技術領域：
：本發(fā)明提供了人參皂苷c-k及其藥學上可接受的溶劑合物或水合物在制備用于治療銀屑病的藥物中的用途，用于治療銀屑病的含有所述人參皂苷c-k的藥盒、藥物組合物，以及制備所述藥物組合物的方法。
背景技術：
：：“銀屑病”，又稱牛皮鮮，是一種邊緣清晰、紅斑、皮膚增厚、表面覆蓋有鱗屑的慢性、復發(fā)性、皮膚炎癥性疾病；頑固、容易復發(fā)。銀屑病在患者全身均可發(fā)病，而在頭皮、四肢伸側以及背部較為常見。臨床癥狀顯示為患者出現紅斑，紅斑上反復出現干燥的鱗屑，鱗屑脫落后有出現出血點。銀屑病在世界各地發(fā)病率差異很大，美洲安第斯山印第安人和澳洲原住居民發(fā)病率為0％，而北歐及俄羅斯部分人群發(fā)病率為11％，在美國有2.2-2.6％人患有該疾病，中國尚缺乏精確的統(tǒng)計，目前有報道稱為0.2-1.5％。全世界總發(fā)病率約為3％。由于銀屑病患者生活質量受到嚴重影響，甚至連就業(yè)和收入也成問題。皮膚是預防侵入物或損傷最前端的防衛(wèi)線，它由許多上皮和免疫成分組成，而這些免疫成分構成了皮膚相關的淋巴組織(salt)，病理情況下或是外界刺激強或慢性反復刺激，或者是由于機體遺傳缺陷，就會產生異常反應。普通型銀屑病是目前認識較清楚且為大家所認可的由t細胞和樹突狀細胞所介導的皮膚慢性炎癥性疾病。研究證明銀屑病不僅僅是受基因所影響，而是也與環(huán)境因素相關，已知的能夠引起銀屑病發(fā)病的環(huán)境因素有感染、應激、過度肥胖、一些藥品、抽煙、過度飲酒，甚至氣候、天氣都可以在一部分病人身上誘發(fā)或加重病情。上述諸多因素形成了銀屑病患者皮膚的典型的病理變化，角朊細胞增殖加速導致皮膚增厚，角朊細胞正常分化過程不能發(fā)生，正常的顆粒層丟失，細胞核在表層上皮仍保留角蛋白，在整個表皮都存在16型角蛋白，真皮層存在著大量的角蛋白。中性粒細胞聚集在表皮中，在真皮有大量的單核細胞，主要是髓性來源的樹突狀細胞和t細胞，而銀屑病患者局部皮膚的紅斑是由于大量的擴張了的皮膚血管。目前常用的治療銀屑病的藥可分為全身系統(tǒng)用藥和局部外用藥，一般來說對于中、重度銀屑病患者常采用全身用藥，而輕度或者部分中度患者常采用外用藥物全身系統(tǒng)用藥，絕大多數臨床醫(yī)師都習慣用甲氨喋呤(mtx)，用于銀屑病患者的第一線全身治療銀屑病或者銀屑病性關節(jié)炎，而另一個常用的藥物為環(huán)孢菌素a，因為它可以通過預防t細胞活化和細胞因子的表達。這兩個藥幾乎成了銀屑病治療藥物的金標準，但是該類藥物，由于原屬細胞毒類抗癌藥或免疫抑制劑，長期應用必然會產生嚴重的毒副作用。近幾年來由于許多研究者和臨床醫(yī)師的共同努力，出現了許多新的治療用的生物制劑和口服全身性靶向小分子藥物等。其中以tnf拮抗劑最為突出，例如etanercept和抗tnf抗體aldalimumab、infliximab等生物制品給中重型銀屑病患者帶來了福音；新的口服抗銀屑病的小分子藥物例如：二甲基反丁烯二酸酯(二甲基延胡索酸)和4型磷酸二酯酶的抑制劑apremilast，可以減少致炎因子的釋放(例如il-12、il-23和tnf)，誘導抗炎細胞因子(例如il-10)的產生。臨床上tofacitinib可以作為口服制劑用于中度和重度銀屑病患者。對于輕度銀屑病患者，即皮損面積小于10％的患者，通常采用外用局部給藥。對于中重度患者，在采用紫外光和全身治療的同時，外用藥也可以作為輔助治療。目前的銀屑病局部用藥有：糖皮質激素類：是目前銀屑病患者最常使用的外用制劑，可以根據皮損大小部位及病情的進展情況選用不同強度和劑型。糖皮質激素類藥物可以產生抗炎、抗增殖、免疫抑制及血管收縮的作用而治療銀屑病，但是局部使用可以導致糖皮質激素產生副作用，而且長期使用會產生耐受，停藥后會產生反跳。