本發(fā)明涉及誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，特別是包括至少兩次施用佐劑化免疫原性組合物的免疫方法，其中在第二次施用中給予比第一次施用低的劑量。發(fā)明背景疫苗接種是預(yù)防傳染病的最有效的方法之一。但是，抗原的單次施用通常不足夠給予完全免疫和/或長(zhǎng)效應(yīng)答。用于建立對(duì)特定病原體的強(qiáng)力且持久的免疫的方法包括向疫苗添加佐劑和/或重復(fù)疫苗接種，即，通過施用一次或多次另外的劑量的抗原以強(qiáng)化免疫應(yīng)答。此類另外的施用可以使用相同疫苗（同源強(qiáng)化）或不同疫苗（異源強(qiáng)化）進(jìn)行。同源強(qiáng)化最常見的方法不僅施用相同疫苗，并且以如先前施用的相同劑量進(jìn)行施用。迄今需要進(jìn)行多劑量疫苗接種的一種疾病是瘧疾。瘧疾是世界主要健康問題之一。2010年，世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization）報(bào)告了估計(jì)2.19億個(gè)全球瘧疾病例。瘧疾是由瘧原蟲（Plasmodium）屬的原生寄生蟲引起的。所述寄生蟲的生命周期是復(fù)雜的，需要兩種宿主，人和蚊來完成。對(duì)人的感染由通過受感染的蚊的唾液將子孢子接種開始。子孢子階段已經(jīng)被鑒定為瘧疾疫苗的一個(gè)潛在靶標(biāo)。子孢子的主要表面蛋白被稱為環(huán)子孢子蛋白（CS蛋白）。對(duì)RTS,S，一種基于瘧疾CS蛋白和乙型肝炎病毒的病毒包膜蛋白的抗原，已經(jīng)進(jìn)行了超過25年的開發(fā)，并且是目前進(jìn)行研究的最先進(jìn)的瘧疾疫苗候選。其結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)描述于在1999年7月27日授權(quán)的US5928902中。在早期工作中，RTS,S和包含與水包油乳液佐劑結(jié)合的QS21和3D-MPL的佐劑組合用于在小型臨床試驗(yàn)中測(cè)試（Stoute等人1997NEJM336:86）。對(duì)該研究已經(jīng)計(jì)劃了三次全劑量施用時(shí)間表，但是因?yàn)椴煊X到過度的反應(yīng)原性，第三次劑量被減少至1/5并且晚于原定計(jì)劃施用。該研究結(jié)果顯示7位受試者中的6位受到保護(hù)。在后續(xù)的工作中，使用了三次全劑量免疫方案，并且在最近的研究中，還使用了用包含QS21和3D-MPL的脂質(zhì)體制劑將RTS,S佐劑化的三次全劑量免疫方案。該佐劑被稱為AS01，并且描述于例如WO96/33739和WO2007/068907中。來自大規(guī)模三期臨床試驗(yàn)（其中RTS,S/AS01以三次相同劑量，相隔一個(gè)月施用）的最新數(shù)據(jù)顯示，在18個(gè)月后的隨訪中顯示，在18個(gè)月的隨訪時(shí)期中，顯示RTS,S/AS01將兒童（在第一次疫苗接種時(shí)年齡為5-17個(gè)月）中的瘧疾病例數(shù)量幾乎減半，并且在嬰兒（在第一次疫苗接種時(shí)年齡為6-12周）中的瘧疾病例減少約四分之一。雖然在疫苗研究和開發(fā)領(lǐng)域中取得了顯著進(jìn)展，但是仍需要針對(duì)疾?。òǒ懠玻┻M(jìn)行免疫的新型免疫原性組合物和方法，其是高效率的、安全的、具成本效益的、長(zhǎng)效的，且誘導(dǎo)廣譜交叉反應(yīng)性免疫應(yīng)答。發(fā)明概述現(xiàn)在令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在使用佐劑化瘧疾疫苗進(jìn)行免疫的多劑量方法中，相比使用相同劑量時(shí)，當(dāng)后續(xù)劑量（強(qiáng)化劑量）相比先前劑量（激發(fā)劑量）減少時(shí)免疫更加有效。使用的佐劑包括TLR4激動(dòng)劑、3D-MPL和免疫活性皂苷級(jí)分QS21。因此，在本發(fā)明的第一個(gè)方面中，提供了在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的RTS,S，條件是所述第一和第二組合物不是均包含RTS,S和與水包油乳液制劑結(jié)合的QS21和3D-MPL。在另外的方面中，提供了用于在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向所述個(gè)體施用包含RTS,S和佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含RTS,S的第二免疫原性組合物，其中所述佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且其中所述第二免疫原性組合物不包含佐劑。附圖簡(jiǎn)述圖1：接種疫苗的受試者中在受到攻擊后28天的隨訪時(shí)間段內(nèi)未發(fā)生寄生蟲血癥的百分比。Fx指示延時(shí)分次劑量組；RRR指示0、1、2個(gè)月組；CTL指示對(duì)照組。圖2a-c：于1999年7月27日授權(quán)的US5928902的RTS,S的序列。圖3a-b：VZV抗原的序列。圖4a：RRr組中4/30的受試者發(fā)生寄生蟲血癥（VE=87%[95%CI:67,95）；RRR組中6/16的受試者發(fā)生寄生蟲血癥（VE=63%[95%CI20,80]）。圖4b：本研究的延時(shí)分次劑量部分針對(duì)至今完成的5個(gè)0、1、2個(gè)月RTS,S/AS01試驗(yàn)中研究的95位受試者的集合數(shù)據(jù)的結(jié)果的比較分析。圖5a-b：在最后劑量之后一個(gè)月受到子孢子攻擊后6個(gè)月的分次強(qiáng)化的研究。對(duì)在第一次攻擊后未受到保護(hù)的受試者提供分次強(qiáng)化。對(duì)在第一次攻擊后受到保護(hù)的受試者隨機(jī)進(jìn)行或不進(jìn)行分次強(qiáng)化，隨后在一個(gè)月后進(jìn)行子孢子攻擊。圖5a：在第12個(gè)月沒有給予強(qiáng)化劑量的受試者。圖6：來自標(biāo)準(zhǔn)和延時(shí)方案中施用M72的小鼠的CD4T細(xì)胞應(yīng)答。圖7：來自標(biāo)準(zhǔn)和延時(shí)方案中施用M72的小鼠的CD8T細(xì)胞應(yīng)答。圖8：來自標(biāo)準(zhǔn)和延時(shí)方案中施用M72的小鼠的CD4T細(xì)胞因子概況。圖9：來自標(biāo)準(zhǔn)和延時(shí)方案中施用M72的小鼠的CD8T細(xì)胞因子概況。圖10：來自標(biāo)準(zhǔn)和延時(shí)方案中施用M72的小鼠的抗M72的血清學(xué)。序列標(biāo)識(shí)簡(jiǎn)述SEQIDNo.1:RTS,S的氨基酸序列，如本文別處所述。SEQIDNo.2:VZV的氨基酸序列，如本文別處所述。SEQIDNo.3:M72的氨基酸序列，如本文別處所述。SEQIDNo.4:具有兩個(gè)N-末端His殘基的M72蛋白的氨基酸序列，如本文別處所述。發(fā)明詳述如上文所述，在第一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的RTS,S，條件是所述第一和第二組合物不是均包含RTS,S和與水包油乳液制劑結(jié)合的QS21和3D-MPL。如本文所用，施用第一組合物“隨后”施用第二組合物表明在施用所述第一組合物和施用所述第二組合物之間已經(jīng)經(jīng)過了時(shí)間間隔。相似地，提供了用于在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法中使用的第一免疫原性組合物，其中所述方法包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的RTS,S，條件是所述第一和第二組合物不是均包含RTS,S和與水包油乳液制劑結(jié)合的QS21和3D-MPL。相似地，提供了用于在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法中使用的第二免疫原性組合物，其中所述方法包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的RTS,S，條件是所述第一和第二組合物不是均包含RTS,S和與水包油乳液制劑結(jié)合的QS21和3D-MPL。在另外的方面中，本發(fā)明涉及包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于誘導(dǎo)人類個(gè)體的免疫應(yīng)答，其中所述個(gè)體先前已接受了包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的RTS,S，條件是所述第一和第二組合物不是均包含RTS,S和與水包油乳液制劑結(jié)合的QS21和3D-MPL。在另外的方面中，本發(fā)明涉及用于在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向所述個(gè)體施用包含RTS,S和佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含RTS,S的第二免疫原性組合物，其中所述佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且其中所述第二免疫原性組合物不包含佐劑。在該方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的RTS,S。在該方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二組合物含有在所述第一和第二組合物中等量的RTS,S。在該方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一和第二組合物均包含25微克RTS,S，或均包含50微克RTS,S。如上文所述，在另外的方面中，本發(fā)明涉及在個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原不是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的所述相同抗原。在一個(gè)方面中，所述個(gè)體是人類個(gè)體。相似地，提供了用于在人類個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法中使用的第一免疫原性組合物，其中所述方法包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原不是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的所述相同抗原。在一個(gè)方面中，所述個(gè)體是人類個(gè)體。相似地，提供了用于在個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法中使用的第二免疫原性組合物，其中所述方法包括向個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原不是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的所述相同抗原。在一個(gè)方面中，所述個(gè)體是人類個(gè)體。在另外的方面中，本發(fā)明涉及包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于誘導(dǎo)人類個(gè)體的免疫應(yīng)答，其中所述個(gè)體先前已接受了包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，其中所述第一和第二組合物的至少一種抗原是相同的，其中所述第一和第二佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的，且其中：?所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分，并且/或者?