專利名稱：一種治療糖尿病的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療糖尿病藥物復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
本發(fā)明所述的復(fù)方制劑是由中藥葛根、地黃、玉米須、天花粉、黃芪、五味子、山藥與化學(xué)藥格列本脲制成的復(fù)方制劑。具有滋腎養(yǎng)陰、益氣生津的功效，用于多飲，多尿，多食，消瘦，體倦無力，眠差腰痛，尿糖及血糖升高之氣陰兩虛型消渴癥，其范疇包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的糖尿病。據(jù)報道，2000年我國糖尿病總患病率已達(dá)到2.4％，全國糖尿病患者總量已達(dá)近3100萬人。除日漸增多的糖尿病患者外，目前我國尚有約8000萬可能患糖尿病的高危人群。據(jù)預(yù)計，至2010年，我國的糖尿病患病率將達(dá)到4％，患者總?cè)藬?shù)將超過5000萬?？纺虿〉奈：碜杂谄洳l(fā)癥，常見的并發(fā)癥有感染合并癥、視網(wǎng)膜病變、高血壓、腎臟病變、冠心病、下肢血管病變、腦血管病變。這些并發(fā)癥已成為糖尿病死亡的主要原因。目前，糖尿病已成為人類社會中僅次于心腦血管疾病與癌癥的第三大致死疾病。因此，研究開發(fā)用于治療糖尿病的藥物具有極大的現(xiàn)實(shí)意義。中醫(yī)藥治療糖尿病有療效確切、副作用小、成本低等優(yōu)勢。本中西復(fù)方制劑用治療糖尿病的臨床應(yīng)用療效已得到肯定。但藥物的療效只有在質(zhì)量可控的前提下才得到保證，而本藥物組合的已有質(zhì)量控制方法極其簡單粗糙，根本不能全面準(zhǔn)確的反映和控制該復(fù)方制劑的質(zhì)量。中藥化學(xué)成分復(fù)雜，往往每種藥材中的有化學(xué)成分有幾十種至數(shù)百種或更多，已知有生物活性的成分也不少于數(shù)種，包涵數(shù)種藥材的中藥復(fù)方制劑的化學(xué)成分更為復(fù)雜。如果僅用其一、二種活性成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更不用說現(xiàn)有技術(shù)根本沒有相關(guān)的含量測定方法。
為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地，申請人系統(tǒng)研究了本中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，增加了大量鑒別與含量測定項目，使制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有了大幅提高，具有顯著的進(jìn)步。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，從而向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機(jī)構(gòu)提供了檢測的指標(biāo)、檢測的手段、技術(shù)方法等等；更好的控制了該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地。
上述中藥復(fù)方制劑的劑型為口服制劑，包括片劑、分散片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸劑、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、口服液劑、凝膠劑。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的 一種治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下全部或部分內(nèi)容 (1)葛根藥材、地黃藥材、天花粉藥材、黃芪藥材、五味子藥材、格列本脲、葛根素、梓醇、瓜氨酸、黃芪甲苷、五味子醇甲、五味子甲素中全部或部分的鑒別測試方法； (2)格列本脲、葛根素、梓醇、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素、黃芪甲苷中全部或部分成分的含量測定方法。
所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下全部或部分內(nèi)容 a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加堿性溶液溶解，堿液加鹽酸調(diào)節(jié)至酸性，用醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，提取液調(diào)整濃度，制得供試品溶液；另取黃芪對照藥材，參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇或正丁醇＝3～10∶0.2～1為展開劑，展開，取出，晾干，顯色，檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用20～60％甲醇或30～70％乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水適量洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣加50～100％甲醇或50～100％乙醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水＝8～20∶3～12∶0.1～4的溶液或分層后的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含硫酸的顯色劑，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用堿性溶液洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、不同濃度的甲醇或乙醇洗脫，收集40～80％甲醇或50～90％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇或水中的一種或幾種溶解，制得供試品溶液；以黃芪甲苷對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液＝20～60∶80～40為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法 取待測生中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子對照藥材，參照供試品溶液制法，制備對照藥材溶液；取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品中的一種或幾種，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或幾種、及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板，以石油醚或環(huán)己烷或正己烷-甲酸乙酯或醋酸乙酯或醋酸乙酯-甲酸或冰醋酸＝10～25∶2～10∶0.1～2的溶液或上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種，制成對照品溶液，采用液相色譜法試驗，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水＝40～90∶50～10為流動相，檢測波長為200～400nm之間的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； f、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-環(huán)己烷或正己烷-甲醇或乙醇-甲酸或冰醋酸＝4～12∶9～17∶0.3～3∶0.3～3為展開劑，展開，取出，晾干，檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； g、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取格列本脲對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝45～80∶55～20為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰； h、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中地黃、梓醇的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水＝10～18∶3～10∶0.2～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含茴香醛的顯色劑，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； i、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相或50～100％甲醇或50～100％乙醇溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈或甲醇-水＝0.5～10∶99.5～90為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； j、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中天花粉、瓜氨酸的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以正丁醇-無水乙醇或甲醇-甲酸或冰醋酸-水＝4～12∶0.5～4∶0.5～4∶1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含茚三酮的顯色劑，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； k、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水＝1～5∶1～5∶2～6∶0.1～2為展開劑，展開，取出，晾干，檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； l、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根素對照品，制成對照品溶液；采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝10～35∶90～65為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法經(jīng)過優(yōu)選，包括以下全部或部分內(nèi)容 a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇＝10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝32∶68為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法 取待測生中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子對照藥材，參照供試品溶液制法，制備對照藥材溶液；取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品中的一種或幾種，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或幾種、及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板，以30～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15∶5∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，以甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝65∶35為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； f、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷-乙醇-冰醋酸＝8∶13∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； g、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-用磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5的0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰； h、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中地黃藥材、梓醇中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝14∶6∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； i、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝1∶99為流動相，檢測波長為210nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰； j、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中天花粉、瓜氨酸的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水＝8∶2∶2∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； k、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水＝2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； l、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜鑒別方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