維生素d3類似物：其代表性藥物為卡泊三醇，是目前常用的銀屑病外用藥，其主要的作用是與維生素d受體結合，抑制了角質形成細胞增殖，并誘導其分化，是目前治療銀屑病的金標準。該藥較糖皮質激素類藥物起效慢，但是較糖皮質激素類間歇期更長，但是該藥對皮損周邊有一過性刺激和便血清腸一過性增高。維生素a酸類衍生物，例如他扎羅汀。它可以刺激角質形成細胞正常化，減少過度增殖，降低炎癥標記物的表達。該藥為常用銀屑病的局部用藥療效是很好的，但是對于皮損及周邊地區(qū)有刺激作用，該藥嚴禁使用于妊娠期，對兒童患者慎用。免疫抑制劑他克莫司和吡美莫司，均屬于鈣調磷酸酯酶，可有效治療面部和屈側部位的銀屑病。該藥的副作用是皮膚刺激和瘙癢，而且fda發(fā)布了有爭議的淋巴病的黑箱報告，所以慎用。焦油類藥物：本品確實對某些銀屑病患者有效，但是會使衣服著色和煤焦油氣味，動物試驗有致癌風險，盡管在人體未能證實。兒童用藥應謹慎。蒽林類：無煤焦油類難聞的氣味和衣服著色。水楊酸類：有一定療效，且無fda規(guī)定的禁忌癥使用劑量，但是大面積使用，特別是肝腎功能不全者應謹慎。上述藥物聯合使用或間歇使用，但必須考慮到它們的理化性質和作用機制的前提下，可能取得更好的療效。發(fā)明簡述本申請?zhí)峁┝艘环N用人參皂苷c-k用于治療銀屑病的用途。使用人參皂苷c-k治療銀屑病的優(yōu)點在于：人參皂苷c-k有抗炎作用，該作用對于銀屑病和類風濕性關節(jié)炎都是有效的；人參皂苷c-k可以抑制角質形成細胞的過度增殖，并誘導其分化；人參皂苷c-k可以抑制血管增生和擴張；人參皂苷c-k可以抑制一些炎癥細胞聚集和炎癥因子的釋放；人參皂苷c-k副作用極小，即便遠超過銀屑病外用劑量下也無副作用。因此，對于銀屑病的治療，本發(fā)明方法是非常有效且無副作用的。根據本申請的一個發(fā)明，本申請?zhí)峁┝巳藚⒃碥誧-k及其藥學上可接受的溶劑合物或水合物在制備用于治療銀屑病的藥物中的用途。根據本申請的優(yōu)選實施方式，所述銀屑病包含尋常型銀屑病。根據本申請的一個發(fā)明，本申請?zhí)峁┝艘环N藥盒，其特征在于，所述藥盒包含人參皂苷c-k或其藥學上可接受的溶劑合物或水合物，所述藥盒用于治療銀屑病。根據本申請的一個發(fā)明，本申請?zhí)峁┝艘环N藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含人參皂苷c-k或其藥學上可接受的溶劑合物或水合物，以及藥學上可接受的載體，所述藥物組合物用于治療銀屑病。根據本申請的一個發(fā)明，本申請?zhí)峁┝艘环N含有人參皂苷c-k的藥物組合物的制備方法，其特征在于，將根據人參皂苷c-k或其藥學上可接受的溶劑合物或水合物與藥學上可接受的載體混合來制備，所述藥物組合物用于治療銀屑病。附圖說明在本文中附帶并且形成本說明書的一部分的附圖例示性的顯示了本發(fā)明，并且與說明書一起進一步用于說明本發(fā)明的原理并且使得相關領域的技術人員能夠做出并且使用本發(fā)明。本發(fā)明的實施例僅作為例子來參照附圖進行描述。圖1和圖2顯示了人參皂苷c-k和空白對照對于hacat細胞分化的免疫組化染色的結果；圖1顯示了在使用20μg/ml的人參皂苷c-k處理48小時后，細胞的染色結果；圖2顯示了48小時后空白對照的細胞的染色結果。發(fā)明詳述定義“人參皂苷”(ginsenoside)是一種固醇類化合物三萜皂苷，是人參中的活性成分。人參皂苷具有相似的基本結構，基本結構是含有由30個碳原子排列而成四個環(huán)的甾烷類固醇。人參皂苷在結構上分成達瑪烷型和齊墩果烷型(c型)。達瑪烷型人參皂苷又分成兩類人參二醇型(a型)和人參三醇型(b型)。人參二醇型(a型)和人參三醇型(b型)的皂苷元屬于四環(huán)三萜，而墩果烷型(c型)皂苷元屬于五環(huán)三萜?！叭藚⒃碥誧-k”(20(s)-ginsenosidec-k)，屬于皂苷類化合物，是二醇型(a型)人參皂苷在人腸道內的代謝產物。