專利名稱：一種糜蛋白酶組合物凍干粉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種糜蛋白酶制劑，具體講，涉及一種糜蛋白酶組合物凍干粉及其制備方法。
背景技術(shù)：
糜蛋白酶,英文名稱為Chymotrypsin,別名胰凝乳蛋白酶、α -糜蛋白酶、甲-糜蛋白酶。是一種典型的絲氨酸蛋白酶，是脊椎動物的消化酶。在胰臟中以酶前體物質(zhì)胰凝乳蛋白酶原的形態(tài)生物合成，隨胰液分泌出去。在小腸受到胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的一定的分解，轉(zhuǎn)變成活性的胰凝乳蛋白酶。屬于肽鏈內(nèi)切酶，主要切斷多肽鏈中的芳香族氨基酸殘基的羧基一側(cè)。對其氨基酸序列、高級結(jié)構(gòu)，反應(yīng)機制的研究還在進展中。牛的α-胰凝乳蛋白酶的氨基酸殘基數(shù)245個，分子量約2. 5萬，第57位組氨酸、102位天冬氨酸、195位絲氨酸等三個殘基在催化作用中起著中心作用。195位絲氨酸受二異丙基氟磷酸(DFP)的 作用受特異的修飾而喪失活性，即所謂絲氨酸蛋白酶。與同樣在胰臟里生物合成的胰蛋白酶雖然在結(jié)構(gòu)和催化機制方面關(guān)系非常密切，但底物特異性完全不同。糜蛋白酶制劑是由牛胰中分離制得的一種蛋白分解酶類藥，作用與胰蛋白酶相似，能促進血凝塊、膿性分泌物和壞死組織等的液化清除。糜蛋白酶具有肽鏈內(nèi)切酶及脂酶的作用，可將蛋白質(zhì)大分子的肽鏈切斷，成為分子量較小的肽，或在蛋白分子肽鏈端上作用，使氨基酸分出；并可將某些脂類水解。通過此作用能使痰中纖維蛋白和粘蛋白等水解為多肽或氨基酸，使粘稠痰液液化，便于咳出，對膿性或非膿性痰都有效。此外，本藥尚能松弛睫狀韌帶及溶解眼內(nèi)某些組織的蛋白結(jié)構(gòu)。糜蛋白酶還有促進抗生索、化療藥物向病灶滲透的作用。注射用糜蛋白酶為蛋白分解酶類藥，具有肽鏈內(nèi)切酶的作用，使蛋白質(zhì)大分子的肽鏈切斷，成為分子量較小的肽，或在蛋白分子肽鏈端上作用，使分出氨基酸。糜蛋白酶制劑還有酯酶作用，使某些脂水解。因此可消化膿液、積血、壞死組織，起創(chuàng)面凈化、消炎、消腫作用。此外還能松弛睫狀韌帶及溶解眼內(nèi)某些組織的蛋白結(jié)構(gòu)。鑒于糜蛋白酶的熱穩(wěn)定性較差，其原料需在冷處貯存，而水溶液不穩(wěn)定，制成注射液或需要高溫滅菌的過程，將對糜蛋白酶的穩(wěn)定性產(chǎn)生較大的影響，所以糜蛋白酶不適合制成注射液或需高溫終端滅菌的生產(chǎn)過程。同時由于糜蛋白酶很容易染菌，對于制備過程中的無菌要求很高。同時由于糜蛋白酶是生物大分子，經(jīng)凍干后的蓬松度較差，溶解速度較慢。為此，本發(fā)明提出了一種蓬松度高、穩(wěn)定性高、生物活性高、無菌化程度高的糜蛋白酶制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要發(fā)明目的在于提出一種糜蛋白組合物的凍干粉制劑。本發(fā)明的第二發(fā)明目的在于提出該糜蛋白組合物的凍干粉制劑的制備方法。為了完成本發(fā)明的發(fā)明目的，所采用的技術(shù)方案為
本發(fā)明涉及一種糜蛋白酶組合物凍干粉，所述糜蛋白酶組合物凍干粉由糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇組成，所述糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇的比例為100萬單位Ig I. 8g : O. 05g O. 6g,優(yōu)選為100萬單位1. 2g I. 6g : O. 08g O. 4g,最優(yōu)選為100 萬單位1. 4g O. Ig0本發(fā)明的第一優(yōu)選技術(shù)方案為所述糜蛋白酶組 合物凍干粉平均的孔隙率為85% 98% ;優(yōu)選90 98% ;更優(yōu)選為95%。本發(fā)明還涉及該糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法，具體包括如下步驟I.配制溶液采用溫度為5 10°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至90 100°C 15 30分鐘,過濾脫炭；2.于配液罐中加入溫度為5 15°C、體積為配液總量60 80%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加2 5ml的注射用水；3.用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至5. 8 6. 1，優(yōu)選6. O ；4.藥液經(jīng)兩次濾膜除菌過濾后，備用；5.濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥。本發(fā)明制備方法的第一優(yōu)選技術(shù)方案為加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2%。本發(fā)明制備方法的第二優(yōu)選技術(shù)方案為步驟(2)中加入糜蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為5 10°C，優(yōu)選10°C。