所述相同抗原不是RTS,S，且所述第二組合物含有比所述第一組合物更低量的所述相同抗原。在一個(gè)方面中，所述個(gè)體是人類個(gè)體。在另外的方面中，本發(fā)明涉及用于在個(gè)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向所述個(gè)體施用包含抗原和佐劑的第一免疫原性組合物，隨后向所述個(gè)體施用包含至少一種與所述第一組合物相同的抗原的第二免疫原性組合物，其中所述佐劑包含TLR激動(dòng)劑和/或免疫活性皂苷，且其中所述第二免疫原性組合物不包含佐劑。在一個(gè)方面中，所述個(gè)體是人類個(gè)體。通常，本發(fā)明方法的目標(biāo)是誘導(dǎo)保護(hù)性免疫應(yīng)答，即，針對(duì)抗原所衍生的病原體使所述個(gè)體免疫或接種疫苗。在一個(gè)實(shí)施方案中，相比其中第一組合物和第二組合物相同的治療方案，本發(fā)明的方法的免疫效力是提高的。例如，根據(jù)本文實(shí)施例確定的，所述疫苗效力可以提高至少10%，諸如25%。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本文實(shí)施例測(cè)定的，實(shí)現(xiàn)了大于80%，如大于90%的免疫效力。因此，所述方法可以用于防止（即預(yù)防）傳染病?？蛇x地，所述方法可以通過誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答而用于免疫治療，即，治療疾?。ㄖT如癌癥）。用于本發(fā)明的方法的佐劑如上文所述，在本發(fā)明的一個(gè)方面中，所述第一佐劑和第二佐劑包含TLR拮抗劑和/或免疫活性皂苷，且這兩種組分中的至少一種是相同的。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑和第二佐劑均包含TLR拮抗劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑和第二佐劑均包含免疫活性皂苷。在還另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑和第二佐劑均包含TLR拮抗劑和免疫活性皂苷。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑和第二佐劑由相同組分組成。因此，在這樣的實(shí)施方案中，兩種佐劑的組分是相同的，但不一定是相同的相對(duì)比例。例如，所述第一佐劑和第二佐劑可以均由脂質(zhì)體制劑中的TLR拮抗劑和皂苷組成，但是TLR拮抗劑與皂苷的比例在第一佐劑中可以是5:1，而在第二佐劑中是1:1?？蛇x地，TLR拮抗劑與皂苷的比例在第一佐劑中可以是4:1，而在第二佐劑中是1:1，在第一佐劑中可以是3:1，而在第二佐劑中是2:1，在第一佐劑中可以是1:1，而在第二佐劑中是1:1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑和第二佐劑由相同組分組成，且這些組分的相對(duì)比例相同。然而，在這樣的實(shí)施方案中，盡管佐劑組分的相對(duì)比例相同，這些組分的絕對(duì)量在所述第一和第二免疫原性組合物之間可以不同。例如所述第二佐劑的全部組分的絕對(duì)量可以是，例如所述第一佐劑的全部組分的絕對(duì)量的五分之一。如上文所述，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二佐劑含有比所述第一佐劑更低量的所述相同組分（即更低量的TLR拮抗劑或更低量的皂苷或兩者均更低量）。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二佐劑中的所述相同組分的更低量是比所述第一佐劑低至少10%，諸如低至少25%，例如，至少低兩倍，諸如至少低三倍，例如至少低四倍，諸如至少低五倍，例如至少低六倍，諸如至少低七倍，例如至少低八倍，諸如至少低九倍，例如至少低十倍，諸如至少低15倍，例如至少低20倍的量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在所述第二佐劑中的所述相同組分的更低量是比所述第一佐劑低2至50倍，諸如低2至20倍，例如，如低2至15倍，如低2至10倍，例如，如低3至7倍，如低4至6倍的量。如上文所述，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑和所述第二佐劑包含TLR（Toll-樣受體）拮抗劑。在佐劑中使用TLR拮抗劑是本領(lǐng)域熟知的，且已經(jīng)由例如Lahiri等人(2008)Vaccine26:6777綜述。可以被刺激以實(shí)現(xiàn)佐劑效果的TLR包括TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8和TLR9。TLR2、TLR4、TLR7和TLR8激動(dòng)劑，特別是TLR4激動(dòng)劑，是優(yōu)選的。合適的TLR4激動(dòng)劑包括脂多糖類，諸如單磷酰脂A（MPL）和3-O-脫酰基單磷酰脂A（3D-MPL）。美國(guó)專利4,436,727公開了MPL及其制備。美國(guó)專利4,912,094及其復(fù)審證書B14,912,094公開了3D-MPL及其制備方法。另一種TLR4激動(dòng)劑是吡喃葡萄糖基脂質(zhì)佐劑（GLA），一種合成的脂質(zhì)A-樣分子（參見，例如Fox等人(2012)Clin.VaccineImmunol19:1633）。在另外的實(shí)施方案中，所述TLR4拮抗劑可以是合成的TLR4激動(dòng)劑，諸如合成的二糖分子，與MPL和3D-MPL結(jié)構(gòu)類似，或可以是合成的單糖分子，諸如氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯（AGP）化合物，其公開于例如，WO9850399、WO0134617、WO0212258、W03065806、WO04062599、WO06016997、WO0612425、WO03066065和WO0190129中。這樣的分子也已經(jīng)作為脂質(zhì)A模擬物描述于科學(xué)和專利文獻(xiàn)中。脂質(zhì)A模擬物適合與脂質(zhì)A共享一些功能和/或結(jié)構(gòu)活性，且在一個(gè)方面被TLR4受體識(shí)別。本文中描述的AGP在本領(lǐng)域中有時(shí)被稱為脂質(zhì)A模擬物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，TLR4拮抗劑是3D-MPL。TLR4拮抗劑，如3-O-脫?；鶈瘟柞Ｖ珹（3D-MPL），及其作為佐劑在疫苗中的用途已經(jīng)在例如WO96/33739和WO2007/068907中描述，且在Alving等人(2012)CurrOpininImmunol24:310中綜述。在本發(fā)明的方法的另外的實(shí)施方案中，所述第一佐劑和所述第二佐劑包含免疫活性皂苷，諸如免疫活性皂苷級(jí)分，如QS21。包含皂苷的佐劑已經(jīng)在本領(lǐng)域中描述。皂苷被描述于：Lacaille-Dubois和Wagner(1996)Areviewofthebiologicalandpharmacologicalactivitiesofsaponins.Phytomedicinevol2:363。皂苷作為疫苗中的佐劑是已知的。例如，QuilA(來源于南美樹皂皮樹的樹皮（QuillajaSaponariaMolina）），由Dalsgaard等人于1974("Saponinadjuvants",Archiv.furdiegesamteVirusforschung,Vol.44,SpringerVerlag,Berlin,243)描述具有佐劑活性。QuilA的純化級(jí)分已經(jīng)由HPLC分離，其保持佐劑活性而沒有與QuilA相關(guān)的毒性（Kensil等人(1991)J.Immunol.146:431.QuilA級(jí)分也被描述于US5,057,540和"Saponinsasvaccineadjuvants",Kensil,C.R.,CritRevTherDrugCarrierSyst,1996,12(1-2):1-55。兩種適合用于本發(fā)明的這樣的級(jí)分是QS7和QS21(也被稱作QA-7和QA-21)。QS21是用于本發(fā)明的優(yōu)選的免疫活性皂苷級(jí)分。QS21已經(jīng)在Kensil(2000)InO’Hagan:VaccineAdjuvants:preparationmethodsandresearchprotocols.HomanaPress,Totowa,NewJersey,第15章中綜述。包含QuilA級(jí)分（如QS21和QS7）的微粒佐劑系統(tǒng)在例如WO96/33739、WO96/11711和WO2007/068907中描述。除了其它組分，所述佐劑優(yōu)選地包含固醇。固醇的存在可以進(jìn)一步降低包含皂苷的組合物的反應(yīng)原性，參見例如EP0822831。合適的固醇包括β-谷固醇、豆固醇、麥角固醇、鈣化醇和膽固醇。膽固醇是特別合適的。合適地，所述免疫活性皂苷級(jí)分是QS21且QS21：固醇的比例為1:100至1:1w/w,如1:10至1:1w/w，例如1:5至1:1w/w。在本發(fā)明的方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述TLR4拮抗劑是3D-MPL，且所述免疫活性皂苷是QS21。在一些實(shí)施方案中，所述佐劑以水包油乳液（例如，包含鯊烯、α-生育酚和表面活性劑）的形式（參見，例如W095/17210）或以脂質(zhì)體的形式存在。脂質(zhì)體呈遞是優(yōu)選的。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“脂質(zhì)體”指的是包覆水性內(nèi)部的單層或多層（特別是2、3、4、5、6、7、8、9或10層，取決于形成的脂質(zhì)膜的數(shù)量）脂質(zhì)結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)體和脂質(zhì)體制劑是本領(lǐng)域熟知的。脂質(zhì)體呈遞在例如WO96/33739和WO2007/068907中描述。能夠形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)包括所有具有脂肪或脂樣性能的物質(zhì)。甘油酯、甘油膦酸酯、甘油膦酯、甘油膦酰酯、硫脂、鞘脂、磷脂、異戊烯醇、類固醇、硬脂、固醇、古脂質(zhì)（archeolipid）、合成的陽離子脂質(zhì)和含碳水化合物脂質(zhì)。在本發(fā)明的特定的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體包含磷脂。合適的磷脂包括（但不限于）:磷酸膽堿(PC)其是卵磷脂合成的中間體；天然磷脂衍生物：卵磷酸膽堿、卵磷酸膽堿、大豆磷酸膽堿、氫化大豆磷酸膽堿、作為天然磷脂的鞘磷脂；和合成的磷脂衍生物:磷酸膽堿(二癸?；?L-a-磷脂酰膽堿[DDPC]、二月桂酰磷脂酰膽堿[DLPC]、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿[DMPC]、二棕櫚酰磷脂酰膽堿[DPPC]、二硬脂酰磷脂酰膽堿[DSPC]、二油酰磷脂酰膽堿[DOPC]、1-棕櫚酰、2-油酰磷脂酰膽堿[POPC]、二烯醇磷脂酰膽堿[DEPC])、磷酸甘油(1、2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油[DMPG]、1、2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸甘油[DPPG]、1、2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油[DSPG]、1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油[POPG])、磷脂酸(1、2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷脂酸[DMPA]、二棕櫚酰磷脂酸[DPPA]、二硬脂酰-磷脂酸[DSPA])、磷酸乙醇胺(1、2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺[DMPE]、1、2-二棕櫚酰-sn-甘油基-3-二硬脂酰[DPPE]、1、2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺[DSPE]、1、2-二油酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺[DOPE])、磷酸絲氨酸（phoshoserine）、聚乙二醇[PEG]磷脂。