所述中藥復(fù)方制劑的含量測定方法包括以下全部或部分內(nèi)容 a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用堿性溶液洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、不同濃度的甲醇或乙醇洗脫，收集40～80％甲醇或50～90％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇或水中的一種或種溶解并定容至適當(dāng)濃度，制得供試品溶液；以黃芪甲苷對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液＝20～60∶80～40為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別精密吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量中含黃芪甲苷的限度不得少于0.10mg； b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇或乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種，制成對照品溶液，采用液相色譜法測定，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水＝40～90∶50～10為流動相，檢測波長為200～400nm之間的一個；分別精密吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量中含量限度應(yīng)為以下一項或幾項 (1)含五味子醇甲不得少于1.0mg； (2)含五味子甲素不得少于0.10mg； (3)含五味子乙素不得少于0.30mg； c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇或乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取格列本脲對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝45～80∶55～20為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別精密吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.0～9.0mg。
d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根素對照品，制成對照品溶液；采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝10～45∶90～55為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于3.0mg； e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相或50～100％甲醇或50～100％乙醇溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈或甲醇-水＝0.5～10∶99.5～90為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于1.5mg。
所述中藥復(fù)方制劑的含量測定方法，經(jīng)過選選，包括以下全部或部分內(nèi)容 a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝32∶68為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含黃芪甲苷的限度不得少于0.20mg； b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，以甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝65∶35為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含量限度應(yīng)為以下一項或幾項 (1)含五味子醇甲不得少于2.0mg； (2)含五味子甲素不得少于0.20mg； (3)含五味子乙素不得少于0.60mg； c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-用磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5的0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.3～8.3mg。
d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于6.0mg； e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜含量測定方法 取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝1∶99為流動相，檢測波長為210nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于3.0mg。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制由中藥葛根、地黃、玉米須、天花粉、黃芪、五味子、山藥和合成藥格列本脲制成的治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。該組方成分復(fù)雜，現(xiàn)有技術(shù)只通過檢測其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，根本無法判斷其藥效的指標(biāo)成分。因此本申請人通過大量的實(shí)驗研究，制定了完善的鑒別和含量測定方法來全面控制該復(fù)方制劑的質(zhì)量。但是由于該復(fù)方制劑中的各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對鑒別和含量測定造成干擾，導(dǎo)致鑒別、含量測定和特征不穩(wěn)定，所以必須通過控制流動相、展開劑等色譜條件，才能得到良好的薄層色譜和含測條件。也就是說，由于處方中各成分相互之間的干擾影響，只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的薄層色譜和含量測定方法。
通過實(shí)驗證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對以由中藥葛根、地黃、玉米須、天花粉、黃芪、五味子、山藥和合成藥格列本脲制成的治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實(shí)驗例1片劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法研究 為了突出黃芪的特征，選擇了黃芪對照藥材作為對照，但是由于該復(fù)方制劑中成分極多，會對特征斑點(diǎn)鑒別造成干擾，例如地黃中的多糖與梓醇，五味子中的五味子醇甲等成分。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下 片劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法研究 條件 結(jié)果 正己烷-醋酸乙酯(8∶2)硅膠H薄層板 Rf值偏低 丙酮-冰醋酸-水(8∶2∶1)硅膠G薄層板 分離不清晰 石油醚-甲醇(7-3)硅膠GF254薄層板陰性有干擾 三氯甲烷-丙酮-甲酸(20∶2∶1)硅膠G薄層板分離不清晰，陰性有干擾 三氯甲烷-丙酮-甲醇(20∶3∶2)硅膠H薄層板陰性有干擾 二氯甲烷-乙醇(3∶2)硅膠G薄層板 分離不清晰，Rf值偏高 分離清晰，Rf值適中，陰性無 三氯甲烷-甲醇(10∶1)硅膠G薄層板 干擾 經(jīng)過篩選，確定最佳條件以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)為展開劑，在此條件下，黃芪對照藥材特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗例2微丸劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法研究 為了突出黃芪的特征，選擇了黃芪甲苷作為其特征斑點(diǎn)，但是由于該復(fù)方制劑中存在較多與黃芪甲苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，例如地黃中的多糖與梓醇，葛根中的葛根素等成分。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下8～20∶3～12∶0.1～4 微丸劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法研究 條件 結(jié)果 三氯甲烷-丙酮-水(10∶8∶0.5)硅膠G薄層板陰性有干擾 二氯甲烷-丙酮-水(10∶8∶0.5)硅膠G薄層板分離不清晰，陰性有干擾 甲醇-丙酮(2∶9)硅膠H薄層板 對照品展至前沿 三氯甲烷-丙酮(10∶5)硅膠GF254薄層板 陰性有干擾 醋酸乙酯-乙醇(13∶7)硅膠H薄層板陰性有干擾 三氯甲烷-乙醇-水(7∶3∶0.5)硅膠G薄層板 分離不清晰，陰性有干擾 三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液 分離清晰，Rf值適中，陰性無干擾 硅膠G薄層板 經(jīng)過篩選，確定了最佳條件以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-水(13-7-2)的下層溶液為展開劑，在此條件下，黃芪甲苷特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗例3膠囊劑中五味子、五味子醇甲、五味子甲素的薄層色譜鑒別方法 為了突出五味子的特征，選擇了五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子甲素作為其特征斑點(diǎn)，但是由于中藥復(fù)方制劑中存在較多與五味子醇甲、五味子甲素結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，例如地黃中的梓醇，葛根中的黃酮類成分。