本發(fā)明制備方法的第三優(yōu)選技術(shù)方案為步驟(2)中，所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加3 5ml的注射用水,優(yōu)選添加3. 5 4. 88ml的注射用水,進一步優(yōu)選添加4. 02 4. 48ml的注射用水。本發(fā)明制備方法的第四優(yōu)選技術(shù)方案為所述硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為 lmol/L。本發(fā)明制備方法的第五優(yōu)選技術(shù)方案為步驟(4)中，采用O. 2μπι濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾。本發(fā)明制備方法的第六優(yōu)選技術(shù)方案為所述的冷凍干燥包括以下步驟(I)預凍擱板溫度在5 15 °C進箱，并將凍干箱溫度以2 6 °C /min的速度降至-20 -15°C，保溫I 3小時；再將凍干箱溫度以O(shè). 7 I. 2°C /min的速度降至-40 -50°C，等制品溫度達-30 -40°C時，計時保溫I 3小時；(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-48 _58°C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 45 O. 550C /min的速度升至4 8°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫I 3小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 5 O. 8°C /min升溫至25 35°C，待制品溫度達20 28°C時，計時保溫2 5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。本發(fā)明制備方法的第七優(yōu)選技術(shù)方案為所述的冷凍干燥包括以下步驟(I)預凍擱板溫度在10 15°C進箱，并將凍干箱溫度以3 6 °C /min的速度降至-20 -15 °C，保溫I 3小時；再將凍干箱溫度以O(shè). 7 I °C /min的速度降至-40 -50°C，等制品溫度達-30 -40°C時，計時保溫I 3小時；
(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-48 _58°C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 45 O. 550C /min的速度升至4 8°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫I. 5 3小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 6 O. 7°C /min升溫至25 33°C，待制品溫度達20 24°C時，計時保溫2 4小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱；優(yōu)選為(I)預凍擱板溫度在10°C進箱，將凍干箱溫度以4.5 6°C /min的速度降至-20 -18 °C,保溫I 3小時；再將擱板溫度以O(shè). 7 O. 75 V /min的速度降至-46 -48°C，等制品溫度達-35 -38°C時，計時保溫2 2. 5小時；(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-54 _57°C，打開箱阱閥，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 5°C /min的速度升至6°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫2 2. 5小時；
(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 650C /min升溫至30°C，待制品溫度達22°C時，計時保溫3. 5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。下面對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步的解釋和說明。本發(fā)明提出一種糜蛋白酶組合物凍干粉，由糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇組成，三者的比例為100萬單位Ig L 8g 0.058 0.68，優(yōu)選為100萬單位1.28