脂質(zhì)體大小可以在30nm至數(shù)um之間變化，取決于磷脂組合物和用于制備它們的方法。在本發(fā)明的特定的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體大小將在50nm至500nm的范圍內(nèi)，而在另外的實(shí)施方案中在50nm至200nm的范圍內(nèi)。動(dòng)態(tài)激光散射是本領(lǐng)域技術(shù)人熟知的用于測(cè)量脂質(zhì)體大小的方法。在特別合適的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的脂質(zhì)體包含DOPC和固醇，特別是膽固醇。因此，在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含以脂質(zhì)體形式的本文所述的任何量的QS21，其中所述脂質(zhì)體包含DOPC和固醇，特別是膽固醇。優(yōu)選地，所述第一佐劑和第二佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的3D-MPL和QS21。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的25至75（如50）微克3D-MPL和25至75（如50）微克QS21，而所述第二佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的5至15（如10）微克3D-MPL和5至15（如10）微克QS21。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的12.5至37.5（如25）微克3D-MPL和12.5至37.5（如25）微克QS21，而所述第二佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的2.5至7.5（如5）微克3D-MPL和2.5至7.5（如5）微克QS21。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的12.5至37.5，如20至30微克(例如大約或恰好25微克)3D-MPL和12.5至37.5，如20至30微克(例如大約或恰好25微克)QS21，而所述第二佐劑包含在脂質(zhì)體制劑中的減少量的3D-MPL或QS21，如2.5至20，如2.5至10微克(例如大約或恰好5微克)3D-MPL和如2.5至20，如2.5至10微克(例如大約或恰好5微克)QS21。合適地，在第一和第二佐劑中3D-MPL的量與QS21的量相同。熟知的是用于腸胃外施用溶液的應(yīng)當(dāng)是生理等滲的（即，具有藥學(xué)上可接受的摩爾滲透壓濃度）以避免細(xì)胞變形或裂解。藥學(xué)上可接受的摩爾滲透壓濃度將通常意為溶液將具有大約等滲或輕微高滲的摩爾滲透壓濃度。合適地，本發(fā)明的免疫原性組合物將具有250至750mOsm/kg范圍內(nèi)的摩爾滲透壓濃度，例如，所述摩爾滲透壓濃度可以在250至550mOsm/kg的范圍內(nèi)，如在280至500mOsm/kg的范圍內(nèi)。摩爾滲透壓濃度可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)測(cè)量，諸如通過使用可商購(gòu)獲得的滲壓計(jì)，例如可從AdvancedInstrumentsInc.(USA)獲得的Advanced?Model2020。“等滲劑”是生理耐受且給予制劑（例如本發(fā)明的免疫原性組合物）合適張度的化合物，以防止水的凈流量穿過與所述制劑接觸的細(xì)胞膜。已知的水性佐劑組合物含有100mM或更多的氯化鈉，例如在WO2005/112991和WO2008/142133中的佐劑體系A(chǔ)（ASA），或公開于WO2007/068907中的脂質(zhì)體佐劑。在一些實(shí)施方案中，被用于所述組合物的等滲劑是鹽。但是，在另外的實(shí)施方案中，所述組合物包含非離子等滲劑，且所述組合物中的氯化鈉的濃度或離子強(qiáng)度小于100mM，如小于80mM，例如小于30mM，例如小于10mM或小于5mM。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述非離子等滲劑是多元醇，如山梨醇。山梨醇的濃度可以是，例如約3%至約15%(w/v)，如約4%至約10%(w/v)。其中等滲劑是鹽或多元醇的包含免疫活性皂苷級(jí)分和TLR4拮抗劑的佐劑已經(jīng)在WO2010142685中描述，參見，例如WO2010142685中的實(shí)施例1和2。在另外的實(shí)施方案中，第一佐劑和/或第二佐劑不包含鋁。用于本發(fā)明的方法的抗原在本發(fā)明的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，第二組合物含有比第一組合物更少量的相同抗原。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二組合物中的所述相同抗原的更低量是比所述第一組合物低至少10%，如低至少25%，例如，至少低兩倍，如至少低三倍，例如至少低四倍，如至少低五倍，例如至少低六倍，如至少低七倍，例如至少低八倍，如至少低九倍，例如至少低十倍，如至少低15倍，例如至少低20倍的抗原量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在所述第二組合物中的所述相同抗原的更低量是比所述第一組合物低2至50倍，諸如低2至20倍，例如，如低2至15倍，如低2至10倍，例如，如低3至7倍，如低4至6倍的抗原量。如上文所述，所述第一免疫原性組合物和所述第二免疫原性組合物具有至少一種相同抗原。在一些實(shí)施方案中，所述第一和第二組合物中的全部抗原相同。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述相同抗原是瘧原蟲抗原，如惡性瘧原蟲（P.falciparum）或間日瘧原蟲（P.vivax）抗原。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述相同抗原是環(huán)子孢子（CS）蛋白或其免疫活性片段或變體，如惡性瘧原蟲的CS蛋白或其免疫活性片段或變體，或間日瘧原蟲的CS蛋白或其免疫活性片段或變體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述相同抗原是CelTOS(Genbank登錄號(hào)Q8I5P1:惡性瘧原蟲3D7CelTOS;也是GenBank:AAN36249).)、TRAP(Genbank登錄號(hào):CAD52497.1GI:23615505)或Pfs25(Genbank登錄號(hào):AAN35500.1GI:23495169)或CelTOS、TRAP和/或Pfs25的免疫活性片段或變體。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是由乙型肝炎的表面抗原S（HBsAg）或其免疫原性片段或包含HBsAg的免疫活性蛋白或其免疫活性片段組成的免疫原性蛋白，例如HBsAg與不同抗原的融合蛋白。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是VZV（水痘帶狀皰疹病毒）抗原。VZV抗原的實(shí)例是VZV糖蛋白gE（也被稱為gp1）或其免疫原性衍生物。野生型或全長(zhǎng)gE蛋白由623個(gè)氨基酸組成，其包含信號(hào)肽、所述蛋白的主體、疏水錨定區(qū)（殘基546-558）和C-端尾。在一個(gè)方面中，使用gE的C-末端截短物（也被稱為截短gE或gE截短物），其中該截短將位于羧基末端的總氨基酸殘基的4-20%移除。在另外的方面中，截短的gR缺少羧基末端錨定區(qū)（大約為野生型序列的氨基酸547-623）。在另外的方面中g(shù)R是具有SEQIDNO.2的序列的截短的gE。所述gE抗原，其無錨定衍生物（其也是免疫原性衍生物）和其生產(chǎn)描述于EP0405867中，且在此引用（還參見Vafai(1994)Vaccine12:1265）。EP192902也公開了gE及其生產(chǎn)。具有SEQIDNo.2所示的序列的截短的gE也由Haumont等人VirusResearch(1996)40:199公開，其通過引用全部并入本文。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是巨細(xì)胞病毒（CMV）抗原，如gB或其免疫原性片段或變體。合適的衍生自gB的抗原已經(jīng)在WO2012/049317中描述，其以US2013216613公開于美國(guó)并且為了描述合適用于本發(fā)明的的蛋白的目的通過引用并入。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是呼吸道合胞體病毒（RSV）抗原，如RSV的F蛋白或其免疫原性片段或變體。衍生自F蛋白的合適的抗原已經(jīng)在WO2010149745中描述，例如WO2010149745中SEQIDNO:18、SEQIDNO:20和SEQIDNO:22中所示的F蛋白變體。另外合適的RSV抗原已經(jīng)在WO2011008974和WO2012158613中描述。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是登革熱病毒抗原，如滅活或活減毒全登革熱病毒。所述組合物可以是多價(jià)的且例如含有四種或更多種登革熱毒株。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是流感嗜血桿菌（Haemophilusinfluenzae）抗原，如蛋白E和/或菌毛蛋白A或其免疫原性片段或變體，例如，在WO2012139225中描述的那些。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）抗原，如M72抗原，例如，在WO2006/117240（其以美國(guó)專利號(hào)8,470,338授權(quán)為了描述合適用于本發(fā)明的的蛋白的目的通過引用并入）中描述的抗原。值得關(guān)注的結(jié)核分枝桿菌抗原包含這樣的序列，所述序列包含以下（或由其組成）：-Rv0125，也被稱為Mtb32a，如在WO2010010177的SEQIDNo20或21中描述的；-Rv0915,也被稱為MTCC2或Mtb41，如在WO2010010177的SEQIDNo14中描述的；-Rv1174，也被稱為DPV，如在WO2010010177的SEQIDNo8中描述的；-Rv1196，也被稱為Mtb39或TbH9，如在WO2010010177的SEQIDNo13中描述的；-Rv1753，如在WO2010010180的SEQIDNo1和2-7中描述的；-Rv1793，也被稱為MTI或Mtb9.9，如在WO2010010177的SEQIDNo10中描述的；-Rv2087，也被稱為MSL或Mtb9.8，如在WO2010010177的SEQIDNo9中描述的；-Rv2386，如在WO2010010179的SEQIDNo1和2-7中描述的；-Rv3616，也被稱為HTCC1或Mtb40，如在WO2010010177的SEQIDNo1和2-7，或在WO2011092253的SEQIDNo161-169、179或180中描述的；或包含（或由其組成）上文序列中任一者的至少20個(gè)（如至少50個(gè)）殘基的免疫原性片段，或包含（或由其組成）與上文序列中任一者具有至少90%（如至少95%或98%）同一性的變體。