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下 膠囊劑中五味子、五味子醇甲、五味子甲素的薄層色譜鑒別方法 條件結(jié)果 正己烷-甲酸乙酯(9∶4)硅膠H薄層板Rf值偏高 正己烷-甲苯-醋酸乙酯(5∶7∶5)硅膠H薄層板陰性有干擾 甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10∶10∶3)的上層溶液 硅膠G薄層板 分離不清晰 石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-乙酸(8∶5∶3) 硅膠GF254薄層板陰性有干擾 石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯(19∶1)硅膠H薄層板 Rf值偏低 石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶分離清晰，Rf值適中，陰性無 液硅膠GF254薄層板 干擾 經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，在此條件下，五味子醇甲、五味子甲素的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗例4丸劑中天花粉、瓜氨酸的一種或兩種薄層色譜鑒別方法 為了突出天花粉的特征，選擇了瓜氨酸作為其特征斑點(diǎn)，但是由于該中藥復(fù)方制劑中存在較多與瓜氨酸結(jié)構(gòu)相近或極性相似的成分，例如黃芪與葛根中的苷類成分。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下 丸劑中天花粉、瓜氨酸的一種或兩種薄層色譜鑒別方法 條件 結(jié)果 醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸(10∶3∶4)硅膠H薄層板Rf值偏低，分離不清晰 正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(14∶5∶0.5∶1)硅膠G薄層板 Rf值偏高，分離不清晰 正丁醇-甲醇-水(10∶6∶0.5)硅膠G薄層板陰性有干擾 正丁醇-甲醇-醋酸乙酯(12∶1∶5)硅膠H薄層板陰性有干擾 正丁醇-乙醇-醋酸乙酯(8∶3∶7)硅膠GF254薄層板陰性有干擾 醋酸乙酯-乙醇-水(10∶4∶5)硅膠G薄層板陰性有干擾分離清晰，Rf值適中，陰性無 正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(8∶2∶2∶3)硅膠G薄層板干擾 經(jīng)過篩選，確定了最佳條件以硅膠G薄層板為固定相，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(8∶2∶2∶3)為展開劑，在此條件下，瓜氨酸的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗例5滴丸劑中葛根、葛根素的一種或兩種薄層色譜鑒別方法 為了突出葛根的特征，選擇了葛根、葛根素作為其特征斑點(diǎn)，但是由于該復(fù)方制劑中存在較多與葛根素結(jié)構(gòu)相近或極性相似的成分，例如黃芪中的苷類，地黃中的多糖與梓醇等成分。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下 滴丸劑中葛根、葛根素的一種或兩種薄層色譜鑒別方法 條件 問題 醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸(10∶3∶4)硅膠H薄層板 分離不清晰 正丁醇-甲醇-苯(4∶3∶10)硅膠GF254薄層板 陰性有干擾 三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(10∶2∶3∶2)分離不清晰，Rf值偏低 硅膠GF254薄層板 醋酸乙酯-甲醇-甲苯(8-3-6)硅膠G薄層板 陰性有干擾 二氯甲烷-醋酸乙酯-苯(7-4-4)硅膠H薄層板陰性有干擾 三氯甲烷-乙醇-水(5-4-3)硅膠GF254薄層板 陰性有干擾 三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(2.5∶3∶4∶0.5) 分離清晰，Rf值適中，陰性 硅膠G薄層板 無干擾 經(jīng)過篩選，確定了最佳條件以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(2.5∶3∶4∶0.5)為展開劑，在此條件下，葛根素的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗例6膠囊劑中葛根素的含量測定 1儀器與試藥 (1)主要儀器 高效液相色譜儀1100series Agilent 高效液相色譜儀2010-AHTSHIMADZU 電子分析天平 BP211D SARTORIUS 紫外/可見分光光度儀 TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司 超聲波清洗儀 KQ250DB 昆山超聲儀器有限公司 (2)試藥 葛根素中國藥品生物制品檢定所 甲醇分析純北京市通廣精細(xì)化工公司 冰醋酸 優(yōu)級純天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心 磷酸二氫胺 優(yōu)級純北京市益利精細(xì)化學(xué)品有限公司 磷酸優(yōu)級純天津市化學(xué)試劑三廠 純凈水 娃哈哈 2檢測波長的選擇 精密稱取葛根素對照品適量，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，葛根素在250nm處有最大吸收，因此選擇250nm作為測定膠囊劑中葛根素含量的檢測波長。
3提取時間的選擇 取本品內(nèi)容物，從中取約0.12g(共4份)，精密稱定，分置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇20ml，精密稱定重量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘，取出，放至室溫，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下提取時間考察 提取時間(min)葛根素含量(mg/粒) 51.828 10 2.065 20 2.047 30 2.082 結(jié)果表明，超聲處理10min即可提取完全，因此超聲時間定為10分鐘。
4色譜條件 色譜儀SHIMADZU 2010AHT； 色譜柱DIKMAD-C18 250×4.6mm 5μm； 流動相甲醇∶1％冰醋酸水溶液＝25∶75； 檢測波長250nm； 柱溫30℃； 流速1ml/min； 進(jìn)樣量10μl。
5對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品適量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，搖勻，即得。
6供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，從中取約0.12g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)10分鐘，取出，放至室溫，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
7測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述條件得到葛根素對照品、供試品色譜，其理論板數(shù)n大于4000。樣品中葛根素色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5。
8陰性干擾排除試驗 為考察其它藥材、原料和輔料是否干擾葛根素的測定，除葛根外，按處方比例稱取其它藥材、原料和輔料同法制成陰性對照品溶液并測定。結(jié)果表明，陰性樣品對葛根素的含量測定無干擾。
9線性關(guān)系的考察 精密量取葛根素對照品溶液(0.4168mg/ml)0.4ml、0.8m、1.2ml、1.6ml、2.0ml，分置10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，配制成0.016672mg/ml、0.033344mg/ml、0.050016mg/ml、0.066688mg/ml、0.08336mg/ml的對照品溶液，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下 葛根素線性關(guān)系 編號葛根素量(μg)峰面積 1 0.16672 654488 2 0.33344 1329030 3 0.50016 1985802 4 0.66688 2627315 5 0.83360 3300969 以葛根素的量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝3953483.09X+2146.70 相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999 結(jié)果表明，葛根素在0.16672μg～0.8336μg之間線性關(guān)系良好。
經(jīng)過計算，葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線為一過原點(diǎn)的直線，因此選擇外標(biāo)一點(diǎn)法測定消渴微丸中葛根素的含量。
10精密度試驗 精密吸取同一份葛根素對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，重復(fù)測定5次，考察對照品溶液精密度，結(jié)果如下 精密度試驗 試驗次數(shù) 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％) 峰面積1634292164427016491551649277164870816451400.39 結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
11供試品溶液穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、6、10、24小時進(jìn)樣測定，結(jié)果如下 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果 時間(h) 026 10 24 平均值 RSD(％) 含量(mg/袋)8.2338.1738.1508.2398.1978.1980.47 結(jié)果表明，供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
12重復(fù)性試驗取本品內(nèi)容物，從中取約0.12g(共5份)，精密稱定，依法測定，結(jié)果如下 重復(fù)性試驗 編號 12345 平均值 RSD(％) 含量(mg/粒)2.0551.9882.0492.0732.0542.0441.59 結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
13加樣回收率試驗 取本品內(nèi)容物，從中取約60mg(共6份)，精密稱定，分置具塞錐形瓶中；精密稱取葛根素10.21mg，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，0.75ml，0.9ml(各兩份)，分置上述具塞錐形瓶中，加甲醇至20ml，搖勻，精密稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)10分鐘，取出，放至室溫，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下 葛根素加樣回收率試驗 平均回收率＝98.05％，RSD＝0.55％。
結(jié)果表明，回收率良好。
14樣品含量測定 取十批樣品，依法測定，結(jié)果如下 十批樣品含量測定結(jié)果 批號 葛根素(mg/粒) 1批0.937 2批1.204 3批1.185 4批1.173 5批1.221 6批1.096 7批1.142 8批1.088 9批1.236 10批 1.194 實(shí)驗例7微丸劑中格列本脲的含量測定 1儀器與試藥 (1)主要儀器 高效液相色譜儀 1100series Agilent 高效液相色譜儀 2010-AHT SHIMADZU 電子分析天平 BP211D SARTORIUS 紫外/可見分光光度儀TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司 超聲波清洗儀 KQ250DB 昆山超聲儀器有限公司 (2)試藥 格列本脲 中國藥品生物制品檢定所 甲醇 分析純 北京市通廣精細(xì)化工公司 冰醋酸 優(yōu)級純 天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心 磷酸二氫胺 優(yōu)級純 北京市益利精細(xì)化學(xué)品有限公司 磷酸 優(yōu)級純 天津市化學(xué)試劑三廠 純凈水 娃哈哈 2檢測波長的選擇 精密稱取格列本脲對照品適量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，格列本脲在230nm處有最大吸收，故選擇230nm作為測定微丸劑中格列本脲含量的檢測波長。