人參皂苷c-k的分子式為c36h62o8，分子量為622.87，在本申請中也簡稱ck。ck分子結構如下式所示：人參皂苷c-k現代研究表明人參皂苷c-k具有抗癌、保肝、調節(jié)免疫系統(tǒng)等多種活性。本申請所述的化合物包含該化合物的無水物形式和非溶劑合物形式，也包含該化合物的水合物和溶劑合物形式。本申請中術語“溶劑合物”是指包含所述化合物和一個或多個藥學上可接受溶劑分子(如乙醇)的分子。當其中溶劑是水時，所述溶劑合物是水合物。術語“藥物組合物”表示含有治療有效量的一種或多種所述化合物及其藥學上可接受的溶劑合物或水合物，與其他藥學上可接受的載體的混合物。將所述化合物制備成藥物組合物的目的是為了更方便地向對象給藥。本申請所述藥物組合物可以為片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、栓劑、散劑、膏劑、貼劑、注射液、溶液、混懸液、噴霧劑、洗劑、滴劑、擦劑。本申請中術語“藥盒”，可與“試劑盒”互換使用。本申請公開了包含治療有效量的所述治療劑或藥物組合物的藥盒。根據本申請的某些實施方式，所述藥盒還包含一種或多種其他的治療劑。術語“給藥”，可與“給予”或“施予”互換使用，是指將一定劑量的化合物或藥物組合物通過合適的給藥方式給予對象。所述“給藥方式”包括但不限于口服給藥、靜脈內給藥、呼吸道內給藥、舌下給藥、局部給藥、肌肉內給藥、眼內給藥、透皮吸收、胃腸外給藥、腹膜內給藥、陰道給藥、頰部給藥、經直腸給藥等本領域已知的任何給藥方式。本領域技術人員應該了解對象的給藥方式取決于多個因素，所述因素包括疾病的位置、對象的年齡、疾病的嚴重程度、以及藥物組合物的成分等。本申請所述化合物或藥物組合物可以在任意時間給藥。例如所述化合物或藥物組合物可以在對象疾病發(fā)作前、發(fā)作時或者發(fā)作后給藥。本申請所述化合物或藥物組合物可以一次給藥，也可以多次給藥。當多次給藥時，可以以間隔任意時間的方式。本申請所述化合物或藥物組合物可以單獨給藥，也可以與其他合適的藥物聯合給藥。所述聯合給藥可以是例如與其他藥物同時給藥或先后給藥。當先后給藥時，可以以間隔任意時間的方式。術語“有效量”或“治療有效量”的所述化合物是指向對象給藥后足以獲得所需的治療效果的量。所述治療效果如有效抑制銀屑病的病癥。本領域技術人員應該了解所述化合物的合適的劑量取決于多個因素，所述因素包括但不限于要治療對象的體重、年齡和性別、給藥時間、要治療的疾病的嚴重程度等。術語“治療”或“處理”指向對象給藥之后，可以“預防”、“防治”、“抑制”、“改善”或“治愈”對象的疾病、紊亂或疾病狀況。本申請中術語“對象”、“受試者”或“患者”可以互換使用，并且具有廣泛的含義，包括人或非人哺乳動物，例如狗、貓、小鼠、大鼠、綿羊、豬、山羊、奶牛、非人靈長類動物；或者禽類，例如雞、鴨、鵝；包括其他脊椎動物、非脊椎動物，也包括體外的組織、原核細胞或真核細胞等。根據本申請的某些實施方式，所述對象是哺乳動物。根據本申請的某些實施方式，所述對象是靈長類動物。根據本申請的某些實施方式，所述對象是人。術語“藥學上可接受的載體”是藥學上可接受的成分或者介質，包括但不限于溶劑、賦形劑、稀釋劑、佐劑、填充劑等。常見的藥學上可接受的載體包括生理鹽水，緩沖劑、糖類、明膠、淀粉、林格氏溶液、纖維素等。所述載體的ph通常為3-11，優(yōu)選5-9，更優(yōu)選7-8。術語“半數抑制濃度(ic50)”，或稱“半抑制率”，是指抑制劑在抑制靶標物質過程中，當靶標物質的活性被抑制到一半時，抑制劑的濃度。通常，抑制劑的抑制能力越強，ic50越低。根據本申請的某些實施方式，本申請所述化合物的ic50是當11β-hsd1活性被抑制50％時，該化合物的濃度。除非在本申請中另有說明或與上下文明顯矛盾，本申請所述的所有方法可以根據本領域技術人員的理解，以任何合適的順序進行。