值得關(guān)注的結(jié)核分枝桿菌融合抗原包括衍生自Mtb72f，如在WO2010010177的SEQIDNo23中描述的；或衍生自M72，如本文SEQIDNo.3描述的那些。特別值得關(guān)注的M72抗原是包含以下（或由其組成）的那些：與本文SEQIDNo.3具有至少90%（如至少95%或98%）同一性的氨基酸序列，如包含SEQIDNo.3的殘基2至723的序列（例如本文SEQIDNo.4）。其它值得關(guān)注的結(jié)核分枝桿菌抗原包含這樣的序列，所述序列包含以下（或由其組成）：-ESAT-6(也被稱為esxA和Rv3875)，在WO97/09428的SEQIDNo:103中(SEQIDNo:104的cDNA)和在Sorensen等人InfectionandImmunity199563(5):1710-1717中所述的多肽序列。ESAT-6的全長(zhǎng)多肽序列在WO10010180的SEQIDNo:16中顯示；-Ag85復(fù)合體抗原(例如Ag85A,也被稱為fbpA和Rv3804c;或Ag85B,也被稱為fbpB和Rv1886c)，其在例如Content等人InfectionandImmunity199159:3205-3212和在Huygen等人NatureMedicine19962(8):893-898中討論。Ag85A的全長(zhǎng)多肽序列在WO10010180的SEQIDNo:17中顯示（殘基43-338的成熟蛋白質(zhì)，即缺少信號(hào)肽的，是特別值得關(guān)注的）。Ag85B的全長(zhǎng)多肽序列在WO10010180的SEQIDNo:18中顯示（殘基41-325的成熟蛋白質(zhì)，即缺少信號(hào)肽的，是特別值得關(guān)注的）；-α-晶狀體蛋白（也被稱為hspX和Rv2031c），其在Verbon等人JournalofBacteriology1992174:1352-1359和Friscia等人ClinicalandExperimentalImmunology1995102:53-57(其中特別值得關(guān)注的是對(duì)應(yīng)于殘基71-91、21-40、91-110和111-130的片段)中討論。α-晶狀體蛋白的全長(zhǎng)多肽序列在WO10010180的SEQIDNo:19中顯示。-Mpt64(也被稱為Rv1980c)，其在Roche等人ScandinavianJournalofImmunology199643:662-670中描述。MPT64的全長(zhǎng)多肽序列在WO10010180的SEQIDNo:20中顯示（殘基24-228的成熟蛋白質(zhì)，即缺少信號(hào)肽的，是特別值得關(guān)注的）；TB10.4，TB10.4的全長(zhǎng)多肽序列在WO10010180的SEQIDNo:23中顯示；或包含（或由其組成）上文序列中任一者的至少20個(gè)（如至少50個(gè)）殘基的免疫原性片段，或包含（或由其組成）與上文序列中任一者具有至少90%（如至少95%或98%）同一性的變體。免疫原性片段可以具有任何長(zhǎng)度，前提是其保留了免疫原性特性。例如，所述片段可以包含相關(guān)蛋白的5個(gè)或更多個(gè)連續(xù)氨基酸，如10個(gè)或更多個(gè)連續(xù)氨基酸，例如20個(gè)或更多個(gè)連續(xù)氨基酸，如50個(gè)或更多個(gè)連續(xù)氨基酸，例如100個(gè)或更多個(gè)連續(xù)氨基酸。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原包含相關(guān)蛋白的變體或由其組成。與參考序列相比時(shí)，變體多肽可以含有多個(gè)置換，優(yōu)選保守置換（例如，可以改變1-50個(gè)，如1-25個(gè)，特別是1-10個(gè)和尤其1個(gè)氨基酸殘基）。合適地，此類置換不發(fā)生在表位區(qū)，因而不會(huì)對(duì)抗原的免疫原性特性具有顯著影響。與參考序列相比，蛋白變體還可以包括其中插入額外的氨基酸的那些，例如，此類插入可以在1-10個(gè)位置出現(xiàn)（如1-5個(gè)位置，合適地1或2個(gè)位置，特別是1個(gè)位置），且可以，例如，在每個(gè)位置涉及添加50個(gè)或更少的氨基酸（如20個(gè)或更少，特別是10個(gè)或更少，尤其是5個(gè)或更少）。合適地，此類插入不發(fā)生在表位區(qū)，因而不會(huì)對(duì)抗原的免疫原性特性具有顯著影響。插入的一個(gè)實(shí)例包括組氨酸殘基短段（例如2-6個(gè)殘基），以幫助表達(dá)和/或純化所關(guān)注的抗原。變體還可以包括與參考序列相比，其中氨基酸已缺失的那些，例如，此類缺失可以在1-10個(gè)位置出現(xiàn)（如1-5個(gè)位置，合適地1或2個(gè)位置，特別是1個(gè)位置），且可以，例如，在每個(gè)位置涉及缺失50個(gè)或更少的氨基酸（如20個(gè)或更少，特別是10個(gè)或更少，尤其是5個(gè)或更少）。合適地，此類缺失不發(fā)生在表位區(qū)，因而不會(huì)對(duì)抗原的免疫原性特性具有顯著影響。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到特定的蛋白變體可以包含置換、缺失和插入（或其任意組合）。變體優(yōu)選地與相關(guān)參考序列具有至少約70%同一性，更優(yōu)選至少約80%同一性，和最優(yōu)選至少約90%同一性（如至少約95%、至少約98%或至少約99%）。適用于確定序列同一性百分比和序列相似度的算法的實(shí)例是BLAST和BLAST2.0算法，其分別在ltschul等人.,Nuc.AcidsRes.25:3389-3402(1977)和Altschul等人.,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)中描述。CS蛋白的合適變體可以是這樣的變體，其中CS蛋白的部分是以與來自乙型肝炎的表面抗原S（HBsAg）的雜合蛋白的形式。CS變體抗原可以是例如，以雜合蛋白的形式，其包含CS蛋白的基本全部C-端部分、CS蛋白免疫顯性區(qū)的四個(gè)或更多串聯(lián)重復(fù)序列和HBsAg。所述雜合蛋白可以包含含有至少160個(gè)氨基酸，且其與CS蛋白的C-端基本同源但是缺乏疏水錨定序列的序列。CS蛋白可以缺乏C端的至少12個(gè)氨基酸。此外，其可以含有4個(gè)或更多個(gè)，例如10個(gè)或更多個(gè)Asn-Ala-Asn-Pro四肽（NANP）重復(fù)基序。用于本發(fā)明的雜合蛋白可以是包含惡性瘧原蟲的CS蛋白的部分的蛋白，其基本上對(duì)應(yīng)于惡性瘧原蟲克隆3D7的氨基酸207-395，其衍生自通過線性接頭與HBsAg的N-端框架內(nèi)融合的NF54株。所述接頭可以包含來自HBsAg的preS2的部分。適合用于本發(fā)明的CS構(gòu)建體概述于WO93/10152，其在美國(guó)以美國(guó)專利號(hào)5,928,902和6,169,171授權(quán)，兩者均出于描述合適用于本發(fā)明的蛋白的目的通過引用并入。用于本發(fā)明的特定的雜合蛋白是被稱為RTS的雜合蛋白（圖2和SEQIDNo.1）（描述于WO93/10152（其中被指示為RTS*）和WO98/05355），其由以下組成：-甲硫氨酸殘基-三個(gè)氨基酸殘基，MetAlaPro-代表惡性瘧原蟲3D7株的CS蛋白的氨基酸207至395的189個(gè)氨基酸的小段-甘氨酸殘基-四個(gè)氨基酸殘基，ProVaIThrAsn，代表乙型肝炎病毒（adw血清型）preS2蛋白的四個(gè)羧基末端殘基，和-226個(gè)氨基酸的小段，其由核苷酸1653至2330編碼，且指定乙型肝炎病毒（adw血清型）的S蛋白。RTS可以是以RTS,S混合微粒的形式。RTS,S微粒包含兩條多肽，RTS和S，其可以是同時(shí)合成的并自發(fā)形成復(fù)合顆粒結(jié)構(gòu)（RTS,S）。RTS蛋白可以在酵母（例如啤酒酵母（S.cerevisiae））中表達(dá)。在此類宿主中，RTS將作為脂蛋白微粒表達(dá)。受體酵母菌株可以已經(jīng)在其基因組中攜帶了數(shù)個(gè)乙型肝炎S表達(dá)盒的整合拷貝。所得的菌株因此合成兩種多肽，S和RTS，其自發(fā)地共裝配至混合的（RTS,S）脂蛋白微粒中。這些微?？梢栽谄浔砻娉尸F(xiàn)雜合體的CS蛋白序列。這些混合微粒中的RTS和S可以以特定比例存在，例如1:4。RTS,S已經(jīng)在例如Vekemans等人.(2009)Vaccine275:G67和Regules等人.(2011)ExpertRev.Vaccines10:589中綜述。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫原性組合物包含25至75，如50微克RTS,S，而所述第二免疫原性組合物包含5至15，如10微克RTS,S。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一免疫原性組合物包含12.5至37.5，如25微克RTS,S，而所述第二免疫原性組合物包含2.5至7.5，如5微克RTS,S。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原衍生自間日瘧原蟲的CS蛋白。已經(jīng)描述了合適的間日瘧原蟲CS蛋白變體。例如，WO2008009652，其在美國(guó)以US20100150998公開并出于描述合適用于本發(fā)明的蛋白的目的通過引用并入，其描述了包含以下的免疫原性雜合融合蛋白：a.來源于間日瘧原蟲I型環(huán)子孢子的重復(fù)區(qū)的至少一個(gè)重復(fù)單元，b.來源于間日瘧原蟲II型環(huán)子孢子的重復(fù)區(qū)的至少一個(gè)重復(fù)單元，和c.來源于乙型肝炎病毒的表面抗原S或其片段。WO2008009652的SEQIDNO:17描述了特定的雜合融合蛋白，被稱作CSV-S。當(dāng)與來源于乙型肝炎病毒的表面抗原S共表達(dá)時(shí)，形成CSV-S,S微粒（WO2008009652）。此類微粒也可以用于本發(fā)明。在另外的實(shí)施方案中，所述相同抗原是包含RTS和CSV-S的混合微粒。此類微粒已經(jīng)在WO2008009650中描述，其在美國(guó)以US20100062028公開并出于描述合適用于本發(fā)明的蛋白的目的通過引用并入。免疫方案，目標(biāo)群體和施用模式如上文描述的，本發(fā)明的方法包括施用包含一種或多種抗原和第一佐劑的第一免疫原性組合物，隨后施用包含一種或多種抗原和第二佐劑的第二免疫原性組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一組合物的初次施用和所述第二組合物的施用之間的時(shí)間間隔為1至24個(gè)月，例如，1至18個(gè)月、如1至12個(gè)月、例如2至24個(gè)月，例如2至18個(gè)月，如2至14個(gè)月，如2至12個(gè)月、2至10個(gè)月，如3至9個(gè)月，例如4至8個(gè)月，如7至8個(gè)月。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一組合物的初次施用和所述第二組合物的施用之間的時(shí)間間隔被加快，使得第一組合物的初次施用和所述第二組合物的施用之間的時(shí)間間隔為1至28天，例如1至21天，例如1至14天，例如1至7天。本發(fā)明的方法可以包括在初次施用所述第一組合物和施用所述第二組合物之外一次或多次另外施用免疫原性組合物。例如，所述個(gè)體可以在施用所述第二組合物之前獲得多次劑量的所述第一組合物。因此，例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，在施用所述第二組合物之前施用兩次所述第一組合物。可選地或另外地，所述個(gè)體可以在初次施用所述第二組合物之后接受多次另外劑量的所述第二組合物。因此，在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二組合物另外施用一次或多次。因此可能的方案包括但不限于以下：a.