3提取時間的選擇 取本品，粉碎成細(xì)粉，從中取約0.8g(共4份)，精密稱定，分置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇20ml，精密稱定重量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘，取出，放至室溫，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下 提取時間考察 提取時間(min) 格列本脲含量(mg/袋) 5 1.323 10 1.310 20 1.315 30 1.319 結(jié)果表明，超聲處理5min即可提取完全，因此超聲時間定為5分鐘。
4色譜條件 色譜儀Aglient 1100series； 色譜柱DIKMAD-C18 250×4.6mm 5μm； 流動相甲醇∶0.05mol/L磷酸二氫胺(用磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5)＝65∶35； 檢測波長；230nm； 柱溫30℃； 流速1ml/min； 進(jìn)樣量10μl。
5對照品溶液的制備 精密稱取在格列本脲對照品適量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，搖勻，即得。
6供試品溶液的制備 取本品，粉碎成細(xì)粉，從中取約0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)10分鐘，取出，放至室溫，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
7測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述條件得到格列本脲對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n大于5000。樣品中格列本脲色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5。
8陰性干擾排除試驗 為考察其它藥材和輔料是否干擾格列本脲的測定，除格列本脲外，按處方比例稱取其它藥材和輔料同法制成陰性對照品溶液并測定。結(jié)果表明，陰性樣品對格列本脲的含量測定無干擾。
9線性關(guān)系的考察 精密量取格列本脲對照品溶液(0.5036mg/ml)0.4ml、0.8m、1.2ml、1.6ml、2.0ml，分置10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，配制成0.020144mg/ml、0.040288mg/ml、0.060432mg/ml、0.080576mg/ml、0.10072mg/ml的對照品溶液，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，結(jié)果如下 格列本脲線性關(guān)系 編號 格列本脲量(μg) 峰面積 1 0.20144 711.379 2 0.40288 1409.371 3 0.60432 2112.89 4 0.80576 2801.792 5 1.0072 3539.442 以格列本脲的量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝3499.1X+0.4107 相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999 結(jié)果表明，格列本脲在0.20144μg～1.0072μg之間線性關(guān)系良好。
經(jīng)過計算，格列本脲標(biāo)準(zhǔn)曲線為一過原點(diǎn)的直線，因此選擇外標(biāo)一點(diǎn)法測定消渴顆粒中格列本脲的含量。
10精密度試驗 精密吸取同一份格列本脲對照品溶液(40.288μg/ml)10μl，注入液相色譜儀，重復(fù)測定5次，考察對照品溶液精密度，結(jié)果如下 精密度試驗 試驗次數(shù) 1 2 3 4 5平均值 RSD(％) 峰面積1407.2361415.7731427.4051400.8951406.6691411.5960.73 結(jié)果表明，精密度良好。11供試品溶液穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、6、10、24小時進(jìn)樣測定，結(jié)果如下 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果 時間(h) 0 2610 24 平均值 RSD(％) 含量(mg/袋)1.2741.2781.2721.2781.2811.2770.28 結(jié)果表明，供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
12重復(fù)性試驗取 本品同一批樣品，粉碎成細(xì)粉，從中取約0.8g(共5份)，精密稱定，平行5份，按正文供試品溶液制備和測定項下進(jìn)行操作，結(jié)果如下 重復(fù)性試驗 編號稱量(g)峰面積 含量(mg/袋) 1 0.842561206.3741.242 2 0.838091196.3851.238 3 0.793181164.8471.274 4 0.825031188.5051.250 50.795311182.4821.290 平均含量＝1.259mg/袋，RSD＝1.77％。
結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
13加樣回收率試驗 取本品同一批樣品，粉碎成細(xì)粉，從中取約0.4g(共6份)，精密稱定，分置具塞錐形瓶中；精密稱取格列本脲10.21mg，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.7ml，0.85ml，1.0ml(各兩份)，分置上述具塞錐形瓶中，加甲醇至20ml，搖勻，精密稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)10分鐘，取出，放至室溫，精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得，結(jié)果如下 格列本脲加樣回收率試驗 平均回收率＝98.28％，RSD＝0.66％。
14樣品含量測定 取十批樣品，依法測定，結(jié)果如下 十批樣品含量測定結(jié)果 批號格列本脲(mg/袋) 1批 1.142 2批 1.259 3批 1.202 4批 1.222 5批 1.173 6批 1.203 7批 1.293 8批 1.284 9批 1.298 10批1.188 實(shí)驗例8片劑中黃芪甲苷含量測定 1儀器與試藥 (1)主要儀器 高效液相色譜儀P-426Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器 2000ES Alltech 高效液相色譜儀1100series Agilent 超聲波清洗機(jī) KQ250B 昆山市超聲儀器有限公司 電熱真空干燥箱ZK-30ABX 北京中興偉業(yè)儀器公司 電子分析天平 AE240Mettler (2)試藥黃芪甲苷中國藥品生物制品檢定所 所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購于天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)開發(fā)公司水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
2色譜條件 色譜柱Platinum C18 4.6×250mm 5μm； 流動相乙腈-水＝32∶68； 流速1.0ml/min； 蒸發(fā)光檢測器檢測漂移管溫度110℃，氣流量2.7L/min； 柱溫30℃。
根據(jù)上述條件得到黃芪甲苷、供試品、陰性色譜圖；黃芪甲苷峰達(dá)到基線分離，與相近峰分離清晰完全，保留時間適中，峰形尖銳，對稱，理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于2000。
3對照品溶液的制備 分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥器減壓干燥24小時的黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的溶液，即得。
4供試品溶液的制備 取本品，研細(xì)，從中精密稱取約45g，加水200ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次200ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次200ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇5ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
5測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl，供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計算黃芪甲苷的含量，即得。
6線性關(guān)系考察 精密吸取黃芪甲苷(0.2085mg/ml)對照品溶液2、4、8、12、16μl，注入液相色譜儀，以黃芪甲苷的量(μg)的常用對數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如下。 黃芪甲苷線性關(guān)系 黃芪甲苷回歸方程Y＝1.0700X+6.0705； 黃芪甲苷相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999； 結(jié)果表明，黃芪甲苷在0.417～3.336μg范圍內(nèi)線性良好。
7精密度試驗 精密吸取對照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果如下 對照品溶液精密度試驗 試驗次數(shù) 1 2 3 4 5 均值 RSD(％) 峰面積2031539204133820214672015966203085520282330.48 結(jié)果表明，精密度良好。8供試品穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，分別在0、6、12、24、48小時重復(fù)測定1次，記錄峰面積積分值，結(jié)果如下 供試品溶液穩(wěn)定性試驗 時間(h) 0 6122448 均值 RSD(％) 含量(mg/袋)0.02620.02580.02540.02610.02570.02581.24 結(jié)果表明，供試品溶液在48小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9重復(fù)性試驗 取本品，研細(xì)，從中精密稱取約45g(共5份)，按正文供試品溶液的制備和測定項下的方法進(jìn)行處理，分別從中精密吸取20μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下 供試品重復(fù)性試驗結(jié)果 編號 1 2 3 4 5 均值 RSD(％) 含量(mg/袋)0.02530.02660.02640.02590.02550.02592.16 結(jié)果表明，重現(xiàn)性良好。
10加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取本品，研細(xì)，從中精密稱取約23g(共6份)，分置具塞錐形袋中；精密吸取黃芪甲苷對照品水溶液(0.3972mg/ml)1ml(共6份)，分置上述具塞錐形瓶中，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇5ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。精密吸取續(xù)濾液20μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下 黃芪甲苷加樣回收率試驗 黃芪甲苷平均回收率＝98.07％；RSD＝1.03％ 11三批樣品黃芪甲苷含量測定 取樣品10批，依法測定，結(jié)果如下 10批中試樣品黃芪甲苷含量測定結(jié)果 批號黃芪甲苷含量(mg/片) 1批 0.0243 2批 0.0268 3批 0.0255 4批 0.0271 5批 0.0254 6批 0.0269 7批 0.0251 8批 0.0273 9批 0.0264 10批0.0267 實(shí)驗例9膠囊劑中五味子醇甲的含量測定 1儀器與試藥 (1)儀器Agilent1100高效液相色譜儀，chemstationsys工作站；TU-1800SPC紫外分光光度計；AE240電子天平。