I.6g : O. 08g O. 4g,最優(yōu)選為 100 萬單位1. 4g : O. Ig0本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，凍干粉針劑的處方中輔料的成分和含量越少，那么由輔料帶來的雜質(zhì)的種類和含量就越少，由雜質(zhì)引起的風險就越小，并且輔料本身給注射者帶來的風險也就越小，因此本發(fā)明采用山梨醇作為賦形劑，經(jīng)過輔料篩選試驗，采用山梨醇作為賦形劑的效果好于甘露醇、葡萄糖等其他原料。同時，發(fā)明人通過實驗確定了所添加的山梨醇的比例，山梨醇主要起支架劑的作用，山梨醇添加的比例是影響凍干粉針的外觀、復溶性等性質(zhì)的重要原因之一?，F(xiàn)有技術(shù)中一般需要添加較多量賦形劑，一般每100萬單位糜蛋白酶需要添加賦形劑在I克左右。本發(fā)明通過對制備方法的改進，進一步的降低了賦形劑的用量，從而使獲得的凍干粉針更易于溶解，溶解速度更快。經(jīng)過大量實驗，發(fā)現(xiàn)當糜蛋白酶、右旋糖酐20與山梨醇的質(zhì)量比為100萬單位Ig 1.8g O. 05g O. 6g時，采用常規(guī)凍干方法凍干時，其凍干效果較差，凍干粉不夠疏松，且復溶性不好。本發(fā)明為了在采用較少賦形劑的基礎(chǔ)上獲得更好的凍干效果，對凍干工藝做了研究和改進。本發(fā)明采用配液總量的體積為每4000單位的糜蛋白酶添加2 5ml的注射用水，再進行凍干，并對凍干工藝做了進一步的改進，獲得的凍干粉的外觀為疏松塊狀物，孔隙率可達85% 98%，復溶性優(yōu)良。當賦形劑的用量進一步減少，糜蛋白酶、右旋糖酐20與山梨醇的質(zhì)量比為100萬單位1. 2g I. 6g O. 2g 0.4g時，產(chǎn)品的外觀依舊良好，復溶性、澄清度優(yōu)良。出于節(jié)省成本的考慮，最優(yōu)選二者比例為100萬單位
I.4g : O. Ig0本發(fā)明的糜蛋白酶凍干粉針劑外觀飽滿不萎縮、色澤均一、復溶性好，孔隙率可達85% 98%，凍干粉針劑在20°C貯存24個月后，凍干粉針劑的顏色無變化，并且復溶后的澄清度好，各項指標均無明顯變化，具有非常優(yōu)異的穩(wěn)定性。本發(fā)明的糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟
(I)配制溶液采用溫度為5 10°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入醫(yī)用活性炭，攪拌，加熱至90 100°C 15 30分鐘,過濾脫炭；(2)于配液罐中加入溫度為5 10°C、體積為配液總量60 80%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量的體積為每4000單位的糜蛋白酶添加2 5ml的注射用水；(3)用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至5. 8 6. 1，優(yōu)選6. O ；(4)藥液經(jīng)濾器二次終端除菌過濾后，備用；(5)濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥。本發(fā)明根據(jù)糜蛋白酶的特點和糜蛋白酶凍干粉針劑處方的特點，對糜蛋白酶凍干粉針劑的制備工藝進行了反復地研究，如各組分的用量、配液溫度、PH值的范圍、活性炭·的量及吸附時間、脫碳方式、凍干工藝等等，通過選擇最合適的組分用量配比、優(yōu)化生產(chǎn)工藝，所得到的凍干品復溶后的澄明度良好，穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控。由于糜蛋白酶對溫度敏感，本發(fā)明針對糜蛋白酶的熱不穩(wěn)定的特點，在配制藥液的過程中先制造一個低溫的溶液環(huán)境，先將注射用水冷卻到5 10°C再用于本產(chǎn)品的制備。將低溫注射用水制備的6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液和糜蛋白酶加入體積為配液總量60 80%的5 10°C注射用水中，糜蛋白酶在溶解時放出溶解熱，溶解熱將及時快速地釋放到大量低溫的溶液中，釋放的溶解熱不會對糜蛋白酶本身帶來任何影響，攪拌直至糜蛋白酶全部溶解，再補齊至配液總量。其中，所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加2 5ml的注射用水，現(xiàn)有技術(shù)中一般采用了每4000單位的糜蛋白酶添加O. 5ml的注射用水的比例，本發(fā)明采用較高的配液總量，其目的為第一，大量的低溫注射用水可以保證糜蛋白酶的溶解在低溫條件下進行，保證了糜蛋白酶的活性；第二，大量的低溫注射用水降低了糜蛋白酶的濃度，使之更不容易發(fā)生降解和污染；第三，通過凍干實驗證實，增加配液體積，可以使凍干粉具有更好的孔隙度，從而使凍干粉更加蓬松，溶劑速度增加，同時溶解后的澄明度良好。當配液的體積為待糜蛋白酶處于一個低溫穩(wěn)定溶液環(huán)境中之后，再調(diào)節(jié)pH值，保證了糜蛋白酶凍干粉針劑藥液在配制的全過程處于一個穩(wěn)定的環(huán)境中，避免了糜蛋白酶在溶解過程中瞬間釋放的溶解熱對糜蛋白酶本身帶來的不利影響。本發(fā)明對活性炭的用量和使用方法進行了研究，添加質(zhì)量百分比為2%的活性炭用量即保證可以完全吸附右旋糖旋20藥液中的熱原、雜質(zhì)等，提高產(chǎn)品的純度和成品率，又不會對藥液中主藥的含量產(chǎn)生影響；采用邊脫炭邊循環(huán)的方法，使得活性炭附著在過濾棒上，使活性炭的吸附能力得到了加強，保證一次、二次O. 2 μ m除菌濾膜的不堵塞而順利地完成過濾藥液，使其除菌過濾效果達到了極佳的狀態(tài)；提高了過濾藥液的澄清度、凍干后溶解性較好。本發(fā)明為了取得良好的凍干效果，對糜蛋白酶的凍干工藝進行了研究，預凍時，擱板溫度在5 15 °C進箱，干箱溫度以2 6 °C /min的速度降至-20 -15 V，保溫