本申請中引用的所有專利、專利申請和參考文獻均通過引用的方式全文并入本申請，其并入程度就如同每一篇文獻單獨引用作為參考。如果本申請和本文提供的文獻之間存在沖突，應以本申請中的內容為準。具體實施方式本申請描述了優(yōu)選的實施方式和實施例，本領域技術人員在閱讀本申請的基礎上，可以對本申請所述的實施方式和實施例進行適當的改變。因此，本申請請求保護的內容包括法律允許范圍內對本申請權利要求書中主題的所有等同的修改和變化。實施例1：ck對人表皮細胞的體外抑制增殖作用本實施例說明人參皂苷c-k(本文中也簡稱為ck)對人表皮細胞具有體外抑制增殖的作用。在本實施例中，所述ck通過溶解在二甲亞砜中給予細胞，所述人表皮細胞是人永生化表皮細胞(hacat細胞)，使用mtt(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍)方法來檢測細胞的存活和生長。將ck樣品(市售，shanghaistandardbiotechco.,ltd.純度92％，lot3690/20548)溶解于二甲亞砜中，得到濃度為10mg/ml的溶液。再用pbs作梯度稀釋，得到濃度分別為1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml的稀釋樣品。將注射用順鉑(凍干型)(市售，齊魯制藥有限公司，批號1wa2a1411073b)作為陽性對照藥，并配置成與樣品一樣的濃度。將稀釋好的樣品加入平底96孔板中，并加入對數生長期的人永生化表皮細胞(hacat細胞，由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院傳代培養(yǎng))，培養(yǎng)48小時。用mtt法檢測細胞相對存活率，且根據在492nm處的光吸收值并基于以下公式計算。表1：體外對hacat細胞株的生長抑制作用化合物hacat細胞ic50(μg/ml)ck＞100順鉑3.12表1的實驗結果證明人參皂苷ck對于hacat細胞無明顯的細胞毒作用，即：無明顯的抑制hacat細胞增殖的作用。實施例2：ck對人表皮細胞分化的影響本實施例說明人參皂苷c-k(ck)對人表皮細胞分化的影響。在本實施例中，所述ck通過溶解在二甲亞砜中給予細胞，所述人表皮細胞是人永生化表皮細胞(hacat細胞)，使用免疫組化染色方法來檢測細胞的分化。hacat細胞培養(yǎng)于dmem培養(yǎng)基(含10％fbs)，至80％的培養(yǎng)瓶面積時，經0.25％胰蛋白酶消化后，調整細胞濃度為8×104/ml并分別移入6孔板中(板中加有已滅菌的玻片)，并將人參皂苷ck濃度設為20μg/ml，分別加入相應的孔中，并設空白對照，置37℃細胞培養(yǎng)箱內，分別在培養(yǎng)0h、48h應用抗角蛋白18/19抗體(由解放軍第二軍醫(yī)大學病理解剖教研室提供)進行免疫組化染色。染色結果如圖1和圖2所示，圖1顯示了在使用20μg/ml的人參皂苷c-k處理48小時后，細胞的染色結果；圖2顯示了48小時后空白對照的細胞的染色結果。由圖可以看出，圖1中用人參皂苷c-k處理的hacat細胞內出現棕色顆粒，表明hacat細胞分化形成了角蛋白，而圖2的空白對照處理中卻沒有角蛋白形成。實施例3：ck對雞胚新生血管(雞胚尿囊膜血管生成)具有抑制作用本實施例說明人參皂苷c-k對雞胚新生血管(雞胚尿囊膜血管生成)具有抑制作用。在本實施例中，陰性對照品-緩沖鹽水(簡稱pbs)、陽性對照品-鹽酸索拉非尼(簡稱索拉非尼)、人參皂苷c-k分別給予雞胚。將使用的手術器械以及濾紙滅菌。取新鮮種蛋，在37℃、50％濕度的條件下連續(xù)孵育6天。在第6天，鑒定雞胚是否存活，取出存活的雞蛋進行開窗。先用光照定位尿囊膜所在位置，做好標記，然后將雞蛋氣囊所在一端扎一個小孔，將雞蛋的尿囊膜朝上放置，用吸耳球輕吸氣囊，使尿囊膜塌陷與蛋殼分開，然后用刀片在尿囊膜上方開一個1cm2的小窗。