(2)試藥五味子醇甲中國藥品生物制品檢定所； 2檢測波長的選擇 精密稱取五味子醇甲適量，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得每1ml分別含0.10mg的溶液，在200-400nm波長范圍掃描。結(jié)果表明五味子醇甲在250nm處有最大吸收，因此選擇250nm作為含量測定的檢測波長。
3色譜條件Dikma ODS(4.6×250mm，5um)；流動相甲醇-水(65∶35)為流動相；檢測波長為250nm；流速1.0ml/min。
4系統(tǒng)適用性試驗 4.1對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品適量，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲0.02mg的對照品混合溶液，即得。
4.2供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約1.5g，精密稱定，置50ml量袋中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。
4.3陰性供試品溶液的制備 稱取不含五味子的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備，作為陰性供試品溶液。
分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。由圖可知，供試品中五味子醇甲峰分離良好，與相近峰分離清晰，完全，陰性供試品無干擾。
5線性關(guān)系考察 精密稱取五味子醇甲對照品10.27mg，置50ml量袋中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量袋中，加甲醇定至刻度，搖勻，精密吸取2μl、4μl、6μl、8μl、10μl，注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如下 五味子醇甲線性關(guān)系考察 編號 五味子醇甲(μg)峰面積 10.08216121.45 20.16432238.71 30.24648362.58 40.32864487.62 50.41080601.91 回歸方程Y＝1472.5X-0.495； 決定系數(shù)γ＝0.9998； 五味子醇甲在0.08216～0.4108μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
6精密度試驗精密吸取同一份對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，連續(xù)測定5次，考察對照品溶液的精密度，結(jié)果如下 對照品精密度試驗 試驗次數(shù) 12 34 5 均值 RSD(％) 峰面積 305.17311.24309.33315.27314.62311.131.33 結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
7穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，分別在0、6、12、24、48小時進(jìn)樣測定，記錄五味子醇甲峰面積，結(jié)果如下 供試品溶液穩(wěn)定性試驗 時間(h) 0 6 122448 均值 RSD(％) 峰面積320.54318.25323.15325.64327.21322.961.01 結(jié)果表明，對照品溶液穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性試驗 取同一批號的本品，取樣5份，依法測定，結(jié)果如下重復(fù)性試驗 編號12345 均值 RSD(％) 五味子醇甲0.2100.2010.2120.2050.2070.2071.86 (mg/粒) 結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
9加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取本品取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約0.75g(共6份)，精密稱定，分置50ml量瓶中；精密量取五味子醇甲對照品溶液(0.4272mg/ml)1ml(共6份)，分置上述50ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果如下五味子醇甲加樣回收率試驗 五味子醇甲平均回收率＝97.30％；RSD＝1.44％。
結(jié)果表明，回收率良好。
10樣品含量測定 取本品樣品十批，依法測定，結(jié)果如下十批樣品含量測定結(jié)果 批號五味子醇甲含量(mg/粒) 1批 0.2334 2批 0.2291 3批 0.2225 4批 0.2136 5批 0.2278 6批 0.2405 7批 0.2306 8批 0.2229 9批 0.2171 10批0.2235 具體的實(shí)施方式 實(shí)施例1片劑中黃芪的薄層色譜鑒別 取待測樣品，研細(xì)，取粉末適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇＝10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例2微丸中黃芪的薄層色譜鑒別 取待測樣品，研細(xì)，取粉末適量，加甲醇提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.05％氫氧化鈉鉀溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3～4，用三氯甲烷提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯甲烷-甲醇＝3∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例3顆粒劑中黃芪的薄層色譜鑒別 取待測樣品適量，加50％乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加5％氨溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4～5，用三氯甲烷提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醇＝10∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例4膠囊劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物適量，加甲醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例5膠囊劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物適量，加50％甲醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醇-水＝8∶3∶4的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以20％硫酸甲醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例6水丸劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研碎，取粉末適量，加95％乙醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用20％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝8∶12∶0.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例7片劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用0.2％氫氧化鉀溶液洗滌，氫氧化鉀溶液棄去，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％甲醇、40％甲醇洗脫，收集40％甲醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.05％冰醋酸水溶液＝60∶40為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例8控釋制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取適量，加50％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用0.5％氫氧化鈉溶液洗滌，氫氧化鈉溶液棄去，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、20％乙醇、90％乙醇洗脫，收集90％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用95％乙醇溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的95％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3％冰醋酸水溶液＝20∶80為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例9滴丸劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取樣品適量，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝32∶68為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例10顆粒劑中五味子醇甲的薄層色譜鑒別方法 取樣品適量，加醋酸乙酯提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子醇甲對照品，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸＝10∶10∶2的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例11微丸劑中五味子、五味子甲素的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加醋酸乙酯提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子對照藥材，參照供試品溶液制法，制備對照藥材溶液；取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸＝25∶2∶0.1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例12膠囊劑中五味子甲素的薄層色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物劑適量，加三氯甲烷提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸＝15∶5∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)驗例13散劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的液相色譜鑒別方法 取樣品適量，以甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝65∶35為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例14微囊劑中五味子醇甲的液相色譜鑒別方法 