I 3小時；再將凍干箱溫度以O(shè). 7 I. 2°C /min的速度降至-40 _50°C，等制品溫度達-30 -40°C時，計時保溫I 3小時。本發(fā)明采用了兩步降溫法，由于配液總體積大，所以先用較快的速度降溫，降溫到一定程度后，保溫一段時間，然后再繼續(xù)以一個相對較慢的速度降溫。降溫速率越大，溶液的過冷度和過飽和度愈大，臨界結(jié)晶的粒度則愈小，成核速度越快，容易形成顆粒較多尺寸較小的細晶，因而冰晶升華后，物料內(nèi)形成的孔隙尺寸較小，干燥速率會比較低，但凍干后復溶性好。相反，慢速凍結(jié)容易形成大顆粒的冰晶，冰晶升華后形成的水氣逸出通道尺寸較大，有利于提高干燥速率，但干后復水性差。所以凍干粉針劑在預凍階段都采用較為快速的冷凍工藝。本發(fā)明采用了先快、穩(wěn)定一定溫度、再稍慢一點降溫的辦法。預凍后，抽真空至IOpa以下,將擱板溫度以O(shè). 45 O. 55°C /min的速度升至4 8°C，保溫至冰晶消失，確保冰晶在一次升溫的過程中保持外形飽滿不萎縮、色澤均一，并且干燥后的成品復溶性好，減少了一次升溫階段中最后的保溫時間，冰晶消失，只需保溫I 3小時，提高了升華效率。另外，本發(fā)明中的輔料山梨醇具有較高的崩解溫度，有利于升華的進行。—次干燥后制品中還存有很多細小的冰晶，由于細小冰晶具有很聞的表面能，若二次干燥的升溫速率較慢，則小冰晶易相互結(jié)合形成大冰晶，若二次干燥的升溫速率較快，則可能出現(xiàn)干燥不充分現(xiàn)象，而糜蛋白酶又是熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，所以本發(fā)明采用先快速升溫，將擱板溫度以O(shè). 5 O. 80C /min的較快速度升至25 35°C，待制品溫度達20 28°C， 計時保溫2 4小時，使得一次干燥后的小冰晶中的水分先快速蒸發(fā)，避免小冰晶之間因升溫較慢而相互結(jié)合形成大冰晶，并確保了糜蛋白酶凍干粉針劑干燥的效果，又確保糜蛋白酶在干燥過程中的保持穩(wěn)定。由于糜蛋白酶易感菌，因此，本發(fā)明采用了藥液經(jīng)濾器二次終端除菌過濾兩次串聯(lián)O. 2 μ m除菌濾膜，從而保證了制劑的無菌，保障了制劑的穩(wěn)定性和活性。整個凍干過程時間較短，并均以均速率的溫度干燥，易于撐握操作。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的糜蛋白酶凍干粉針劑及其制備方法的有益效果為I.本發(fā)明提供的糜蛋白酶凍干粉針劑外觀飽滿均一、復溶性好、穩(wěn)定性好，有利于穩(wěn)定地運輸和貯存，并且處方簡單，藥用輔料添加比例小，對人體的副作用小，安全可靠。2.本發(fā)明對糜蛋白酶凍干粉的制備工藝做了進一步的改進，通過改進配液過程中的溫度、配液體積、凍干過程并進行兩次除菌，從而制備出了一種活性、穩(wěn)定性、復溶性良好的凍干粉針。3.針對糜蛋白酶的特點以及糜蛋白酶凍干粉針劑處方的特點，對糜蛋白酶凍干粉針劑的制備工藝進行了大量的研究，提供的制備工藝簡單、方便可行、重復性好，很容易實現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)，并且凍干時間短、廢品率低、燈檢剔廢難度低，節(jié)約人力，較短的生產(chǎn)周期、較低的廢品率和更低的人力成本，使生產(chǎn)成本大幅度降低，可以產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟和社會效益。本發(fā)明的具體實施方式
僅限于進一步解釋和說明本發(fā)明的內(nèi)容，并不對本發(fā)明的內(nèi)容構(gòu)成限制。
具體實施例方式實施例I :一種糜蛋白酶組合物凍干粉，配方為糜蛋白酶4000萬單位；右旋糖酐20 40g ；山梨醇2g。所述糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為85%。所述糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟I.配制溶液采用溫度為10°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至90°C 30分鐘，再經(jīng)鈦棒脫炭過濾；其中，加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2% ；2.于配液罐中加入溫度為5°C、體積為配液總量60%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加4. 48ml的注射用水；加入糜 蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為10°C ；3.用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至6. O ;所用的硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為lmol/L ；4.藥液經(jīng)O. 2 μ m濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾；5.濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥(I)預凍擱板溫度在5°C進箱，并將凍干箱溫度以2°C/min的速度降至_20°C，保溫I小時；再將凍干箱溫度以O(shè). 70C /min的速度降至_40°C，等制品溫度達_30°C時，計時保溫I 3小時；(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-48 °C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 450C /min的速度升至4°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫I 3小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 50C /min升溫至25°C，待制品溫度達20°C時，計時保溫5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。實施例2 一種糜蛋白酶組合物凍干粉，配方為糜蛋白酶4000萬單位；右旋糖酐20 48g ；山梨醇6g。所述糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為95%。所述糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟I.配制溶液采用溫度為10°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至90°C 25分鐘，再經(jīng)鈦棒脫炭過濾；其中，加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2% ；2.于配液罐中加入溫度為5°C、體積為配液總量60%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加5ml的注射用水；加入糜蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為10°C ；3.用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至6. O ;所用的硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為lmol/L ；4.藥液經(jīng)O. 2 μ m濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾；5.濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥
(I)預凍擱板溫度在5°C進箱，并將凍干箱溫度以6°C/min的速度降至_15°C，保溫3小時；再將凍干箱溫度以I. 2°C /min的速度降至_50°C，等制品溫度達_40°C時，計時保溫2小時；(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-48 -58°C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 45 O. 550C /min的速度升至4 8°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫I 3小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 8°C /min升溫至35°C，待制品溫度達28°C時，計時保溫2小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。
實施例3 一種糜蛋白酶組合物凍干粉，配方為糜蛋白酶4000萬單位；右旋糖酐20 56g 山梨醇4g。所述糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為90 98%。所述糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟I.配制溶液采用溫度為10°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至100°c 15分鐘，過濾脫炭；加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2% ；2.于配液罐中加入溫度為10°C、體積為配液總量70%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加4. 88ml的注射用水；加入糜蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為10°C ；3.用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至優(yōu)選6. O ;所述硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為lmol/L。4.藥液經(jīng)O. 2 μ m濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾。5.濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥(I)預凍擱板溫度在12°C進箱，并將凍干箱溫度以4°C /min的速度降至_20°C，保溫2小時；再將凍干箱溫度以O(shè). 8V /min的速度降至_45°C，等制品溫度達_35°C時，計時保溫2小時；(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-58 °C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 5°C /min的速度升至8°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫2小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 7V /min升溫至28°C，待制品溫度達24°C時，計時保溫2小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱；實施例4:一種糜蛋白酶組合物凍干粉，配方為糜蛋白酶4000萬單位；右旋糖酐20 56g ；山梨醇16g。所述糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為98%。所述糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟I.配制溶液采用溫度為8°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至90 10(TC 15 30分鐘，再經(jīng)鈦棒脫炭過濾；加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2% ；
2.于配液罐中加入溫度為12°C、體積為配液總量80%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加3. 5ml的注射用水；加入糜蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為10°C ；3.用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至5. 8 ;所述硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為lmol/L ；4.藥液經(jīng)O. 2 μ m濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾；5.濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥(I)預凍擱板溫度在10°C進箱，將凍干箱溫度以4. 5°C /min的速度降至_20°C，保溫I 3小時；再將擱板溫度以75°C /min的速度降至_48°C，等制品溫度達一38°C時，計時保溫2. 5小時；
(2) 一次干燥將冷凝溫度降至-57°C，打開箱阱閥，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 5°C /min的速度升至6°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫2. 5小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 650C /min升溫至30°C，待制品溫度達22°C時，計時保溫3. 5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。實施例5一種糜蛋白酶組合物凍干粉，配方為糜蛋白酶4000萬單位；72g ;山梨醇Sg ;糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為95%。所述糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟I.配制溶液采用溫度為8°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至90 10(TC 15 30分鐘，再經(jīng)鈦棒脫炭過濾；加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2% ；2.于配液罐中加入溫度為10°C、體積為配液總量80%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加4. 02ml的注射用水；加入糜蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為10°C ；3.用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值6. O ;所述硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為lmol/L ；4.藥液經(jīng)O. 2 μ m濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾；5.濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥(I)預凍擱板溫度在10°C進箱，將凍干箱溫度以6°C /min的速度降至_18°C，保溫3小時；再將擱板溫度以O(shè). 750C /min的速度降至一48°C，等制品溫度達_38°C時，計時保溫2 2. 5小時；(2) 一次干燥將冷凝溫度降至_54°C，打開箱阱閥，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 5°C /min的速度升至6°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫2. 5小時；(3) 二次干燥凍干箱以O(shè). 650C /min升溫至30°C，待制品溫度達22°C時，計時保溫3. 5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。實驗例I 6%右旋糖酐20溶液中針用活性炭用量的確定采用活性炭除熱原和脫色可能會對溶液中藥物有吸附作用，因此考察一定濃度的活性炭對糜蛋白酶吸附的影響。試驗方法于80ml注射用水中加入稱取的處方量的6%右旋糖酐20，加熱并攪拌至右旋糖酐20完全溶解。將新配制的右旋糖酐20溶液液，分成4等份，其中3份分別加入O. 5% (W/W)、I % (ff/ff) ,2% (W/W)的針用活性炭，另一份作未吸附溶液，均攪均，沸騰30分鐘，再經(jīng)鈦棒脫炭，量取各組濾液進行分析檢測，考察右旋糖酐20藥液經(jīng)不同濃度的活性炭在相同攪拌時間內(nèi)的相對含量(相對吸附前的溶液)、溶液澄清及顏色、細菌內(nèi)毒素，分析結(jié)果見表I。表I針用活性炭吸附結(jié)果
檢測項目側(cè)碰縮職g/ml)_ 未吸附0.5% (W/W) 1% (WAV)2% (WAV)
含量(％)100.6100.299.999.2
澄清度比空白水濁比空白水略濁與溶劑水相當與溶劑水相當
顏色無色無色無色無色
細菌內(nèi)毒素不合格不合格合格合格由分析結(jié)果可知針用活性炭0.5% 2% (W/W)對右旋糖酐20含量均有明顯的吸附，經(jīng)活性炭吸附后溶液澄清度與純化水比較，均有不同程度的改觀，細菌內(nèi)毒素加入1%和2%均符合規(guī)定。綜合考慮吸附細菌內(nèi)毒素的效果和其他指標的影響，我們選擇O. 3%濃度的針用活性炭進行吸附。實驗例2酸度范圍確定根據(jù)注射用糜蛋白酶質(zhì)量標準(《中國藥典》2010年版)的pH值范圍為5. 5
6.5，基于糜蛋白酶的溶解性和人體的耐受性影響因素，本制劑在配液時，藥液的pH值為
5.8 6. 1，優(yōu)選為6. O。實驗例3針用活性炭吸附時間的考察根據(jù)以上試驗結(jié)果，用3%濃度的針用活性炭，經(jīng)不同的吸附時間，考察針用活性炭對右旋糖酐20的吸附情況，確定針用活性炭的吸附時間。試驗方法準備80ml的注射用水置不銹鋼桶內(nèi)，加入右旋糖酐20 6g，加熱并攪拌至右旋糖酐20完全溶解，加入2% (W/W)針用活性炭，攪均。將新配制的右旋糖酐20溶液80ml，分成3等份，分別加入占藥液總體積的2% (W/W)的針用活性炭，分別按表2中的時間進行沸騰攪拌吸附，過濾除炭，再取各濾液進行分析檢測，考察糜蛋白酶溶液經(jīng)相同濃度的活性炭在不同吸附時間的含量變化情況、溶液澄清度及顏色、細菌內(nèi)毒素的影響，結(jié)果見表2。表2針用活性炭吸附時間的考察
權(quán)利要求
1.一種糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征在于，所述糜蛋白酶組合物凍干粉由糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇組成，所述糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇的比例為100萬單位Ig I. 8g : O. 05g O. 6g,優(yōu)選為100萬單位1. 2g I. 6g : O. 08g O. 4g,最優(yōu)選為100 萬單位1. 4g O. Ig0
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征在于，所述糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為85% 98% ;優(yōu)選90 98% ;更優(yōu)選為95%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征為在于，所述糜蛋白酶組合物凍干粉的制備方法包括如下步驟 (1)配制溶液采用溫度為5 10°C注射用水配制6%右旋糖酐20溶液，加入針用活性炭，攪拌，加熱至90 100°C 15 30分鐘，過濾脫炭； (2)于配液罐中加入溫度為5 15°C、體積為配液總量60 80%的注射用水，攪拌，依次加入6%右旋糖酐20溶液、20%山梨醇注射液、糜蛋白酶，攪拌至糜蛋白酶完全溶解，補加注射液至配液總量；所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加2 5ml的注射用水； (3)用硫酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液的pH值至5.8 6. 