第一組合物，隨后第二組合物b.第一組合物，隨后第一組合物，隨后第二組合c.第一組合物，隨后第二組合物，隨后第二組合d.第一組合物，隨后第一組合物，隨后第一組合物，隨后第二組合e.第一組合物，隨后第一組合物，隨后第二組合物，隨后第二組合f.第一組合物，隨后第二組合物，隨后第二組合物，隨后第二組合方案b.的時(shí)間間隔可以是例如0、1、5（即第0月、第1月、第5月）或0、1、6，或0、1、7，或0、1、8，或0、1、12。相似地，方案c.的時(shí)間間隔可以是例如0、1、5，或0、1、6，或0、1、7，或0、1、8，或0、1、12。方案b.和c.的加快時(shí)間間隔可以是例如第0天、第7天、第14天。在另外的實(shí)施方案中，所述第二組合物可以是例如，以每年重復(fù)的強(qiáng)化劑形式給予，例如持續(xù)1-5年或更長(zhǎng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在施用所述第二組合物后，以至少1個(gè)月、至少2個(gè)月、至少3個(gè)月、至少4個(gè)月、至少5個(gè)月、至少6個(gè)月、至少7個(gè)月、至少8個(gè)月、至少9個(gè)月、至少10個(gè)月、至少11個(gè)月、至少12個(gè)月、至少13個(gè)月、至少14個(gè)月、至少15個(gè)月、至少16個(gè)月、至少17個(gè)月、至少18個(gè)月、至少19個(gè)月或至少20個(gè)月或更多個(gè)月的時(shí)間間隔，另外施用所述第二組合物一次或多次。在一個(gè)實(shí)施方案中，在施用所述第二組合物后，以至少1年、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年的時(shí)間間隔，另外施用所述第二組合物一次或多次。使用本發(fā)明的方法治療的所述個(gè)體可以是任意年齡。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，所述個(gè)體是人。本發(fā)明的方法可以用作瘧疾清除程序的部分，在該情況下可能可用于使基本上全部群體（即全部或大部分年齡組）接受免疫。然而，在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)施用所述第一組合物時(shí)，所述人類個(gè)體年齡大于18歲。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)施用所述第一組合物時(shí)，所述人類個(gè)體年齡小于5歲。在另外的實(shí)施方案中，所述個(gè)體年齡為6-12周或5-17月。另外的特別合適的目標(biāo)群體包括前往瘧疾流行地區(qū)的旅行者。所述第一和第二組合物可以通過多種合適的途徑施用，其包括腸胃外，如肌內(nèi)或皮下施用。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，所述第二組合物是皮內(nèi)施用。如本文使用的術(shù)語皮內(nèi)地，意指將抗原應(yīng)用至人皮膚的真皮和/或上皮內(nèi)。免疫原性組合物的皮內(nèi)應(yīng)用可以通過使用技術(shù)人員已知的任何皮膚方法進(jìn)行，包括但不限于，使用短針頭裝置（包括約0.2至約0.6mm長(zhǎng)度的微針）遞送或使用皮膚貼片遞送。用于本文描述的經(jīng)皮膚疫苗的合適的裝置包括如那些在US4,886,499,US5,190,521,US5,328,483、US5,527,288、US4,270,537、US5,015,235、US5,141,496、US5,417,662和EP1092444中描述的短針頭裝置。經(jīng)皮膚疫苗還可以通過限制針頭進(jìn)入皮膚的有效穿透長(zhǎng)度的裝置施用（如WO99/34850中描述的那些）。通過液體射流注射器或通過針頭將液體疫苗遞送至真皮的射流注射裝置也是合適的。使用壓縮空氣將粉末形式的疫苗加速穿過皮膚表層至真皮的彈道粉末/顆粒遞送裝置也是合適的。皮膚貼片將通常包括墊板，其包括固體支持物。貼片遞送本發(fā)明使用的抗原和佐劑至真皮或上皮。在特別的實(shí)施方案中，可用于本發(fā)明的貼片包括多個(gè)微突起。所述微突起可以具有適合用于刺穿角質(zhì)層、上皮和/或真皮的任何形狀，并將抗原和佐劑遞送至上皮或真皮。在特別的實(shí)施方案中，所述微突起是生物可降解的且包含生物可降解的聚合物。用于本發(fā)明的免疫原性組合物可以通過將一種或多種抗原與佐劑摻和而制備。所述一種或多種抗原可以以凍干形式或液體制劑提供。針對(duì)每種組合物，可以提供包括含有抗原的第一容器和含有佐劑的第二容器的試劑盒。合適地，根據(jù)本發(fā)明的所述免疫原性組合物具有0.05ml至1ml的人劑量體積，如0.1至0.5ml,特別是約0.5ml,或0.7ml的劑量體積?？梢詼p少所述第二免疫原性組合物的體積，并例如為0.05ml至0.5ml,如0.1至0.2ml。所使用的組合物的體積可以取決于遞送途徑，通過皮內(nèi)途徑施用更小劑量。通常，對(duì)于向人施用，所述第一和第二免疫原性組合物將包含1ug至100ug的結(jié)核分枝桿菌（例如，包含SEQIDNo.3的多肽），如1ug至50ug。合適地，所述第一免疫原性組合物將含有1ug至50ug的M72相關(guān)抗原（如5ug至50ug），尤其是1ug至20ug（如5ug至20ug）并特別地在大約或恰好10ug。在一些實(shí)施方案中，所述第二免疫原性組合物將含有與所述第一免疫原性組合物等量的M72相關(guān)抗原。例如，所述第二免疫原性組合物將含有1ug至50ug的M72相關(guān)抗原（如5ug至50ug），尤其是1ug至20ug（如5ug至20ug）并特別地在大約或恰好10ug。在其它實(shí)施方案中，所述第二免疫原性組合物將含有相對(duì)所述第一免疫原性組合物減少量的M72相關(guān)抗原。例如，所述第二免疫原性組合物將含有1ug至40ug的M72相關(guān)抗原（如2ug至40ug），尤其是1ug至16ug（如2ug至16ug）并特別地小于10ug（如1至8ug）。本應(yīng)用的全部參考的教導(dǎo)，包括專利應(yīng)用和授權(quán)的專利，通過引用全部并入本文。以“包含”某些要素定義的組合物或方法或過程被理解為涵蓋了（分別地）由那些要素組成的組合物、方法或過程。本發(fā)明將進(jìn)一步通過參考一下非限制性的實(shí)例進(jìn)行描述：實(shí)施例1：使用RTS,S和佐劑AS01的疫苗接種和實(shí)驗(yàn)性瘧疾攻擊研究中使用的疫苗基本如WO93/10152中所述在酵母（釀酒酵母）中生產(chǎn)RTS，S?！皹?biāo)準(zhǔn)”劑量的RTS,S/AS01包含在含有在具有脂質(zhì)體的制劑中的免疫刺激劑3D-MPL?(GlaxoSmithKlineBiologicals,Montana,USA)和QS21(各50ug)的500uLAS01佐劑中重構(gòu)的50ug凍干的RTS,S抗原?！胺执巍眲┝康腞TS,S/AS01是100uL上述溶液，即，其含有10ug凍干的RTS,S抗原和各10ug具有脂質(zhì)體的3D-MPL和QS21。術(shù)語在本文中，RTS,S/AS01的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量被稱為“R”，而分次劑量被稱為“r”。具有三次標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的標(biāo)準(zhǔn)方案被稱為“RRR”，而其中第三次劑量為分次劑量的方案被稱為“RRr”。具有兩次標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量隨后是兩次分次劑量的方案是“RRrr”，以此類推。方法學(xué)進(jìn)行臨床試驗(yàn)以評(píng)價(jià)含有AS01佐劑化的抗原RTS,S的瘧疾疫苗針對(duì)子孢子攻擊的安全性、反應(yīng)原性和效力，所述疫苗被肌內(nèi)施用于年齡為18-50歲的健康的無瘧疾志愿者。給予“延時(shí)分次劑量”組兩次標(biāo)準(zhǔn)劑量（在0月和1個(gè)月），并在7個(gè)月給予分次劑量（標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的五分之一（1/5th））。間隔一個(gè)月給予（“0、1、2-月”組）三次標(biāo)準(zhǔn)劑量。將46位受試者招募至兩個(gè)組群，并隨機(jī)分配至上述“延時(shí)分次劑量”（30位受試者）和“0、1、2-月”（16位受試者）。另外12位受試者是“傳染性”對(duì)照的一部分，即不接受任何免疫，但承受子孢子攻擊的志愿者。對(duì)每個(gè)組群，志愿者被要求接受標(biāo)準(zhǔn)化的初次瘧疾攻擊（Chulay等人.(1986)AmJTropMedHyg.35:66)，其也通常被稱為“子孢子攻擊”，約3周后進(jìn)行上述組中任意的第三次劑量。初次攻擊涉及允許受惡性瘧原蟲子孢子感染的斯氏按蚊（Anophelesestevensi）在每個(gè)受攻擊的志愿者上喂食5分鐘的時(shí)間段。在受到攻擊后受試者隨后在至少30天的時(shí)間段每天進(jìn)行評(píng)估他們是否已經(jīng)受到瘧疾感染。檢測(cè)感染的原理方法是Giesma-染色外周血涂片的評(píng)估，以通過光學(xué)顯微鏡檢測(cè)無性生殖期的寄生蟲。無性生殖期寄生蟲的存在指示受試者已經(jīng)經(jīng)歷了有效感染，寄生蟲已經(jīng)從肝臟釋放并且進(jìn)行至紅細(xì)胞內(nèi)期，并因此沒有實(shí)現(xiàn)針對(duì)攻擊的無菌保護(hù)。在出現(xiàn)感染的最初癥狀時(shí)，受試者被宣布為對(duì)瘧疾呈陽性，并接受治療劑量的氯喹。最初效力讀出為無菌保護(hù)，即受試者從未發(fā)展出無性繁殖期子孢子。另外，記錄了那些未完全受保護(hù)的受試者中受到攻擊至出現(xiàn)寄生蟲血癥的時(shí)間。通過接受子孢子攻擊但保持不被惡性瘧原蟲感染的接受免疫的參與者的比例以及通過導(dǎo)致感染的展開前（pre-patent）時(shí)期的推遲對(duì)保護(hù)進(jìn)行評(píng)估。疫苗效力(VE）被定義為100*(1-相對(duì)風(fēng)險(xiǎn))。使用Fisher’sExact測(cè)試比較各個(gè)“延時(shí)分次劑量”和“0、1、2-月”疫苗組與“傳染性”對(duì)照之間的瘧疾發(fā)生率。結(jié)果表1.疫苗效力組別疫苗接種的受試者數(shù)量在受到攻擊后發(fā)生寄生蟲血癥的接種疫苗受試者的數(shù)量**疫苗效力%（VE）預(yù)估*延時(shí)分次劑量304870、1、2-月16663*Logrank分析（發(fā)生寄生蟲血癥的時(shí)間），F(xiàn)x對(duì)RRRp=0.0455。**在攻擊后第28天已經(jīng)測(cè)量到的寄生蟲血癥。研究不足以檢測(cè)延時(shí)分次劑量組相比0、1、2個(gè)月組的優(yōu)越性，且兩組之間的差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上并非特別顯著（Fx相比RRR的VE增加=57.0%,[-7.9-88.3],p=0.0741,Fisher’sexact）。但是，延時(shí)分次劑量組相比0、1、2個(gè)月組的存活時(shí)間差異的分析（其考慮了在延時(shí)分次劑量組中感染的推遲時(shí)間）具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性（p=0.0455,logrank）。RRr組中4/30的受試者發(fā)生寄生蟲血癥（VE=87%[95%CI:67,95）；RRR組中6/16的受試者發(fā)生寄生蟲血癥（VE=63%[95%CI20,80]）。圖4a。此外，至今完成的比較研究的延時(shí)分次劑量組的結(jié)果針對(duì)5個(gè)0、1、2個(gè)月RTS,S/AS01試驗(yàn)中所研究的95位受試者的集合數(shù)據(jù)的分析顯示，現(xiàn)在的結(jié)果極不可能是偶然發(fā)生的（p=0.0045,Fisher’sexact）。