取樣品適量，以95％乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲對照品的95％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝40∶50為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例15軟膠囊劑中五味子甲素、五味子乙素的液相色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物適量，以9甲醇乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子甲素、五味子乙素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝90∶10為流動相，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例16分散片劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加三氯甲烷提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷-乙醇-冰醋酸＝8∶13∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例17緩釋制劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加醋酸乙酯提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，加醋酸乙酯制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-正己烷-乙醇-冰醋酸＝12∶9∶0.3∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例18凝膠劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法 取樣品，加二氯甲烷提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，加二氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷-甲醇-甲酸＝4∶17∶3∶3為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； 實(shí)施例19膠囊劑中格列本脲的液相色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5)＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例20口服液中格列本脲的液相色譜鑒別方法 取待測樣品，加95％乙醇稀釋至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的95％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-3％甲酸水溶液＝45∶55，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例21微丸中格列本脲的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈-0.005mol/L磷酸二氫鉀溶液＝80∶20，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例22片劑中地黃藥材、梓醇的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝14∶6∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例23膠囊劑中梓醇的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯甲烷-乙醇-水＝10∶3∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例24微囊劑中梓醇的薄層色譜鑒別方法 取樣品適量，加50％乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝18∶3∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例25微丸劑中梓醇的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝1∶99為流動相，檢測波長為210nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例26分散片劑中梓醇的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加50％甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝10∶90為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例27分散片劑中梓醇的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加95％乙醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣95％乙醇溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的95％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝0.5∶99.5為流動相，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例28膠囊劑中天花粉、瓜氨酸的薄層色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物適量，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水＝8∶2∶2∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例29顆粒劑中瓜氨酸的薄層色譜鑒別方法 取本品內(nèi)容物，加50％乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，加50％乙醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-甲醇-冰醋酸-水＝4∶0.5∶0.5∶5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例30片劑中瓜氨酸的薄層色譜鑒別方法 取本品內(nèi)容物，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，加乙醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正丁醇-甲醇-甲酸-水＝12∶4∶0.5∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例31顆粒劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取樣品適量，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，加乙醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙醇-甲酸乙酯-水＝1∶5∶2∶0.1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例32微丸劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加50％甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，加50％甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水＝5∶1∶6∶0.1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例33膠囊劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取樣品內(nèi)容物適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水＝2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例34微囊劑中葛根素的液相色譜鑒別方法 取樣品適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例35分散片劑中葛根素的液相色譜鑒別方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，加50％乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的50％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液＝10∶90為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例36散劑中葛根素的液相色譜鑒別方法 取樣品適量，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.001％磷酸水溶液＝35∶65為流動相，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實(shí)施例37片劑中黃芪甲苷的含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝32∶68為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述對照溶液5μ、10μl，供試溶液10μl，注入液相色譜儀；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含黃芪甲苷的限度不得少于0.20mg。
實(shí)施例38分散片中黃芪甲苷的含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加50％甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用水溶解并定容至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3％冰醋酸水溶液＝20∶80為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述對照溶液8μ、16μl，供試溶液10μl，注入液相色譜儀；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含黃芪甲苷的限度不得少于0.10mg。
實(shí)施例39微丸中黃芪甲苷的含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、20％乙醇、50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用95％乙醇溶解并定容至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的95％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.05％甲酸水溶液＝60∶40為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述對照溶液10μ、20μl，供試溶液10μl，注入液相色譜儀；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含黃芪甲苷的限度不得少于0.10mg。
實(shí)施例40顆粒劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量測定方法 取樣品適量，精密稱定，以甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝40∶50為流動相，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含量限度應(yīng)為以下幾項 (1)含五味子醇甲不得少于2.0mg； (2)含五味子甲素不得少于0.20mg； (3)含五味子乙素不得少于0.60mg。
實(shí)施例41膠囊劑中五味子醇甲的含量測定方法 取樣品內(nèi)容物適量，精密稱定，以乙提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝65∶35為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含五味子醇甲不得少于2.0mg。
實(shí)施例42片劑中五味子醇甲的含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，以乙提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝90∶10為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液10μl、對照溶液20μl，注入液相色譜儀；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含五味子醇甲不得少于1.0mg。