1，優(yōu)選6. O ； (4)藥液經(jīng)兩次濾膜除菌過濾，備用； (5)濾液分裝，半加塞，放入凍干機中進行冷凍干燥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征為在于，加入針用活性炭的質(zhì)量百分比濃度為2%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征在于，步驟(2)中加入糜蛋白酶時配液罐中的溶液溫度為5 10°C，優(yōu)選10°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征在于，步驟(2)中，所述配液總量為每4000單位的糜蛋白酶添加3 5ml的注射用水，優(yōu)選添加3. 5 4. 88ml的注射用水，進一步優(yōu)選添加4. 02 4. 48ml的注射用水。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征在于，所述硫酸溶液或氫氧化鈉溶液的濃度分別為lmol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征在于，步驟(4)中，采用O. 2 μ m濾膜一次除菌過濾及O. 2 μ m濾膜二次終端除菌過濾。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征為在于，所述的冷凍干燥包括以下步驟 (1)預凍擱板溫度在5 15°C進箱，并將凍干箱溫度以2 6°C/min的速度降至-20 -15 °C，保溫I 3小時；再將凍干箱溫度以O(shè). 7 I. 2 °C /min的速度降至-40 _50°C，等制品溫度達-30 _40°C時，計時保溫I 3小時； (2)—次干燥將冷凝溫度降至-48 _58°C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 45 O. 550C /min的速度升至4 8°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫I 3小時； (3)二次干燥凍干箱以O(shè). 5 O. 8°C /min升溫至25 35°C，待制品溫度達20 28°C時，計時保溫2 5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的糜蛋白酶組合物凍干粉，其特征為在于，所述的冷凍干燥包括以下步驟 (I)預凍擱板溫度在10 15°C進箱，并將凍干箱溫度以3 6°C /min的速度降至-20 -15 °C，保溫I 3小時；再將凍干箱溫度以0.7 I °C /min的速度降至-40 -50°C，等制品溫度達-30 -40°C時，計時保溫I 3小時； (2)—次干燥將冷凝溫度降至-48 -58°C，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 45 O. 550C /min的速度升至4 8°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫I. 5 3小時； (3)二次干燥凍干箱以O(shè). 6 O. 7°C /min升溫至25 33°C，待制品溫度達20 24°C時，計時保溫2 4小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱； 優(yōu)選為 (1)預凍擱板溫度在10°C進箱，將凍干箱溫度以4.5 6°C /min的速度降至-20 -18 °C,保溫I 3小時；再將擱板溫度以O(shè). 7 O. 75 V /min的速度降至-46 _48°C，等制品溫度達-35 -38°C時，計時保溫2 2. 5小時； (2)—次干燥將冷凝溫度降至-54 -57°C，打開箱阱閥，抽真空至IOpa以下，將凍干箱溫度以O(shè). 5°C /min的速度升至6°C，保溫至水晶消失，然后繼續(xù)保溫2 2. 5小時；(3)二次干燥凍干箱以O(shè). 650C /min升溫至30°C，待制品溫度達22°C時，計時保溫3. 5小時；檢查真空度無變化，結(jié)束凍干過程，充氮全壓塞，出箱。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種糜蛋白酶制劑，具體講，涉及一種糜蛋白酶組合物凍干粉及其制備方法。本發(fā)明的糜蛋白酶組合物凍干粉由糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇組成，所述糜蛋白酶、右旋糖酐20和山梨醇的比例為100萬單位1g～1.8g∶0.05g～0.6g。該糜蛋白酶組合物凍干粉平均的孔隙率為85％～98％。本發(fā)明還涉及該糜蛋白組合物凍干粉的制備方法。本發(fā)明的糜蛋白酶凍干粉針劑外觀飽滿均一、孔隙率高、復溶性好、穩(wěn)定性高，并且處方簡單，藥用輔料添加比例小，對人體的副作用小，安全可靠。本發(fā)明對糜蛋白酶凍干粉的制備工藝做了進一步的改進，通過改進配液過程中的溫度、配液體積、凍干過程并進行兩次除菌。
文檔編號A61K9/19GK102860988SQ20111018734
公開日2013年1月9日 申請日期2011年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月5日
發(fā)明者鐘正明, 馬鷹軍, 王小樹, 羅韜 申請人:海南錦瑞制藥股份有限公司