圖4b。研究延長(zhǎng)將研究延長(zhǎng)，且一些受試者在最后劑量的6個(gè)月后接受分次強(qiáng)化，隨后在一個(gè)月后用子孢子攻擊。對(duì)在第一次攻擊后未受到保護(hù)的受試者提供分次強(qiáng)化。在第一次攻擊后受到保護(hù)的受試者隨機(jī)接受或不接受分次強(qiáng)化，隨后在一個(gè)月后用子孢子攻擊。結(jié)果匯總于表2以及圖5a和5b中。NP代表在第一次攻擊期間沒有受到保護(hù)，P代表在第一次攻擊期間受到保護(hù)。全部強(qiáng)化都是分次的（RTS,S/AS01B劑量的五分之一）。表2.分次劑量強(qiáng)化。方案受保護(hù)的RRr-NP-經(jīng)強(qiáng)化2/2RRr-P-經(jīng)強(qiáng)化9/10RRr-P-未經(jīng)強(qiáng)化3/7RRR-NP-經(jīng)強(qiáng)化2/3RRR-P-經(jīng)強(qiáng)化1/5RRR-P-未經(jīng)強(qiáng)化1/4傳染性對(duì)照0/6在Fx方案（n=2）或RTS,S的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量方案（n=3）后均沒有受到保護(hù)的大部分受試者可以使用隨后的強(qiáng)化劑量（1/5th劑量）獲得保護(hù)（數(shù)據(jù)未顯示）?？?CS抗體效價(jià)通過由GSKBiologicals開發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）確定抗-CS抗體效價(jià)。Clement等人.(2012)MalarJ11:384。使用參考標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算抗體效價(jià)并且如所述以ELISA單位（EU）表示。結(jié)果匯總于表3中。表3.抗-CS抗體效價(jià)。Fx、RRR、NP、P、FxNP、FxP、RRRNP和RRRP在本文別處描述。分類NGMTLLULFx30405453297949847RRR16551483707282037NP10398002236870817P36467253843256808FxNP4345831906062748FxP26415493323151944RRRNP64370817505109133RRRP10634034488089570親和力測(cè)定評(píng)估了抗-CS抗體針對(duì)CSP的重復(fù)區(qū)的親和力指數(shù)（AI）。為了測(cè)量IgG的親和力，如Olotu等人(2014)PLoSOne15;9(12):e115126.doi:10.1371/journal.pone.0115126所述使用兩個(gè)不同的ELISA板（一個(gè)使用離液劑處理，一個(gè)未進(jìn)行處理）對(duì)樣品進(jìn)行評(píng)估。將硫氰酸銨（NH4SCN）的1M溶液作為離液劑添加至處理板，而將含0.05%Tween-20的PBS添加至未處理板，且兩個(gè)ELISA板被進(jìn)一步洗滌并如描述顯色。親和力指數(shù)（AI）以在使用NH4SCN處理后保持與包覆抗原結(jié)合的抗-CSPIgG的濃度(EU/ml)除以在未處理板中保持與包覆抗原結(jié)合的IgG的濃度(EU/ml)的比例計(jì)算。結(jié)果匯總于表4中。表4.親和力指數(shù)（AI）。Fx、RRR、NP、P、FxNP、FxP、RRRNP和RRRP在本文別處描述。分類NGMTLLULFx300.680.650.72RRR160.550.510.58NP100.610.550.68P360.640.610.68FxNP40.700.630.78FxP260.680.640.72RRRNP60.550.500.60RRRP100.540.490.59AI可以用于比較方案，但是不能解釋在個(gè)體水平的保護(hù)。實(shí)施例2：使用M72和佐劑AS01的疫苗接種在小鼠模型中研究了肺結(jié)核抗原M722-his(SEQIDNo.4)的延時(shí)的和減少的劑量的影響。材料和方法動(dòng)物模型通過肌內(nèi)途徑，向雌性小鼠C57BL/6JOlaHsd（6周齡，12只小鼠/組）在0-14天和28或98天注射50μl，如下表所述。AS01E佐劑含有在具有脂質(zhì)體的制劑中的免疫刺激物3D-MPL?(GlaxoSmithKlineBiologicals,Montana,USA)和QS21(各2.5ug)。使用佐劑緩沖液進(jìn)行稀釋。讀出全血ICS，在第21天-II-后7天（G1-7）；第35天-III-后7天（G1-3）；第105天-III-后77天（G1-3）和III-后7天（G4-7）血清學(xué)抗-M72IgTot，在第28天-II-后-14天（G1-7）；第42天-III-后-14天（G1-3）；第112天-III-后84天（G1-3）和III-后14天（G4-7）為了得到足夠的體積，在第21、35和105天收集3只小鼠組的4個(gè)集合的全血。個(gè)體血清在第28、42和112天收集。單獨(dú)鑒定小鼠以將ICS和血清學(xué)的PII和PIII結(jié)果關(guān)聯(lián)。讀出描述細(xì)胞免疫應(yīng)答-胞內(nèi)細(xì)胞因子染色（ICS）白細(xì)胞分離在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，從每只小鼠收集血液并隨后匯集（3只小鼠的5個(gè)集合）。將血液收集在裝有含有肝素（1/10）的RPMI/添加劑（RPMI1640,補(bǔ)充有谷氨酰胺、青霉素/鏈霉素、丙酮酸鈉、非必需氨基酸和2-巰基乙醇）的試管中。將10體積裂解緩沖液添加至全血中并將試管在室溫（RT）下溫育10分鐘。在離心（RT下335g,10分鐘）后，在RPMI/添加劑中收集團(tuán)塊并過濾（細(xì)胞篩100μm）。將細(xì)胞再次沉淀（在RT下335g,10分鐘），并在完全培養(yǎng)基（RPMI1640,補(bǔ)充有谷氨酰胺、青霉素/鏈霉素、丙酮酸鈉、非必需氨基酸和2-巰基乙醇以及5%熱滅活胎牛血清）中重懸。新鮮白細(xì)胞的體外刺激將白細(xì)胞在圓底96-孔板以約每孔1百萬細(xì)胞鋪板。隨后使用抗-CD28(克隆9C10(MFR4.B)和抗-CD49d(克隆37.51)以1μg/ml刺激6小時(shí)（37℃,5%CO2），其含有或不含有1μg/ml覆蓋M72序列的肽。在2小時(shí)刺激后，添加在完全培養(yǎng)基中稀釋至1/200的BrefeldinA，再持續(xù)4小時(shí)。隨后將平板轉(zhuǎn)移至4℃過夜。ICS使用5-色I(xiàn)CS測(cè)定進(jìn)行細(xì)胞染色和分析。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至V-底96-孔板，在使用200μlFlowBuffer(PBS1X,1%FCS)洗滌后在4℃下以189g離心5分鐘，在4℃下在含有稀釋至1/50的抗-CD16/32(克隆2.4G2)的50μlFlowBuffer中重懸細(xì)胞10分鐘。隨后添加含有抗-CD4-V450(克隆RM4-5,稀釋至1/50)和抗-CD8-PerCp-Cy5.5(克隆53-6.7,稀釋至1/50)抗體以及Live&DeathPO(稀釋至1/500)的50μlFlowBuffer，在4℃下保持30分鐘，將細(xì)胞離心（在4℃下189g5分鐘）并用200μlFlowBuffer洗滌。將白細(xì)胞固定并通過在4℃下添加200μlCytofix/Cytoperm溶液(BectonDickinsoncommercialbuffer)20分鐘進(jìn)行透性化處理。將細(xì)胞離心（在4℃下189g5分鐘）并用200μlPerm/Wash緩沖液（在蒸餾水中以1:10稀釋的BectonDickinson商用緩沖液）洗滌。在額外的離心步驟后，在4℃下將細(xì)胞在含有抗-IL2-FITC(克隆JES6-5H4,稀釋至1/400)、抗-IFNγ-APC(克隆XMG1.2,稀釋至1/50)和抗-TNFα-PE(克隆MP6-XT22,稀釋至1/700)抗體的50μlPerm/Wash緩沖液中染色1小時(shí)。將細(xì)胞用Perm/Wash緩沖液洗滌兩次，在220μlBDStabilizingFixative溶液中重懸。通過流式細(xì)胞術(shù)使用LSRII和FlowJo軟件分析染色的細(xì)胞。體液應(yīng)答-通過Elisa的抗-M72Igtot血清學(xué)使用含0.25μg/ml重組抗原M72的PBS包覆96-孔Elisa板，并在4℃下溫育過夜。將來自PostII和PostIII的經(jīng)免疫的小鼠的血清在PBS(0.2%)-BSA中以1/10000稀釋，并隨后在孔1至12中進(jìn)行2倍系列稀釋并溫育。標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照材料的系列稀釋被用于計(jì)算被測(cè)血清的抗-M72抗體標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)并確保測(cè)試的有效性。在每個(gè)溫育步驟后，使用PBS0.1%tween20緩沖液洗滌板。隨后添加特異于小鼠Ig的生物素?；窖蚩贵w，并且通過與鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物和過氧化物酶底物鄰-苯二胺鹽酸鹽/H2O2溫育顯示抗原-抗體復(fù)合物。在490-620nm記錄光密度(O.D.)。使用回歸模型，通過ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線確定每個(gè)單獨(dú)小鼠血清的抗-M72抗體效價(jià)，并用ELISA單位(EU)/ml表示。隨后計(jì)算每組小鼠的幾何平均效價(jià)（GMT）。結(jié)果T細(xì)胞應(yīng)答A.M72-特異性CD4T&CD8T細(xì)胞應(yīng)答的動(dòng)力學(xué)為了評(píng)估分次和/或延時(shí)第三劑量對(duì)CD4T和CD8T細(xì)胞應(yīng)答的潛在益處，使小鼠接受本研究中0.25ugM72的最大劑量的免疫，以處于CD4T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)范圍中，同時(shí)誘導(dǎo)可檢測(cè)的CD8T細(xì)胞應(yīng)答。如圖6所示，在標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表（D0-D14-D28）中給予分次第三劑量沒有提供改善的CD4T細(xì)胞應(yīng)答，而在接受全劑量、1/5劑量和1/25劑量的組的7PII至7PIII中觀察到了相當(dāng)?shù)膹?qiáng)化。然而，盡管在集合之間存在M72特異CD4T細(xì)胞應(yīng)答的一些可變性，但是相比標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表，在延時(shí)的0.25ug劑量的M727天后觀察到更強(qiáng)的強(qiáng)化。此外，接受延時(shí)和分次第三劑量或延時(shí)和未佐劑化第三劑量的小鼠中的M72特異CD4T細(xì)胞應(yīng)答水平與標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表中全劑量免疫組中觀察到的水平相當(dāng)。這說明了延時(shí)計(jì)劃表對(duì)于CD4T細(xì)胞應(yīng)答的益處。在標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表中接受0.25ugM72劑量的小鼠中檢測(cè)到低水平的M72-特異CD8T細(xì)胞應(yīng)答，且第三免疫劑量沒有強(qiáng)化M72-特異CD8T細(xì)胞應(yīng)答（圖8）。在標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表中接受分次第三劑量的小鼠中觀察到減少的M72-特異CD8T細(xì)胞應(yīng)答。