實(shí)施例43微丸劑中格列本脲的含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5)＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.3～8.3mg。
實(shí)施例44分散片劑中格列本脲的含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈-0.005mol/L磷酸二氫鈉水溶液＝45∶55，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各5μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.0～9.0mg。
實(shí)施例45顆粒劑中格列本脲的含量測定方法 取樣品適量，精密稱定，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-3％冰醋酸＝80∶20，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.0～9.0mg。
實(shí)施例46膠囊劑中格列本脲的含量測定方法 取樣品內(nèi)容適量，精密稱定，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5)＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.3～8.3mg。
實(shí)施例47膠囊劑中葛根素的液相色譜含量測定方法 取樣品內(nèi)容物適量，精密稱定，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于10.0mg。
實(shí)施例48片劑中葛根素的液相色譜含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加50％甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的50％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.001％磷酸水溶液＝10∶90為流動相，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于6.0mg。
實(shí)施例49顆粒劑中葛根素的液相色譜含量測定方法 取樣品內(nèi)容物適量，精密稱定，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液＝45∶55為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于6.0mg。
實(shí)施例50微丸劑中葛根素的液相色譜含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于15.0mg。
實(shí)施例51控釋制劑中梓醇的液相色譜含量測定方法 取樣品，研細(xì)，取粉末適量，精密稱定，加50％乙醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的50％乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝10∶90為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各20μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于1.0mg。
實(shí)施例52膠囊中梓醇的液相色譜含量測定方法 取樣品內(nèi)容物適量，加甲醇提取，精密稱定，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝1∶99為流動相，檢測波長為210nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各5μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于3.0mg。
實(shí)施例53顆粒劑中梓醇的液相色譜含量測定方法 取樣品適量，精密稱定，加甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝0.5∶99.5為流動相，檢測波長為400nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于1.5mg。
權(quán)利要求
1、一種治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容
(1)葛根藥材、地黃藥材、天花粉藥材、黃芪藥材、五味子藥材、格列本脲、葛根素、梓醇、瓜氨酸、黃芪甲苷、五味子醇甲、五味子甲素中全部或部分的鑒別測試方法；
(2)格列本脲、葛根素、梓醇、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素、黃芪甲苷中全部或部分成分的含量測定方法。
2、按照權(quán)利要求1所述的治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下全部或部分內(nèi)容
a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加堿性溶液溶解，堿液加鹽酸調(diào)節(jié)至酸性，用醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，提取液調(diào)整濃度，制得供試品溶液；另取黃芪對照藥材，參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇或正丁醇＝3～10∶0.2～1為展開劑，展開，取出，晾干，顯色，檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用20～60％甲醇或30～70％乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水適量洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣加50～100％甲醇或50～100％乙醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水＝8～20∶3～12∶0.1～4的溶液或分層后的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含硫酸的顯色劑，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用堿性溶液洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、不同濃度的甲醇或乙醇洗脫，收集40～80％甲醇或50～90％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇或水中的一種或幾種溶解，制得供試品溶液；以黃芪甲苷對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液＝20～60∶80～40為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法
取待測生中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子對照藥材，參照供試品溶液制法，制備對照藥材溶液；取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品中的一種或幾種，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或幾種、及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板，以石油醚或環(huán)己烷或正己烷-甲酸乙酯或醋酸乙酯或醋酸乙酯-甲酸或冰醋酸＝10～25∶2～10∶0.1～2的溶液或上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種，制成對照品溶液，采用液相色譜法試驗，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水＝40～90∶50～10為流動相，檢測波長為200～400nm之間的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
f、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-環(huán)己烷或正己烷-甲醇或乙醇-甲酸或冰醋酸＝4～12∶9～17∶0.3～3∶0.3～3為展開劑，展開，取出，晾干，檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
g、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取格列本脲對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝45～80∶55～20為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰；
h、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中地黃、梓醇的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水＝10～18∶3～10∶0.2～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含茴香醛的顯色劑，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
i、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相或50～100％甲醇或50～100％乙醇溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈或甲醇-水＝0.5～10∶99.5～90為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
j、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中天花粉、瓜氨酸的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以正丁醇-無水乙醇或甲醇-甲酸或冰醋酸-水＝4～12∶0.5～4∶0.5～4∶1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含茚三酮的顯色劑，加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
k、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水＝1～5∶1～5∶2～6∶0.1～2為展開劑，展開，取出，晾干，檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
l、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根素對照品，制成對照品溶液；采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝10～35∶90～65為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
3、按照權(quán)利要求2所述的治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下全部或部分內(nèi)容
a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇＝10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液加于氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水溶解后加水飽和正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝32∶68為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法