將濃度為1μg/μl、2μg/μl的緩沖鹽水(簡稱pbs)、索拉非尼(4μg/μl，dmso為溶劑)、人參皂苷c-k(20μg/μl，dmso為溶劑)滴在濾紙上，風干，避開大血管，輕輕地將濾紙放置在尿囊膜上。用透明膠布封好小窗，繼續(xù)孵育48小時，揭開透明膠帶，將窗口擴大用相機拍照。新生血管根據每張照片的血管的分枝點來計數。結果如表2所示。相對抑制率計算方法：在上述相對抑制率計算公式中，對照組是陰性對照組(或稱為pbs組)的簡稱。表2：ck對雞胚新生血管生成的抑制作用陽性對照品-索拉非尼是眾所周知的靶向性抗癌藥，對血管增生有明顯的抑制作用；由表2的結果可以看出，人參皂苷c-k的抗血管增生作用也是非常明顯的，其效果幾乎與索拉非尼相當。實施例4：ck對小鼠尾部鱗片表皮細胞的影響本實施例說明人參皂苷c-k可以促進小鼠尾部細胞顆粒層的形成，并且有一定劑量依賴關系。采用70只小鼠，隨機分成7組，即正常對照組、空白乳膏組、陽性對照-卡泊三醇組(市售，愛爾蘭利奧制藥有限公司，生產批號eh8304，15g：0.75mg，即15g乳膏中含0.75mg卡泊三醇)、受試乳膏人參皂苷c-k0.5％、1％、2％、4％四個劑量組。除正常對照組，給藥前各組動物均用尼龍刷子輕刷尾根0.5cm處100次，然后在同一部位涂抹給藥(100μl)，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天，正常對照組給予生理鹽水。最后一次給藥后1小時殺死小鼠，取給藥部位皮膚一長條，用10％甲醛溶液固定。石蠟包埋，he染色，在光學顯微鏡下觀察每個小鼠的尾部鱗片。凡兩個毛囊口之間的鱗片表皮有排列成行的顆粒層者，稱為有顆粒層的鱗片，計數每100個鱗片中有顆粒層的鱗片數，結果用百分數表示。結果示于表3,采用t檢驗，并計算代表統(tǒng)計學上的顯著性的p值。表3：人參皂苷c-k對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的作用(n＝10，)注：與正常對照組比較，p*<0.05,p**<0.01；與空白乳膏組比較p#<0.05,p##<0.01。表3顯示，本試驗條件下，與正常對照組相比，空白乳膏組、卡泊三醇組和不同劑量人參皂苷c-k乳膏的給藥組連續(xù)給藥7天后，有顆粒層鱗片數極其明顯增加。而且卡泊三醇組和不同劑量人參皂苷c-k乳膏的給藥組與空白乳膏組相比，有顆粒層鱗片數也極明顯增加。這一結果說明人參皂苷c-k乳膏可以促進小鼠尾部細胞顆粒層的形成，并且有一定劑量依賴關系。實施例5：ck對鹽酸普萘洛爾誘發(fā)豚鼠銀屑病模型的影響采用豚鼠70只，除正常對照組，其余動物均用5％鹽酸普萘洛爾乳劑(約200μl)均勻涂抹于雙耳背皮膚，每天兩次，連續(xù)涂抹四周，獲得鹽酸普萘洛爾誘發(fā)豚鼠銀屑病模型。四周后分為空白乳膏組、卡泊三醇(同上)組、受試乳膏-人參皂苷c-k0.5％、1％、2％、4％四個劑量(同上)組。正常對照組，為正常豚鼠耳朵，涂抹生理鹽水；其他組將不同藥物(約200μl)涂抹于豚鼠雙側耳背，每天2次，連續(xù)給藥7天。實驗期間對動物狀態(tài)進行觀察，最后一次給藥后1小時處死豚鼠。結果示于表4,采用t檢驗，并計算代表統(tǒng)計學上的顯著性的p值。表4：人參皂苷c-k對鹽酸普萘洛爾誘發(fā)豚鼠銀屑病模型給藥7天的耳部表皮厚度(n＝10)注：采用one-wayanova統(tǒng)計方法進行方差分析，與正常對照組比較，p*<0.05，p**<0.01；與空白乳膏組比較p#<0.05，p##<0.01。從表4的表皮厚度數據可知，本實驗條件下，空白乳膏組表皮厚度高達221.65μm，與正常對照組有非常顯著的差異，提示本批動物造模是成功的。與空白乳膏組相比，人參皂苷c-k各劑量組對鹽酸普萘洛爾誘發(fā)豚鼠銀屑病模型給藥7天的耳部表皮厚度有明顯的抑制作用。當前第1頁12