這與先前的數(shù)據(jù)（未顯示）一致，其中CD8T細(xì)胞應(yīng)答主要受到用于免疫小鼠的M72蛋白劑量范圍的影響，且其中高劑量的M72（1ug或8ug）誘導(dǎo)比0.1ug或0.25ug的M72更高水平的應(yīng)答。在接受0.25ugM72的延時(shí)第三劑量的小鼠中，在所有測(cè)試集合中的7PII至7PIII觀察到M72特異性CD8T細(xì)胞應(yīng)答的強(qiáng)化。然而，盡管全部組別均接受了2個(gè)劑量的0.25ugM72/AS01E，CD8T細(xì)胞應(yīng)答的中值在各組的7PII中顯示出變化性(0.231至0.817)。B.M72-特異性CD4T&CD8T細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞因子概況在標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表中接受了全劑量、1/5劑量和1/25劑量的組別中，在7PII和7PIII時(shí)均觀察到了相似的CD4T細(xì)胞因子表達(dá)概況。M72-特異CD4T細(xì)胞應(yīng)答包括2次免疫后的三倍（IL2/IFNg/TNFa）和雙倍（IFNg/TNFa）應(yīng)答。第三次免疫劑量沒有支持多功能CD4Th1細(xì)胞的進(jìn)展，卻相反地增加了產(chǎn)生兩倍（IL2/IFNg）和單一（僅IFNg）的CD4T細(xì)胞（圖7）。給予延時(shí)第三劑量似乎支持了多功能CD4Th1細(xì)胞的進(jìn)展，因?yàn)镸72-特異CD4T細(xì)胞應(yīng)答幾乎由產(chǎn)生IL2/IFNg/TNFa和IFNg/TNFa的CD4T細(xì)胞構(gòu)成（圖7）。AS01進(jìn)一步增強(qiáng)了多功能T細(xì)胞的進(jìn)展，在接受延時(shí)和未佐劑化的第三劑量的小鼠中觀察到了產(chǎn)生降低水平的IL2/IFNg/TNFa和IFNg/TNFa和僅增加IFNg水平的CD4T細(xì)胞。盡管在接受了延時(shí)和分次第三劑量的小鼠中的M72特異CD4T細(xì)胞應(yīng)答的水平與基準(zhǔn)所觀察到的相似，但是細(xì)胞因子概況略有不同，而這些數(shù)據(jù)一起說明了在延時(shí)的免疫計(jì)劃表中多功能CD4Th1細(xì)胞進(jìn)展的改善。已經(jīng)表明，多功能CD4T細(xì)胞的量級(jí)和質(zhì)量與小鼠中的保護(hù)相關(guān)（Derrick等人2011Vaccine29:2902-2909）。在所有組別的7PII和7PIII時(shí)均觀察到相似的M72-特異CD8T細(xì)胞的細(xì)胞因子概況（圖8）。M72-特異CD8T細(xì)胞應(yīng)答大部分由產(chǎn)生兩倍（IFNg/TNFa）和單一（僅IFNg）的CD8T細(xì)胞構(gòu)成。還檢測(cè)到了非常低水平的產(chǎn)生IL2/INFg/TNFa和TNFa的CD8T細(xì)胞。抗體應(yīng)答A.抗-M72Igtot血清學(xué)如圖10所示，在標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃表中接受全劑量、1/5劑量和1/25劑量的組別中在14PII和14PIII之間觀察到抗-M72血清學(xué)應(yīng)答的強(qiáng)化。觀察到的劑量范圍效應(yīng)的趨勢(shì)為最高劑量給予了最高的M72特異性血清學(xué)應(yīng)答。在84PIII時(shí)，更低的血清學(xué)應(yīng)答表明應(yīng)答的持續(xù)隨時(shí)間降低。在接受延時(shí)的第三次免疫的小鼠中，觀察到了更高量級(jí)的應(yīng)答。在存在和不存在AS01E的情況下，觀察到相似水平的M72特異性Ig，說明在延時(shí)的第三次免疫后，單獨(dú)的M72足以誘導(dǎo)高血清學(xué)應(yīng)答。序列表<110>GlaxoSmithKlineBiologicalssa<120>誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的新方法<130>VB65685PCT<150>GB1405921.6<151>2014-04-02<160>4<170>PatentInversion3.5<210>1<211>424<212>PRT<213>人工序列<220><223>RTS,S<400>1MetMetAlaProAspProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAla151015AsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAla202530AsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAla354045AsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAla505560AsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnAlaAsnProAsnLys65707580AsnAsnGlnGlyAsnGlyGlnGlyHisAsnMetProAsnAspProAsn859095ArgAsnValAspGluAsnAlaAsnAlaAsnSerAlaValLysAsnAsn100105110AsnAsnGluGluProSerAspLysHisIleLysGluTyrLeuAsnLys115120125IleGlnAsnSerLeuSerThrGluTrpSerProCysSerValThrCys130135140GlyAsnGlyIleGlnValArgIleLysProGlySerAlaAsnLysPro145150155160LysAspGluLeuAspTyrAlaAsnAspIleGluLysLysIleCysLys165170175MetGluLysCysSerSerValPheAsnValValAsnSerSerIleGly180185190LeuGlyProValThrAsnMetGluAsnIleThrSerGlyPheLeuGly195200205ProLeuLeuValLeuGlnAlaGlyPhePheLeuLeuThrArgIleLeu210215220ThrIleProGlnSerLeuAspSerTrpTrpThrSerLeuAsnPheLeu225230235240GlyGlySerProValCysLeuGlyGlnAsnSerGlnSerProThrSer245250255AsnHisSerProThrSerCysProProIleCysProGlyTyrArgTrp260265270MetCysLeuArgArgPheIleIlePheLeuPheIleLeuLeuLeuCys275280285LeuIlePheLeuLeuValLeuLeuAspTyrGlnGlyMetLeuProVal290295300CysProLeuIleProGlySerThrThrThrAsnThrGlyProCysLys305310315320ThrCysThrThrProAlaGlnGlyAsnSerMetPheProSerCysCys325330335CysThrLysProThrAspGlyAsnCysThrCysIleProIleProSer340345350SerTrpAlaPheAlaLysTyrLeuTrpGluTrpAlaSerValArgPhe355360365SerTrpLeuSerLeuLeuValProPheValGlnTrpPheValGlyLeu370375380SerProThrValTrpLeuSerAlaIleTrpMetMetTrpTyrTrpGly385390395400ProSerLeuTyrSerIleValSerProPheIleProLeuLeuProIle405410415PhePheCysLeuTrpValTyrIle420<210>2<211>546<212>PRT<213>水痘帶狀皰疹<400>2MetGlyThrValAsnLysProValValGlyValLeuMetGlyPheGly151015IleIleThrGlyThrLeuArgIleThrAsnProValArgAlaSerVal202530LeuArgTyrAspAspPheHisIleAspGluAspLysLeuAspThrAsn354045SerValTyrGluProTyrTyrHisSerAspHisAlaGluSerSerTrp505560ValAsnArgGlyGluSerSerArgLysAlaTyrAspHisAsnSerPro65707580TyrIleTrpProArgAsnAspTyrAspGlyPheLeuGluAsnAlaHis859095GluHisHisGlyValTyrAsnGlnGlyArgGlyIleAspSerGlyGlu100105110ArgLeuMetGlnProThrGlnMetSerAlaGlnGluAspLeuGlyAsp115120125AspThrGlyIleHisValIleProThrLeuAsnGlyAspAspArgHis130135140LysIleValAsnValAspGlnArgGlnTyrGlyAspValPheLysGly145150155160AspLeuAsnProLysProGlnGlyGlnArgLeuIleGluValSerVal165170175GluGluAsnHisProPheThrLeuArgAlaProIleGlnArgIleTyr180185190GlyValArgTyrThrGluThrTrpSerPheLeuProSerLeuThrCys195200205ThrGlyAspAlaAlaProAlaIleGlnHisIleCysLeuLysHisThr210215220ThrCysPheGlnAspValValValAspValAspCysAlaGluAsnThr225230235240LysGluAspGlnLeuAlaGluIleSerTyrArgPheGlnGlyLysLys245250255GluAlaAspGlnProTrpIleValValAsnThrSerThrLeuPheAsp260265270GluLeuGluLeuAspProProGluIleGluProGlyValLeuLysVal275280285LeuArgThrGluLysGlnTyrLeuGlyValTyrIleTrpAsnMetArg290295300GlySerAspGlyThrSerThrTyrAlaThrPheLeuValThrTrpLys305310315320GlyAspGluLysThrArgAsnProThrProAlaValThrProGlnPro325330335ArgGlyAlaGluPheHisMetTrpAsnTyrHisSerHisValPheSer340345350ValGlyAspThrPheSerLeuAlaMetHisLeuGlnTyrLysIleHis355360365GluAlaProPheAspLeuLeuLeuGluTrpLeuTyrValProIleAsp370375380ProThrCysGlnProMetArgLeuTyrSerThrCysLeuTyrHisPro385390395400AsnAlaProGlnCysLeuSerHisMetAsnSerGlyCysThrPheThr405410415SerProHisLeuAlaGlnArgValAlaSerThrValTyrGlnAsnCys420425430GluHisAlaAspAsnTyrThrAlaTyrCysLeuGlyIleSerHisMet435440445GluProSerPheGlyLeuIleLeuHisAspGlyGlyThrThrLeuLys450455460PheValAspThrProGluSerLeuSerGlyLeuTyrValPheValVal465470475480TyrPheAsnGlyHisValGluAlaValAlaTyrThrValValSerThr485490495ValAspHisPheValAsnAlaIleGluGluArgGlyPheProProThr500505510AlaGlyGlnProProAlaThrThrLysProLysGluIleThrProVal515520525AsnProGlyThrSerProLeuIleArgTyrAlaAlaTrpThrGlyGly530535540LeuAla545<210>3<211>723<212>PRT<213>人工序列<220><223>M72融合蛋白<400>3MetThrAlaAlaSerAspAsnPheGlnLeuSerGlnGlyGlyGlnGly151015PheAlaIleProIleGlyGlnAlaMetAlaIleAlaGlyGlnIleArg202530SerGlyGlyGlySerProThrValHisIleGlyProThrAlaPheLeu354045GlyLeuGlyValValAspAsnAsnGlyAsnGlyAlaArgValGlnArg505560ValValGlySerAlaProAlaAlaSerLeuGlyIleSerThrGlyAsp65707580ValIleThrAlaValAspGlyAlaProIleAsnSerAlaThrAlaMet859095AlaAspAlaLeuAsnGlyHisHisProGlyAspValIleSerValThr100105110TrpGlnThrLysSerGlyGlyThrArgThrGlyAsnValThrLeuAla115120125GluGlyProProAlaGluPheMetValAspPheGlyAlaLeuProPro130135140GluIleAsnSerAlaArgMetTyrAlaGlyProGlySerAlaSerLeu145150155160ValAlaAlaAlaGlnMetTrpAspSerValAlaSerAspLeuPheSer165170175AlaAlaSerAlaPheGlnSerValValTrpGlyLeuThrValGlySer180185190TrpIleGlySerSerAlaGlyLeuMetValAlaAlaAlaSerProTyr195200205ValAlaTrpMetSerValThrAlaGlyGlnAlaGluLeuThrAlaAla210215220GlnValArgValAlaAlaAlaAlaTyrGluThrAlaTyrGlyLeuThr225230235240ValProProProValIleAlaGluAsnArgAlaGluLeuMetIleLeu245250255IleAlaThrAsnLeuLeuGlyGlnAsnThrProAlaIleAlaValAsn260265270GluAlaGluTyrGlyGluMetTrpAlaGlnAspAlaAlaAlaMetPhe275280285GlyTyrAlaAlaAlaThrAlaThrAlaThrAlaThrLeuLeuProPhe290295300GluGluAlaProGluMetThrSerAlaGlyGlyLeuLeuGluGlnAla305310315320AlaAlaValGluGluAlaSerAspThrAlaAlaAlaAsnGlnLeuMet325330335AsnAsnValProGlnAlaLeuGlnGlnLeuAlaGlnProThrGlnGly340345350ThrThrProSerSerLysLeuGlyGlyLeuTrpLysThrValSerPro355360365HisArgSerProIleSerAsnMetValSerMetAlaAsnAsnHisMet370375380SerMetThrAsnSerGlyValSerMetThrAsnThrLeuSerSerMet385390395400LeuLysGlyPheAlaProAlaAlaAlaAlaGlnAlaValGlnThrAla405410415AlaGlnAsnGlyValArgAlaMetSerSerLeuGlySerSerLeuGly420425430SerSerGlyLeuGlyGlyGlyValAlaAlaAsnLeuGlyArgAlaAla435440445SerValGlySerLeuSerValProGlnAlaTrpAlaAlaAlaAsnGln450455460AlaValThrProAlaAlaArgAlaLeuProLeuThrSerLeuThrSer465470475480AlaAlaGluArgGlyProGlyGlnMetLeuGlyGlyLeuProValGly485490495GlnMetGlyAlaArgAlaGlyGlyGlyLeuSerGlyValLeuArgVal500505510ProProArgProTyrValMetProHisSerProAlaAlaGlyAspIle515520525AlaProProAlaLeuSerGlnAspArgPheAlaAspPheProAlaLeu530535540ProLeuAspProSerAlaMetValAlaGlnValGlyProGlnValVal545550555560AsnIleAsnThrLysLeuGlyTyrAsnAsnAlaValGlyAlaGlyThr565570575GlyIleValIleAspProAsnGlyValValLeuThrAsnAsnHisVal580585590IleAlaGlyAlaThrAspIleAsnAlaPheSerValGlySerGlyGln595600605ThrTyrGlyValAspValValGlyTyrAspArgThrGlnAspValAla610615620ValLeuGlnLeuArgGlyAlaGlyGlyLeuProSerAlaAlaIleGly625630635640GlyGlyValAlaValGlyGluProValValAlaMetGlyAsnSerGly645650655GlyGlnGlyGlyThrProArgAlaValProGlyArgValValAlaLeu660665670GlyGlnThrValGlnAlaSerAspSerLeuThrGlyAlaGluGluThr675680685LeuAsnGlyLeuIleGlnPheAspAlaAlaIleGlnProGlyAspAla690695700GlyGlyProValValAsnGlyLeuGlyGlnValValGlyMetAsnThr705710715720AlaAlaSer<210>4<211>725<212>PRT<213>人工序列<220><223>M72融合蛋白(2-his)<400>4MetHisHisThrAlaAlaSerAspAsnPheGlnLeuSerGlnGlyGly151015GlnGlyPheAlaIleProIleGlyGlnAlaMetAlaIleAlaGlyGln202530IleArgSerGlyGlyGlySerProThrValHisIleGlyProThrAla354045PheLeuGlyLeuGlyValValAspAsnAsnGlyAsnGlyAlaArgVal505560GlnArgValValGlySerAlaProAlaAlaSerLeuGlyIleSerThr65707580GlyAspValIleThrAlaValAspGlyAlaProIleAsnSerAlaThr859095AlaMetAlaAspAlaLeuAsnGlyHisHisProGlyAspValIleSer100105110ValThrTrpGlnThrLysSerGlyGlyThrArgThrGlyAsnValThr115120125LeuAlaGluGlyProProAlaGluPheMetValAspPheGlyAlaLeu130135140ProProGluIleAsnSerAlaArgMetTyrAlaGlyProGlySerAla145150155160SerLeuValAlaAlaAlaGlnMetTrpAspSerValAlaSerAspLeu165170175PheSerAlaAlaSerAlaPheGlnSerValValTrpGlyLeuThrVal180185190GlySerTrpIleGlySerSerAlaGlyLeuMetValAlaAlaAlaSer195200205ProTyrValAlaTrpMetSerValThrAlaGlyGlnAlaGluLeuThr210215220AlaAlaGlnValArgValAlaAlaAlaAlaTyrGluThrAlaTyrGly225230235240LeuThrValProProProValIleAlaGluAsnArgAlaGluLeuMet245250255IleLeuIleAlaThrAsnLeuLeuGlyGlnAsnThrProAlaIleAla260265270ValAsnGluAlaGluTyrGlyGluMetTrpAlaGlnAspAlaAlaAla275280285MetPheGlyTyrAlaAlaAlaThrAlaThrAlaThrAlaThrLeuLeu290295300ProPheGluGluAlaProGluMetThrSerAlaGlyGlyLeuLeuGlu305310315320GlnAlaAlaAlaValGluGluAlaSerAspThrAlaAlaAlaAsnGln325330335LeuMetAsnAsnValProGlnAlaLeuGlnGlnLeuAlaGlnProThr340345350GlnGlyThrThrProSerSerLysLeuGlyGlyLeuTrpLysThrVal355360365SerProHisArgSerProIleSerAsnMetValSerMetAlaAsnAsn370375380HisMetSerMetThrAsnSerGlyValSerMetThrAsnThrLeuSer385390395400SerMetLeuLysGlyPheAlaProAlaAlaAlaAlaGlnAlaValGln405410415ThrAlaAlaGlnAsnGlyValArgAlaMetSerSerLeuGlySerSer420425430LeuGlySerSerGlyLeuGlyGlyGlyValAlaAlaAsnLeuGlyArg435440445AlaAlaSerValGlySerLeuSerValProGlnAlaTrpAlaAlaAla450455460AsnGlnAlaValThrProAlaAlaArgAlaLeuProLeuThrSerLeu465470475480ThrSerAlaAlaGluArgGlyProGlyGlnMetLeuGlyGlyLeuPro485490495ValGlyGlnMetGlyAlaArgAlaGlyGlyGlyLeuSerGlyValLeu500505510ArgValProProArgProTyrValMetProHisSerProAlaAlaGly515520525AspIleAlaProProAlaLeuSerGlnAspArgPheAlaAspPhePro530535540AlaLeuProLeuAspProSerAlaMetValAlaGlnValGlyProGln545550555560ValValAsnIleAsnThrLysLeuGlyTyrAsnAsnAlaValGlyAla565570575GlyThrGlyIleValIleAspProAsnGlyValValLeuThrAsnAsn580585590HisValIleAlaGlyAlaThrAspIleAsnAlaPheSerValGlySer595600605GlyGlnThrTyrGlyValAspValValGlyTyrAspArgThrGlnAsp610615620ValAlaValLeuGlnLeuArgGlyAlaGlyGlyLeuProSerAlaAla625630635640IleGlyGlyGlyValAlaValGlyGluProValValAlaMetGlyAsn645650655SerGlyGlyGlnGlyGlyThrProArgAlaValProGlyArgValVal660665670AlaLeuGlyGlnThrValGlnAlaSerAspSerLeuThrGlyAlaGlu675680685GluThrLeuAsnGlyLeuIleGlnPheAspAlaAlaIleGlnProGly690695700AspAlaGlyGlyProValValAsnGlyLeuGlyGlnValValGlyMet705710715720AsnThrAlaAlaSer725當(dāng)前第1頁1 2 3