在45°C、510r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)16h，然后將所得溶液10000 rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行?；磻?yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)18h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星溶液；
(3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取Img熒光探針溶解于0.5mL的反應(yīng)溶劑中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)18h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.5mL復(fù)溶，得到以金納米星為載體具有靶向性和近紅外熒光成像的抗腫瘤藥物傳遞系統(tǒng)；
(4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像的靶向金納米星溶液經(jīng)干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:1.7依次加到25mL的反應(yīng)溶劑中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在21°C下510r/min避光攪拌反應(yīng)36h，得混合溶液，再將得到的混合溶液以1000rpm超速離心30min (去掉未反應(yīng)的阿霉素和反應(yīng)溶劑)，得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，干燥即得光熱和光動(dòng)聯(lián)合抗腫瘤的以葉酸介導(dǎo)的金納米星為載體的藥物傳遞系統(tǒng)粉末。
[0019]實(shí)施例4
本發(fā)明在具體實(shí)施中，還可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
Cl)制備氨基化的金納米星:在20-22°C，500-600r/min的磁力攪拌條件下，加入濃度為50 μ g/mL的金納米星溶液13-17mL，然后加入濃度為6_8mg/mL的氨基化合物2_3mL，進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)8-10 h，再10000 rpm高速離心30min，然后用超純水復(fù)溶得到氨基化金納米星溶液；
(2)制備具有靶向性的金納米星:分別稱取葉酸17-18mg、N，N’- 二環(huán)己基碳酰亞胺12-13mg、N-羥基琥珀酰亞胺8-9.5mg，然后依次加入3_4mL反應(yīng)溶液中，混勻溶解，再進(jìn)行活化羧基，即在43-47°C、500-600r/min下避光磁力攪拌反應(yīng)12_20h，然后將所得溶液10000 rpm高速離心30min得沉淀，沉淀用超純水復(fù)溶，加入步驟(I)制備的氨基化金納米星溶液中進(jìn)行酰化反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16-20h，再10000 rpm高速離心30min，去除游離的小分子，得到末端含有氨基的葉酸靶向金納米星溶液；
(3)制備具有近紅外熒光成像和靶向性的金納米星溶液:取0.8-1.2mg熒光探針溶解于0.4-0.6mL的反應(yīng)溶劑中，加入步驟(2)制備的葉酸靶向金納米星溶液中進(jìn)行酰胺反應(yīng)，室溫避光攪拌反應(yīng)16-20h，再1000rpm超速離心30min得沉淀，沉淀用超純水0.4-0.6mL復(fù)溶，得到以金納米星為載體具有靶向性和近紅外熒光成像的抗腫瘤藥物傳遞系統(tǒng)；
(4)制備負(fù)載阿霉素的金納米星溶液:將步驟(3)制備的具有近紅外熒光成像的靶向金納米星溶液經(jīng)干燥得粉末，將粉末和阿霉素以質(zhì)量比1:1.8-2.2依次加到20-30mL的反應(yīng)溶劑中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，超聲溶解，在20-22°C下50