取待測生中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷提取，提取液適當(dāng)濃縮，作為供試品溶液；取五味子對照藥材，參照供試品溶液制法，制備對照藥材溶液；取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品中的一種或幾種，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或幾種、及供試溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板，以30～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15∶5∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，以甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝65∶35為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
f、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加三氯甲烷提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；另取格列本脲對照品，加三氯甲烷制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷-乙醇-冰醋酸＝8∶13∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
g、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-用磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5的0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜保留時間一致的色譜峰；
h、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中地黃藥材、梓醇中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取地黃對照藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；取梓醇對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝14∶6∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
i、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝1∶99為流動相，檢測波長為210nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
j、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中天花粉、瓜氨酸的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取天花粉對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取瓜氨酸，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水＝8∶2∶2∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
k、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根、葛根素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根對照藥材，參照供試品溶液制法制成對照藥材溶液；取葛根素對照品，加甲醇制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水＝2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
l、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜鑒別方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
4、按照權(quán)利要求1所述的治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的含量測定方法應(yīng)包括以下全部或部分內(nèi)容
a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用堿性溶液洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、不同濃度的甲醇或乙醇洗脫，收集40～80％甲醇或50～90％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇或水中的一種或種溶解并定容至適當(dāng)濃度，制得供試品溶液；以黃芪甲苷對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液＝20～60∶80～40為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別精密吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量中含黃芪甲苷的限度不得少于0.10mg；
b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇或乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種，制成對照品溶液，采用液相色譜法測定，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水＝40～90∶50～10為流動相，檢測波長為200～400nm之間的一個；分別精密吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量中含量限度應(yīng)為以下一項或幾項
(1)含五味子醇甲不得少于1.0mg；
(2)含五味子甲素不得少于0.10mg；
(3)含五味子乙素不得少于0.30mg；
c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇或乙醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取格列本脲對照品，制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝45～80∶55～20為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別精密吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.0～9.0mg；
d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；取葛根素對照品，制成對照品溶液；采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫胺溶液＝10～45∶90～55為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于3.0mg；
e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，精密稱定或量取，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相或50～100％甲醇或50～100％乙醇溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品制成對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈或甲醇-水＝0.5～10∶99.5～90為流動相，檢測波長為200～400nm中的一個；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于1.5mg。
5、按照權(quán)利要求4所述的治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的含量測定方法包括以下全部或部分內(nèi)容
a、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液蒸干，殘渣加水溶解，用水飽和的正丁醇提取，提取液用氨溶液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘渣用甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝32∶68為流動相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀；以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含黃芪甲苷的限度不得少于0.20mg；
b、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中一種或幾種的含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，以甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法試驗，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水＝65∶35為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含量限度應(yīng)為以下一項或幾項
(1)含五味子醇甲不得少于2.0mg；
(2)含五味子甲素不得少于0.20mg；
(3)含五味子乙素不得少于0.60mg；
c、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中格列本脲的含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以格列本脲對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-用磷酸調(diào)節(jié)pH＝3.5的0.05mol/L磷酸二氫胺水溶液＝65∶35，檢測波長為230nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含格列本脲應(yīng)為3.3～8.3mg；
d、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中葛根素的液相色譜含量測定方法
取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取并調(diào)整至適當(dāng)濃度，作為供試品溶液；以葛根素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液＝25∶75為流動相，檢測波長為250nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含葛根素不得少于6.0mg；
e、治療糖尿病的中藥復(fù)方制劑中梓醇的液相色譜含量測定方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，作為供試品溶液；以梓醇對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水＝1∶99為流動相，檢測波長為210nm；分別吸取上述供試溶液與對照溶液適量，注入液相色譜儀，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計算，制劑每日用劑量含梓醇不得少于3.0mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由葛根、地黃、玉米須、天花粉、黃芪、五味子、山藥和格列本脲制成的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該組方制劑中多種組分的鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發(fā)明為該組方制劑的質(zhì)量控制提供了一套可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴(yán)格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測方法，為確?；颊哂盟幍挠行?、安全性提供了保障。
文檔編號A61P3/10GK1939472SQ200610141078
公開日2007年4月4日 申請日期2006年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者于文風(fēng) 申請人:北京奇源益德藥物研究所